分子生物学实验中常用的抗生素配置及工作浓度
AbMole 生物实验中常用的抗生素讲解
AbMole|生物实验中常用的抗生素讲解抗生素主要是由细菌、霉菌或其他微生物产生的次级代谢产物或人工合成的类似物，在筛选稳定表达株、抑制微生物或肿瘤细胞、调节细胞等方面发挥重要作用。
针对研究中常用的抗生素，为大家逐一介绍。
实验筛选用抗生素01G-418disulfate(遗传霉素)G-418disulfate（M2719）是一种氨基糖苷类抗生素，在原核和真核细胞的蛋白质合成过程中，能够阻止蛋白质的延伸，进而抑制蛋白质的合成。
G418浓度在1-300mg/毫升时，能抑制多种原核和真核生物；来自Tn5（编码氨基糖苷3'-磷酸转移酶，APT3'II）的neo基因能产生G418抗性，通常用在实验室研究中用于筛选基因工程细胞。
一般作用于细菌和藻类的浓度为5mg/L或更低，筛选哺乳动物细胞的浓度为400mg/L，维持哺乳动物细胞的浓度为200mg/L。
02Puromycin Dihydrochloride(嘌呤霉素)Puromycin dihydrochloride（M3637）是一种氨基核苷类抗生素，能够特异地抑制原核和真核核糖体上的肽链转移，常用于筛选通过质粒转染/转化、病毒感染等方法能表达pac基因（puror）的真核或原核多克隆或单克隆细胞。
嘌呤霉素能够通过抑制蛋白质合成而抑制革兰氏阳性菌和各种细胞的生长，在某些特定条件下也可用于大肠杆菌转化子的筛选。
哺乳动物细胞一般对1-10µg/ml浓度敏感，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，则多数情况下使用浓度为125µg/ml。
03Hygromycin B(潮霉素B)Hygromycin B（M2761）是由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
抗生素工作浓度
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
生命科学科研领域常用抗生素概要
生命科学科研领域常用抗生素北京华越洋生物G418溶液 (geneticin,20mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,6个月又称遗传霉素 , 新霉素 , 对细菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳动物细胞具有氨基苷类毒性 , 对真核细胞进行筛选。
无菌溶液。
pH7.2--‐7.9, 经一般工作浓度为 50--‐1000ug/ml。
氨苄青霉素溶液 (Ampicillin,50mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月细菌培养常用抗生素 , 用于配制含氨苄的 LB 或 LB 平板等。
干扰肽聚糖的交联从而抑制细胞壁的合成。
无菌溶液。
工作浓度为 50--‐100ug/ml。
氨苄青霉素溶液 (Ampicillin,100mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月细菌培养常用抗生素 , 用于配制含氨苄的 LB 或 LB 平板等。
干扰肽聚糖的交联从而抑制细胞壁的合成。
主要由氨苄青霉素溶于水 ,0.22um 滤膜过滤除菌 , 工作浓度为 50--‐100ug/ml。
潮霉素 B 溶液 (Hygromycin B ,50mg/ml 10ml 抗生素 40% 4℃ , 避光 ,12个月抑制原核细胞、真核细胞中蛋白质合成,多种细胞类型的重组克隆的筛选。
无菌溶液,水溶液,经过滤除菌。
潮霉素 B 溶液 (Hygromycin B ,50mg/ml 20ml 抗生素 40% 4℃ , 避光 ,12个月抑制原核细胞、真核细胞中蛋白质合成,多种细胞类型的重组克隆的筛选。
无菌溶液,水溶液,经过滤除菌。
相当于 1个的包装。
丁胺卡那霉素溶液 (Amikacin,50mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月抗菌谱与庆大霉素相似 , 但对耐卡那霉素、妥布霉素和庆大霉素的细菌包括绿脓杆菌和沙雷氏杆菌仍有效。
无菌溶液,经过滤除菌。
各种抗生素的配制
抗生素
（一）溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml50ug/ml-20℃Strp（链霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml-20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml-20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml50ug/ml-20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml50ug/ml-20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22um水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=39.24mgAS+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤器过滤除菌；使用浓度：0.1mM/L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量2.1320gMES，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH调节PH至5.3后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
1/1。
实验室常用溶液配制-培养基,抗生素
常见实验用溶液的配制方法默认分类2008-07-04 14:10:54 阅读4 评论0 字号：大中小一、常用溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）：溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份，贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份，贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA)：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份，贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA：配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
各种抗生素的配制
溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml 50ug/ml -20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml 50ug/ml -20℃Strp（链霉素）水10mg/ml 50ug/ml -20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml -20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml -20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml 50ug/ml -20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml 50ug/ml -20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22um水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生
素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=39.24mgAS+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤
器过滤除菌；
使用浓度：0.1mM/L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量2.1320gMES，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH 调节PH至5.3后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
抗生素的配制
抗生素的配制储存液工作浓度(mg/ml)保存条件严紧型质粒(ug/ml)松驰型质粒(ug/ml)氨苄青霉素50(溶于水) -20℃20 60羧苄青霉素50(溶于水) -20℃20 60氯霉素34(溶于乙醇) -20℃25 170卡那霉素10(溶于水) -20℃10 50链霉素10(溶于水) -20℃10 50四环素5(溶于甲醇) -20℃10 50常用抗生素溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml羧苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml链霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml四环素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/mlDocument number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UTa：以水为溶剂的抗生素贮存液通过μm滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。
所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
各种抗生素的配制
抗生素溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana卡那霉素水10mg/ml50ug/ml-20℃Amp氨苄霉素水50mg/ml50ug/ml-20℃Strp链霉素水10mg/ml50ug/ml-20℃Hyp潮霉素水50mg/ml-20℃Ca头孢霉素水50mg/ml-20℃Cm氯霉素乙醇34mg/ml50ug/ml-20℃
Rif利福平二甲基亚砜
DMSO
50mg/ml50ug/ml-20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过水膜滤器过滤除菌;以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过有机膜滤器过滤除菌;以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理,所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中;
乙酰丁香酮AS的配置：200mM/L=+1ml二甲基亚砜DMSO使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷IPTG的配置：用水配置成50mg/ml,后使用水膜滤器过滤除菌；
使用浓度：L-1mM/L
MES溶液：1mol/L,精确称量,加入95ml的ddH2O,使用5M KOH调节PH至后,定容至100ml,超净台内过滤除菌,-20℃冻存;。
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项一、酶与载体的分装酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl 或20 μl；连接酶（solutionΙ）按5 μl分装；dNTP（10 mM）分装成50 μl；无菌水分装成1 ml；注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。
（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。
（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。
（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。
（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。
每人负责六个月。
其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。
由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。
二、常见抗生素及IPTG的配置以氨苄青霉素为例：1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。
2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。
3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。
4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。
注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。
5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。
在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。
6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。
注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。
表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度名称储存浓度工作浓度氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/mlIPTG 1 M 0.05-0.6 mM五、基因扩增1．引物与合成：设计引物序列，发至生工公司进行合成（jinan@）。
普通使用的抗生素的贮液和工作液浓度
普通使用的抗生素的贮液和工作液浓度下面的内容摘自《分子克隆》第三版附录2①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度氨苄青霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 20 μg/ml （严紧型质粒） 60 μg/ml （松弛型质粒）羧苄青霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 20 μg/ml （严紧型质粒） 60 μg/ml （松弛型质粒）氯霉素贮液浓度 34 mg/ml 溶于乙醇 -20℃保存工作浓度 25 μg/ml （严紧型质粒） 170 μg/ml （松弛型质粒）卡那霉素贮液浓度 10 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）链霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）四环素贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）利福平，Rifampicin (INN) 简写为Rif。
分子式：C43H58N4O12，相对分子质量为822.94022 [g/mol]。
化学名 3-[[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基]-利福霉素利福平是一种半人工合成的抗生素，最初从地中海氏拟无枝菌酸菌（Amycolatopsis mediterranei）中获得。
利福平为利福霉素类半合成广谱抗菌药，对多种病原微生物均有抗菌活性。
该药对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌（包括麻风分枝杆菌等）在宿主细胞内外均有明显的杀菌作用。
分子生物学常用抗生素
名称 氨苄青霉素 博来霉素 羧苄青霉素
种类 β-内酰胺 糖肽 β-内酰胺
作用方式*
杀菌 √ √ √
抑菌
工作浓度** μg / mL 100-200 5-100 100
抑制细胞壁的合成 诱导DNA断裂 抑制细胞壁的合成 结合核糖体50S亚基; Chloramphenicol 氯霉素 NA 抑制肽基转移 结合核糖体50S亚基; Erythromycin 红霉素 大环内酯 抑制氨酰基转移 结合核糖体30S亚基; Kanamycin 卡那霉素 氨基糖苷 导致翻译错误 Polymyxin B 多粘菌素 多肽 导致细胞膜穿孔 结合核糖体30S亚基; Spectinomycin 放线菌素 氨基糖苷 阻断蛋白质合成 Streptomycin 链霉素 氨基糖苷 抑制蛋白质合成的启动 结合核糖体30S亚基; Tetracycline 四环素 四环素 阻断蛋白质合成过程的 延伸 *原核细胞 **无特殊说明，溶解为ddH2O
√ √ √ √ √ √ √
2-25 in EtOH 50-100 i5-50 25-100 10
LB培养基中抗生素的贮液配置和工作液浓度
LB培养基中抗生素的贮液配置和工作液浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml （严紧型质粒）170 μg/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
质粒类型：。
常用培养基和抗生素的配制方法
常用培养基和抗生素的配制方法1.LB培养基：材料：10g蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠、水至1000mL。
方法：将蛋白胨、酵母提取物和氯化钠加入水中，调整pH值至7.0，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
2.M9盐基培养基：材料：64gNa2HPO4•7H2O、15gKH2PO4、2.5gNaCl、5gNH4Cl、水至1000mL。
方法：将Na2HPO4•7H2O、KH2PO4、NaCl和NH4Cl加入水中，调整pH值至7.0，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
3.TSB培养基：材料：17g磷酸二氢钾、20g蛋白胨、5g氯化钠、水至1000mL。
方法：将磷酸二氢钾、蛋白胨和氯化钠加入水中，调整pH值至7.3，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
4.青霉素琼脂培养基：材料：5g酵母提取物、1g酪蛋白、10gD-葡萄糖、2gK2HPO4、2gKH2PO4、20g琼脂、水至1000mL。
方法：将酵母提取物、酪蛋白、D-葡萄糖、K2HPO4和KH2PO4加入水中，调整pH值至7.0，加入琼脂，用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
抗生素的配制方法：1.青霉素盐酸盐溶液：材料：10g青霉素盐酸盐、水至100mL。
方法：将青霉素盐酸盐加入水中，搅拌至溶解。
2.氨苄青霉素钠盐溶液：材料：10g氨苄青霉素钠盐、水至100mL。
方法：将氨苄青霉素钠盐加入水中，搅拌至溶解。
3.克拉霉素溶液：材料：10g克拉霉素、水至100mL。
方法：将克拉霉素加入水中，搅拌至溶解。
4.挠敏霉素溶液：材料：10g挠敏霉素、水至100mL。
方法：将挠敏霉素加入水中，搅拌至溶解。
5.氯霉素溶液：材料：10g氯霉素、水至100mL。
方法：将氯霉素加入水中，搅拌至溶解。
以上是常用培养基和抗生素的基本配制方法，具体使用时还需要根据实验的需求和文献资料进行相应的优化和调整。
在配制过程中，需要注意配制环境的无菌操作、避免污染和准确称量材料的重量等。
抗生素的配制
抗生素的配制1. 氨苄青霉素Amp（100mg/mL）取1g氨苄青霉素溶于100mL的ddH2O中溶解，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为50μg/mL。
2. 硫酸链霉素（400mg/mL）氨基糖苷类抗生素，氨苄青霉素主要用于抑制革兰氏阴性细菌的生长。
取4g硫酸链霉素溶于100mL的ddH2O中溶解，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为200μg/mL。
3. 乳酸（50%）大多数细菌不耐酸，而真菌偏好酸性。
将50mL的乳酸溶液与50mL的ddH2O混匀，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为0.35%。
4. 卡纳霉素Kanamycin是一种氨基糖酐类，从卡那霉素链霉菌(Streptomyceskanamyceticus)中分离得到。
能结合细菌核糖体的30S亚基上的16S rRNA，干扰formyl-methionyl-tRNA 与30SrRNA的连接，阻断细菌蛋白质的合成。
取1g卡纳霉素溶于100mL的ddH2O中溶解，分装于2mL离心管中，-20度保存。
用时每100mL加75μL，终浓度为50μg/mL。
1. 青霉素：β-内酰胺类抗生素,主要是抑制细菌的细胞壁生成,使之产生缺陷,细菌破裂死亡.2. 红霉素: 大环内酯类抗生素,阻碍细菌蛋白质的合成,起到抑制细菌繁殖的作用,但是不能杀菌.3. 四环素: 四环素类抗生素,抑制细菌DNA复制,阻碍蛋白质合成.起到抑制细菌生长作用,但大剂量也可杀菌.4. 链霉素: 氨基甙类抗生素,阻碍细菌蛋白质合成.杀菌作用.毒素和抗毒素是相对概念,某些物质进入体内会抑制我们正常的生理运转环境和途径,比如有机磷农药可以使神经肌肉接头的信号传递出现障碍.从而产生一系列的症状.而抗毒素用通俗的话来说就是解毒药.能逆转或者阻止毒素对正常生理的破坏.外毒素（exotoxin）: 细菌在生长过程中由细胞内分泌到细胞外的毒性物质。
各种抗生素的配制
抗生素溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml 50ug/ml -20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml 50ug/ml -20℃Strp（链霉素）水10mg/ml 50ug/ml -20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml -20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml -20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml 50ug/ml -20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml 50ug/ml -20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤器过滤除菌；
使用浓度：L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH调节PH至后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
各种抗生素的配制
抗生素溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml50ug/ml-20℃Strp（链霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml-20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml-20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml50ug/ml-20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml50ug/ml-20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22um水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=39.24mgAS+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤器过滤除菌；
使用浓度：0.1mM/L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量2.1320gMES，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH 调节PH至5.3后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
分子生物学实验中常用的抗生素配置及工作浓度
经常应用抗生素：备注：（摘自《分子克隆》第三版附录2 ）①以水为溶剂的抗生素贮存液应应用0.22 μm滤器过滤除菌;②用乙醇消融的抗生素溶液无须过滤除菌;③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保管.氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）消融1g氨苄青霉素钠盐于足量的水(最好是高压后的灭菌水)中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于发展造就基.羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）消融羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于发展造就基.甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）消融1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一路添加于发展造就基.卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）消融100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于发展造就基.氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）消融250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以～25ug/ml的终浓度添加于发展造就基.链霉素（streptomycin）（50mg/ml）消融链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于发展造就基.萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）消融50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml.分装成小份于-20℃贮存.常以15ug/ml的终浓度添加于发展造就基.四环素（tetracyyline）（10mg/ml）消融100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml.分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存.常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于发展造就基.。
分子生物学实验室常用试剂的配制
分子生物学实验室常用试剂的配制一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH 调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
常用抗生素：
备注：
（摘自《分子xx》第三版附录2）
①以水为溶剂的抗生素贮存液应使用
0.22μm滤器过滤除菌；②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水(最好是高压后的灭菌水)中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解
0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以
37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以
12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解
0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。