D-D二聚体测定标准操作程序
D-D二聚体测定标准操作程序
文件编号制定日期文件版次正文页数附件份数第一版5D-二聚体测定作业指导书文件持有部门：检验科临检室D-二聚体测定（分析仪器法）1实验原理：免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5,与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集2.1早晨空腹采血（空腹12小时左右）,静脉采血。
2.23.8 % （w∕v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放1小时内（3000r∕min × 15min）分离血浆，室温放置不超过2小时,2〜8C保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70 C不超过6个月），只能冻融1次，在37C迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4标本运输：低温条件下运输。
5 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。
6. 实验材料：6.1 德国Dade Behring MarbUrg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂，用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（15C ~25C）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2〜8 C贮存到说明书上有效期，复溶试剂2〜8 C保存不超过2天，室温保存不超过5天。
6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15 C ~25C）放置约15分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2〜8 C贮存到说明书上有效期，复溶试剂2〜8 C保存不超过5天。
6.3 D-Dimer PLUS复溶液：液体。
用于溶解D-二聚体PLUS乳胶试剂。
D-D二聚体测定标准操作程序
D-二聚体测定（分析仪器法）1实验原理：免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4标本运输：低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂,用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过2天，室温保存不超过5天。
6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。
6.3D-Dimer PLUS复溶液：液体。
用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。
6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
D二聚体检测(胶乳凝集法)作业指导书
D二聚体检测（胶乳凝集法）作业指导书1.原理用D-二聚体的单克隆抗体致敏胶乳颗粒，当血浆中D-二聚体浓度升高，胶乳颗粒将发生凝集。
2. 标本采集：2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：血浆2.3标本要求：采集静脉血2ml，枸橼酸钠抗凝(蓝色盖子的抗凝管)，分离血浆备用。
3. 标本储存：待测血浆室温下储存不超过4小时，4℃不超过8小时，-20℃不超过一个月。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：凝集、溶血、脂血和细菌污染标本不能作测定。
6. 试剂6.1 试剂名称：D二聚体检测试剂盒6.2 试剂生产厂家：美国Fisher科技有限公司6.3 包装规格：80 Test/kit6.4 试剂组成：6.4.1 致敏胶乳试剂---Latex Reagent6.4.2 阳性对照---Positive Control6.4.3 阴性对照---Negative Control6.4.4 样品稀释液---Saline Solution6.4.5 实验板6.4.6 搅棒6.5 试剂储存条件及有效期：保存于2～8℃，有效期1年。
7. 操作步骤：7.1 定性检测：7.1.1 用前将所有试剂回复至室温。
7.1.2 按下表在实验板#1，#2，#3区域滴加试剂。
7.2.1 用前将所有试剂恢复至室温。
7.2.2 用样品稀释液稀释标本：阴性：呈现圆滑均匀的乳状悬液。
阳性：呈现凝集颗粒。
半定量测定：浓度为出现阳性结果的最高稀释度×0.25µg/ml9. 参考范围：阴性或<0.25µg/ml10. 质量控制：每次试验均应设阴性和阳性对照，其结果应与预期相符。
11. 临床意义：11.1 高凝状态，血栓性疾病和DIC时，血浆D-二聚体明显升高，是诊断DIC的重要依据。
11.2 D-二聚体在继发性纤溶症时升高，而在原发性纤溶症时正常，这是鉴别两者的重要依据。
12. 操作性能：快捷简便、灵敏度0.225µg/ml，重复性好，特异性高。
D-Dimer标准操作流程
D－二聚体标准操作流程目录1 目的2 检测原理3 产品信息4 试剂配制5 试剂保存和稳定性6 预防和警告7 样本收集和准备8 检测需要但试剂盒中未提供的耗材9 质量控制10定标11定标方法 (如需要)12操作流程13结果14 结果解释15程序局限性16 预期结果17 性能特征18 参考文献1 目的此程序提供在ACL™ 8000，ACL9000上使用HemosIL D-Dimer试剂用于D-二聚体检测的指导。
2 测试原理D-二聚体存在于因子XIIIa交联纤维蛋白(XDP)纤溶酶降解过程中形成的可溶性衍生物中。
这些可溶性纤维蛋白降解产物包括一种原纤维蛋白原分子中没有的新抗原（D-二聚体结构），以及它的降解产物和可溶性纤维蛋白。
D-二聚体胶乳试剂是一种大小均一的聚苯乙烯乳胶颗粒悬浊液，这些乳胶颗粒上包被有对纤维蛋白可溶性衍生物中的D-二聚体结构具有高度特异性的单克隆抗体。
当含有D-二聚体的血浆与D-二聚体试剂盒中的乳胶试剂和反应缓冲液反应时，包被的乳胶颗粒会发生凝集。
凝集的程度与样本中D-二聚体浓度成正比，仪器通过检测405 nm 波长处，由凝集引起的透射光的减少进行测定（透射免疫比浊法）。
3 产品信息D-二聚体试剂盒（P/N 20008500）内含：胶乳试剂：4 瓶x 3 mL包被有鼠单克隆抗体 (MA-8D3)聚苯乙烯乳胶颗粒冻干悬浊液，内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。
反应缓冲液：3瓶x9mL磷酸盐缓冲液，内含牛血清白蛋白，稳定剂和防腐剂。
D-二聚体定标液：2 瓶x 1 mL冻干溶液，为从人纤溶酶降解的纤维蛋白中部分纯化的D-二聚体。
内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。
D-二聚体质控（P/N 20008610）试剂盒内含：低值质控： 5 瓶x 1 mL冻干溶液，为从人纤溶酶降解的纤维蛋白中部分纯化的D-二聚体。
内含牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。
高值质控：5 瓶x 1 mL冻干溶液，为从人纤溶酶降解的纤维蛋白中部分纯化的D-二聚体。
D-二聚体(D-Dimer)测定标准操作规程
D-二聚体（D-Dimer）测定标准操作规程1检验原理：本试剂采用单克隆抗体和乳胶增强免疫比浊法测定人血浆中D －二聚体的含量。
血浆中的D-D抗原与试剂中相应抗体在液相中结合，形成抗原抗体复合物，产生浊度变化，乳胶试剂可以特异的增大该浊度变化，增大试剂的灵敏度。
该浊度变化的高低与样本中D-D的含量成正比。
测定该浊度，与标准血浆比较，即能得出样本血浆中D-D含量。
2.试剂主要组成成分：R1:PBS缓冲液、表面活性剂R2:PBS缓冲液、表面活性剂、鼠抗人D-D的致敏乳胶颗粒悬液。
3.样本要求：采集静脉血，置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠采血管中，通过离心管收集上层血浆，应避免溶血；当天采集当天测试，如当天采集样本不能及时测定应保存于-20℃（建议1个月内使用），测定前37摄氏度快速融化，切忌反复冻融。
4.检验方法：全自动血凝分析仪测定（详见雷杜RAC-1830标准操作规程）5.参考区间：0-0.5mg/L6.检验结果的解释：专业人员负责检验结果的审核。
检验结果的分析，受年龄、性别、饮食、地域影响，通常在参考区间内认为正常，如超出范围，应重新测定进行确认。
检测结果仅反应采样当时状态，需临床医生结合临床及其他检测指标进行相关判断。
检查结果如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析查找原因。
7.检验方法的局限性7.1本试剂线性范围为0.2—20mg/mL(37℃)，超出线性范围的样本应用生理盐水稀释后重测。
7.2本法受许多测试前因素的影响，包括样本采集及保存、技术人员熟练程度、感染物质等，因此必须严格控制这些因素。
8.产品性能指标：8.1线性范围：在0.2—20.00mg/mL（37℃）范围，相关系数（r）应≧0.9908.2重复性：CV≦10%8.3批间差：≦15%。
8.4准确度：相对偏差不超过±15%9.4临床意义DIC时，血浆D－二聚体明显升高，呈阳性反应，是诊断DIC的重要依据.D －二聚体在原发性纤溶症时正常，继发性纤溶亢进则显著增高，是二者鉴别的重要指标，此外，各型白血病，急性心肌梗死、脑血管疾病、肺脏疾病、外科手术等均可见血浆D－二聚体水平增高。
检验科D-二聚体检测标准操作规程
检验科D-二聚体检测标准操作规程1.【目的】为保障血浆D-二聚体测定结果的准确性，特制作本规程。
2.【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【标本类型及实验前准备】1．标本类型1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
2.患者准备早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
3.容器、添加剂类型3.8％枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
4.仪器设备1. 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪2. 仪器厂家:日本Sysmex公司3. 仪器型号:Sysmex CA-15004. 仪器技术参数:4.1 速度: 最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。
4.3 样本位:50个,可自动连续添加。
5. 仪器校准程序:5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂批号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。
5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。
5.实验试剂德国Dade Behring Marburg 公司的D-Dimer测定试剂（60人份/套）,未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开封试剂2～8℃保存不超过5天。
4.【测定原理】免疫比浊法：当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
DD二聚体测定标准操作程序
D-二聚体测定(分析仪器法)1实验原理:免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时,聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体(DD5),与交联纤维蛋白降解产物(D-二聚体)的交联区域结合。
交联区域呈立体结构,有两个单克隆抗体表位。
总之,一个单克隆抗体就能触发凝集反应,随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测,将吸光度转换成浓度值,由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集2、1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2、23、8％(w/v)枸椽酸钠0、2ml+静脉血1、8ml,混匀。
3标本存放1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时,长时间保存需在冰冻条件下,(-70℃不超过6个月),只能冻融1次,在37℃迅速解冻,以减低凝血因子的消耗,解冻后立即测试。
4标本运输:低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6、实验材料:6、1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂,用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂,室温(15℃~25℃)放置约5分钟,并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期,复溶试剂2～8℃保存不超过2天,室温保存不超过5天。
6、2 D-Dimer PLUS加速剂:用5ml蒸馏水溶解,室温(15℃~25℃)放置约15分钟,并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前,轻轻振荡试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期,复溶试剂2～8℃保存不超过5天。
6、3D-Dimer PLUS复溶液:液体。
用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期,开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。
6、4 Dade D-二聚体质控血浆I/II、用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
D-D二聚体测定标准操作程序
D-二聚体测定（分析仪器法）1实验原理：免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4标本运输：低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂,用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过2天，室温保存不超过5天。
6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。
6.3D-Dimer PLUS复溶液：液体。
用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。
6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
D-D二聚体测定标准操作程序
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D-二聚体测定作业指导书
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制定部门 检验科
文件持有部门：检验科临检室
D-二聚体测定 （分析仪器法）
1 实验原理：免疫比浊法
当混合标本中含有 D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产 物（D-二聚体）的交联区域结合。交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。总之，一个单 克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。仪器在 575nm 处通过对浊度改变的监测，将 吸光度转换成浓度值，由此获得样本中 D-二聚体的量。
6.2 D-Dimer PLUS 加速剂：用 5ml 蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约 15 分钟，并不时混匀。将 试剂放于仪器相应的试剂位置上。使用前，轻轻振荡试剂。未开封试剂 2～8℃贮存到说明书上有 效期，复溶试剂 2～8℃保存不超过 5 天。
6.3 D-Dimer PLUS 复溶液：液体。用于溶解 D-二聚体 PLUS 乳胶试剂。未开封试剂 2～8℃贮存到说 明书上有效期，开瓶后试剂 2～8℃保存不超过 12 周。
6.4 Dade D-二聚体质控血浆 I/II.用蒸镏水 1ml 溶解后放置 30 分钟,才能使用或分装。复溶后,室温保 存 2 小时,2～8℃4 小时。
7. 仪器设备:
7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500 全自动血液凝固分析仪 7.2 仪器厂家:日本 Sysmex 公司
7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤: 8.1 检查前准备:
D-二聚体(D-Dimer)测定标准操作程序SOP文件
D-二聚体(D-Dimer)测定标准操作程序SOP文件1 测定方法颗粒增强的免疫比浊法。
2 测定原理标本中的D-二聚体(D-Dimer)与试剂中包被有抗D-二聚体抗体的胶乳颗粒相遇，发生特异性的抗原-抗体反应，形成抗原-抗体复合物，使溶液的浊度发生改变。
该浊度的高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比，待反应完成后测定其浊度，从而使D-二聚体得以测定。
3 标本枸橼酸盐抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20 - 25℃ 8小时4 - 8℃ 4天-20℃ 6个月其他：冰冻标本要在37℃温箱中完全溶解，再在室温重稳定15分钟后才能使用。
标本不需要稀释。
混匀标本要避免形成泡沫，标本要在2500g至少离心15分钟。
4 试剂4.1 试剂来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末R1：打开后机上稳定28天R2：打开后机上稳定28天准备：R1:直接使用。
R2直接使用，但是第一次使用和上机后每周要混匀一次。
其他：将R1和R2试剂放入37℃温箱中温育，并且在室温重稳定30分钟，然后将试剂放入仪器冷藏室，稳定30分钟后使用为佳。
4.2 校准物来源：符合Asserachrom的D-Dimer检测标准，具体如下：S1-6: D-Dimer 定标液（货号：1556495）贮存条件：校准物在2-8℃保存至效期末。
准备: 直接使用。
定标频率：A 试剂批号更换 B 由质控结果决定4.3 质控物来源：roche 的D-Dimer质控品其它适合的质控品贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。
质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5 仪器ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6 操作见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。
参数设置见附表。
7 参考范围< 0.5ug/ml8 线性范围本法线性范围为0.15-9.0ug/ml，不准确度允许范围X±3SD，不精密度CV=6.5%，灵敏度为0.04ug/ml。
2020年整理D-D二聚体测定标准操作程序.pdf
D-二聚体测定（分析仪器法）1实验原理：免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4标本运输：低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂,用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过2天，室温保存不超过5天。
6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。
6.3D-Dimer PLUS复溶液：液体。
用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。
6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
医院检验中心D1D二聚体操作规程
医院检验中心D1、D-二聚体操作规程
[原理]
以抗D-二聚体单克隆抗体标记固相载体胶乳颗粒，在此胶乳颗粒抗体结合物中加入受检血浆，如血浆中含0.5mg/L以上的D-二聚体,胶乳颗粒则发生凝集反应.
[标本与试剂准备]
0.109M枸椽酸钠抗凝剂与血液以1:9混匀,2500g 10分钟离心。
试剂在室温平衡15分钟后摇匀使用.
[操作]
在黑色纸片上的每个圈内各放入15ul未稀释样本血浆,阳性对照和阴性对照血浆，依次于每个圈内加摇匀后的胶乳试剂15ul(与标本等量),用塑料棒搅匀,轻轻摇动纸片2~3分钟后观察，如未稀释血浆呈阳性,可继续将样本用标本稀释液作倍比稀释。
[结果]
根据阳性结果的倍比值作半定量结果报告.
[临床意义]
DIC时,血浆D-二聚体明显升高,呈阳性反应,是诊断DIC的重要依据.D-二聚体在原发性纤溶症时正常,继发性纤溶亢进则显著增高,是二者鉴别的重要指标,此外,各型白血病,急性心肌梗死、脑血管疾病、肺脏疾病、外科手术等均可见血浆D-二聚体水平增高。
DD二聚体测定标准操作程序PDF.pdf
D-二聚体测定（分析仪器法）1实验原理：免疫比浊法当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4标本运输：低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂,用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过2天，室温保存不超过5天。
6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。
6.3D-Dimer PLUS复溶液：液体。
用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。
6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
D-二聚体测定
D-二聚体测定D-二聚体（D-dimer，D-D）是交联纤维蛋白降解产物之一，为继发性纤溶特有代谢产物。
本检测主要反映患者的继发性纤溶状态。
（一）定性试验1.检验原理乳胶凝集法。
D-二聚体乳胶试剂是一种聚苯乙酰乳胶颗粒，它包被有高特异性的D-二聚体抗体，当血浆中D-二聚体与乳胶试剂混合，可使包被的乳胶颗粒凝聚，凝聚程度与血浆中的D-二聚体含量呈正相关。
2.检验方法学（1）试剂1）包被D-D抗体的乳胶颗粒。
2）磷酸盐缓冲液，pH 7.35。
（2）标本采集与制备：受检全血与0.109mol/L枸橼酸钠溶液作9∶1抗凝，充分混匀，1500r/min离心10分钟，以此制备乏血小板血浆。
（3）标本检验：取D-二聚体乳胶试剂25μl置瓷板或玻璃板上，加受检血浆10μl，立即用塑料棒（直径不超过1.0cm）搅匀，持板晃动3分钟，于黑色背景下观察有无凝聚出现。
同时按上法用缓冲液作阴性对照。
乳胶颗粒较阴性对照明显粗大者为阳性。
3.方法学评价（1）离心时间及特殊的标本类型会对检测构成影响（详见凝血酶原时间测定）。
（2）受检血浆中存在肝素及类风湿因子可干扰本检验，导致假阴性结果出现。
4.质量保证（1）为确保D-二聚体乳胶试剂的质量，每次检测均应做阴、阳性对照。
（2）应在采血后4小时内完成检测，否则可出现假阴性。
5.参考范围阴性。
6.临床意义D-二聚体升高多见于深静脉血栓形成，弥散性血管内凝血、心肌梗死、恶性肿瘤、外科手术、创伤、妊娠、肝脏疾病及肺栓塞等；陈旧性血栓患者D-二聚体并不升高。
（二）定量试验1.检验原理双抗体夹心法。
将一种单抗包被于聚苯乙烯塑料板上，用另一种单抗标记辣根过氧化物酶，加入待检标本后测定孔内形成特异性的抗体-抗原-抗体复合物，可使底物显色，生色深浅与标本中心的D-二聚体含量成正比。
2.检验方法学（1）试剂和仪器：已包被抗体的酶标板、酶标抗体、酶标抗体反应助剂、标本稀释液、D-D标准品、洗涤液、底物邻苯二胺、底物缓冲液、30%H2O2、终止液3mol/L硫酸、酶标仪。
D-D二聚体测定标准操作程序
文件编号制定日期文件版次正文页数附件份数第一版5D-二聚体测定作业指导书文件持有部门：检验科临检室D- 二聚体测定分析仪器法）实验原理 ：免疫比浊法当混合标本中含有 D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（ DD5,与交联纤维蛋白降解产 物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单 克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在 575nm 处通过对浊度改变的监测，将 吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
标本采集早晨空腹采血 （空腹 12 小时左右 ）, 静脉采血。
3.8 ％ （w/v ） 枸椽酸钠 0.2ml+ 静脉血 1.8ml, 混匀。
标本存放1小时内（3000r/min x 15min ）分离血浆,室温放置不超过 2小时,2〜8C 保存不超过 4小时，长时 间保存需在冰冻条件下，（-70 C 不超过6个月）,只能冻融1次，在37C 迅速解冻，以减低凝血 因子的消耗，解冻后立即测试。
标本运输： 低温条件下运输。
标本拒收的标准 : 抗凝剂不符合 , 采血量不准确 , 凝固 , 溶血 , 脂血标本不能作测定。
实验材料 :德国 Dade Behring Marburg 公司 D-Dimer PLUS 乳胶试剂 , 用 4mlD- 二聚体 PLUS 复溶液溶解一 瓶D 二聚体PLUS 试剂，室温（15C ~25C ）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的 试剂位置上。
未开封试剂 2〜8 C 贮存到说明书上有效期，复溶试剂2〜8 C 保存不超过2天，室温保存不超过 5 天。
D-Dimer PLUS 加速剂：用5ml 蒸馏水溶解，室温（15 C ~25C ）放置约15分钟，并不时混匀。
将 试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2〜8 C 贮存到说明书上有效期，复溶试剂2〜8 C 保存不超过5天。
D-Dimer PLUS 复溶液：液体。
D-二聚体(D-Dimer)测定作业指导书
D-二聚体(D-Dimer)测定1 测定方法颗粒增强的免疫比浊法。
2 测定原理标本中的D-二聚体(D-Dimer)与试剂中包被有抗D-二聚体抗体的胶乳颗粒相遇，发生特异性的抗原-抗体反应，形成抗原-抗体复合物，使溶液的浊度发生改变。
该浊度的高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比，待反应完成后测定其浊度，从而使D-二聚体得以测定。
3 标本枸橼酸盐抗凝血浆, 处理方法见标本处理程序。
稳定性：20 - 25℃ 8小时4 - 8℃ 4天-20℃ 6个月其他：冰冻标本要在37℃温箱中完全溶解，再在室温重稳定15分钟后才能使用。
标本不需要稀释。
混匀标本要避免形成泡沫，标本要在2500g至少离心15分钟。
4 试剂4.1 试剂来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末R1：打开后机上稳定28天R2：打开后机上稳定28天准备：R1:直接使用。
R2直接使用，但是第一次使用和上机后每周要混匀一次。
其他：将R1和R2试剂放入37℃温箱中温育，并且在室温重稳定30分钟，然后将试剂放入仪器冷藏室，稳定30分钟后使用为佳。
4.2 校准物来源：符合Asserachrom的D-Dimer检测标准，具体如下：S1-6: D-Dimer 定标液（货号：1556495）贮存条件：校准物在2-8℃保存至效期末。
准备: 直接使用。
定标频率：A 试剂批号更换 B 由质控结果决定4.3 质控物来源：roche 的D-Dimer质控品其它适合的质控品贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。
质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5 仪器ROCHE MODULAR P生化分析仪。
6 操作见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。
参数设置见附表。
7 参考范围< 0.5ug/ml8 线性范围本法线性范围为0.15-9.0ug/ml，不准确度允许范围X±3SD，不精密度CV=5%，灵敏度为0.04ug/ml。
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D-二聚体测定
（分析仪器法）
1实验原理：免疫比浊法
当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。
交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。
总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。
仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。
2标本采集
2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.2
3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3标本存放
1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4标本运输：低温条件下运输。
5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:
6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂, 用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶
D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。
将试剂放于仪器相应的试剂位置上。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过2天，室温保存不超过5天。
6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。
将
试剂放于仪器相应的试剂位置上。
使用前，轻轻振荡试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。
6.3D-Dimer PLUS复溶液：液体。
用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。
未开封试剂2～8℃贮存到说明
书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。
6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。
复溶后,室温保
存2小时,2～8℃4小时。
7. 仪器设备:
7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司
7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500
7.4 仪器技术参数:
7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。
7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。
7.5 仪器校准程序:
7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂批号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校
准。
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤:
8.1 检查前准备:
8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。
8.1.2 添加足够反应杯(不能超过警告线)。
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。
8.2 开机
先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。
8.3 输入工作清单:
从主菜单选,
按相应实验项目名称键并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、
TT）”，可按，选完项目后按
本编号项目。
（快速输入可用
8.4 放置样本
按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5 按.
盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架
样本工作清单,按继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。
8.6 每日维护:（完成每日的测定后,关机前维护。
）
8.6.1 冲冼针Rinse Probe
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。
8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。
8.7 关机:先关主机,再关打印机。
9．检验结果的判断与分析:
9.1 仪器测定D-Dimer的线性范围在40-2000ug/L,测定完成后仪器显示D-D含量等参数。
若不能对参
数进行正确计算,将出现下列信息:
﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ.ˉ不能计算参数
＋＋＋.＋数值超出线性范围.
9.2 仪器设定D-D参考范围在40-2000ug/L,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:
﹡出现错误信息
< 数据低于可报告的低限
> 数据高于可报告的高限
10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控
限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则详见室内质控作业指导书。
11 临床意义：检测D二聚体交联降解产物，即可反映纤溶作用。
11.1参考范围：﹤500ug/L
11.2 D二聚体浓度增加见于各种局灶性、弥漫性、年龄性的血栓性疾病。
因此，D二聚体浓度基础值
超出健康人群的范围，不能排除血栓性疾病。
D二聚体检测结果应结合其他实验室检查结果和临床数据。
D二聚体升高提示出现凝块，报告有深静脉血栓，肺栓塞和弥漫性血管内凝血。
11.3若D二聚体结果低于决定水平，可以用阴性预示值排除血栓可能。
12变异的潜在来源
12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查
12.2标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成
结果变异。
12.3纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。
12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。
12.5FDP增加使凝固时间延长。
12.6某些药物，如口服避孕药、雌激素、无门冬跣胺酶、钠络酮等影响测试结果。
13. 操作注意事项:（干粉试剂及质控血浆溶解）
13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书
要求使用。
13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。
13.3复溶后，室温放置15-30分钟方可使用。
14. 仪器维护与保养
14.1 日常维护（见8.6）
14.2 每周维护
14.2.1液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按
→按键运行此程序→完成后按返回。
14.2.2清洁仪器：定期用擦布擦干净仪器内外，包括试剂槽。
14.3 需要时维护：
14.3.1调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按→按
键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。
14.3.2更换灯泡：关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装上内外盖→从主菜单按
14.3.3更换保险管：关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上保险管盖。
15. 参考文献
15.1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社.
15.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500操作手册》 1998.6修订本.
15.3 DADE BEHRING D-DimerPLUS试剂说明书。