R D 血型鉴定操作规程

检验科ABO及RH血型标准操作规程

检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。

2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。

1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。

1.3受检者血清。

1.4受检者5%红细胞盐水悬液。

2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。

2.25%D阳性红细胞生理悬液。

2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。

4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。

常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。

②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。

结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。

虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。

Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。

5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。

2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。

3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。

4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。

ABO和RH血型鉴定操作规程4

ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。

二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。

2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。

（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。

（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。

如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。

（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。

2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。

(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。

有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。

3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。

试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程

试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定的技术操作，保证鉴定结果准确及临床输血安全有效。

二、适用范围适用于试管法进行ABO和RhD血型鉴定。

三、原理1、单克隆抗-A、抗-B试剂与受检者红细胞反应作为正定型，A、B、O型试剂红细胞与受检者血清（血浆）反应作为反定型，以检测受检者红细胞上的A、B抗原及血清（血浆）中抗-A、抗-B。

根据受检者红细胞表达的A、B抗原及血清（血浆）中抗-A、抗-B情况判断ABO血型。

2、单克隆抗-D试剂与受检者红细胞反应，检测受检者红细胞是否表达D抗原，根据结果判断RhD血型。

四、设备与试剂设备：普通离心机，血型血清学专用离心机，显微镜试剂：单克隆抗A抗B抗D试剂，3%-5%的A、B、O红细胞五、环境条件室温控制在18-27℃，湿度保持在30%-70%。

六、步骤和方法1、将受检者血标本离心分离血清（血浆）及压积红细胞，取压积红细胞30—50微升加生理盐水1毫升稀释成3%—5%红细胞悬液。

2、取干净试管6支，正定型分别标记为抗-A、抗-B，反定型分别标记Ac、Bc、Oc另标记抗-D，在标记为抗-A、抗-B、抗-D的3支试管中分别加入相应的单克隆试剂2滴约100微升，再各加入受检者3%—5%红细胞悬液1滴约50微升；在标记为Ac、Bc、Oc的3支试管中各加入受检者血清（血浆）2滴约100微升，再分别加入相应的A、B、O型试剂红细胞1滴约50微升，轻摇使试管内反应物混匀。

用血型血清学专用离心机120g离心1 min后观察结果。

3、首先观察有无溶血现象，然后轻轻转动试管，边转动边观察有无凝集，使沉于管底的红细胞全部悬浮。

如肉眼观察不能确定有无凝集时须在显微镜下观察确定。

4、结果判断4.2 ABO血型鉴定结果判定规则，如下表：4.3 RhD血型判定：红细胞与单克隆-D试剂凝集为RhD阳性，无凝集为RhD阴性。

七、质量控制单克隆抗-A、抗-B、抗-D试剂在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性和效价。

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。

(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。

2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。

(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。

(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。

(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。

2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。

(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。

(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。

人民医院RhD血型鉴定

人民医院Rh（D）血型鉴定1、实验原理红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。

2、标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。

如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。

收集在ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液标本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。

3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品：Rh(IgM)血型定型试剂（单克隆抗体）：4、操作步骤4.1 玻片法：4.1.1 干净玻片上加1滴抗D。

4.1.2 再加入1滴40%-50%的被检红细胞悬液。

该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。

4.1.3 在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。

2分钟左右肉眼判读结果。

不要将试剂的干燥与凝集相混淆。

4.1.4 如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。

4.2 盐水试管法4.2.1 加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中4.2.2 再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。

混匀。

4.2.3 离心，速度和时间可选择以下二种之一：转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。

4.2.4 检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，是细胞再悬浮起来。

4.2.5 观察凝集状况，并立即记录结果。

必要时可借助显微镜。

4.2.6 若是阴性结果，需在37℃孵育15分钟-30分钟，然后再离心观察结果。

结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。

4.3 微量板法（U型板）4.3.1 加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。

4.3.2 再在微孔中一滴约3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。

4.3.3 用机械的方法将U型板混匀。

4.3.4 用板式离心机离心：2000rpm,时间30 秒。

不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。

Rh(D)血型鉴定标准操作程序

SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血型鉴定。

三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。

ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。

其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。

其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。

用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。

1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。

由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。

一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。

1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。

绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。

2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。

3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。

3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。

不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。

2.Rh(D)血型鉴定操作规程

4.试剂及设备:
4.1RhD血型定型试剂、0.9%生理盐水
4.2血型血清学离心机、显微镜、恒温水浴箱
5.样本的采集与处理:
5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。
5.2标本要求：
5.2.1抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。
5.2.2手指血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。
10.3RH新生儿溶血病（HDN）患儿输血或换血的原则：பைடு நூலகம்BO血型同患儿血型相同，RH血型同母亲血型相同。
10.5RH弱D型妇女与RH阳性丈夫生育的婴儿可能产生新生儿溶血病。
10.6RHD抗原阴性患者血小板输注原则:尽管血小板表面无RH抗原但制品中含有一定量的红细胞,可使患者致敏,故RHD抗原阴性生育期的女患者(包括女童)应输RHD阴性血小板。
8.2.3某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。
8.2.4如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。
8.2.5遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。
8.2.6抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
9.质量控制;
9.1抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
9.2由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
9.3Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
9.4对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
6.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。

Rh血型鉴定操作规程

抗D血型鉴定操作规程1.目的：定性鉴定患者Rh（D）血型2.适用范围：适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。

3.方法及原理;该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。

.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。

在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。

其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。

其鉴定方法，由抗血清的性质而定。

如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。

4.试剂及设备:4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱5.样本的采集与处理:5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。

5.2标本储存：2℃-8℃保存。

5.3标本运输：室温运输5.4.标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定。

6.操作步骤：6.1试管法6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。

6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。

6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。

6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。

6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。

6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。

6.2玻片法6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。

6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。

6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。

6.2.4记录结果6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。

8.干扰因素:8.1假阳性因素8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。

血型鉴定、交叉配血操作规程

⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。

根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。

5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。

备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。

⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。

【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。

【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。

【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。

ABORhD血型定型检测试剂卡操作规程

ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作规程【试验目的和原理】ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。

对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。

其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。

常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。

Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D 抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。

ABO/RhD血型定型检测试剂卡采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D抗体的凝胶。

A细胞、B 细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。

当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】1、用于输血前检测（1）鉴定ABO,以备选择ABO血型相配合的血液用于交叉配血。

（2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。

2、用于围产期检查（1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。

（2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。

3、用于常规ABO、RhD血型化验检查，如健康体检等。

Rh(D)血型鉴定操作规程完整

对象：全院职工
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
Rh（D）血型鉴定
【原理】Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统。Rh血型系统常见的抗原有D和C、c、E、e五种，分别由RHD基因和RHCE基因编码，RhD和RhCE蛋白均是反复穿膜的蛋白质。使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E、抗e五种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，一般只做D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）抗D试剂与红细胞反应表现凝集，而对照为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阳性
（2）抗D试剂与对照均为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阴性
（3）对照管凝集则试验无效
【注意事项】玻片法可能存在感染性标本暴露的风险，需要注意防范；玻片法不适用于检测弱D表型

Rh(抗D)血型鉴定标准操作程序文件

Rh（抗D）血型鉴定标准操作程序文件1.【原理】Rh血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇有相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。

若误诊误治，可导致患者残废或死亡。

有条件者应作此检查。

目前，一般应用5种分型血清来检查红细胞抗原。

临床上，凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带D抗原者，称为Rh阴性。

2、【使用的标本种类和收集方法】2.1、受检者2-3％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水32滴（1.6ml）配成2-3％的红细胞悬液。

2.2、标本接收2.2.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。

2.2.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。

2.3、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3. 【仪器和试剂】3.1、仪器型号：TL80-1型医用离心机3.2、仪器厂家：中国江苏姜岩是田里医疗器械有限公司3.3、许可证号：苏药管械（试）字2001第2030436号3.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序3.5、Rh抗血清本科使用珠海贝索生物技术有限公司生产的Rh抗血清试剂产品注册号:国食药监械(准)字2004第3400398号4. 【操作】4.1 取小试管2支,用蜡笔标记，分别加上述Rh抗血清1滴,再加2-3%受检者红细胞盐水悬液2滴,混匀。

离心：3200-3400转/min,15--30秒4.2结果判断:轻摇试管，观察结果：如受检管凝集,即表示阳性；受检管不凝集,即表示阴性。

5、【注意事项】5.1、Rh抗血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。

如出现混浊或变色则不能使用。

5.2、。

试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

5.3、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

5.4、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。

RD血型鉴定操作规程

1.试管法
【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于Rh鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。
【试剂】
（1）IgM抗D试剂
（2）Rh对照试剂
【操作】
（1）加1滴抗D到一洁净试管，并做好标记
（2）加1滴Rh对照试剂到第二个洁净试管中，并做好标记
（3）分别加1滴2%～5%红细胞悬液到每支试管中
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为%～%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）抗D试剂与红细胞反应表现凝集，而对照为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阳性
（2）抗D试剂与对照均为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阴性
（3）对照管凝集则试验无效
【注意事项】玻片法可能存在感染性标本暴露的风险，需要注意防范；玻片法不适用于检测弱D表型
【参考文献】
中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第四版）
RD血型鉴定操作规程
对象：全院职工
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：
修订日期：
执行日期：
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科

输血科RhD血型鉴定

输血科Rh（D）血型鉴定1、实验原理红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。

2、标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。

如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。

收集在ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液标本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。

3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品：Rh(IgM)血型定型试剂（单克隆抗体）：4、操作步骤4.1 玻片法：4.1.1 干净玻片上加1滴抗D。

4.1.2 再加入1滴40%-50%的被检红细胞悬液。

该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。

4.1.3 在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。

2分钟左右肉眼判读结果。

不要将试剂的干燥与凝集相混淆。

4.1.4 如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。

4.2 盐水试管法4.2.1 加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中4.2.2 再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。

混匀。

4.2.3 离心，速度和时间可选择以下二种之一：转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。

4.2.4 检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，是细胞再悬浮起来。

4.2.5 观察凝集状况，并立即记录结果。

必要时可借助显微镜。

4.2.6 若是阴性结果，需在37℃孵育15分钟-30分钟，然后再离心观察结果。

结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。

4.3 微量板法（U型板）4.3.1 加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。

4.3.2 再在微孔中一滴约3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。

4.3.3 用机械的方法将U型板混匀。

4.3.4 用板式离心机离心：2000rpm,时间30 秒。

不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。

Rh(D)血型鉴定操作规程

【参考文献】
中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第四版）
对象：全院职工
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
Rh（D）血型鉴定
【原理】Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统。Rh血型系统常见的抗原有D和C、c、E、e五种，分别由RHD基因和RHCE基因编码，RhD和RhCE蛋白均是反复穿膜的蛋白质。使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E、抗e五种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，一般只做D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
1.试管法
【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于Rh鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。
【试剂】
（1）IgM抗D试剂
（2）Rh对照试剂
【操作】
（1）加1滴抗D到一洁净试管，并做好标记
（2）加1滴Rh对照试剂到第二个洁净试管中，并做好标记

Rh(D)血型鉴定标准操作程序

SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血型鉴定。

三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。

ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。

其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。

其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。

用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。

1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。

由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。

一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。

1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。

绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。

2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。

3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。

3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。

不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。

Rh(D)血型鉴定

1.1.6 200Xg离心1分钟或1000Xg离心20秒。
1.1.7轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察集反应。
若结果仍为阴性，需要时则从如下步骤进行弱D表型检测实验。
1.2、弱D表型抗原检测
1.2.1操作步骤与上述盐水试管法相同。如果先前已进行了盐水试管法实验，同一试管可直接用弱D表型检测实验。
输血科
5，其它附注参见ABO血型鉴定。
输血科
文件编号：
Rh（D）血型鉴定
版序：
页码：第1页，共2页
【原理】
红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。
【试剂组成】
抗D试剂
广谱抗人球蛋白
【试剂保存和稳定性】
存放2—8℃，有效期内使用。
【标本收集和制备】
无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。收集在ACD、CPD、CPD－2A液中的血液标本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。
2．3 用干净涂棒，将试剂和血液充分混匀。
2．4 在一个照亮的观察箱上方轻轻前后倾斜玻片，观察凝集反应。并在显微镜下镜检证实。
【结果判断】
1．阳性表明所测的红细胞带有D抗原。
2．阴性表明所测的红细胞缺少正常强度的D抗原，这种情况下，对于病人可以可靠地定型为Rh(D)阴性，但是，对于献血员应经过间接抗人球蛋白试验确定是否存在弱D表型。
【质量控制与附注】
1，抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
2，由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
3，Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。