维生素B1片含量测定的方法验证
维生素B1片含量测定方法的验证
Ｇａ ａ ｉ ｏＹｊｅ Ａｂ ｔａ ｔ０ｂｅｔｖ ： ｅ ｌｒ ｖｏｅ ｐ ｃｒ ｐ ｏ ｏ ｔｉ ｔ ｄｄ ｔｒ ｎ ｔｏ ｔ ｍｉ １ｐｅ ｅｏ ｔ ｍｉ １ ｏ ｔ ｎ ｎ ａ ｒｅ ｈ ｏ ｉ— ｓｒｃ ： ｊｃｉｅ Ｕｓ ｓｕｔａ ｉｌｔｓ ｅ ｔｏ ｈ ｔ ｍｅｒｃｍｅｈｏ ｅｅｍｉ ａｉｎＶｉａ ｎＢ ｉｃ ｆＶｉａ ｎＢ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｄ ｃ ｒｉｓｏｎｔ ｅｃ ｎｆｒ
ｍａ ｏ ｏ ｔ ｉ ｔ ｏ ． ｅ ｈ ｄ ： ｉｈ ｔ ｅ ｕ ｔ ａ ｉ ｌ ｔ ｐ ｃ ｒ ｐ ｏ ｏ ｉ ｒ ｎ ｔ ｈ ｓ ｍｅ ｈ ｄ Ｍ ｔ ｏ ｓ Ｗ ｔ ｈ ｌｒ ｖ ｏ ｅ ｅ ｔｏ ｈ ｔ ｍｅ ｒｃｍｅ ｈ ｄ ｉ ｈ ４６ ｓ ｔｉ ｔ ｏ ｔ ｅ ２ ｎｍ ｌ ｃ ｅ ｅ ｍｉ ａ ｉ ｎ ｅ ｔｎ ｔ ｎ， ｎ ｂｓ ｒ ｓｔ ｅ ｍｅ ｈ ｄ ｎ ｐａ ｅｄ ｔ ｒ ｎ ｔ ｘ ｉｃｉ ｏ ｏ ａ ｄａ ｏ ｂ ｈ ｔ ｏ ｏｆ ｏ ｒ ｌ ｔ ｓ ａ ｄ ｔ ｅ ｃ ｍｐａ ｉｏ ｏ ｐ ｒｓ ｎ ｔ ｓ ｏ ｐ ｔ ｔｏ ｔ ｈ ｒ ｅ ｔ ｇ ．Ｒｅ ｕ ｔ ： ｔ ｒ ｎｅ ｈ ｔ ｍｉ １ｃ ｎｔ ｎ ｔ ｈ ｔ ａ ｉ ｌ ｔ ｒｅａｅ ｎ ｈ ｏ ｃ ｒｓ ｎ ｃ ｍ ａ ｉ ｏ ｅ ｔ ｃ ｍ ｕ ａ ｉ ｎ ｗｉｈ ｔ ｅ ｐｅ ｃ ｎ ａ ｅ ｓ ｌｓ Ｄｅ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｅ Ｖｉ ａ ｎ Ｂ ｏ ｅ ｔ ｗｉｈ ｔ ｅ ｕｌｒ ｖ ｏ ｅ
摘要 ： 目的 ： 用 紫 外 分光 光 度 法测 定 维 生素 Ｂ 采 １片 中维 生 素 Ｂ 的 含 量 并 对 该 方 法进 行 验 证 。方 法 ： 紫 外 分 光 光 度 法 在 ２ ６ ｍ 处 测 定 吸 光 １ 用 ４ｎ 度 ， 用 百分 吸 收 系数 法和 对 照 品 比较 法 计 算 。结 果 ： 紫 外 分 光光 度 法测 定 维 生素 Ｂ 含 量的 方 法专 属 性 好 ； 并 用 当维 生 素 Ｂ 浓度 在 ７ ５ １． ｐ ／ １ ． ～ ７ ５ ｇ ｍｌ 范 围时 线 性 关 系 良好 ， 归 方程 为 Ｙ一０ ０ １ Ｘ＋０ ０ ９ ， 性 相 关 系数 ｒ ； 均 回 收 率 为 ９ ． ０ ， Ｄ＝０ ４ ； 密 度 为 ０ ７ ； 百 分吸 收 回 ．４Ｉ ．０４线 一１ 平 ９ ６ ＲＳ ．５ 精 ．６ 用 系数 法计 算 平 均 标 示量 为 １ １ ７ ， 对 照 品 比 较 法 计 算平 均 标 示 量 为 １４ ３ 。结 论 ： 紫外 分 光 光度 法测 定 维 生 素 Ｂｌ 中维 生 素 Ｂ ０ ． 用 ０ ． 用 片 ｌ的 含 量 操
维生素b1片含量测定的方法验证
维生素B1在体内参与糖代谢，对维持神经系统正常 功能和防止脚气病有重要作用。
维生素B1的测定方法
荧光分光光度法
01
利用维生素B1在特定波长下的荧光特性进行定量分析。
高效液相色谱法
02
通过色谱柱将维生素B1与其他杂质分离，再通过紫外检测器进
行定量。
微生物法
03
利用含有维生素B1的微生物培养基培养微生物，通过测定微生
维生素B1片含量测 定的方法验证
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
确定维生素B1片的含量
目的
通过实验测定，确定维生素B1片 中维生素B1的含量，为生产质量 控制和药品监管提供依据。
方法
采用高效液相色谱法（HPLC）进 行测定，通过色谱柱分离、检测 器检测，计算峰面积并外标法定 量。
采用合适的统计分析方法，如平 均值、标准差、变异系数等，对 数据进行分析和比较。
实验误差分析
误差来源
分析实验过程中可能产生的误差来源，如称量误差、滴定误差、 读数误差等。
误差传递
根据误差来源，计算误差对最终结果的影响，并评估误差传递的 规律和特点。
误差控制
针对误差来源，采取相应的措施，如使用高精度天平、规范操作 流程等，以减小误差对结果的影响。
05
CATALOGUE
结论
实验结论总结
实验结果表明，采用高效液相色谱法测定维生素B1片 的含量是可行的，该方法具有较高的准确度和精密度
，能够满足药品质量控制的测定要求。
输标02入题
在实验过程中，我们发现维生素B1片在波长为 246nm处有最大吸收，因此选择该波长作为检测波长 较为合适。
紫外分光光度法测定维生素B1片含量(精)
药物分析实验课班级：学生(学号：导师：实验室201 年月日紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证一、摘要二、仪器与试药三、原理四、实验部分处方分析：组成处方量(g 比例(%维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（）为421计算，即得。
2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1 250μg/ml的对照溶液。
分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。
标准曲线测定数据1 2 3 4 5浓度7.5 10 12.5 15 17.5吸收度2.2.回收试验（准确度试验）对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同2.1项下。
供试品溶液的制备：精密称取维生素B1精制原料约0.25g，置50ml量瓶中，加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成5.0mg/m维生素B1溶液储备液；分别精密量取该溶液4、5、6ml置已加入比例量辅料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml 量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含量。
维生素B1片的含量测定以及方法验证2
原有量mg
加入量mg
测得量mg
回收率mg
取供试品20片，精密称定，称取片粉适量（约相当于 维生素B125mg），一式5份，置100mL容量瓶中，加 盐酸溶液（9 → 1000）适量，振摇15min，再加盐酸 溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量 取滤液5mL，置另一100mL量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，即得约含维生素 B112.5mg/mL的供试品溶液。另取维生素B1对照品适 量，用盐酸溶液（9 → 1000）稀释制成12.5ug/mL的 对照品溶液。照分光光度法在246nm处分别测定供试 品溶液和对照品溶液的吸光度，用百分吸光度和对照品 比较法分别进行计算，即得
浓度μg/mL 吸光度
7.5
10.0
12.5
15.0
17.55.91ug/mL的溶液，分 别在-20℃、-4℃、室温放置0min、15min、 30min、45min、60min、75min，然后在 246nm波长测的吸光度。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约 相当于维生素B115mg），置100mL棕色容量瓶中， 共称9份。其中3份分别加入浓度为70.29ug/mL， 对照液50mL，3份分别加入浓度为101.53ug/mL， 对照液50mL，加盐酸溶液（9到1000）至刻度， 摇匀，精密量取上述溶液5.0mL置100mL量瓶中， 加盐酸溶液（9 → 1000）稀释至刻度，摇匀，在 246nm的波长处测吸光度，计算含量，并求回收 率。
维生素B1
精密称取相当于维生素B1片粉25mg，置于100mL 量瓶中，加盐酸溶液（9 → 1000）约70mL，摇 匀15min使维生素B1溶解，加同种溶剂稀释至刻度， 摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取5mL，置于一 100mL量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，用 紫外分光光度法，在246nm波长测定吸收度，计 算含量。
维生素B片含量测定的方法验证课件
CH2CH2OH
Cl- HCl
CH3
维生素B片含量测定的方法验证
2
性质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应：
特征性鉴别
• 紫外吸收特性：Amax=246含n量m测定 • 与生物碱沉淀试剂反应 • 氯化物特性：氯化物检查
维生素B片含量测定的方法验证
3
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
• 吸收波长选择 • 精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD% • 重复性试验：引如用何其引他用组？ 同学数据（称样量，吸光度）
计算标示量%，计算RSD% • 稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算
RSD%
• 加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样 回收率试验
• 含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
• RSD < 2.0%
维生素B片含量测定的方法验证
18
加样回收试验
98~102%
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
维生素B片含量测定的方法验证
19
撰写方法学验证论文
• 线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 • 精密度试验 • 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 • 重复性试验 • 加样回收试验: • 设计称样量、对照品加入量 • 含量测定：根据实验测定数值进行计算
维生素B片含量测定的方法验证
8
分析方法的验证
1
线性关系和范围
2
精密度试验
3
重现性试验
4
加样回收试验
5
稳定性试验
维生素B片含量测定的方法验证
9
线性与•范精围密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g)比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。
2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀1250μg/ml的对照溶液。
紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证
５Ｏ ０ｍｇ 、Ｈ １（－ １０ ）。试药 ：维生素Ｂｌ （ 格 １ｍ ． ０ ／ ０ ｍＬ Ｃ ９－ ０ ０ ＇ 片 规 ０ｇ １０ ，产 品批号２ １０３ ，生产 日 ０ １ ７１，华 中药业股份有 限 ０片 ０ １７４ 期２ １． ． ０ ０
４０ｍ波长处 扫描 ，即得维生素Ｂ的最大吸收峰 （ ）。 ０￣ ０ｎ 图１
取供试 品２片 ，精密称定 ，研 细 ，称取片 粉适量 （ 当于维生 ０ 约相
素Ｂ２ｍｇ ５ ），置１０ Ｌ ０ｍ 量瓶 中，加盐酸溶 液 （— １０ ）约７ ｍ ，振 ９ ００ ０Ｌ
摇 １ｍｎ ５ ｉ使维生素Ｂ溶解 ，再加盐酸溶 液 （— １０ ）稀 释至刻度 ，摇 。 ９ ００
匀 ，用干燥 滤纸滤过 ，精密量取 续滤液５ ，置 另一 １０ 量瓶 中， ｍＬ ｏｍＬ
约６ｍｇ １ ，取相 当于２ｍｇ ５ 维生素Ｂ的片粉约０ ５。表 １ 。 ．ｇ １ 为处方 。
３ 测定条件选择 ． ２ 最大 吸收波长的确定 ：精密称 取维生素Ｂ对照 品２ｍｇ ５ ，用溶剂盐
５０ 移 液 管 、 电子 天平 （ Ｐ １ Ｓ ．ｍＬ Ｂ ２ ０ 编号 ：１ ９ ７ １ ） 、漏 斗 、维 ９ ９ ８ ３
【］ 梅 武轩 ， ３ 曾常春 ． 提 取物 对大 鼠乙酸 胃溃 疡愈合 质量 的影 响 乳香 ［ ． 中西医结 合 消化杂 志 ， ０ ， （） ４３． Ｊ 中国 】 ２ ４１ ４： —７ ０ ２ ３
４ ・买验 研 究 ・ ５ ６
加盐 酸溶液 （— １０ ）稀释至 刻度 ，摇匀 ，的供试 品溶液 ；取维生 ９ ００ 素Ｂ对照 品适量 ，用盐酸溶液 （— １０ ）稀 释制成 １． ，ｍＬ 。 ９ ００ ２ ｐ ／ 的对照 ５ｇ 品溶 液 。照分 光光度法 （ｈＰ ００ Ｃ ．２ １年版第 二部 附录ＩＡ） ，在２ ６ｍ Ｙ ４ｎ 处分 别测定供试 品溶 液和对照 品溶 液的吸光度 ，用百 分吸光度和对 照
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证
【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证一、实验目的1.验证维生素B1含量测定的方法的准确性和可靠性。
2.了解高效液相色谱法对于短波紫外检测器的适应性。
二、实验原理1.高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种高效分离、快速分析的方法。
它与用计算机控制的仪器联用，可以进行定量、半定量和定性分析。
本实验中，采用HPLC法测定维生素B1的含量。
2.短波紫外检测器短波紫外检测器是一种用于分析有机物的光谱仪器。
它在紫外光谱的200~400nm范围内进行检测，可以检测吸收较大的分子。
在本实验中，采用短波紫外检测器测定维生素B1的含量。
三、实验步骤1.样品的准备取维生素B1片0.2g，加入250mL量瓶中，加入10mL0.1mol/L盐酸溶液，加水至刻度线，摇匀，称取100mL筛滤取滤液5mL，加入5mL4%磷酸溶液中，用向后溯流液相色谱（HPLC）法测定。
2.试剂的准备（1）0.1mol/L盐酸溶液取盐酸100mL，加水至1000mL，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液调节pH，使溶液处于酸性状态。
（2）4%磷酸溶液取磷酸15mL，加水至250mL，摇匀。
（3）乙腈甲醇（2:1）将乙腈甲醇配制成2:1比例。
3.测定方法（1）样品注射量为20μL。
（2）柱温为35℃。
（4）短波紫外检测器的检测波长为266nm。
4.数据处理及结果分析四、实验结果样品编号维生素B1标准品质量（mg）峰面积（mv∙s）维生素B1含量（mg）1 0.006 8898 0.0062 0.008 11956 0.0083 0.010 15576 0.0104 0.012 18960 0.0125 0.014 22004 0.0146 0.016 25597 0.0167 0.018 28887 0.0188 0.020 32295 0.0202.维生素B1含量的平均值：五、实验分析通过本实验，我们验证了测定维生素B1含量的方法的准确性和可靠性。
紫外分光光度法测定维生素B片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)10 16.39维生素B1淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm 的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%E）为421计算，即得。
1cm2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1250μg/ml的对照溶液。
维生素B1片的含量测定的方法验证
维生素B1片的含量测定的方法验证专业：药物制剂班级：姓名：学号：紫外分光光度法测定维生素B1片的含量摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。
实验_维生素b1片含量测定的方法验证
• 5，掌握考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或
参考值接近的程度
实验原理
• 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
N
NH2 H2 C N+
•RSD < 2.0% ……仪器分析
重现性试验
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
稳定性试验
•要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min
时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分 别测定样品的峰面积。
含量测定
精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置
100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml
摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇 匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液1.0ml置于 25ml量瓶中，共两份盐酸溶液（9→1000）定容至 刻度，摇匀 → 测用吸光系数计算浓度。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
加样回收率试验
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
撰写方法学验证论文
•线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 •精密度试验
• 稳定性试验
根据实验测定数值进行计算
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
处方分析：
组成
维生 素 B1
淀粉 糊精 硬脂 酸镁 生产
处方 量(g)
10 20 30 1.0 1000
比例 (%)
16.39 32.78 49.18 1.639
片
根据处方量分析，维生素 B1 含 16.39%，辅料含 83.61%。平均片重约 61mg，取相当于 25mg 维生素 B1 的片粉约 0.15g。
2.2. 回收试验（准确度试验）
对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同 2.1 项下。 供试品溶液的制备：精密称取维生素 B1 精制原料约 0.25g，置 50ml 量瓶中， 加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成 5.0mg/m 维生素 B1 溶液储备液； 分别精密量取该溶液 4、5、6ml 置已加入比例量辅料（0.15g，1/100 天平）的 100ml 量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约 70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9 →1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液 5ml，置另一 100ml 量瓶中，摇匀，得 高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在 246nm 的波长处测定吸收度，
编加 对
吸测
回收
号 入 量 照 液 浓 光 得 对 照 率（%）
（mg） 度
度A 液浓度
（ug/ml）
（ug/ml）
11
10.
0 9.2
92.6
0.00 00
.370 6
21
10.
0 9.2
92.6
0.00 00
.370 6
31
10.
0 9.2
92.6
0.00 00
.370 6
41
12.
0 11.
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Cl- HCl
N
性
质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应： • 紫外吸收特性：Amax=246nm • 与生物碱沉淀试剂反应 • 氯化物特性：
氯化物检查
特征性鉴别
含量测定
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素， 色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现 于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物 分析》第六版，P258）
•含量测定 • 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml
量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度 ，摇匀→ 得到对照品溶液。 • 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分 别测定吸光度，计算即得。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验内容与要求
•鉴别试验 •吸收波长选择 •精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
• 含量测定
1% 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，E1 cm 421
实验方法
1. 鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解， 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇 2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的 蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱 使成碱性，则荧光复现。
稳定性试验
• 同批、同法
序号 1
时间 (min)
信号值
平均 信号值
RSD （%）
RSD （%）
2 3 4 5 6 7
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度 •要求 •同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 •RSD < 2.0% ……仪器分析
重现性试验(示例)
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定；
•RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
精密度试验
•目的
•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可
信程度
•要求
•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶
液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内 • RSD < 2.0% ……仪器分析
•含量测定
1.精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg，标
示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml
量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15
分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥 滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中， 盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 得到供 示品溶液。
98~102%
平均加样 回收率 （%）
回收率 （%）
RSD （%）
65.28
27.2
100.1
98.6
100.0
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
撰写方法学验证论文
• • • • • • •
线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 精密度试验 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 重复性试验 加样回收试验: 设计称样量、对照品加入量 含量测定：根据实验测定数值进行计算
如何引用？ RSD% •重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光 度）计算标示量%，计算RSD% •稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算 RSD% •加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加 样回收率试验 •含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
分析方法的验证
1 2 3 4 5
试验 序号 1 2 3 4 5 6 称样量 （g） 0.1666 0.1667 0.1669 0.1742 0.1667 … RSD 测定值 含量 平均含量 （mg） （mg/g） （ mg/g ） （%） 22.04 24.82 21.90 23.54 20.86 … 132.29 148.89 131.22 134.53 135.13 125.13 … 0.3% <2.0%
实验八 维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
药物分析实验
实验原理
•维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
NH2 H2 C
CH2CH2OH N+ CH3
线性关系和范围
精密度试验
重现性试验 加样回收试验 稳定性试验
线性与范围
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量
瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解， 并定容至刻度，摇匀 →分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、 5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液 （9→1000）至刻度，摇匀→将其置于紫外分光光度计中 在246nm处测量→并用C做A的回归曲线。
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
加样回收试验
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 称样量 （g） 0.16 0.2500 0.2512 0.2509 0.2500 0.2500 0.2504 0.2500 0.2510 15.0 42.84 33.1 15.0 53.04 29.8 15.0 待测组分 含量 （mg） 对照品加 入量 （mg） 测得量 （mg）
线性关系
序号 浓度 （mg/ml）
1
2
3
4
5
测定值
稳定性试验
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置 100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量， 使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →将其 置于紫外分光光度计中在246nm处测量→在0、15、 30、45、60min时间点分别测定样品的A246→在0、 1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.
精密度试验（示例 ）
实验 序号 1 2 3 4 5 6
信号值 0.512 0.508 0.511
平均值
RSD
0.510
0.509 0.510 0.509
0.2% (<2.0%)
加样回收率试验
•目的
•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值
或参考值接近的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制