全国临床检验操作规程

全国临床检验操作规程〔第3版〕

精液检查

一．标本收集

1.在3个月内检查2次至数次,二次之间间隔应>7天,但不超过3周.

2.采样前至少禁欲3天,但不超过7天.

3.采样后1h内送到检验科.

4.用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液,不宜采用避孕套内的精液.某些塑料容器具有杀精子作用,但是否合适应事先做实验.

5.应将射精精液全部送检.

6.传送时温度应在20~40℃.

7.容器必须注明患者##和〔或〕识别号〔标本号或条码〕,标本采集日期和时间.

8.和所有体液一样,精液也必须按照潜在生物危害物质处理,因为精液内可能含有肝炎病毒、人类免疫缺陷〔病毒〕和疱疹病毒等.

二．一般性状检查

一般性状检查包括记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化.

1.外观正常精液呈灰白色或乳白色,不透明.棕色或红色提示出血.黄色可能服用某种药物.精子浓度低时精液略显透明.

正常精液是一种均匀黏稠的液体,射精后立即凝固,30 min后开始液化.若液化时间超过60 min考虑为异常,应记录这种情况.正常精液可含有不液化的胶冻状颗粒.

2.量用刻度量筒或移液管测定.正常一次全部

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射精精液量约2~5 ml.精液量过多或过少是不育的原因之一.

3.黏稠度在精液全部液化后,用Pasteur滴管吸入精液,然后让精液依靠重力滴落,并观察拉丝长度.正常精液呈水样,形成不连续小滴.黏稠度异常时,形成丝状或线状液滴〔长度大于2 cm〕.也可使用玻璃棒或注射器测定黏稠度.

4.酸碱度用精密试带检查.正常人pH为7.2~8.0,平均7.8.

三．精子存活率

精子存活率〔motility〕用活精子比例来反映.

1.伊红染色法

[试剂]

5 g/L伊红Y染色液：伊红Y 0.5 g,加生理盐水至

100 ml.

[操作]

（1）在载玻片上加新鲜精液和伊红溶液各1滴,混匀后,加上盖玻片,30 s后在高倍镜

下观察,活精子不着色.死精子染成红色.

（2）计数200个精子,计算未着色〔活精子〕的百分率.

2.伊红-苯胺黑染色法

[试剂]

〔1〕10 g/L伊红Y染色液：伊红1 g,加蒸馏水

至100 ml.

〔2〕100 g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10 g,加蒸馏

水至100 ml.

[操作]

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（1）取小试管,加新鲜精液和伊红溶液各1滴,混匀.

（2）30 s后,加苯胺黑溶液3滴,混匀.

（3）30 s后,在载玻片上,加精液-伊红-苯胺黑混合液1滴,制成涂片,待干.

（4）油镜下观察,活精子为白色,死精子染成红色,背景呈黑色,计数200个精子,计算

未着色活精子的百分率.

3.精子低渗膨胀试验〔HOS〕

[试剂]

膨胀液：枸橼酸钠0.735 g,果糖1.351 g,加蒸馏水至100 ml.分装,- 20℃冷冻保存,使用前解冻,并充分混匀.

[操作]

（1）取小试管,加1 ml膨胀液,37℃预温5 min. （2）加0.1 ml液化精液,轻轻搅匀,在37℃孵育至少30 min.

（3）在相差显微镜下观察精子,膨胀精子为尾部形状发生变化的精子,即活精子.计数

200个精子,计算膨胀精子的百分率. [参考区间]

在排精30~60 min内,约有70%以上精子应为活动精子.精子低渗膨胀试验应有60%以上精子出现尾部膨胀.

[附注]

（1）如室温低于10℃时,应将标本先放入37℃温育5~10 min后镜检.

（2）某些标本试验前就有尾部卷曲的精子,在

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HOS试验前,计算未处理标本中尾部卷

曲精子的百分数,实际HOS试验结果百

分率就等于测定值减去未处理标本中尾

部卷曲精子百分率.

（3）HOS也是精子尾部膜功能试验.

四．精子活力

WHO推荐一种无需复杂设备而能进行简单精子活力〔activity〕分级的方法.

[操作]

取10 μl标本涂片,连续观察至少5个视野,对200个精子进行分级,首先计数a级和b级精子,随后在同一视野内计数c级和d级精子.

[结果判断]

根据下述标准把精子活力分为a、b、c、d四级. a级：快速前向运动：37℃时速度≥25 μm/s,或20℃时速度≥20 μm/s〔25 μm大约相当于精子5个头部的长度,或半个尾部的长度〕.

b级：慢速或者呆滞的前向运动.

c级：非前向运动〔＜5 μm/s〕.

d级：不动.

[参考区间]

正常精液采集后60 min内,a级+b级精子达50%以上.

五．精子计数

[试剂]

精子稀释液：碳酸氢钠5 g,40%甲醛溶液1 ml,蒸馏水100 ml,待完全溶解过滤后使用.

[操作]

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1.于小试管内加精子稀释液0.38 ml,吸液化精

液20μl,加入稀释液内摇匀.

2.充分摇匀后,滴入改良Neubauer血细胞计数

池内,静置1~2 min,待精子下沉后,以精子头

部作为基准进行计数.

3.如每个中央方格内精子少于10个,应计数所

有25个中方格内的精子数.

4.如每个中央方格内精子在10~40个,应计数

10个中方格内的精子数.

5.如每个中央方格内精子多于40个,应计数5

个中方格内的精子数.

[结果判断]

精子数= 计数结果* 25 *1* 20 * 103/ml

计数中方格数计数池高度

= 计数结果*1* 5 * 105/ml

计数中方格数计数池高度

[参考区间]

正常男性≥20 * 106/ml

[附注]

1.收集精液前避免性生活3~7天.收集精液标

本后应在1 h内检验,冬季应注意保温.

2.出现一次异常结果,应隔1周后复查,反复查

2~3次方能得出比较正确的结果.

3.如低倍镜、高倍镜检查均无精子,应将精液离

心沉淀后再涂片检查,如两次均无精子,报告"

无精子".

六．精子形态观察

[试剂]

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