化学发光PPT课件
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化学发光原理及检测项目PPT课件
triglycerides2
The Intestines Constipation4 Decreased GI motility4
泛的影响
The Brain
Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
The Kidneys Decreased function5 Fluid retention and edema5
1. Nemeroff CB. Clinical significance of psychoneuroendocrinology in psychiatry: focus on the thyroid and adrenal. J Clin Psychiatry. 1989;50(suppl):13-20. 2. Klausen IC, Nielsen FE, Hegedüs L, Gerdes LU, Charles P, Faergeman O.Treatment of hypothyroidism reduces low-density lipoproteins but not lipoprotein (a) Metabolism. 1992;41:911-914. 3. Polikar R, Burger AG, Scherrer U, Nicod P. The thyroid and the heart. Circulation. 1993;87:1435-1441. 4. Vassilopoulou-Sellin R, Sellin JH. The gastrointestinal tract and liver in hypothyroidism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:816-820. 5. Moses AM, Scheinman SJ. The kidneys and electrolyte metabolism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:812-815. 6. Emerson CH.Thyroid function and disease in the female. In: Gold JJ, Josimovich JB, eds. Gynecologic Endocrinology. 4th ed. New York, NY:Plenum Publishing Corp; 1987:109-133. 7. Haddow JE, Palomaki GE, Allan WC, et al. Maternal thyroid deficiency during pregnancy and subsequent neuropsychological development of the child. N Engl J Med. 1999;341:549-555.
The Intestines Constipation4 Decreased GI motility4
泛的影响
The Brain
Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
The Kidneys Decreased function5 Fluid retention and edema5
1. Nemeroff CB. Clinical significance of psychoneuroendocrinology in psychiatry: focus on the thyroid and adrenal. J Clin Psychiatry. 1989;50(suppl):13-20. 2. Klausen IC, Nielsen FE, Hegedüs L, Gerdes LU, Charles P, Faergeman O.Treatment of hypothyroidism reduces low-density lipoproteins but not lipoprotein (a) Metabolism. 1992;41:911-914. 3. Polikar R, Burger AG, Scherrer U, Nicod P. The thyroid and the heart. Circulation. 1993;87:1435-1441. 4. Vassilopoulou-Sellin R, Sellin JH. The gastrointestinal tract and liver in hypothyroidism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:816-820. 5. Moses AM, Scheinman SJ. The kidneys and electrolyte metabolism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:812-815. 6. Emerson CH.Thyroid function and disease in the female. In: Gold JJ, Josimovich JB, eds. Gynecologic Endocrinology. 4th ed. New York, NY:Plenum Publishing Corp; 1987:109-133. 7. Haddow JE, Palomaki GE, Allan WC, et al. Maternal thyroid deficiency during pregnancy and subsequent neuropsychological development of the child. N Engl J Med. 1999;341:549-555.
化学发光ppt课件
47
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
6
2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
27
酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
25
酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
6
2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
27
酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
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酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
化学发光原理及应用ppt课件
Part III. 化学发光法的临床应用
甲状腺功能的免疫分析 糖代谢紊乱的免疫分析 常见肿瘤标志物及其免疫分析 常见传染性疾病的免疫检测
– – –
病毒性肝炎 HIV感染 严重急性呼吸综合征（SARS)
其他免疫检测项目
甲状腺功能的免疫分析
• 甲状腺机能的常见评价指标及其临床
意义 1.甲状腺机能亢进 2.甲状腺功能减退 3.低T3和低T3、T4综合征
C肽
C肽测定用于了解II型糖尿病人是否需要胰岛素治疗，如 果C肽水平较低，葡萄糖刺激反应差，则表示表明立即或 最终需要胰岛素治疗，也可用于评价糖尿病酮症酸中毒病 人的胰岛功能。C肽的另一个重要的临床用途是各种低血 糖病因的鉴别。C肽水平升高科见于轻型糖尿病患者，常 见空腹血糖升高不多者C肽大多高于正常。胰岛素瘤患者， 如血中存在胰岛素抗体，血清C肽大都增高。胰腺肿瘤患 者行胰腺切除后，如血清C肽仍可测出，提示手术未能全 部切除胰腺组织。如果手术后一度阴性，后又称为阳性， 提示肿瘤复发或转移。 在肝硬化时，血浆胰岛素有升高趋势，其原因在于肝脏摄 取和降解胰岛素减少；但空腹血糖正常。
癌胚铁蛋白 糖蛋白 肝 癌胚抗原 糖蛋白 结肠、直肠、胰 腺、肺、乳腺
胰癌胚抗原 糖蛋白 胰腺
鳞状细胞抗 糖蛋白 肺、皮肤、头和 原 颈部
组织多肽抗 细胞角 乳腺、结肠 原 蛋白
CEA
• 原发性结肠癌，患者CEA升高者占45-90%. • 胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系 •
三、低T3和低T3、T4综合征
• 低T3综合征是一种由于非甲状腺疾病 造成的甲状
腺激素异常，其发生与机体的代谢状态，基础疾 病的性质和严重程度以及外来因素，如用药等有 关。代谢状态差、基础病情加重时其发生率随之 增高；当病情好转、机体健康状况趋于正常时， 低T3状态可自行消失。
《化学发光分析》课件
《化学发光分析》PPT课 件
本课程将介绍化学发光分析的工作原理、分类、常用试剂和仪器、典型实验 操作步骤以及优点和应用。让我们一起探索这一极具活力和创新性的化学分 析技术。
化学发光分析概述
什么是化学发光分析？
化学发光分析是指利用发光剂 （luminophore）与感光器 （photodetector）在光激发条件下 发生发光反应进行分析的技术。
发光机制和原理
发光反应主要包括螯合发光、化学 发光、电化学发光和生物发光，其 基本原理为激发能量从分析物传递 到发光剂。
化学发光分析的分类
化学发光分析主要分为储能法、电 化学发光法、免疫分析法、分子印 迹技术法和气相化学发光分析 （GPCA）等。
优点和应用
快速、敏感、高效
化学发光法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短和快速分析等优势，被广泛应用于临床、 食品、环境、药学、安全等领域。
数据统计和分析
4
利用计算机等工具进行数据的整理、计算与 分析，得出结果，并进行结果的验证和确认。
取样
用适当的方法取得样品，并得到有效的样品。
发光检测
激发分析样品使其产生发光，并利用仪器对 其进行检测。
案例分析和总结
CRO公司使用化学发光分析技术加 快药代动力学评估
合同研究组织（CRO）将计划100名志愿者的药代动力 学模拟研究里程碑提前了八个月，其采用了高通量类 似物筛选、高通量药代动力学测定和新一代大规模并 行化药代动力学建模等技术。这些技术包括，化学发 光法作为测定细胞器的特异性标记的方法。
电化学发光分析
电化学发光分析仪（ECL）是用于 电化学发光分析的专用设备，适用 于光谱分析和光度测定等分பைடு நூலகம்。
酶标仪
酶标仪是一种测量酶反应的光度仪 器，通常用于免疫学、生化学等领 域的分析。
本课程将介绍化学发光分析的工作原理、分类、常用试剂和仪器、典型实验 操作步骤以及优点和应用。让我们一起探索这一极具活力和创新性的化学分 析技术。
化学发光分析概述
什么是化学发光分析？
化学发光分析是指利用发光剂 （luminophore）与感光器 （photodetector）在光激发条件下 发生发光反应进行分析的技术。
发光机制和原理
发光反应主要包括螯合发光、化学 发光、电化学发光和生物发光，其 基本原理为激发能量从分析物传递 到发光剂。
化学发光分析的分类
化学发光分析主要分为储能法、电 化学发光法、免疫分析法、分子印 迹技术法和气相化学发光分析 （GPCA）等。
优点和应用
快速、敏感、高效
化学发光法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短和快速分析等优势，被广泛应用于临床、 食品、环境、药学、安全等领域。
数据统计和分析
4
利用计算机等工具进行数据的整理、计算与 分析，得出结果，并进行结果的验证和确认。
取样
用适当的方法取得样品，并得到有效的样品。
发光检测
激发分析样品使其产生发光，并利用仪器对 其进行检测。
案例分析和总结
CRO公司使用化学发光分析技术加 快药代动力学评估
合同研究组织（CRO）将计划100名志愿者的药代动力 学模拟研究里程碑提前了八个月，其采用了高通量类 似物筛选、高通量药代动力学测定和新一代大规模并 行化药代动力学建模等技术。这些技术包括，化学发 光法作为测定细胞器的特异性标记的方法。
电化学发光分析
电化学发光分析仪（ECL）是用于 电化学发光分析的专用设备，适用 于光谱分析和光度测定等分பைடு நூலகம்。
酶标仪
酶标仪是一种测量酶反应的光度仪 器，通常用于免疫学、生化学等领 域的分析。
化学发光介绍-PPT
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肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
27
肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
22
肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
15
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
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肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
22
肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
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感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
化学发光法检测传染病优秀课件优选ppt资料
第十一页，共48页。
AutolumiS2000微粒子化学发光仪
第十二页，共48页。
第十三页，共48页。
全自动化学发光免疫分析(fēnxī)系统开发及其产业化，在2021 年12月通过国家科学技术委员会的鉴定，鉴定委员会认为：
该项目具有创新 性和自主(zìzhǔ)知识 产权，整体达到国际 先进水平。
❖ 批内、批间的分析重现性。
第二十二页，共48页。
微粒子化学发光试剂(shìjì)的精密度
HCV
1
2
3
4
5
…… Mean SD CV
批内 86.11 86.36 88.40 87.90 86.43 …… 86.27 1.55 1.79%
批间 74.59 73.63 69.64 71.90 71.96 …… 71.01 3.20 4.50%
S1, S2阴性, S3,S4,S5,S6阳性
L1、L2阳性， L3阴性，L4阴性
传统酶免法 特异性
(-/-)20/20 (+/+)3/3
(-/-)20/20 (-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)14/15
(-/-)29/30 (+/+)29/30 (-/-)18/20 (+/+)20/20 (-/-)20/20 (+/+)10/10
4.91% 2.14%
HBsAg
试剂(shìjì)性能多中心临床评估
HIV
HCV
相关性 显著相关 显著相关
相关系数 0.99 0.93
线性系数 0.98 0.99
AutolumiS2000微粒子化学发光仪
第十二页，共48页。
第十三页，共48页。
全自动化学发光免疫分析(fēnxī)系统开发及其产业化，在2021 年12月通过国家科学技术委员会的鉴定，鉴定委员会认为：
该项目具有创新 性和自主(zìzhǔ)知识 产权，整体达到国际 先进水平。
❖ 批内、批间的分析重现性。
第二十二页，共48页。
微粒子化学发光试剂(shìjì)的精密度
HCV
1
2
3
4
5
…… Mean SD CV
批内 86.11 86.36 88.40 87.90 86.43 …… 86.27 1.55 1.79%
批间 74.59 73.63 69.64 71.90 71.96 …… 71.01 3.20 4.50%
S1, S2阴性, S3,S4,S5,S6阳性
L1、L2阳性， L3阴性，L4阴性
传统酶免法 特异性
(-/-)20/20 (+/+)3/3
(-/-)20/20 (-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)14/15
(-/-)29/30 (+/+)29/30 (-/-)18/20 (+/+)20/20 (-/-)20/20 (+/+)10/10
4.91% 2.14%
HBsAg
试剂(shìjì)性能多中心临床评估
HIV
HCV
相关性 显著相关 显著相关
相关系数 0.99 0.93
线性系数 0.98 0.99
化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
HRP
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
常见化学发光技术PPT课件
02
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
化学发光ppt课件
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底
1. 天然荧光寿命小，而发光微粒发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采集光信 号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 2. 采用680nm红光激发，其能级不可能激发生物样品中的荧光物质。 3. LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质， 用荧光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出， 有效降低本底。
敏化化学发光 是指某些化学反应中的由于激发态产物 本身不发光或反光十分微弱，但通过加入某种接受体 （荧光剂）可导致发光。反应式为：
A+B → C*+D, F+C* → F*+C,
F* → F+ hv C为能量给于体，F为能量接受体
化学发光强度与反应物浓度的关系
化学发光强度与化学反应速度（dp/dt）相关联，而一切 影响反应速度的因素多可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：
CL基本类型
按反应机理 自身化学发光、 敏化化学发光、电致化学发光 自身发光：是指被测物质为反应物直接参与化学反应， 利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。 可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类最普遍，多数有机物分子在液相中的化学反应属于这一类型
CL基本类型
缺点：水溶性差。适用于有机相体系。
荧光棒
常用化学发光试剂
C 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 光。
CL发光效率和发光强度
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本身；而发光效率则 取决于发光体本身的结构和性质，也受环境的影响。
《化学发光免疫技术》课件
总结词
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
《化学发光免疫技术》 ppt课件
CATALOGUE
目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
CATALOGUE
化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
《化学发光免疫技术》 ppt课件
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目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
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化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
化学发光PPT课件
第2页/共56页
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
第3页/共56页
第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第41页/共56页
电化学发光免疫分析示意图
第42页/共56页
电化学发光免疫测定示意图
第43页/共56页
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
第44页/共56页
第45页/共56页
第46页/共56页
第47页/共56页
第48页/共56页
第49页/共56页
第50页/共56页
第51页/共56页
四、临床应用
第9页/共56页
光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
第17页/共56页
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
第18页/共56页
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
第3页/共56页
第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第41页/共56页
电化学发光免疫分析示意图
第42页/共56页
电化学发光免疫测定示意图
第43页/共56页
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
第44页/共56页
第45页/共56页
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四、临床应用
第9页/共56页
光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
第17页/共56页
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
第18页/共56页
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
化学发光介绍ppt课件
9
主要内容
免疫学检测方法介绍 感染性疾病检测 肿瘤标志物检测 甲状腺及甲状旁腺功能检测 肝纤维化检测 肾功能检测 激素检测 自身抗体检测 优生优育
唐氏筛查 心血管及心肌标志物 高血压辅助诊断 糖代谢 骨代谢 贫血类 炎症 药物浓度
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现anti-HAV-IgM,于发病
优点：特异性好
缺点：灵敏度较差，结果判断主观，只能定性检测
6
免疫学检测方法介绍
时间分辨荧光分析法：用3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多 肽、蛋白质、核酸及生物细胞，待反应体系发生后，用时间分辨 检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧 光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分 析。
14
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
优点：灵敏度高、特异性好、可实现自动化 缺点：成本较高
7
免疫学检测方法介绍
化学发光检测技术：免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和 氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态 中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用 发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发 光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
主要内容
免疫学检测方法介绍 感染性疾病检测 肿瘤标志物检测 甲状腺及甲状旁腺功能检测 肝纤维化检测 肾功能检测 激素检测 自身抗体检测 优生优育
唐氏筛查 心血管及心肌标志物 高血压辅助诊断 糖代谢 骨代谢 贫血类 炎症 药物浓度
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现anti-HAV-IgM,于发病
优点：特异性好
缺点：灵敏度较差，结果判断主观，只能定性检测
6
免疫学检测方法介绍
时间分辨荧光分析法：用3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多 肽、蛋白质、核酸及生物细胞，待反应体系发生后，用时间分辨 检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧 光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分 析。
14
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
优点：灵敏度高、特异性好、可实现自动化 缺点：成本较高
7
免疫学检测方法介绍
化学发光检测技术：免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和 氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态 中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用 发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发 光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
化学发光介绍ppt课件
3
免疫比浊技术：在免疫反应沉淀检测法的 基础上建立起来的，是用透射比浊仪或散 射比浊仪检测可溶性抗原抗体复合物在液 相中形成的浊度从而测定抗原（抗体）的 含量 优点：快速简便 缺点：受“前带现象”影响较大，灵敏度 和特异性较差 放射免疫分析技术：用同位素标记纯化的 抗原（抗体）与待测的抗体（抗原）结合，
•化学发光免疫检 测介绍
1
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
主要内容
免疫学检测方法介绍 筛查 感染性疾病检测 管及心肌标志物 肿瘤标志物检测 压辅助诊断 甲状腺及甲状旁腺功能检测 谢 肝纤维化检测 谢
唐氏 心血 高血
糖代 骨代
2
免疫学检测方法介绍
免疫学检测是基于抗原和抗体的特 异性反应进行检测的一种手段；
免疫标记技术是将一些既易测定又 具有高度敏感性的物质标记到特异 性抗原或抗体分子上，通过这些标 记物的增强放大效应来显示反应系 统中抗原或抗体的性质与含量。
5
金标记免疫（胶体金）分析技术：简便、 快速、不需要特殊仪器，适用于单人份操 作，可用于较紧急和实验条件较差场合。 但是灵敏度、特异性较差，无法实现自动 化，结果判断主观，受环境影响较大，成 本高。 免疫荧光技术：先将已知的抗原（抗体） 标记上荧光素，再用这种荧光抗原（抗体） 作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗 原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗
唐氏 心血 高血
糖代 骨代
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现 anti-HAV-IgM,于发病后2～3周达峰值， 1～2月后迅速下降，3个月后基本消失。因 此，anti-HAV-IgM是诊断甲型肝炎早期感 染的指标。 HAV-IgG Anti-HAV-IgM一般在急性感染 后3～12周出现，滴度缓慢上升，6个月后 达到峰值，然后逐渐下降，但维持时间较
化学发光介绍 ppt课件
2、定量测定HBeAg和HBeAb浓度的变化，可以反映病情变化和治疗效果。明确测定 HbeAg向抗-Hbe转换的时期，即表现为HbeAg浓度下降和抗-Hbe浓度升高的过程。高浓 度的HbeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的抗-Hbe一方 面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有 关。
缺点
化学发光 放射免疫 酶联免疫 时间分辨 电化学发光
操作简单，成本较低，灵 进口试剂成本较高，国产 敏度较高，试剂较稳定 试剂合理
试剂成本低，灵敏度较高 操作复杂操作简单
灵敏度低，适用于定性和 半定量
灵敏度较高，试剂较稳定 操作复杂，反应时间长， 试剂成本较高
灵敏度较高，试剂较稳定 试剂成本高，仪器维护费 用较高，有本底干扰
收费标准 每月标本量 每年毛收入 每年成本
(元)
(万元)
(万元)
乙肝两对半
180
15*22天
71.28
化学发光免疫仅乙肝五项年净收入总计47.52万元
23.76 每人份60元
年净收入/ 万元(保守
估计)
47.52
乙肝两对半
25
15*22天
9.90
1.19
8.71
每人份3元
酶法试剂乙肝五项年净收入总计 8.71万元
3、性激素系列
（LH,FSH,TSH,E2,PRO,PRL,TES,HC G,B-HCG…）
8、优生优育类
（TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB）
4、甲状腺功能
9、其他类
（T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TPO…） （ALB,一些药物测试等）
5、糖尿病系列
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A+B → C*, C* → C+hv 该发光反应的化学发光强度取决于反应速度dp/dt和反应 的化学发光量子效率（ ΦCL ）
ICL（T）= ΦCLdp/dt
常用化学发光试剂
A 鲁米诺（luminol）及其衍生物
（3—氨基—邻苯甲酰肼）
在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发 出蓝色光，量子产率介于0.01~0.05之间是一个研究最早，最多，
适用范围广
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底 适用范围广
酶的活性、受体-配体反应、低亲和力的反应、第二信使 水平、DNA、RNA、蛋白质、多肽、碳水化合物、小分 子、大分子
易使用 高通量
光激发化学发光
特点：
2. 低本底 第一，天然荧光寿命小，而发光微粒的稳定发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采 集光信号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 第二，由于LiCA采用680nm红光激发，而红光的能级几乎不可能激发生物样品或微孔 板中的荧光物质，故本底很低。 第三，LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用荧 光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有效降低 本底。
CL基本类型
按反应机理 自身化学发光、 敏化化学发光、电致化学发光 自身发光：是指被测物质为反应物直接参与化学反应， 利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。 可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类最普遍，多数有机物分子在液相中的化学反应属于这一类型
CL基本类型
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底
1. 天然荧光寿命小，而发光微粒发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采集光信 号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 2. 采用680nm红光激发，其能级不可能激发生物样品中的荧光物质。 3. LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用 荧光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有 效降低本底。
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时间
O3, NO, NO2, H2S, SO2, CO
化学发光在CE中的应用
柱后套管式 柱端液池式 电致发光式
光激发化学发光
Light initiated chemiluminescence assay, LiCA
主要原理是由光激发产生的均相化学发光技术。是 以纳米级高分子微粒为基础的新一代化学发光技术， 被广泛地应用于研究生物分子的相互作用。
CL基本原理
在化学发光（chemluminescence, CL）中，由化学反应 产生能的原子或分子由激发态回到基态时所产生的这一 光辐射现象叫化学发光。根据化学发光的强度测定物质 含量的分析方法叫化学发光分析。
1887年 Redziszewski首次报道了络吩碱（lophine,2,4,5三苯基咪痤）在碱性条件下与氧气反应发出黄金设色的 光———人为的化学发光…#43; D* D* → D + hV
（1）能快速地释放出足够的能量 （化学发光反应多为氧化还原反应， 激发能与反应能相当，DE=170～300 kJ/mol；发光位于可见光区； （2）化学反应的能量至少能被一种物质所接受并使之生成激发态； （3）激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态
敏化化学发光 是指某些化学反应中的由于激发态产物 本身不发光或反光十分微弱，但通过加入某种接受体 （荧光剂）可导致发光。反应式为：
A+B → C*+D, F+C* → F*+C, F* → F+ hv
C为能量给于体，F为能量接受体
化学发光强度与反应物浓度的关系
化学发光强度与化学反应速度（dp/dt）相关联，而一切 影响反应速度的因素多可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：
逐级放大的化学反应的结果。 感光微粒富含感光化合物，在光照射后每个微粒会释放出60000个/s离 子氧，离子氧作用于发光微粒中的二甲基噻吩衍生物产生大量紫外光完 成第二级放大；紫外光激发包埋在发光微粒中的镧系元素释放光能完成 第三级放大过程。三级梯度放大过程使LiCA的检测限低至10-15摩尔。
低背景 适用范围广
缺点：水溶性差。适用于有机相体系。
荧光棒
常用化学发光试剂
C 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 光。
CL发光效率和发光强度
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本身；而发光效率则 取决于发光体本身的结构和性质，也受环境的影响。
化学发光强度
动力学 反应时间，提高灵敏度?
应用最广泛的发光试剂。 pH 10-12 水溶性好
O
O
NH NH
NH2
O
鲁米诺
NH NH H2N O
异鲁米诺
常用化学发光试剂 鲁米诺发光原理
鲁米诺与双氧水的发光机理
异鲁米诺
常用化学发光试剂
B 过氧草酸盐（peroxalate）
自身并不发光，其化学发光均为敏化发光反应。是芳香草酸盐和 H2O2芳香草酸盐和H2O2反应形成高能量的中间物。 与鲁米诺相比，过氧草酸盐化学反应的发光效率更高，可达到 27%，且在较宽的酸度范围内(pH 4~10)都能发光。
光激发化学发光
感光化合物的感光微粒和含有 发光化合物的发光微粒组成。 微粒直径约188nm，表面 覆盖多糖水凝胶。其功能为：
1. 非特异性结合少 2. 增加微粒的悬浮性。 3. 连接目标生物分子。 4. 增加了反应的表面积，可结
合成百上千个生物分子
镧系元素 60000个/s
光激发化学发光特点
高灵敏度
ICL（T）= ΦCLdp/dt
常用化学发光试剂
A 鲁米诺（luminol）及其衍生物
（3—氨基—邻苯甲酰肼）
在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发 出蓝色光，量子产率介于0.01~0.05之间是一个研究最早，最多，
适用范围广
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底 适用范围广
酶的活性、受体-配体反应、低亲和力的反应、第二信使 水平、DNA、RNA、蛋白质、多肽、碳水化合物、小分 子、大分子
易使用 高通量
光激发化学发光
特点：
2. 低本底 第一，天然荧光寿命小，而发光微粒的稳定发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采 集光信号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 第二，由于LiCA采用680nm红光激发，而红光的能级几乎不可能激发生物样品或微孔 板中的荧光物质，故本底很低。 第三，LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用荧 光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有效降低 本底。
CL基本类型
按反应机理 自身化学发光、 敏化化学发光、电致化学发光 自身发光：是指被测物质为反应物直接参与化学反应， 利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。 可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类最普遍，多数有机物分子在液相中的化学反应属于这一类型
CL基本类型
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底
1. 天然荧光寿命小，而发光微粒发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采集光信 号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 2. 采用680nm红光激发，其能级不可能激发生物样品中的荧光物质。 3. LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用 荧光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有 效降低本底。
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时间
O3, NO, NO2, H2S, SO2, CO
化学发光在CE中的应用
柱后套管式 柱端液池式 电致发光式
光激发化学发光
Light initiated chemiluminescence assay, LiCA
主要原理是由光激发产生的均相化学发光技术。是 以纳米级高分子微粒为基础的新一代化学发光技术， 被广泛地应用于研究生物分子的相互作用。
CL基本原理
在化学发光（chemluminescence, CL）中，由化学反应 产生能的原子或分子由激发态回到基态时所产生的这一 光辐射现象叫化学发光。根据化学发光的强度测定物质 含量的分析方法叫化学发光分析。
1887年 Redziszewski首次报道了络吩碱（lophine,2,4,5三苯基咪痤）在碱性条件下与氧气反应发出黄金设色的 光———人为的化学发光…#43; D* D* → D + hV
（1）能快速地释放出足够的能量 （化学发光反应多为氧化还原反应， 激发能与反应能相当，DE=170～300 kJ/mol；发光位于可见光区； （2）化学反应的能量至少能被一种物质所接受并使之生成激发态； （3）激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态
敏化化学发光 是指某些化学反应中的由于激发态产物 本身不发光或反光十分微弱，但通过加入某种接受体 （荧光剂）可导致发光。反应式为：
A+B → C*+D, F+C* → F*+C, F* → F+ hv
C为能量给于体，F为能量接受体
化学发光强度与反应物浓度的关系
化学发光强度与化学反应速度（dp/dt）相关联，而一切 影响反应速度的因素多可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：
逐级放大的化学反应的结果。 感光微粒富含感光化合物，在光照射后每个微粒会释放出60000个/s离 子氧，离子氧作用于发光微粒中的二甲基噻吩衍生物产生大量紫外光完 成第二级放大；紫外光激发包埋在发光微粒中的镧系元素释放光能完成 第三级放大过程。三级梯度放大过程使LiCA的检测限低至10-15摩尔。
低背景 适用范围广
缺点：水溶性差。适用于有机相体系。
荧光棒
常用化学发光试剂
C 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 光。
CL发光效率和发光强度
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本身；而发光效率则 取决于发光体本身的结构和性质，也受环境的影响。
化学发光强度
动力学 反应时间，提高灵敏度?
应用最广泛的发光试剂。 pH 10-12 水溶性好
O
O
NH NH
NH2
O
鲁米诺
NH NH H2N O
异鲁米诺
常用化学发光试剂 鲁米诺发光原理
鲁米诺与双氧水的发光机理
异鲁米诺
常用化学发光试剂
B 过氧草酸盐（peroxalate）
自身并不发光，其化学发光均为敏化发光反应。是芳香草酸盐和 H2O2芳香草酸盐和H2O2反应形成高能量的中间物。 与鲁米诺相比，过氧草酸盐化学反应的发光效率更高，可达到 27%，且在较宽的酸度范围内(pH 4~10)都能发光。
光激发化学发光
感光化合物的感光微粒和含有 发光化合物的发光微粒组成。 微粒直径约188nm，表面 覆盖多糖水凝胶。其功能为：
1. 非特异性结合少 2. 增加微粒的悬浮性。 3. 连接目标生物分子。 4. 增加了反应的表面积，可结
合成百上千个生物分子
镧系元素 60000个/s
光激发化学发光特点
高灵敏度