维生素B1片含量测定的方法验证
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备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
加样回收试验
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 称样量 （g） 0.16 0.2500 0.2512 0.2509 0.2500 0.2500 0.2504 0.2500 0.2510 15.0 42.84 33.1 15.0 53.04 29.8 15.0 待测组分 含量 （mg） 对照品加 入量 （mg） 测得量 （mg）
•含量测定 • 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml
量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度 ，摇匀→ 得到对照品溶液。 • 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分 别测定吸光度，计算即得。
实验内容与要求
•鉴别试验 •吸收波长选择 •精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
如何引用？ RSD% •重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光 度）计算标示量%，计算RSD% •稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算 RSD% •加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加 样回收率试验 •含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
分析方法的验证
1 2 3 4 5
98~102%
平均加样 回收率 （%）
回收率 （%）
RSD （%）
65.28
27.2
100.1
98.6
100.0
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
撰写方法学验证论文
• • • • • • •
线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 精密度试验 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 重复性试验 加样回收试验: 设计称样量、对照品加入量 含量测定：根据实验测定数值进行计算
• 含量测定
1% 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，E1 cm 421
实验方法
1. 鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解， 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇 2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的 蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱 使成碱性，则荧光复现。
稳定性试验
• 同批、同法
序号 1
时间 (min)
信号值
Fra Baidu bibliotek
平均 信号值
RSD （%）
RSD （%）
2 3 4 5 6 7
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度 •要求 •同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 •RSD < 2.0% ……仪器分析
重现性试验(示例)
Cl- HCl
N
性
质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应： • 紫外吸收特性：Amax=246nm • 与生物碱沉淀试剂反应 • 氯化物特性：
氯化物检查
特征性鉴别
含量测定
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素， 色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现 于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物 分析》第六版，P258）
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定；
•RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
精密度试验
•目的
•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可
信程度
•要求
•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶
液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内 • RSD < 2.0% ……仪器分析
•含量测定
1.精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg，标
示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml
量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15
分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥 滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中， 盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 得到供 示品溶液。
线性关系和范围
精密度试验
重现性试验 加样回收试验 稳定性试验
线性与范围
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量
瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解， 并定容至刻度，摇匀 →分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、 5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液 （9→1000）至刻度，摇匀→将其置于紫外分光光度计中 在246nm处测量→并用C做A的回归曲线。
精密度试验（示例 ）
实验 序号 1 2 3 4 5 6
信号值 0.512 0.508 0.511
平均值
RSD
0.510
0.509 0.510 0.509
0.2% (<2.0%)
加样回收率试验
•目的
•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值
或参考值接近的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
线性关系
序号 浓度 （mg/ml）
1
2
3
4
5
测定值
稳定性试验
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置 100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量， 使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →将其 置于紫外分光光度计中在246nm处测量→在0、15、 30、45、60min时间点分别测定样品的A246→在0、 1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.
实验八 维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
药物分析实验
实验原理
•维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
NH2 H2 C
CH2CH2OH N+ CH3
试验 序号 1 2 3 4 5 6 称样量 （g） 0.1666 0.1667 0.1669 0.1742 0.1667 … RSD 测定值 含量 平均含量 （mg） （mg/g） （ mg/g ） （%） 22.04 24.82 21.90 23.54 20.86 … 132.29 148.89 131.22 134.53 135.13 125.13 … 0.3% <2.0%
•RSD < 2.0%
加样回收试验
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 称样量 （g） 0.16 0.2500 0.2512 0.2509 0.2500 0.2500 0.2504 0.2500 0.2510 15.0 42.84 33.1 15.0 53.04 29.8 15.0 待测组分 含量 （mg） 对照品加 入量 （mg） 测得量 （mg）
•含量测定 • 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml
量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度 ，摇匀→ 得到对照品溶液。 • 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分 别测定吸光度，计算即得。
实验内容与要求
•鉴别试验 •吸收波长选择 •精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
如何引用？ RSD% •重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光 度）计算标示量%，计算RSD% •稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算 RSD% •加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加 样回收率试验 •含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
分析方法的验证
1 2 3 4 5
98~102%
平均加样 回收率 （%）
回收率 （%）
RSD （%）
65.28
27.2
100.1
98.6
100.0
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
撰写方法学验证论文
• • • • • • •
线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 精密度试验 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 重复性试验 加样回收试验: 设计称样量、对照品加入量 含量测定：根据实验测定数值进行计算
• 含量测定
1% 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，E1 cm 421
实验方法
1. 鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解， 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇 2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的 蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱 使成碱性，则荧光复现。
稳定性试验
• 同批、同法
序号 1
时间 (min)
信号值
Fra Baidu bibliotek
平均 信号值
RSD （%）
RSD （%）
2 3 4 5 6 7
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度 •要求 •同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 •RSD < 2.0% ……仪器分析
重现性试验(示例)
Cl- HCl
N
性
质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应： • 紫外吸收特性：Amax=246nm • 与生物碱沉淀试剂反应 • 氯化物特性：
氯化物检查
特征性鉴别
含量测定
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素， 色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现 于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物 分析》第六版，P258）
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定；
•RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
精密度试验
•目的
•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可
信程度
•要求
•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶
液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内 • RSD < 2.0% ……仪器分析
•含量测定
1.精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg，标
示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml
量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15
分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥 滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中， 盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 得到供 示品溶液。
线性关系和范围
精密度试验
重现性试验 加样回收试验 稳定性试验
线性与范围
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量
瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解， 并定容至刻度，摇匀 →分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、 5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液 （9→1000）至刻度，摇匀→将其置于紫外分光光度计中 在246nm处测量→并用C做A的回归曲线。
精密度试验（示例 ）
实验 序号 1 2 3 4 5 6
信号值 0.512 0.508 0.511
平均值
RSD
0.510
0.509 0.510 0.509
0.2% (<2.0%)
加样回收率试验
•目的
•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值
或参考值接近的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
线性关系
序号 浓度 （mg/ml）
1
2
3
4
5
测定值
稳定性试验
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置 100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量， 使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →将其 置于紫外分光光度计中在246nm处测量→在0、15、 30、45、60min时间点分别测定样品的A246→在0、 1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.
实验八 维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
药物分析实验
实验原理
•维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
NH2 H2 C
CH2CH2OH N+ CH3
试验 序号 1 2 3 4 5 6 称样量 （g） 0.1666 0.1667 0.1669 0.1742 0.1667 … RSD 测定值 含量 平均含量 （mg） （mg/g） （ mg/g ） （%） 22.04 24.82 21.90 23.54 20.86 … 132.29 148.89 131.22 134.53 135.13 125.13 … 0.3% <2.0%