结核病实验室诊断技术
结核病的实验室诊断方法及评价
结核病的实验室诊断方法及评价耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR 为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
结核实验室检查项目
结核实验室检查项目包括痰涂片、痰培养、结核菌素试验和胸部X线检查等。
1. 痰涂片：通过显微镜观察痰液中的结核杆菌是否存在，是诊断结核病的常用方法之一。
2. 痰培养：将痰液置于培养基上进行培养，检测结核杆菌的生长情况，可以确定病原体的种类和药物敏感性。
3. 结核菌素试验：注射结核菌素后观察皮肤反应，判断是否感染了结核杆菌。
阳性结果需要进一步确认是否为活动性结核病。
4. 胸部X线检查：通过X光照射胸部，观察肺部是否有结核病变，如结节、空洞等。
对于早期病变或隐匿性病变的发现具有重要意义。
这些检查项目可以帮助医生确定患者是否患有结核病，并指导治疗方案的选择和调整。
同时，这些检查也有助于监测治疗效果和预防结核病的传播。
结核病实验室检查
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病，通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核，而也可以通过血液传播到其他部位，如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方，特别是在发展中国家，结核病仍然是一种普遍的疾病，因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测，例如：1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌，因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织，也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性，则可以确诊结核病。
但是，该方法也存在一些局限性，例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌，如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA（酶联免疫吸附试验）或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体，如果测试结果呈阳性，则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是，结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况，这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA，并且非常特异和灵敏，因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中，PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA，以确认病原体的存在。
但是，该方法对样本中的DNA污染非常敏感，因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之，结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点，并且结果可能受到许多因素的影响。
因此，必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现，以取得最佳的诊断结果。
同时，实验室技术人员必须受过专业培训，严格遵守操作规程，以确保准确诊断和最佳治疗效果。
结核病实验室诊断技术研发进展
结核杆 菌培养是诊 断结核病 的金标 准 ， 但传 统 的罗 氏培 养需要 ４～ ６周 的培养方能 检测 到结 核菌 的生长 。 目前 正在
推广 的液体培养系统 仅需 １ —３周 ， 更加敏 感 、 快速 。早 期 的
Ｂ Ｃ Ｅ －６ 由于具有 放射 性 而 限制 了其应 用 。Ｍ Ｉ Ａ Ｔ Ｃ４ ０法 Ｇ Ｔ为 ｍ ｃｂｃ ｒ ｌ ｒ ｔ ｉｄｃｔ ｂ ｙｏａｔ ｉ ｏ ｈ ｎ ｉ ｏ ｔ ｅ的简称 ， ｅａ ｇ ｗ ａ ｒｕ 其原 理是 Ｊ试 管 ： 底部的荧光复合物与氧气结 合时处 于淬灭状 态 ， 当结核 菌生 长时 ， 氧气逐渐减少 ， 荧光 复合 物就发出荧光 而被 检测 到。 自 动化的 ＭＧＴ还可 加入 临 界浓 度 的抗 结核 药物 进 行药 敏 分 Ｉ 析。Ｂ Ｄ公 司 推 出的 Ｂ Ｃ Ｅ － Ｉ ６ Ａ Ｔ Ｃ ＭＧＴ ９０全 自动分 枝杆 菌 培 养／ 鉴定／ 药敏系统操作简便 ； 阳性标本检出时间平均为 ９天 ；
诊断性能优于标准荧光显微镜。多项研究经 ｍ ｔ ｅ ａ分析显示 ： Ｌ Ｄ检查 的敏感 性 比传 统镜 检方法 高约 １ ％… 。同时具 备 Ｅ ０ 荧光染色的优点 ， 且花 费低 、 可实施性 强 ， 可更广泛 的常规 使 用。中国卫 生部 一 茨基金会 和中国卫 生部 一 国梅 里埃 基 盖 法 金会结核病防治项 目已准备将 Ｌ Ｄ显微 镜在 我 国基 层实 验 Ｅ
室推广。 二 、 枝 杆 菌 培 养 技 术 研 发 进 展 分
扩增反应在 等温条 件下进行 ， 不需 要专 门的 Ｐ Ｒ仪 ， Ｃ 只需一 个水浴 锅或 简单 的保 温桶 和温度计 ； 其结果可以肉眼读值 ： 通 过 生成 的焦磷 酸盐置换锰 离子 ， 使与之结 合的钙黄绿素 （ ａ— Ｃｌ ｃｉ） ｅ 游离 而发 出荧光 Ｊ也可通过 加人 核酸燃料 Ｓ Ｂ ｒｅ ｎ ， Ｙ ＲＧ ｅｎ Ｉ 或产生 白色混浊焦磷酸镁沉淀进行 肉眼观察或实时浊度计 观察 。其对于发展 中国家而言是一项分子检测结核杆菌的很 有前景 的方法 。 文献报 道 Ｌ ＭＰ的 总 特 异 性 为 ９ ％ Ｊ 总 敏 感 性 为 Ａ ９ ， ８ ．％ ， 中在痰涂 片 阴性 、 ８２ 其 培养 阳性 病 例 中 的敏 感性 只 有 ４ ． ％ ， 在 痰 涂 片 阳性 、 养 阳 性 病 例 中 的 敏 感 性 达 ８８ 但 培 ９ ． ％ 。中国卫生部 一盖茨基金会和 中国卫生部 一法 国梅里 ７７ 埃基金会结核病防治项 目已将 Ｌ Ｍ Ａ Ｐ列 入我国基层实验室推
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室诊断技术2017.10.13
• 绝对浓度法 • 比例法
• 液体培养法
基于固体培养基；时间：4周 多种药物
基于液体培养基，时间：4-12天 INH/RFP/SM/EMB/PZA
结核分枝杆菌药物敏感试验
不同药敏方法的差异
三者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差 别，导致结果有很少一部分不相符
比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以上,对于 结核分支杆菌,二种方法测试 SM INH RFP EMB的耐药率均无显著 性差异
涂片显微镜检查的敏感性
观察到的AFB
AFB估计数量 涂片阳性的可能性(%)
数量
( /ml)
• 0 in ≥100 fields
< 1,000
<10
• 1-2 in 300 fields 5,000 – 10,000
50
• 1-9 in 100 fields about 30,000
80
• 1-9 in 10 fields
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别：
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理：硝基苯甲酸还原酶机制
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸（PNB ）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸（PABA），而 绝大部分（98%以上）MTBC缺乏对硝基-苯甲酸（PNB ）还原酶活性，为对氨基-苯甲酸（PABA）将对硝基苯甲酸（PNB）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 （PABA） • 局限：鉴定周期长15天-30天，特异性不高
结核病实验室检测流程标准
结核病实验室检测流程标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传染性强，严重威胁人类健康。
为了及时发现和诊断结核病，实验室检测是必不可少的一环。
本文将从标本采集、实验室检测和结果判读三个方面，介绍结核病实验室检测流程标准。
一、标本采集结核病的标本采集是实验室检测的第一步，其质量直接影响后续检测结果的准确性。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，采集的标本应包括痰液、胸腔积液、尿液、脑脊液等。
在采集痰液时，应让患者深呼吸数次，然后咳出痰液，避免口腔分泌物的污染。
采集胸腔积液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
采集尿液时，应让患者在清晨第一次排尿时采集，避免尿液的稀释。
采集脑脊液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
二、实验室检测结核病的实验室检测主要包括涂片法、培养法、PCR法等。
涂片法是最常用的检测方法，其操作简单、快速，但灵敏度较低。
培养法是检测结核分枝杆菌的“金标准”，其灵敏度高，但需要较长的培养时间。
PCR法是一种新兴的检测方法，其灵敏度高、特异性强，但需要较高的技术水平和设备支持。
实验室检测应在严格的无菌条件下进行，避免标本污染和交叉感染。
检测结果应及时记录和报告，确保患者能够及时接受治疗。
三、结果判读结核病的实验室检测结果应根据临床表现和其他检查结果进行综合判读。
涂片法和PCR法的阳性结果可以初步诊断结核病，但需要进一步的确认。
培养法的阳性结果可以确诊结核病，但需要排除其他细菌感染。
实验室检测结果应及时通知临床医生，以便制定合理的治疗方案。
综上所述，结核病实验室检测流程标准包括标本采集、实验室检测和结果判读三个方面。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，实验室检测应遵循相应的操作规范，结果判读应综合考虑临床表现和其他检查结果。
只有严格按照标准操作，才能确保结核病的及时发现和诊断，保障人民群众的健康。
结核病实验室诊断技术
阴、 无 痰及 Ｌ型结核 菌的肺结 核病人则难以诊断 。Ｐ Ｐ Ｄ试验 、 血 清结 核抗 体检查对结核病 的诊断有一定参 考价值 ， 但 无法区分 Ｂ Ｃ Ｇ接种 、 既往感染 和正在感染 ， 而且其 灵敏性和特异性不理想 。随着 分子生 物学技 术 的发展 ， 基因诊断技术 因具有较高 的敏感性 、 特异性而 日益显示其优越性 。 目前用 于结核 分枝 杆菌诊断 的方法有聚合酶链反应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 、 Ｄ Ｎ Ａ探针技 术 、 基 因芯片技术 。Ｐ Ｃ Ｒ技术具 有快速 、 特异、 灵 敏和 可无培 养依赖性特征 。Ｄ Ｎ Ａ探针技术用于结核病 的诊 断 ， 及进行菌种鉴定 与分类 。Ｄ Ｎ Ａ序列 测定 不但 为结 核病 的诊断和鉴别诊断提供准确病原学依据 而且 作为鉴定结核分枝杆菌耐药基 因突变 的重 要手段。基因芯片 法（ Ｇ Ｃ Ｔ ） 具有高效率 、 微 型化 、 自动化 、 成本低 、 防污染 等特 点。总之将这些诊断方法不断进行改进 。在临 床工作 中将各种诊断技术有机 的结 合 ， 综合分析 ， 合理 的为临床服务 ； 从而做出正确 的诊断 ， 以使结核病能
的 检 测 方 法 较 常 用 的有 ： 斑点金免疫金渗滤试验 （ Ｄ Ｉ Ｇ Ｆ Ａ） ， 是
一
、
痰涂片镜检 、 痰 结 核 菌 培 养 法
结核病 的 实 验 室诊 断 主要 依 赖 细 菌 学 涂 片 和 培 养 检 查 Ｊ ， 痰样本涂 片抗酸 染色 显微 镜检 查 和痰 抗酸 杆菌 培养 ， 是结 核病实验室诊断的主要方法 。具有简便 、 快速 、 价廉 等特 点， 对结核病早期诊 断起着 重要作 用 。痰样本 涂 片检查无 法 区分死 菌 和 活 菌 ， 且 敏 感 性低 ， 阳 性检 出率 约 为 １ ９ ． ９ ％ 一 ３ ５ ％ 。目前杨松等 研究临床报道较 高 的也 只有 ３ ６ ． ４ ％。
结核病实验室诊断技术新进展
染者全血或单个核 细胞体 外 ３ ℃ 孵育过 夜 ， 定致敏 Ｔ细 ７ 测
胞 受抗原刺激后 ＩＮ一 释放水平 ， 而判 定是否有 ＭＴ Ｆ 从 Ｂ感 染。Ｉ Ｒ Ｇ Ａ的刺激抗原分 为 Ｐ Ｄ和特 异 ＭＴ Ｐ Ｂ抗原 两类。前 者存在 的缺 点与 Ｔ相 同 ， 不能 区分 出 Ｍ Ｂ潜伏感 染者与 Ｔ
一
酸杆菌均可着色， 需进一 步试验才可确 定是否为结核 菌。此
方 法 由于检 测 原 理 的 限制 ， 不可 能 出现 突破 性 的进 展 。
１２ 痰结核 菌常规培 养法 是 鉴定死 茵活菌的 “ 标 准” ． 金 。
缺 点 是 时 间 长 ， ２—８周 才 能报 出 结 果 ， 敏 感 性 低 ， 片 需 且 涂
采用双重皮试法 ， Ｐ Ｄ引起 的反 应扣 除迟发致敏素 引起的 将 Ｐ 反应后作 出诊 断， 一定程度上提 高了Ｐ Ｄ的特性。 Ｐ ２ ２ ２ ＩＮ一 释放试验（Ｇ Ｕ） 即用 ＭＴ ．． Ｆ Ｉｒ Ｂ抗原与 可疑感
性水平。这项试验通 常在痰结核茵培养的基础上进行 ， 需 故
菌素（ Ｔ 和第二代 纯蛋 白衍 生物 （ Ｐ ， Ｐ Ｏ） Ｐ Ｄ） Ｐ Ｄ是 Ｏ Ｔ滤液的 沉淀物 ， Ｏ 比 Ｔ的效价更稳 定， 有更 高的敏感性和特异性 。近
一
个世纪来， ｓ Ｔ Ｔ一直是诊 断 Ｍ Ｂ感染 的传 统方 法之 一， Ｔ 常
用于辅助诊 断 Ｍ Ｂ感染、 Ｔ 筛选 Ｂ Ｇ接 种对 象、 Ｃ 了解接种效果、 作流行病 学调 查等。但 由于 Ｐ Ｄ 中的 大多数蛋 支 Ｔ 杆 菌感染及 Ｂ Ｇ接种方面还存在特异性差的问题 ， Ｃ 以及 １％ ０
１４ 分支杆菌菌种鉴定 利 用分子 生物 学技 术可精 确地鉴 ． 定分支杆菌的不同菌种， 操作复杂。 但 １５ 痰结核菌快速培养 系统 ２ ． ０世纪 ７ ０年代发展 的一种 新的结核病细菌学检查 方法。该 系统根 据分 支杆 菌生长 时
QB—SPOT结核实验
QB—SPOT结核实验
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。
TBspot试验通常指T-SPOT试验，即结核杆菌感染T细胞斑点试验，又称为结核菌感染干扰素释放试验，是利用结核特异性抗原，通过酶联免疫斑点技术，检测受试者体内是否存在结核效应的T淋巴细胞，从而判断被检查者是否感染结核杆菌。
该检查的原理是结核杆菌感染之后，T淋巴细胞会形成免疫记忆。
通常在体外分离到T淋巴细胞之后，培养增殖T细胞的同时，用相应的特异性抗原，进行刺激，激活T细胞记忆，有记忆的细胞则会分泌大量的干扰素。
结核T-SPOT检查即为结核菌T细胞斑点检测，是临床用于诊断结核病的新型检查方法。
通过检测干扰素的量，判断该细胞是否存在结核感染形成的记忆，进而通过进一步的反应判断是否存在结核菌感染。
但它的结果不能作为单独或决定性诊断活动性结核的证据，阳性结果仅提示患者体内存在结核杆菌特异性的效应T细胞。
但是否为活动性结核，则需要结合患者的临床症状及其他检测指标，进行综合判断。
现在已经有多项研究的结果显示，T-SPOT试验只能判断是否感染过结核，但无法鉴别活动性结核与潜伏性结核，因此对于活动性结核的诊断价值有限。
结核病实验室检测新诊断技术
HAIN和目前常规药敏方法比较
比较项目 时间
生物安全级别要求 人员培训
操作简易程度 仪器设备
HAIN 1-2天 较低 2-3天 简单 性价比较高
常规药敏方法 2-3个月
二级实验室 2-3个月 复杂 --
对环境洁净度要求
较高，易出现 假阳性
较高
四、GENECHIP基因芯片耐多药 检测技术
适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、TB菌种鉴定。 3、利福平和异烟肼耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。
，
耐药检测基因芯片
基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通 过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断 特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。
结核分枝杆菌耐药检测基因芯片基于rpoB/katG/inhA的基 因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性 （利福平、异烟肼）。
发光二极管荧光显微镜（LED）
镜下视野
发光二极管荧光显微镜（LED）
不需要加热玻片，步骤简单 视野比普通的显微镜大大2-4倍 • 对数目少的不必使用镜油 • 节省人力时间，时间为普通的1/4每天可检查至少60个涂
片 • 可帮助早期诊断肺结核 – 即使菌浓度较低 • 杆菌也有很高的灵敏度，与ZN相比阳性发现率平均增加
适用范围：痰涂片镜检 十一五国家重大科技专项：泰兴、江阴 厂家：湖南天骑公司 原理：集菌法
流程图
痰标本消化灭活 基片的夹层杯
离心 细菌附着在基片
在夹层杯中
直接染色 取出基片
于载玻片上
镜检 自动阅片计算机报告系统。
所需仪器设备：普通的抗酸染色液、彭氏杯 （专利）、涂片机、KP21型快速干片机、抗 酸杆菌自动阅片计算机报告系统。
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GenoType MTBDR and 诊断结核感染及对利福 MTBDRplus；INNO- 平和异烟肼药物敏感性 LiPA Rif.TB
Frane; LW Scientific; Zeiss
诊断结核患者
Cepheid GeneXpert
诊断结核感染及对利福 平的耐药性
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 DNA微阵列芯片法
有前景的几种新技术
❖ 分子诊断技术:GeneXpert（Cepheid公司） ❖ 分子线性探针技术:INNO-LIPA（Innogenetics公司） ❖ 反向点杂交技术:GenoType MTBDR （Hain Lifescience）
分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（亚能生物） ❖ 基因芯片技术：微阵列芯片法（博奥生物） ❖ 细胞免疫学技术：T-SPOT.TB（Oxford Immunotec公司）
目前诊断方法回顾
细菌学检测方法 ： 涂片、常规培养、快培 其他辅助检查方法：皮试、结核抗体
目前诊断方法的局限性
涂片的缺点： 敏感性低； 特异性差； 无法区别死菌与活菌
培养的缺点： 耗时久，一般需4~8周； 阳性率低，约30%~50%；特异性差， 无法区别MTB与NTM
皮试的缺点： 敏感性低特异性差 抗体检测缺点：敏感性低特异性差
新型诊断技术产品比较
企业 美国 Cepheid
比利时 Innogenetics 德国 Hain Lifescience 中国 亚能生物
中国 博奥生物
英国 Oxford Immunotec
方法
产品特点
GeneXpert
同时检测MTBC和判断利福平耐药； 快速；简便；安全
线性探针杂交法 （INNO-LIPA）
➢ 新的实验诊断技术可弥补传统方法的不足，提高诊 断的灵敏度和特异性，但各有缺点或不足，难以完 全满足临床检测需求，因此，新型结核杆菌诊断技 术及产品的研发势在必行。
知识回顾 Knowledge
Review
祝您成功！
灵敏度高；特异性好；能检测肺 外结核；快速；筛选TB潜伏感染； 不能作为活动性TB诊断指标
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 液体培养（2007年）
分子线性探针技术 （2008年）
LED 荧光显微镜 （2009年） 自动化检测和MDR筛 选实验（2010年）
商品
检测目的
Bact/TLERT 3D; MGIT 诊断结核感染及药物敏 感性
鉴定16种分枝杆菌
PCR-反向点杂交法 鉴定16种NTM；需配备昂贵进口 （GenoType MTBDR） 设备；结果肉眼判读
PCR-反向点杂交法
鉴定21种NTM及MTC；结果肉眼 判读；操作简便
微阵列芯片法
鉴定16种NTM及MTC；需专用设 备；阅读仪器判读结果；成本高
酶联免疫斑点法 （T-SPOT.TB）
商品
检测目的
生物结核分枝杆菌耐 诊断结核感染及对利 药基因检测试剂盒 福平和异烟肼的药物
敏感性
γ-干ห้องสมุดไป่ตู้素释放实验 核酸扩增
MODS
T-SPOT.TB; QFT
诊断结核感染
环介导核酸扩增试验 检测结核感染 （LAMP）
无商品化试剂盒
检测结核感染
总结
➢ 目前结核病的实验室诊断主要依赖于常规的结核病 实验室诊断方法，可应用的方法有限，不能满足临 床需要。