云芝多糖的提取

云芝多糖的提取分离

第一章文献综述

云芝是担子菌纲云芝属的一种杂色菌，腐木生，是珍贵的药用真菌，其子实体具有清热消炎之功效，临床上用于治疗慢性气管炎，慢性肝炎等疾病[1]。这只要是和云芝多糖密切相关，云芝多糖（PSK）是从担子菌纲云芝（Coriolus versicolor in basidiomycete）中提取的一种蛋白质多糖，它具有免疫调节功能，已用于肿瘤和炎症的辅助性治疗[2]。它能激活免疫细胞，提高机体免疫功能而对正常细胞没有毒副作用[3]。根据张翼伸等的报道[4]，用水醇提取法从天然云芝子实体中分离提取，获得了糖和蛋白含量较恒定的蛋白结合多糖，通过对其生物学效应的研究，发现小鼠腹腔注射PSK有提高其腹腔巨噬细胞硒谷胱甘肽过氧化物酶（SeGSHPx）的活性和基因表达水平，保护巨噬细胞免受tbOOH和氧化修饰LDL（Ox-LDL）引起的脂质过氧化物损伤[5-9]。现在除了用水醇提取法以外，还有的人采用盐提法，酸提法甚至超声波法等等。

1.1水提法不同因素的比较

1.1.1真菌多糖提取条件

影响真菌多糖提取率的因素很多，有培养方法，提取原材料的状态，温度、介质、介质浓度、提取时间、浸提次数、原料的预处理等等，做真菌多糖的提取时要充分考虑到这些因素，因为一个因素的不同就会对提取量造成很大的影响。1.1.2原材料对多糖提取的影响

真菌原材料的不同对多糖的提取会产生一定的影响，有研究指出姬松茸菌丝体的多糖提取率高于子实体[10]。而香菇现在则多从子实体中提取多糖，当存在着周期长，成本高等问题。而且就算同是从云芝中提取多糖，还有野生和栽培之分，根据田光辉等人的研究，发现栽培的云芝用水提法提取出的多糖含量要高于野生菌株。

1.1.3提取方法的比较

水提法中还包括了不同的提取方法，有干提法，湿提法等等。参考国内外已有

的研究资料，基本可以归类为三类：A.将湿菌丝体不做任何处理，直接加水提取；

B.将菌丝体烘干，粉碎，加水提取；

C.将菌丝体用组织捣碎机捣碎后，加水提取。在香菇多糖的提取中组织捣碎法得到的多糖量最高[11]。

1.1.4不同加水比例对多糖提取的影响

首先，先看水体积对提取的影响，用水来提真菌多糖的方法与加入其中的水的体积有着密切的关系，不同的真菌对水的比例会有不同的要求。要是水的体积没有达到一定的程度就会严重的影响提取的效果，提出的多糖量会变得很少，大部分的真菌多糖最佳提取水比例为1：30，如灵芝、平菇等。根据臧晋、黄开勋的研究，灵芝多糖的提取水体积一般为1：30。要是在这个比例之下它的提取效果会非常得不好，要是水的体积再增加它的提取量增加的也就不显著了。而在提取银耳多糖时水的最佳比例是1：50[12]。相比较而言，水对白灵菇多糖的提取影响很大，在1：30～1：40时效果最好。若加水过少，多糖浓度过高不利于多糖的浸出，若加水过多则浸提液过多不利于以后的分离[13]。也有低于1：30这个比例的，像五味子多糖得提取，它的水比例在1：25之后影响就不明显了[14]。而从茶薪菇发酵菌丝体中提取多糖只需要加入10倍的蒸馏水[15]。

1.1.5不同提取温度对多糖产率的影响

温度是多糖提取的关键因素之一。对于平菇来说在90℃的条件下提取可以达到较高的多糖得率。温度过低则溶剂的渗透能力和溶剂能力降低，使多糖不能有效溶出，温度过高则导致多糖得破坏，使多糖得率降低[15]。而白灵菇的提取温度一般在80～90℃之间，温度对它的影响和平菇是类似的[13]。温度对五味子多糖的提取率有显著的影响，温度的上升伴随着多糖提取率的显著上升，在100℃条件下多糖得提取率几乎是85℃时提取率的两倍[14]。银耳相对于以上几种真菌要显得特殊一些，它的多糖在提取时要经过一个灭酶的过程，因为它在水提时要加入1%的果胶酶。它先在45℃得水浴中浸提，在98℃经过灭酶后再保温浸提[12]。

1.1.6不同提取时间对多糖产率的影响

一般而言，随着浸提时间的增加，多糖得提取率也有所增加，但是，这种增加会有一种减慢的趋势，找出提取的最佳时间能够大大的提高提取的效率。当然，不同的真菌会有不同的最佳时间点。以平菇为例，平菇的提取时间是属于比较长的，要达到7～8个小时，8个小时以后它的提取量增加程度会明显的下降[16]。

需要较短时间的有茶薪菇菌丝体，它的提取时间一般设为4个小时[15]。在同等条件下，白灵菇提取3～4个小时较为合适[13]。根据专家对姬松茸的研究，在94℃条件下，提取两次，以1：25的比例加水则发现，在时间低于3小时时，得率随提取时间的延长增加很快，超过3小时后则增加缓慢。这表明，产物溶解于水有个过程，时间过短，产物溶解不充分，但时间过长又易引起产物结构的破坏和生物活性的丧失，并使生产效率降低，所以，姬松茸的提取时间以3～4为好[17]。

1.1.7不同乙醇浓度对提取量的影响

用水提法提出多糖后用乙醇沉淀，乙醇的浓度也是需要考虑的重要因素。用乙醇沉淀多糖，有时不同浓度的乙醇可沉淀出不同组分的多糖。一般情况下，多糖的分子量越大，被沉淀下来所需要的乙醇浓度越小；乙醇浓度越大，沉淀下来的多糖分子量越小，多糖得率越高[18]。从白灵菇子实体中提取到的多糖用70%～80％浓度的乙醇为宜，以80%最佳，乙醇浓度大于80%，多糖得率增长缓慢。而对灵芝多糖只需要加入75%的乙醇就可以达到最佳效果。

1.1.8不同提取次数对提取量的影响

提取次数直接影响胞内多糖的得率，在进行姬松茸多糖的提取时，到第四次提取，粗多糖得率已处于较低水平，而过度增加提取次数，反而会使生产效率降低，因此姬松茸多糖的提取以3次为宜[18]。而灵芝的提取相对来将需要的提取次数就要少的多,根据研究得出,灵芝提取两次就能达到提取率90%以上了.

1.2研究的目的及意义

近几年，真菌多糖受到了人们越来越多的关注，更多的真菌多糖被作为保健因子添加到了食品中，这种食品受到了人们的欢迎。其中云芝多糖因为具有抗细菌、霉菌及病毒的功能，刺激巨噬细胞转化，增加血液里的白细胞介素α、γ干扰素及肿瘤坏死因子的作用，能抑制癌细胞的生成[1][19].近期对云芝多糖提取分离的研究也日趋热门。本实验主要是根据前人研究的基础上参考真菌多糖的提取工艺，分析及改进云芝多糖的提取工艺，选取出提取云芝多糖的最佳工艺。