第八章基因工程ppt-第八章基因工程
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(7)用于载体的质粒 DNA 分子上至少含一个限制酶识别位点(√ )
(8)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在
并表达
(√)
在日常生 活中， 随处都 可以看 到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
2．载体需具备的条件及其作用(连线)
对点落实
返回
1．(2016·全国卷Ⅲ)图(a)中的三个 DNA 片段上依次表示出了
EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和 Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列
与 切 割 位 点 ， 图 (b) 为 某 种 表 达 载 体 的 示 意 图 ( 载 体 上 的
EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。
↓
↓
↓
——GAATTC—— ——GGATCC—— ——GATC——
返回
(2)写出产生的末端的种类：①产生的是黏性末端；②产生的 是 平末端 。 (3)EcoRⅠ限制酶和 SmaⅠ限制酶识别的碱基序列 不同，切割 位点不同 (填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有专一性 。
在日常生 活中， 随处都 可以看 到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
图(b)
图(c)
(3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，常见的
有__E_·_c_o_l_i__D_NA_连__接__酶_和____T_4D_N_A_连___接__酶___，其中既能连接黏 性末端又能连接平末端的是__T_4D_N_A__连__接__酶___。
解析
在日常生 活中， 随处都 可以看 到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
第8章-酵母基因工程---基因工程原理与技术---刘志国-课件
酵母菌（Yeast）是一群以芽殖或裂殖方式进行无性 繁殖的单细胞真核生物，分属于子囊菌纲、担子菌纲、半知 菌类，共由56个属和500多个种组成。
酵母菌是比较成熟的真核生物表达系统。
作为宿主细胞的酵母需满足的基本要求
①安全无毒，没有致病性。 ②遗传背景清楚，容易进行遗传操作。 ③外源DNA容易导入宿主细胞，转化效率高。 ④培养条件简单，容易进行高密度发酵。 ⑤有较强的蛋白质分泌能力。 ⑥有类似高等真核生物的蛋白质翻译后的修饰加工能 力。
含有酵母菌染色体DNA同源序列的YIp质粒的构建
在大肠杆菌质粒上组装酵母菌染色体DNA特定序列和标 记基因，构建出来的质粒称为YIp。目的基因表达盒通常插 在染色体DNA特定序列中，这样目的基因就能高效整合入 酵母菌特定的染色体DNA区域。
酵母附加体质粒YEp：含有酿酒酵母2m质粒DNA复 制有关的序列，该载体在酵母细胞中稳定，拷贝数 可达60-100。转化效率高（b）。
REP1
A
IR
ori IR
同源重组
接合酵母属中的pSR1和pSB1，以及
克鲁维酵母属中的pKD1等均与2m质
B
粒类似。
FLP REP2
第一节 酵母基因工程表达体系 --------载体
酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增、又可以 在酵母系统中复制与扩增，故此类载体又称为穿梭载体（ shuttle vector）。
由于巴斯德毕赤酵母没有合适的自主复制型载体，所以 外源基因序列一般整合入受体的染色体DNA上。其外源基因 的高效表达在很大程度上取决于整合拷贝数的多寡。目前已有 20余种具有经济价值的重组蛋白在该系统中获得成功表达。
多型汉逊酵母表达系统
多型汉逊酵母也是一种甲基营养菌。其自主复制序列 HARS已被克隆，并用于构建克隆表达载体， HARS质粒 能高频自发地整合在受体的染色体DNA上（可连续整合100多 个拷贝，因此重组多型汉逊酵母的构建也是采取整合的策略。
酵母菌是比较成熟的真核生物表达系统。
作为宿主细胞的酵母需满足的基本要求
①安全无毒，没有致病性。 ②遗传背景清楚，容易进行遗传操作。 ③外源DNA容易导入宿主细胞，转化效率高。 ④培养条件简单，容易进行高密度发酵。 ⑤有较强的蛋白质分泌能力。 ⑥有类似高等真核生物的蛋白质翻译后的修饰加工能 力。
含有酵母菌染色体DNA同源序列的YIp质粒的构建
在大肠杆菌质粒上组装酵母菌染色体DNA特定序列和标 记基因，构建出来的质粒称为YIp。目的基因表达盒通常插 在染色体DNA特定序列中，这样目的基因就能高效整合入 酵母菌特定的染色体DNA区域。
酵母附加体质粒YEp：含有酿酒酵母2m质粒DNA复 制有关的序列，该载体在酵母细胞中稳定，拷贝数 可达60-100。转化效率高（b）。
REP1
A
IR
ori IR
同源重组
接合酵母属中的pSR1和pSB1，以及
克鲁维酵母属中的pKD1等均与2m质
B
粒类似。
FLP REP2
第一节 酵母基因工程表达体系 --------载体
酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增、又可以 在酵母系统中复制与扩增，故此类载体又称为穿梭载体（ shuttle vector）。
由于巴斯德毕赤酵母没有合适的自主复制型载体，所以 外源基因序列一般整合入受体的染色体DNA上。其外源基因 的高效表达在很大程度上取决于整合拷贝数的多寡。目前已有 20余种具有经济价值的重组蛋白在该系统中获得成功表达。
多型汉逊酵母表达系统
多型汉逊酵母也是一种甲基营养菌。其自主复制序列 HARS已被克隆，并用于构建克隆表达载体， HARS质粒 能高频自发地整合在受体的染色体DNA上（可连续整合100多 个拷贝，因此重组多型汉逊酵母的构建也是采取整合的策略。
基因工程-PPT课件
干扰素 1200 升人血 2－3 万美元 / 病人
1 升发酵液 200－300 美元 / 病人
国外生物医药的发展
➢1976年第一家基因工程技术开发药物的公司建立。 ➢1982年第一个基因工程药物重组人胰岛素正式生产，推向市场。 ➢2019年全球生物技术公司总数已达4284家，美国占34％。 ➢2019年基因重组生物技术药物的年销售额已经突破400亿美元。 ➢2019年市场上的生物技术药物达到200种左右，而在研的药物为600种。 ➢全世界已有2.5亿人使用生物技术药物和疫苗。
• 曼哈顿计划 • 阿波罗计划
20世纪科学史上3个里程碑
HGP的意义
• 了解生命的起源与进化 – 认识种属之间和个体之间存在差异的起因 – 五种“模式生物” 基因组的研究：大肠杆菌、酵母、 线虫、果蝇和小鼠
• 解码生命，认识自身 – 了解生命体生长发育的规律
• 认识疾病产生的机制，掌握生老病死规律 – 疾病的诊断和治疗
甜椒在栽培的过 程中，容易受病毒的 感染。我国科学工作 者，采用转基因技术， 培育出抗病毒的甜椒。
油菜是人们食用油的主要来源之一。一般油菜 籽的含油量约为40％左右。通过转基因技术，培育 出来的油菜籽，可以大大地提高它的出油率。而且 油的纯度质量更好。
玉米是主要粮食之一，又可以提炼油脂，也可以 用作食品和工业的原料以及作饲料，浑身是宝。人们称 它是含金的植物。如今培育出转基因玉米，品质更好， 产量更高。
淋巴细胞ADA酶恢复至正常水平的5%-10% 维持免疫系统功能,改善病人症状
遗传缺陷病人
腺病毒 adenovirus
修正基因
插入修正基因
感染病人細胞
取出病人細胞
修正基因转入到患者体内
注射修正基因
基因工程技术ppt课件
是指目的基因在受体细胞内表达，研究功能。
3
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
应用：
• 克隆感兴趣基因进行序列分析，研究其组织结构。 • 转入原核表达载体，进行大规模蛋白质合成,生产多肽
产品。 • 转入真核表达载体，导入细胞，研究其功能，表达调
载体：
• 载体(Vector)是目的基因的运载工具，其作用是将目 的基因带入受体细胞中，并使目的基因扩增和表达。
• 种类： 按来源分： 质粒载体(plasmid vector)、噬菌体载体(phage vector)、 柯氏质粒载体(cosmid vector)、病毒载体(virus vector ). 按作用分： 克隆载体(cloning vector )、表达载体(expression vector)、 穿梭载体(shuttle vector)
四环素选择标记上，4种位于Amp抗性基因上。外源基因的插入将破坏 抗性基因的完整性，导致抗性基因插入失活，这种特性可用于区分重组 和非重组分子。 • 松弛性质粒，在大肠杆菌细胞内有较高的拷贝数，当细菌蛋白质合成停 止时，它仍能继续复制。
16
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
17
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
18
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程TA 源自隆AA19
3
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
应用：
• 克隆感兴趣基因进行序列分析，研究其组织结构。 • 转入原核表达载体，进行大规模蛋白质合成,生产多肽
产品。 • 转入真核表达载体，导入细胞，研究其功能，表达调
载体：
• 载体(Vector)是目的基因的运载工具，其作用是将目 的基因带入受体细胞中，并使目的基因扩增和表达。
• 种类： 按来源分： 质粒载体(plasmid vector)、噬菌体载体(phage vector)、 柯氏质粒载体(cosmid vector)、病毒载体(virus vector ). 按作用分： 克隆载体(cloning vector )、表达载体(expression vector)、 穿梭载体(shuttle vector)
四环素选择标记上，4种位于Amp抗性基因上。外源基因的插入将破坏 抗性基因的完整性，导致抗性基因插入失活，这种特性可用于区分重组 和非重组分子。 • 松弛性质粒，在大肠杆菌细胞内有较高的拷贝数，当细菌蛋白质合成停 止时，它仍能继续复制。
16
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
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病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
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病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程TA 源自隆AA19
基因工程-第8章-重组子的筛选与鉴定
2、根据插入序列的表型特征选择重
组体分子的直接选择法
转化进来的外源DNA编码的基因，能够 对大肠杆菌寄主菌株所具有的突变体发 生体内抑制或互补效应，从而使被转化 的寄主细胞表现出外源基因编码的表型 特征。
Example:
λ gt.λ B噬菌体（由于C片断的缺失而造成重 组缺陷的λ red－噬菌体），在大肠杆菌lig ts菌株上生长不能形成噬菌斑，在有连接酶功 能的大肠杆菌lig＋菌株上形成噬菌斑。 将具有连接酶基因的重组体噬菌体λ gt. λ B，涂布在大肠杆菌lig ts菌株上时，通过 寄主细胞的互补作用，能够形成噬菌斑。根据 形成噬菌斑这种表型特征，直接选择具野生功 能的重组体噬菌体。
缺点： 不单要求克隆的DNA片断必须大到足 以包含一个完整的基因，而且还要求所 编码的基因能够在大肠杆菌中实现功能 表达。 （对于真核基因很难达到要求）
二、物理检测法
1、凝胶电泳检测法 从宿主细胞中提取重组子分子，利用凝胶 电泳的方法，鉴定外源片断是否插入及其 长度。 优点：简便、快速。 缺点：只能提供克隆片段大小的信息。
抗药性标记插入失活
Amp r
1)限制酶切 2)DNA重组 无DNA插入
Tc
有DNA插入
Amp r
Tcr
转化
Amp r Tc s
外源DNA
Amp r பைடு நூலகம்cr
无菌落 筛选重组子 阳性菌落
Amp r Tc s
提取DNA 电泳
筛 选 重 组 子 的 示 意 图
Amp r Tc s
重组DNA
（2）β-半乳糖苷酶显色反应选择法
外源DNA 有DNA插入
Apr
转化
Ap r
Ap r
筛选重组子 白色菌落
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⑴ 分子量相对较小，在细菌中稳定存在， 拷贝指数高。
⑵ 具有遗传标记： 如抗生素性基因 —半乳糖酶基因（LacZ）
⑶ 具有多个酶的单一切点。称多克隆位点（ multiple cloning sites , MCS）
如 PBR322(人工合成)4.3Kb ：含 AmP( 氨卞青霉素)、 Tet(四环素)
2-3字母： 小写：细菌种名 如 EcoR 1
4 : 大写: 菌株
1，2…: 分离到的次序
8
9
3.酶的识别和切割位点: 通常4-6bp,具有回文结构(palindrom)
（1）产生粘性末端(sticking end) 5＇-末端: EcoR 1: 5＇-GAATTC-3＇ 3＇-CTTAAG-5’
25
C.若Lac Z基因被外源DNA插入而破坏，则不能制造半乳糖 苷酶，菌落为无色（白色）。
26
②取代型载体（又叫替换型载体） 理P258
图8-4基因工程原
在DNA分子的中央，插入一段DNA片段： 具有多克隆位点的反向重复序列 当外源DNA插入时其可被置换掉 作用：提高了克隆外源DNA的能力。
27
5、末端脱氧核苷酰转移酶 ：末端转移酶
作用：在DNA的3＇-OH上，加上 dNTP
6、Taq DNA聚合酶 和其它耐热DNA聚合酶
PCR时
14
内切酶、碱性磷酸酶、连接酶的作用
15
第二节 载体
*本质：DNA 携带外源DNA进入受体细胞的运载工具。
*分类： 克隆载体
质粒 入噬菌体 粘性质粒 M13噬菌体
2、 粘性质粒（Cosmid）：容量40-50kb
*由DNA的Cos区与质粒构建 *环状双链DNA 特点；①含质粒的抗性标记如Amp，Tet
②带Cos区，可进行体外包装 ③一个或多个酶切位点 ④分子量小，容量大 /筛选AP平板
28
29
30
3、 M13噬菌体（M13 phage）
（1）大肠杆菌噬菌体 （2）基因组DNA全长6.5kb（单链） （3）感染后，可复制成双链DNA（RF，DNA） （4）当RF→100—200后，只有（+）链复制
⑴ 特点
① 双链DNA分子（线性或环形）
② 两端具有12个nt单链互补粘性末端
③具非必需区（中间区约1/3长度）
④可在E.Coli中大量繁殖
⑤可克隆15Kb左右的外源基因
22
噬菌体的溶原周期和溶菌周期
23
24
⑵ 载体类型 （两种）
插入型载体：外源DNA克隆到分子上，使噬菌体的某种生物 功能丧失效力，即插入失活效应。
24个单一切点
18
PBR322
19
质粒的构建
20
质 粒 携 带 外 源 基 因
21
2. 噬菌体：最大容量：9—23kb 感染细菌的病毒 根据生活周期分
溶菌性（Lytic）：在细菌中连续增殖直到细菌裂时， 释放噬菌体。
溶原性（Lysogenic）：将其DNA整入细菌中。 **只有双链DNA的噬菌体才具有溶原周 期。
表达载体
大肠杆菌表达载体 哺乳动物表达载体
16
质粒载体
大肠杆菌质粒载体 PBR322 枯草杆菌质粒载体 PNC3 酵母菌质粒载体 农杆菌Ti质粒载体 Ti
噬菌体载体
噬菌体载体 Cos噬菌体载体
病毒载体
SV40病毒载体 乳头瘤病毒载体
17
Hale Waihona Puke 一 常用的克隆载体1. 质粒（plasmid）：
种类很多，但作为克隆载体须具备。
如：—半乳糖酶失活的插入型载体（蓝白筛选） 编码
A :载体中含一个LacZ基因 半乳糖苷酶
X-gal(无色)
X(蓝色)+gal(半乳糖)
*其中X为有色基因：（4-溴-5-氯吲哚）与gal结合
成无色的X-gal
B:在含X-gal的培养基中，在Lac操纵子诱导物IPTG（异丙硫半 乳糖苷）作用下，细菌合成半乳糖苷酶，分解X-gal，此菌落为 蓝色。
11
二 修饰酶
对DNA 或RNA 末端进行剪切、补平、连接及化 学修饰的酶。
1、DNA聚合酶 活性.
大肠杆菌中第一个发现，MW 109KD
方向：5＇3＇ 还具有5‘3’及3‘5’外切酶
缺口平移法标记DNA时常用
12
2、逆转录酶 （reverse transcriptase） 两类：禽类成骨细胞性白血病病毒逆转录酶（AMV） moloney小鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV）
4种常用载体的比较 P146 表8—2 筛选：蓝白筛选
31
32
二. 表达载体（expressing vector）
在受体细胞中表达（转录和翻译）外源基因的载体。
㈠ 大肠杆菌表达载体 除克隆载体的特性外还含有：
表达系统元件
启动子 核糖体结合位点 克隆位点 转录终止信号
启动子：常用的有
trp-lac启动子（or tac启动子） 噬菌体Pc启动子 T7噬菌体启动子
3＇-末端:Pst1 : 5＇-CTGCAG-3＇ 3＇-GACGTC-5＇
（2）产生平末端(blunt end):
Sma1:
5＇-CCCGGG-3＇
3＇-GGGCCC-5＇
10
4.同功异源酶(isochizomers): 来源不同, 识别和切割位点相同
如:BamH 1 和 Bst 1
5.同尾酶(isoaudamers): 识别序列不同,但产生相同的粘性末端 BamH 1 :GGATCC Sau3A 1: NGATCN
第八章 基因工程
1
重组DNA技术
2
3
4
5
6
基因工程的应用
7
第一节、工具酶
一、限制酶（restriction enzyme）：限制性内切酶 1、分类 根据酶结构、作用及DNA结合和裂解的特性
1 类：限制和修饰作用 * 2 类：识别DNA内部位点、切割双链
3 类：同类．
2、命名
首字母： 大写：细菌属名
方向：5‘3’
作用NA ligase） 将3＇-OH 与5＇-P 连接形成3＇, 5＇-磷酸二 酯键
13
4、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）
去除DNA or RNA 5＇-P，制备载体时可防止载 体自身连接， 提高重组效率。
33
㈡哺乳动物表达载体
除含有原核序列：在E-Coli中的复制起始点、便于筛选
的抗性基因
还包括真核表达元件
启动子/增强子
克隆位点
终止信号和加poly（A）信号
基因工程的受体系统
原核受体 E-Coli受体系统 外源基因复制、扩增场所 链霉菌受体系统 外源基因表达场所
⑵ 具有遗传标记： 如抗生素性基因 —半乳糖酶基因（LacZ）
⑶ 具有多个酶的单一切点。称多克隆位点（ multiple cloning sites , MCS）
如 PBR322(人工合成)4.3Kb ：含 AmP( 氨卞青霉素)、 Tet(四环素)
2-3字母： 小写：细菌种名 如 EcoR 1
4 : 大写: 菌株
1，2…: 分离到的次序
8
9
3.酶的识别和切割位点: 通常4-6bp,具有回文结构(palindrom)
（1）产生粘性末端(sticking end) 5＇-末端: EcoR 1: 5＇-GAATTC-3＇ 3＇-CTTAAG-5’
25
C.若Lac Z基因被外源DNA插入而破坏，则不能制造半乳糖 苷酶，菌落为无色（白色）。
26
②取代型载体（又叫替换型载体） 理P258
图8-4基因工程原
在DNA分子的中央，插入一段DNA片段： 具有多克隆位点的反向重复序列 当外源DNA插入时其可被置换掉 作用：提高了克隆外源DNA的能力。
27
5、末端脱氧核苷酰转移酶 ：末端转移酶
作用：在DNA的3＇-OH上，加上 dNTP
6、Taq DNA聚合酶 和其它耐热DNA聚合酶
PCR时
14
内切酶、碱性磷酸酶、连接酶的作用
15
第二节 载体
*本质：DNA 携带外源DNA进入受体细胞的运载工具。
*分类： 克隆载体
质粒 入噬菌体 粘性质粒 M13噬菌体
2、 粘性质粒（Cosmid）：容量40-50kb
*由DNA的Cos区与质粒构建 *环状双链DNA 特点；①含质粒的抗性标记如Amp，Tet
②带Cos区，可进行体外包装 ③一个或多个酶切位点 ④分子量小，容量大 /筛选AP平板
28
29
30
3、 M13噬菌体（M13 phage）
（1）大肠杆菌噬菌体 （2）基因组DNA全长6.5kb（单链） （3）感染后，可复制成双链DNA（RF，DNA） （4）当RF→100—200后，只有（+）链复制
⑴ 特点
① 双链DNA分子（线性或环形）
② 两端具有12个nt单链互补粘性末端
③具非必需区（中间区约1/3长度）
④可在E.Coli中大量繁殖
⑤可克隆15Kb左右的外源基因
22
噬菌体的溶原周期和溶菌周期
23
24
⑵ 载体类型 （两种）
插入型载体：外源DNA克隆到分子上，使噬菌体的某种生物 功能丧失效力，即插入失活效应。
24个单一切点
18
PBR322
19
质粒的构建
20
质 粒 携 带 外 源 基 因
21
2. 噬菌体：最大容量：9—23kb 感染细菌的病毒 根据生活周期分
溶菌性（Lytic）：在细菌中连续增殖直到细菌裂时， 释放噬菌体。
溶原性（Lysogenic）：将其DNA整入细菌中。 **只有双链DNA的噬菌体才具有溶原周 期。
表达载体
大肠杆菌表达载体 哺乳动物表达载体
16
质粒载体
大肠杆菌质粒载体 PBR322 枯草杆菌质粒载体 PNC3 酵母菌质粒载体 农杆菌Ti质粒载体 Ti
噬菌体载体
噬菌体载体 Cos噬菌体载体
病毒载体
SV40病毒载体 乳头瘤病毒载体
17
Hale Waihona Puke 一 常用的克隆载体1. 质粒（plasmid）：
种类很多，但作为克隆载体须具备。
如：—半乳糖酶失活的插入型载体（蓝白筛选） 编码
A :载体中含一个LacZ基因 半乳糖苷酶
X-gal(无色)
X(蓝色)+gal(半乳糖)
*其中X为有色基因：（4-溴-5-氯吲哚）与gal结合
成无色的X-gal
B:在含X-gal的培养基中，在Lac操纵子诱导物IPTG（异丙硫半 乳糖苷）作用下，细菌合成半乳糖苷酶，分解X-gal，此菌落为 蓝色。
11
二 修饰酶
对DNA 或RNA 末端进行剪切、补平、连接及化 学修饰的酶。
1、DNA聚合酶 活性.
大肠杆菌中第一个发现，MW 109KD
方向：5＇3＇ 还具有5‘3’及3‘5’外切酶
缺口平移法标记DNA时常用
12
2、逆转录酶 （reverse transcriptase） 两类：禽类成骨细胞性白血病病毒逆转录酶（AMV） moloney小鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV）
4种常用载体的比较 P146 表8—2 筛选：蓝白筛选
31
32
二. 表达载体（expressing vector）
在受体细胞中表达（转录和翻译）外源基因的载体。
㈠ 大肠杆菌表达载体 除克隆载体的特性外还含有：
表达系统元件
启动子 核糖体结合位点 克隆位点 转录终止信号
启动子：常用的有
trp-lac启动子（or tac启动子） 噬菌体Pc启动子 T7噬菌体启动子
3＇-末端:Pst1 : 5＇-CTGCAG-3＇ 3＇-GACGTC-5＇
（2）产生平末端(blunt end):
Sma1:
5＇-CCCGGG-3＇
3＇-GGGCCC-5＇
10
4.同功异源酶(isochizomers): 来源不同, 识别和切割位点相同
如:BamH 1 和 Bst 1
5.同尾酶(isoaudamers): 识别序列不同,但产生相同的粘性末端 BamH 1 :GGATCC Sau3A 1: NGATCN
第八章 基因工程
1
重组DNA技术
2
3
4
5
6
基因工程的应用
7
第一节、工具酶
一、限制酶（restriction enzyme）：限制性内切酶 1、分类 根据酶结构、作用及DNA结合和裂解的特性
1 类：限制和修饰作用 * 2 类：识别DNA内部位点、切割双链
3 类：同类．
2、命名
首字母： 大写：细菌属名
方向：5‘3’
作用NA ligase） 将3＇-OH 与5＇-P 连接形成3＇, 5＇-磷酸二 酯键
13
4、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）
去除DNA or RNA 5＇-P，制备载体时可防止载 体自身连接， 提高重组效率。
33
㈡哺乳动物表达载体
除含有原核序列：在E-Coli中的复制起始点、便于筛选
的抗性基因
还包括真核表达元件
启动子/增强子
克隆位点
终止信号和加poly（A）信号
基因工程的受体系统
原核受体 E-Coli受体系统 外源基因复制、扩增场所 链霉菌受体系统 外源基因表达场所