复旦大学免疫实验免疫比浊法检测免疫球蛋白
透射免疫比浊终点法与速率法测定免疫球蛋白对比分析
/L、聚乙二醇 ４０g/L,试 剂 ２ 为 羊 抗 人 I
１００ mmo
l
gG
抗体适量、叠 氮 钠 ０．
９５g/L)及 定 标 校 准 品 (浓 度 为
６、
１２、
２０、
３０g/L),批 号 为 １９０９０４. 校 准 品 量 值 可 溯
源至IRMM ERM DA４７０ 参考物质.
１．
３ 方法
１．
３．
速率法,副波长无,加入试剂 R２ 混匀后立即测定初始
吸光度,连续 监 测 ２ mi
n 测 定 吸 光 度 变 化 率 ΔA/mi
n
计算出 浓 度. 其 余 参 数、反 应 过 程 和 校 准 方 法 同 终
检验医学与临床 ２０２１ 年第 １８ 卷增刊 Ⅰ Lab MedC
l
i
n,
２０２１,
Vo
l．
种方法测定结果比较 差 异 无 统 计 学 意 义 (
P ＞０．
０５),
有良好的相关性,见表 １.
结果(
x±s,
g/L)
方法
终点法
速率法
t
不同浓度 I
gG(
g/L)
６
１２
２０
３０
６．
１２±０．
１８ １１．
９６±０．
４８２２．
０４±３．
１７３２．
１３±６．
１２
０．
０８
＞０．
０５
P
＞０．
０５
２．
抗体相似的 球 蛋 白,能 与 相 应 抗 原 特 异 性 结 合,介 导
体 液 免 疫 作 用 [１]. 同 时,其 本 身 也 是 抗 原,具 有 免 疫
免疫比浊法检测免疫球蛋白
浊度产生与测量原理
浊度产生
浊度测量
当抗原与抗体发生特异性结合时，形 成的抗原-抗体复合物会在反应体系 中产生浊度，浊度的高低与复合物的 数量成正比。
通过测量反应体系的浊度变化，可以 间接推断出抗原或抗体的含量。常用 的浊度测量方法包括透射比浊法和散 射比浊法。其中，透射比浊法是通过 测量光线通过反应体系后的透射光强 度来计算浊度；散射比浊法则是通过 测量光线在反应体系中散射的光强度 来计算浊度。
作用机制
不同类型的免疫球蛋白在机体免疫应答中发挥不同作用。例如，IgG是血清中主要的免疫球蛋白，参与体液免疫 ；IgA主要分布于粘膜表面，参与粘膜免疫；IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是早期体液免疫应答中产生的主 要抗体；IgD的生物学功能尚不完全清楚，可能与B细胞活化有关；IgE则与过敏反应相关。
疫苗接种效果评估
接种疫苗后，体内会产生相应的免疫球蛋白，通过检测可以评估 疫苗接种的效果。
健康状况评估
免疫球蛋白水平可以反映机体的免疫状态，通过检测可以评估个 体的健康状况。
个性化健康管理
根据免疫球蛋白的检测结果，可以为个体提供个性化的健康管理 建议，如饮食、运动等方面的调整。
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Chapter
在疾病诊断中的应用
01
02
03
感染性疾病
通过检测免疫球蛋白水平 ，可以辅助诊断各种感染 性疾病，如病毒、细菌和 寄生虫感染。
自身免疫性疾病
免疫球蛋白的异常表达与 多种自身免疫性疾病相关 ，如类风湿性关节炎、系 统性红斑狼疮等。
肿瘤
某些肿瘤会导致免疫球蛋 白水平异常，通过检测可 以辅助肿瘤的诊断和预后 评估。
试剂选择与配制
选择高质量的免疫比浊法检测试 剂盒，确保试剂的稳定性和准确
两种免疫比浊法测定血清免疫球蛋白的结果差异探讨及解决方法
１ 试剂及校准 品 ｆ Ｉ ｍａｅ ． ２ １ ｍ ｇ 测定 ＩＧ ＩＡ、 Ｍ全 部配套 ） ｇ 、ｇ Ｉ ｇ 试剂ｆ 批号 ＩＧ Ｍ６ １０ 、 Ａ Ｍ １３ ０ ＩＭ Ｍ６ １ ２） ｇ １ ３ １ Ｉ ６ １０ 、ｇ ０ ２ ４与校准 ｇ 品ｆ 批号 Ｍ ０ ３ ８（ ６４５） 简称 Ｂ ｃ ｍ ｎ试剂１（） Ｉ ｅｋ ａ ： Ｉ Ｉ ２ Ｎ） 迈克试剂公 司 ＩＧ、 Ａ、 Ｍ定 量测定试剂盒（ ｇ Ｉ Ｉ ｇ ｇ 批号均为 ２ ０ ０ ０ ） ０ ５ ３ １， 试剂盒 自
２ 结 果
２１ 方 法 ｆ１ 射 比 浊 法 采 用 迈 克 试 剂 公 司 试 剂 ． 日立 ． １透 用
７０ ６ ０全 自动 生 化 分 析 仪 进 行 测 定 ｆ１速 率 散 射 比 浊 法 采 用 ２ Ｉ ａｅ免疫 化学 系统 进 行 ｆ１ 器 精 密 度 评 价 试 验 用 一 份 正 ｍｍ ｇ ３ 仪 常 浓 度 混 合 血 清 样 本 分 别 用 两 种 方 法 完 成 ＩＧ、ｇ ＩＭ 的 ｇ Ｉ Ａ、ｇ
１１ 仪 器 Ｂ ｃｍａ — ｏｌ ｒ 司 生 产 的 Ｉ ａｅ免 疫 化 学 ． ｅｋ ｎ Ｃ ｕ ｅ 公 ｔ ｍｍ ｇ 系统 ． 日立 ７ ０ ６ ０全 自动 生化 分析 仪
双 份 平 行 测 定 ．各 自重 复 ２ ０次 ．计 算 出两 种 测 定 方 法 的均 值 、 准 差 批 内１ 标 和变 异 系 数 （ ｖ批 内１此 即批 内 精 密 度 。 ｃ ．
带 校 准 品
钟 混 匀 分 别 测 定 ２次 求 均 值 ． 共 ２ 总 ０天 得 ２ ０个 数 据 ． 同样 计 算 均 值 、 准 差 批 间１ 变 异 系 数 （ ｖ批 问１此 为 批 间精 标 和 ｃ ，
免疫球蛋白检验方法
免疫球蛋白检验方法
一、适用范围
适用于检测人血清、血浆中免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM、IgE）水平。
二、原理
免疫球蛋白的检测利用免疫沉淀反应，配制特异性抗血清与病人标本混合，当IgG、IgA、IgM、IgE抗体形成沉淀时，以比色检测，检测抗体浓度的变化，从而检测血清中免疫球蛋白含量。
三、试剂盒选择
抗体用于免疫球蛋白检测的试剂盒应选择经认证的、适用于检测人免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM、IgE）水平的试剂盒（如ELISA试剂）。
四、仪器使用
根据使用的试剂盒类型，选择适当的仪器，如ELISA仪、比色检测仪等，以便进行免疫球蛋白检测。
五、样本收集
根据使用的试剂盒，收集血清或血浆样本，每次检测取0.5ml样本，如果多次检测，可放置在4℃保存，4℃以下冷冻保存不超过一个月。
六、试剂配制
1．将用于 ELISA 检测的准备好的抗体、病人标本等试剂放置室温，将其涂层板中；
2．按照试剂盒的使用说明，准备其他试剂，并用抗体标本反应
液调整到稀释抗体的浓度；
3．将抗体标本反应液和病人标本混合涂洒到涂层板的检测格中，放置室温反应15分钟；
4．用洗涤液洗涤检测格，然后用抗体反应液复活格中的抗体，放置室温反应10分钟；
5．用洗涤液洗涤检测格，然后用检测液检测抗体，放置室温反应1小时；
6．用洗涤液洗涤检测格，然后用终止液终止反应，放置室温反应30分钟；
7．将涂层板置于比色检测仪中，检测抗体浓度的变化，从而检测血清中免疫球蛋白的含量。
七、报告
根据比色检测仪结果，判定血清中IgA、IgG、IgM、IgE含量，并根据参考值报告免疫球蛋白水平。
放射免疫法与免疫比浊法检测脑脊液免疫球蛋白含量比较
格林 巴利 综 合征 患 者 脑 脊 液 中 的免 疫 球 蛋 白浓 度 是确 诊格 林 巴利综 合 征 的一 项 重 要指 标 ， 效 性 高 、 确 性 强 的 有 准
临床 检验 方 法对 于临 床诊 治具 有指 导 意义 。 者通 过 两种 方 笔 法进 行检 测 ， 将本 院检 测结 果 和经 验报道 如下 ： 现 １ 资 料 与 方 法
淀物 的放射性 ， 根据 结果 制作 标 准 曲线 图。 免疫 比浊 法 ： 齐 备 ｌＧ、 Ａ、 Ｍ 试剂 盒 、 准 品 等 必 备 品 后 ， 用 Ａｒ ｙ ６ ｇ Ｉ Ｉ ｇ ｇ 校 应 ｒ ３ ０特 ａ 种 蛋 白分 析 仪 和美 国雅 培 Ａ Ｂ Ｔ ｅｏｅ 全 自动 生化 仪 ， Ｂ Ｏ ＦＡ ｒｓｔ 严格 按 照操 作说 明进 行 。
比 浊 法 线 性 范 围 高 于 放 射 免 疫 法 （。４１ ，＝ ．１ ） ｘ＝ ．６ Ｐ ００ ６ 。
２２测 量 灵 敏 度 ．
比浊法灵敏 度较放 射免 疫法 低 ， 性 范围较放 射免 疫法 宽 ， 线 根 据 两组 数据 显示 其灵 敏度 及线 性 范围 均能 满足 临床应 用 。 本
的 时 问不少 于 ２ｈ 每批 对 样 本 做双 份 测定 ， 均 值 ， ， 取 计算 批
内 、 间 、 间和总 精 密度 ， 一批 测定 均做 一次 质控日 得 出 批 天 每 。 标本 批 内变异 系 数 （ Ｖ） ２３ ， 问 Ｃ Ｃ 为 ．％ 批 Ｖ为 ３１ 天 间 Ｃ ．％， Ｖ
一
射性 标 记 的抗 原 的量 ， 而 计算 出相应 的结 果 。放 射免 疫法 从 存 在放 射 性 核 素污 染 ． 试剂 保存 期 短 ， 作 繁杂 ， 性 小 ， 操 线 要 批量 做 ， 果报 告不 及 时 ， 结 对高 浓 度标 本需 稀 释重 做 ， 但费 不 时 费力 ． 而且手 工稀 释 ， 以满 足实 验室 和 临床 的要求［ 难 ４ １ 。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
免疫实验,对流免疫电泳 ,免疫比浊溶血实验
免疫实验,对流免疫电泳 ,免疫比浊溶血实验免疫实验是生命科学中非常重要的一种实验技术，它通常用于检测血清中抗体或其它免疫反应分子的含量、识别特定的分子结构，以及鉴定抗原和抗体的交互作用等。
其中涉及到的技术手段也非常繁多，下面我将着重介绍对流免疫电泳和免疫比浊溶血实验这两种技术。
对流免疫电泳是一种利用电泳和抗体-抗原交互作用原理的分析技术。
它可以快速地分离和检测出血清中的不同类型免疫球蛋白。
具体操作步骤如下：首先，将需要检测的血清标本加入一种被分离物抗体浸渍的石蜡条或高分子凝胶中，拍平并等待凝胶凝固。
然后，加上一种被检测的抗原标记物，通常使用放射性同位素、酶或荧光染料作为标记。
当抗体与抗原结合时，这些标记物也随之紧密结合在其上，形成复合物。
随着复合物的形成，它们在凝胶中开始移动，直到其达到与该复合物大小同等的电荷质量比。
然后，加上电场，复合物将沿电场布局在凝胶中，从而形成一条与电场方向大致平行的对流带。
在对应位置破裂凝胶，分析不同样品的对流带，可以快速、准确地确定其免疫球蛋白的种类和含量。
免疫比浊溶血实验是一种利用血清中抗体与相应抗原间的特异性结合作用引起溶血反应析出现象，以检测抗体的含量和活性的实验方法。
在此实验中，我们需要将血清和口香糖酐混合，使其等比例溶解，然后加入一定浓度的相应抗原（通常为红细胞抗原）。
随着抗体与抗原结合，它们最终会形成网状复合物，从而导致红细胞溶解，此过程可观察到裂解和溶解反应的现象。
通常情况下，使用抗人丙型溶血球素（血型试剂）作为抗原，将其加到不同的稀释血清中，通过测量反应光密度，可以得到抗体与抗原之间的复合和溶解反应程度。
免疫比浊溶血实验的优点是检测速度快，灵敏度高，适用范围广泛。
总之，免疫实验技术在生命科学研究中扮演着极为重要的角色，对流免疫电泳和免疫比浊溶血实验是其中的两种典型代表。
我们可以根据自己的需要和实验目的，灵活选择适当的技术手段，以提高实验效率和准确度，为揭示生命科学研究中一些重要的问题提供更加全面和精准的解答。
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法-检验科免疫室作业指导书
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法1.原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。
抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。
散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。
标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹标本种类：血清或血浆标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。
避免反复冻融。
标本运输：室温运输标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪仪器厂家：芬兰Orion集团公司仪器型号：Turboxplus8.操作步骤：8.1试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液：液体待用。
8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。
定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。
8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。
8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。
下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。
临床意义：IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是一种高效能抗体、能固定补体，具有溶菌、抑菌、中和病毒作用。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels ofIgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used fordetermination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)020【总页数】2页(P2034-2035)【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白【作者】刘少华;邓文平;李燕【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000【正文语种】中文人体免疫球蛋白(Ig)测定，是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法，只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。
免疫球蛋白定量的测定方法
免疫球蛋白定量的测定方法
免疫球蛋白定量的测定方法，这可真是个超级重要的事儿啊！你知道吗，就好像我们要了解一个神秘宝库里面到底有多少宝贝一样。
先来说说单向免疫扩散法吧，这就像是在一个大平地上，让免疫球蛋白和特定的抗体慢慢扩散开来，然后形成一个个独特的沉淀环，通过测量这些沉淀环的大小，不就能知道免疫球蛋白的量了嘛！是不是很神奇？
还有免疫比浊法，哇哦，这就好像是一场激烈的比赛！让免疫球蛋白和抗体在特殊的环境里“较量”一番，然后通过观察溶液的浑浊程度来判断免疫球蛋白的多少，这多有意思呀！
还有呢，酶联免疫吸附测定法，这简直就是一个精心设计的实验舞台呀！把免疫球蛋白和各种试剂放在一起，通过一系列反应，最后用特殊的方法检测出结果，就像是一场精彩的魔术表演，最后谜底揭晓，我们就知道免疫球蛋白的量啦！
放射免疫测定法也不能落下呀！就如同能看到微观世界的神奇眼睛，利用放射性物质来精确测量免疫球蛋白的量，这是多么高妙的手段呀！
这些方法各有各的特点，各有各的厉害之处，不是吗？它们就像一群各具本领的超级英雄，为了我们的健康而战斗！我们能不好好了解它们吗？免疫球蛋白定量的测定方法真的是太重要了，它们是医学领域的得力助手，帮助医生们更准确地了解病情，为患者提供更好的治疗方案。
我们应该对这些方法充满敬意和感激，它们是守护我们健康的无声卫士啊！。
免疫球蛋白的检测方法
免疫球蛋白的检测方法免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称Ig）是一类在机体免疫应答中起关键作用的蛋白质，它能够识别和结合抗原，参与免疫反应的调节和执行。
因此，对免疫球蛋白的检测具有重要的临床意义。
本文将介绍免疫球蛋白的检测方法，以及各种方法的优缺点和适用范围。
一、免疫球蛋白的定量检测方法。
1. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
ELISA法是一种常用的免疫球蛋白定量检测方法，其原理是利用酶标记抗体与待测血清中的免疫球蛋白结合，再通过底物的反应产生显色反应来定量测定免疫球蛋白的含量。
ELISA法操作简便，灵敏度高，且能够同时检测多个样本，因此被广泛应用于临床诊断和科研领域。
2. 免疫荧光法。
免疫荧光法是利用荧光标记的抗体与待测血清中的免疫球蛋白结合，再通过荧光显微镜观察荧光信号来定量测定免疫球蛋白的含量。
该方法操作简单，对样本的要求较低，且具有较高的特异性和灵敏度，适用于多种免疫球蛋白的检测。
二、免疫球蛋白的定性检测方法。
1. 免疫固定电泳法。
免疫固定电泳法是一种通过电泳分离待测血清中的免疫球蛋白亚型的方法。
该方法操作简便，能够快速、准确地对免疫球蛋白的亚型进行鉴定，对于某些免疫球蛋白病的诊断具有重要意义。
2. 免疫印迹法（Western Blot）。
免疫印迹法是一种通过将待测血清中的免疫球蛋白分离并转移至膜上，再通过特异性抗体的结合来检测免疫球蛋白的方法。
该方法具有高度的特异性和灵敏度，能够对免疫球蛋白进行准确的定性鉴定。
三、各种方法的优缺点和适用范围。
1. ELISA法的优点是操作简便，灵敏度高，适用于大规模样本的检测，但其缺点是对待测物质的亲和性要求较高。
2. 免疫荧光法的优点是具有较高的特异性和灵敏度，适用于多种免疫球蛋白的检测，但其缺点是需要荧光显微镜等专门设备。
3. 免疫固定电泳法的优点是操作简便，能够快速、准确地对免疫球蛋白的亚型进行鉴定，但其缺点是不能进行定量测定。
4. 免疫印迹法的优点是具有高度的特异性和灵敏度，能够对免疫球蛋白进行准确的定性鉴定，但其缺点是操作较为繁琐，且耗时较长。
实验1 免疫比浊法检测免疫球蛋白
实验原理
合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG的作用下形成微粒，使 样品的浊度发生变化
可用分光光度仪测量反应液体的浊度。当抗体浓度固定，样品的浊度与 其中所含有的抗原量成正比。
由于免疫复合物的形成有时限变化。当抗原抗体相遇后立即结合成小复 合物，几分钟到几小时才形成可见的复合物，这种速度太慢，加入聚合 剂（或促聚剂）可加速大的免疫复合物形成。
散 射光
θ
检测器
散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。 其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
实验材料
免疫球蛋白A,G试剂 免疫球蛋白A、G校准品（Mix），蒸馏水 微量加样枪、EP管 分光光度仪、水浴箱
IgG R1 250μL
IgA RI 150μL
对照/标准品/
样本 2 μL
混
匀
37
医学免疫学实验
上海医学院免疫学系
2016-3-9
INSTITUTE FOR IMMUNOBIOLOGY DEPARTMENTOF IMMUNOLOGY
实验室注意事项：
实验安全
戴手套操作，注意试剂不要溅到眼里嘴里，有问题及时和老师沟通。
实验卫生
实验结束后学生收拾桌面，物归原处，移液器调回最大量程。值日生打 扫卫生，装好枪头，收拾垃圾，（垃圾扔在走廊西侧垃圾桶内）。
℃
水
浴
5
对照/标准品/ 分
样本 3 μL
钟
IgG R2 85μL 混
匀 37 ℃ 水 浴 5 IgA R2 分 50μL 钟
检测 OD700
试剂1（R1）： Tris缓冲液 20mmol/l 聚乙二醇-6000 4% 试剂2（R2）： Tris缓冲液 20mmol/l 羊抗人IgA/G抗体
免疫球蛋白GIgG测定免疫比浊法-检验科免疫室作业指导书
免疫球蛋白GIgG测定免疫比浊法原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。
抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。
散射光结果和血清中的IgG浓度成正比。
2.标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹。
标本种类：血清或血浆。
标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。
避免反复冻融。
标本运输：室温运输。
标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白G检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：7.1仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪7.2仪器厂家：芬兰Orion集团公司7.3仪器型号：Turboxplus操作步骤：试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液：液体待用。
8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。
定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。
为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。
准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。
下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
如下准备各比色管：轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
结果计算：仪器直接计算并打印结果。
临床意义：IgG是血清中抗细菌、抗病毒、抗毒素的主要抗体。
巨噬细胞、中性粒细胞表面具有IgGFc受体，可增强对细菌等物质的吞噬能力。
免疫球蛋白的定量检测方法
免疫球蛋白的定量检测方法免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是一类高度特异性的抗体分子，是机体免疫系统中的重要组成部分。
它们能够识别并结合抗原，参与体内外的免疫应答，并发挥抗体介导的免疫效应。
由于免疫球蛋白的重要性，准确地定量测定免疫球蛋白的水平对于诊断和监测许多疾病非常关键。
免疫学原理免疫球蛋白的定量检测方法基于免疫学原理，通过特异性抗体与待测的免疫球蛋白发生特异性结合反应，从而定量测定免疫球蛋白的浓度。
在典型的定量检测方法中，首先要选择特异性的抗体。
对于免疫球蛋白的检测，通常使用与特定免疫球蛋白亚类（例如IgG、IgM、IgA）结合的抗体。
这些抗体会与待测的免疫球蛋白发生特异性结合，而与其他免疫球蛋白亚类没有或有很弱的结合能力。
免疫球蛋白的定量检测方法免疫球蛋白的定量检测方法主要包括免疫比浊法、免疫电泳法和免疫透析法等。
免疫比浊法免疫比浊法是最常用的免疫球蛋白定量方法之一。
它利用免疫反应生成的免疫复合物会导致液体浑浊的特性，通过比较免疫复合物和标准溶液的浑浊程度可以推测出免疫球蛋白的浓度。
利用这个原理，可以通过比色法、比度法或比重法进行免疫比浊定量。
免疫电泳法免疫电泳法是一种将免疫反应与电泳相结合的方法。
在免疫电泳的过程中，将待测的免疫球蛋白与特异性抗体结合，然后经过电泳分离。
通过在凝胶上形成特定的免疫球蛋白带，就能够对免疫球蛋白进行定性和定量分析。
免疫透析法免疫透析法是通过利用半透膜将大分子量的抗原或抗体与待测免疫球蛋白分离的方法。
待测免疫球蛋白通过半透膜与特异性抗体进行反应，然后通过透析膜分离。
通过测定分离后的物质的浓度，可以定量测定免疫球蛋白的浓度。
应用领域免疫球蛋白的定量检测方法在临床医学和科研中具有广泛的应用。
在临床医学中，免疫球蛋白的定量检测方法常用于免疫系统疾病的诊断和治疗监测，例如免疫缺陷病、自身免疫病等。
此外，免疫球蛋白的定量检测也可用于感染病的检测与诊断，例如HIV、COVID-19等。
免疫球蛋白G(IgG) 免疫比浊法
项目免疫球蛋白G（IgG）方法免疫比浊法目录1．检测原理2．标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3．试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4．仪器5．操作6．计算7．操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8．参考值9．临床意义附录A: 参数1. 检测原理405nm样本中IGG + 试剂中的IGG抗体-----------------大分子免疫复合物在405nm监测生成的复合物的浊度变化，与样本中IGG含量成正比。
2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：不使用抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：R1：PEG4 缓冲液：包含高分子强化剂的磷酸盐缓冲液。
含有0.095%的叠氮化钠。
R2：IgG抗血清，含0.095%的叠氮化钠。
3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的多项免疫类标准液。
其中包含免疫球蛋白G的定值。
校准频次：全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较彭凤;徐晓萍;王琳;应春妹【摘要】Objective To compare the anti-interference abilities of immune turbidimetry and immune nephelometry for detecting specific proteins [ immunoglobulin G ( IgG) , immunoglobulin M (IgM ) and C reactive protein ( CRP) ] through the interferers of free bilirubin ( FBil) , conjugated bilirubin ( CBil) , hemoglobin ( Hb) and chyle ( CH ). Methods A total of 6 mixed serum samples were prepared under 2 levels (high/low) of specific proteins (IgG: 8-12 g/L, >16 g/L;IgM:1.0-1.5 g/L, > 2. 0 g/L;CRP:4-10mg/L, >100mg/L). The 4 interferers were prepared into 5 different concentrations(FBil:656, 1 312, 1 968, 2 624 and 3 280 μmol/L;CBil:688, 1 376, 2 064, 2 752 and 3 440 μmol/L;Hb:9.9, 19.8, 29.8, 39. 7 and 49.6μmol/L;CH:3 000, 6 000, 9 000, 12 000 and 15 000 FTU) by rules(l: 5 , 2- 5 , 3: 5, 4: 5 and 5: 5) , and the interferers were added to the mixed serum. The concentration of the specific proteins was detected by immune turbidimetry and immune nephelometry respectively, and the interference rate was calculated. The anti-interference abilities of the 2 methods were calculated according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) EP7-A standard. The average concentration of the specific proteins with different in terferers ±5% of the control tubes at the same concentration was considered to have interference. Results By the immune nephelometry, the values to detect IgM (high level ) and CRP ( low level) with theinterferer of Hb (9. 9 and 29.8 μmol/L)and Hb(9.9, 29.8 and 39.7 μmol/L) respectively, also the values to detect IgM (high level and low level ) with the interferer of CH (9 000, 12 000 and 15 000 FTU)and CH (6 000, 9 000,12 000 and 15 000 FTU) were all considered to have interference. However, by the immune turbidimetry,the values to detect IgG, IgM and CRP withthe 4 interferers were considered to have no interference. Conclusions To 4 interferers (FBil, CBil, Hb and CH) ,the anti-interference ability of immune turbidimetry is better than that of immune nephelometry. The immunernturbidimetry shows better accuracy to detect specimens with the interferers of lipidemia and haemolysis as large particles in the clinical application.%目的比较免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白[免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)和C反应蛋白(CRP)]时对游离胆红素(FBil)、结合胆红素(CBil)、血红蛋白(Hb)和乳糜(CH)的抗干扰能力.方法收集血清样本,分别制备高、低2种浓度(IgG:8 ～ 12 g/L、＞16 g/L;IgM:1.0 ～ 1.5 g/L、＞2.0 g/L；CRP:4 ～ 10 mg/L、＞100 mg/L)的特定蛋白混合血清6管,按1∶5、2∶5、3∶5、4∶5、5∶5将4种干扰物分别配成5种不同浓度(FBil:656、1 312、1 968、2 624、3 280 μmol/L;CBil:688、1 376、2 064、2 752、3440 μmol/L；Hb:9.9、19.8、29.8、39.7、49.6 μmol/L；CH:3 000、6 000、9 000、12 000、15 000 FTU)添加于混合血清中,用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法分别检测相应的特定蛋白浓度,计算干扰率,按美国临床实验室标准化协会(CLSI) EP7-A文件评价2种方法的抗干扰能力.添加不同浓度干扰物之后的特定蛋白测定均值超过同一浓度下的空白对照管的±5％为产生了干扰作用.结果免疫散射比浊法检测高浓度IgM、低浓度CRP分别在Hb浓度为9.9、29.8和9.9、29.8、39.7 μmol/L时有干扰作用；免疫散射比浊法测定高、低浓度IgM分别在CH浓度为9 000、12 000、15 000和6 000、9 000、12000、15 000 FTU时有干扰作用；而4种干扰物对免疫透射比浊法检测IgG、IgM和CRP均无干扰作用.结论免疫透射比浊法对临床常见的4种干扰物(FBil、CBil、Hb和CH)的抗干扰能力优于免疫散射比浊法.免疫透射比浊法对于干扰物颗粒较大的脂血、溶血样本具有更高的准确性.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2013(028)002【总页数】4页(P142-145)【关键词】免疫球蛋白G;免疫球蛋白M;C反应蛋白;免疫透射比浊法;免疫散射比浊法;抗干扰能力【作者】彭凤;徐晓萍;王琳;应春妹【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海200127【正文语种】中文【中图分类】R446.62在临床检测样本时，经常遇到溶血、黄疸和脂血样本。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
诱导剂
增 加 散 透 率 : 660nm 测 定 散 射 光
散射光测定
检测器 (LED) 样品
光电计 100 % 散射光强度 0% 时间
速率散射比浊法
（一）基本原理 — 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 — 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 单位时间内 复合物的速度。 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起， 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时， 间内形成速率下降时， 速率峰， 即出现速率峰 即出现速率峰，该峰 值的高低， 值的高低，即代表所 测抗原的量。 测抗原的量。
光通量是每单位时间到达、 光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面 的光能数量
散射比浊法
• 原理 在入射光的一定角度检测粒子发出的散 在入射光的一定角度检测粒子发出的散 一定角度 射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。 射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。 IC的含量呈正比
散射比浊法测定原理
聚集形成 聚集形成
材料
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 1.免疫球蛋白试剂A,M,G 免疫球蛋白试剂 2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品， 2.免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水 免疫球蛋白试剂A,M,G校准品 3.微量加样枪 3.微量加样枪 4.分光光度仪 4.分光光度仪
结果计算方法
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）= 校准管浓度 × Ig校准浓度（g/L）
透射比浊法和散射比浊法光路
IC I
透射比浊法 检测器A 检测器
I0
免疫比浊法检测免疫球蛋白
抗体的特异性、效价、亲和力 3、反应的溶液 4、增浊剂的使用
透射比浊法和散射比浊法优缺点比较
1、透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度 计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想， 所需的抗血清量大，检测的周期较长。
2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特 定的分析仪器，试剂价格高。
本实验中应用聚乙二醇的生理特性聚乙二醇是中性无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物聚乙二醇即peg具有高度的亲水性在水溶液中有较大的水动力学体积并且没有免疫原性
免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫学系
实验原理
免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中 特异结合，产生一定大小的复合物，形成 光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后 的透射光或散射光作为计算单位。
散射比浊法的缺陷
(1)因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个待 测样本的吸收和散射效果，可测定结果不准确
(2)测定的仍是抗原－抗体反应的第二阶段，不适合 快速检测。
(3) 终点法存在反应本底，测定样本的含量越低本底 比例越大，故在微量测定时，本底的干扰是影响 准确测定的重要因素。
影响免疫比浊测定的因素
当一束光
免
线通过溶
疫
液受到光
比
散射和光
浊 法 分 类
吸收两个 因素的影 响而使光
的强度减
弱
散射比浊法: 在光源的光路方向（50-960） 角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
透射比浊法: 在光源的光路方向（00） 测量透射光强度和被检测 溶液微粒浓度关系的方法。
透射比浊法和散射比浊法光路
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免疫比浊法检测免疫球蛋白
时间：地点：实验人：
1基本原理：
样本中的IgA、IgG与试剂中的抗IgA和抗IgG的特异性抗体结合，产生不溶性免疫复合物，使得反应溶液产生浊度。
溶液浊度与样本中IgA、IgG的浓度成正比。
在合适的nm处（700nm）测吸光度，通过计算可以得到IgA、IgG的浓度。
2实验材料：
免疫球蛋白A、G（IgA、IgG）测定试剂（试剂1、试剂2）
免疫球蛋白A、G（IgA、IgG）校准品
蒸馏水、血清样本
微量加样枪、ep管（1.5ml离心管）
酶标仪、水浴箱
3实验方法步骤
在酶标管内反应。
从左到右共做6管试剂：
1：IgG试剂1（125µl）+蒸馏水1µl
2：IgG试剂1（125µl）+校准品1µl
3：IgG试剂1（125µl）+样本1µl
4：IgA试剂1（150µl）+蒸馏水3µl
5：IgA试剂1（150µl）+校准品3µl
6：IgA试剂1（150µl）+样本3µl
混匀，37度水浴五分钟。
继续添加试剂，从左到右：
1、2、3：IgG试剂2（42.5µl）
4、5、6：IgA试剂2（50µl）
混匀，37度水浴五分钟。
在OD700nm测取吸光度，记录数据。
4.实验结果：
4.1 IgG蛋白：
空白管吸光度0.051 校准管吸光度1.155 样本管吸光度0.699
IgG校准浓度31.3g/L
待测血清样本中免疫球蛋白含量IgG浓度（g/L）= 0.699-0.051/1.155-0.051 ×31.3=18.4g/L
实验结果偏高，且误差为（18.4-16.0）/16.0 ×100% =15.0%
4.2 IgA蛋白：
空白管吸光度0.049 校准管吸光度0.372 样本管吸光度0.212
IgA校准浓度4.15g/L
待测血清样本中免疫球蛋白含量IgA浓度（g/L）=0.212-0.049/0.372-0.049
×4.15=2.1g/L 实验结果在标准范围内
5实验分析：
5.1 IgG实验校准组数值偏高的原因我们认为可能有以下几点：
●IgG试剂所加的量偏高，但是没有达到过量的程度。
导致更多的抗体与抗原
结合，从而使得有更多的抗原抗体复合物沉淀生成，造成最后算出的校准组IgG浓度偏高。
●IgG实验校准组液体中含有气泡，气泡使得液体的吸光度增加，从而造成最
后算出的校准组IgG浓度偏高。
●抗原抗体复合物沉淀附着在装置内壁，阻碍光线传播，造成吸光度偏大。
●透射比浊法本身灵敏度和精密度均不够理想，所做得的结果方差较大，造成
本次实验校准组吸光度偏大。
●抗原抗体反应需要一定时间和温度，操作过程中可能因为时间限制未能使抗
原抗体完全反应，对实验数据可能会造成一定影响。
5.2免疫比浊法的适合区带？
应采用抗体过量的前带，因为所检测的物质是抗原，希望所加样品中的抗原完全与抗体结合形成微粒，所有的微粒均可吸收酶标仪中透过的光线。
因为吸光度OD值与溶液中颗粒的浓度成正比，而计算时默认颗粒的浓度与样品中所含抗原的浓度相当，所以，只有在抗体含量过量时，才能保证所有抗原都能与抗体结合形成微粒，降低因抗原未完全结合抗体所带来的误差。
5.3加样头在每次加样器加样之前需不需要更换？
如果加样头没有伸入液面以下，或者是没有更换加样头中所加试剂的种类，则不需要更换加样头。
5.4为什么分两次在37。
C水浴加热而非一次?
我们分析认为，在加入抗原之前先进行37。
C保温处理，能够更好的保证抗体正常的生理活性，避免了低温环境下小部分抗体活性降低或者失活对实验的影响，使得实验数据具有更高的准确性。