正交试验培养基配方

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实验五青霉素发酵培养基正交优化试验_百替生物

实验五青霉素发酵培养基正交优化试验[实验目的]1、掌握培养基的原理2、了解培养基优化的原理和试验设计方法3、通过实验确定青霉素发酵的较适培养基[实验原理]1、掌握培养基的原理a碳源、氮源许多碳源和氮源都是复杂的有机物大分子,如淀粉、黄豆饼粉等,用这类原料作为培养基时,微生物必须要具备分泌胞外淀粉酶和蛋白酶的能力,但不是所有的微生物都具备这种能力的.相应的酶水解/葡萄糖:成本高b代谢的阻遏和诱导碳源、氮源:根据微生物的特性和培养的目的,注意快速利用的碳(氮)源和慢速利用的碳(氮)源的相互配合葡萄糖:具体利用葡萄糖产生的分解代谢产物会阻遏或抑制某些产物合成所需的酶系的形成或酶的活性.氮源的诱导或阻遏:蛋白酶类,受培养基中蛋白质或多肽的诱导,而受铵盐、硝酸盐的阻遏;应以有机氮源为主c合适的C、N比碳氮:过多则容易形成较低的pH;不足则容易引起菌体的衰老和自溶，显著影响微生物生长繁殖和产物合成。

氮源:过多,菌体生长过于旺盛,pH偏高,不利于代谢产物的积累;不足则菌体繁殖量少,从而影响产量。

碳氮比:菌丝体生长阶段氮源需求高;孢子生长阶段氮源需求低.100:(0.2~2.0)d pH的要求微生物在利用营养物质后,由于酸碱物质的积累或代谢酸碱物质的形成会造成培养体系的pH的波动.因而在配制培养基选取营养成分时,除了要考虑营养的需求外,还要考虑其代谢后对培养体系pH缓冲体系的影响2、培养基优化的原理和试验设计方法a培养基优化的基本原理一个批发酵(流加发酵):可以分为生长期和产物形成期两个阶段。

第一阶段:控制菌体的生长,目的是使长好的菌体能够处于最佳的产物合成状态,即如何控制有利于微生物催化产物合成所需酶系的形成。

第二阶段:控制产物的合成;找出影响反应速度变化的主要因素并加以控制使产物的形成速度处于最佳或底物的消耗最经济。

b实验设计方法单因子实验确定培养基的成分：多因子实验确定各成分对培养基的影响大小及适宜浓度多因子:通过较少的实验次数获得所需的结果,正交实验设计、相应面分析等为了追求可比性，正交表中的每个水平都要有适当的重复。

正交设计法筛选紫芝菌丝液体培养基的研究

第ｌ７卷第２期２１年６００月
天津农学院学报ＪｕｌｆｉｎｉＡｇｉｌｒｌｉｅｓｙｏｍａｏａｊｒｕｔａＵｎｒｔＴｎｃｕｖｉ
Ｖ０．７，ＮＯ２１１．
Ｊｎ，００ｕｅ２１
文章编号：１０— ３４（００２０１—４０８５９２１）０－０４０
Ａｓｅｕｔｈｅｍｙｅｉｌｅｌｔｉｅｓａｉｇｆｓａｈｄ６００ｎｄＧａｏｅｍａＳｎｎｉｈｐａｃｕｄｇｏｗｅｌｎｆｕａｓｒｓｌ，ｔｃｌｌｓｎｔｈｋｎａｋｒｃｅ０，ａｎｄｒｉｅｓｓｙｈｏｌｒｗｌｉｒｙａａｐｅｈｌｅｏｄ
１％、蔗糖２０．０．％、蛋白胨Ｏ２．％、ＫＰ４．％、ＭｇＯ・Ｈ２．％。以筛选出的液体种子初Ｈ２Ｏ１０Ｓ４７Ｏ０５０始培养基进行３因素３水平正交设计，获得了最优的液体种子培养基配方为：玉米面１％、蔗糖．５
２０．％、蛋白胨０１．％、ＫＰ４．％、ＭｇＯ４７Ｏ００％、ＶＢ微量。最终可达到每瓶中的菌球Ｈ２ＯＯ１Ｓ・Ｈ２．５数为６０，且菌丝在４ｄ的时间就可基本上生长良好。００关键词：紫芝：菌球；液体培养基；正交设计中图分类号：Ｑ１８５文献标识码：Ａ
．
ｏｓｒｅｅｂｅｖｄｔｍｙｅｉｌｅｌｔｎｔｅｅｄｃｌｒｄｕｈｃｌｐｌｓｉｓｅｕｔｅｍｅｉｍａｄｈｅｇｏｈｆＧａｏｅｍａｉｅｓｓｈｐａｂｔｅｏｉａｅｈｕｎｔｒｗｔｏｎｄｒＳｎｎｉｙｈｙｈｓｌｄｆｒｎａｉｎ，ｔｅｈａｉｉｕｄｓｅｄｕｏｏｎｐｗｄｒ１０，ｓｃｏｅ２０，ｐｐｏｅ０２，ＫＨ２Ｏ４０１，ｅｍｅｔｔｏｈｎｔｅｂｓｃｌｉｅｄｍｅｉｍｆｃｒｏｅ．％ｑｕｒｓ．％ｅｔｎ．％Ｐ．％ＭｇＯ４Ｈ２００％ａｅｃｎｒｄＡｌｏｉｉｏｔｚｄｔｅｓｅｕｔｒｄｕｉｈｅａｔｒｔｒｅｌｖｌｏｔｏｏａＳ・０．５７ｒｏｆｍｅ．ｓ，ｔｓｐｉｅｈｅｄｃｌｅｍｅｉｍｎａｔｒｅｆｃｏ－ｅｅｅｒｇ，ｓｃｏｅ２０，ｐｐｏｅ０１，ＫＨ２Ｏ４Ｏ１，ＭｇＯ４Ｈ２Ｏ０％，ａｄｍｉｉｍＶ．ｘｅｍｅｔｈｔｓｏｎｐｗｅ．％ｉｉｕｒｓ．％ｅｔｎ．％Ｐ．％Ｓ・０．５７ｎｎｍｕＢ

利用正交旋转组合法优化平菇培养基研究

关键词：菌丝长速；菌丝干重；正交旋转组合设计
中图分类号：４．十文献标识码：文章编号：０－００（００Ｏ —０６一ＯＳ６６１４Ａ１１０９２１）３１８３０为解决平菇产量下降、品质欠佳、转代次数不明、适镁、磷酸二氢钾原料按表１量加到基础培养基内。按用
、

一２４１．７３３
，
一
一１３１８．６８
一
１００ｍ。０Ｌ培养基配方：将葡萄糖、白胨、蛋酵母粉、酸硫
经方差检验：型（）１１２８Ｐ值＞０１Ｐ一模１Ｆ一．７，．（
作者简介：弓建国（９４）男，１５～，副教授，主要从事生物及农艺方现面的教学工作。Ｅｍｉｇｎｊｎｕ８８３２１３ＣＲ。－ａ：ｏｇａｇｏ８６８＠６．ＯＤｌｉ－
采用四因素五水平二次回归正交旋转组合设计方法ｌ］设葡萄糖、白胨、母粉、机盐（Ｓ４５，蛋酵无ＭｇＯ，
ＫＨＰ４４Ｏ）个试验因子，５各个水平，６３个处理组合，各
因子设计水平见表１。
表１
因素
养平菇母种最佳用量比例。
二次回归正交旋转组合表设计出３个配方，６每配方重复８，次每次重复１，０ｍＬ装好试管后，高压灭菌３ｎ０ｍｉ之后，将其摆成大小相同的斜面。］１４测定内容．菌丝生长速度：将等量的菌种接人已编号的培养基

正交试验法优选中药巴布剂基质配方

糖浆作粘合剂,压成片子后,崩解和溶出较为理想,但因药片硬度较差,且片身较松、脆,使其脆碎度不理想,包衣后外观不合格,因此也不够理想。

而HPMC-K4具有较强的粘性,对质地疏松或脆硬的原料可增加其颗粒粘合性,改善药片的可压性,有效地促进药物的溶出和崩解。

因此,以HPMC-K4作为替硝唑片的粘合剂,可以克服其崩边、缺角、片松及崩解差的现象,压出的片硬度好,素片及薄膜衣片的外观光滑、完整,崩解度符合规定,溶出度较理想。

因此,通过此试验,我们选择210%HPMC-K4、50%乙醇作为替硝唑片的粘合剂。

参考文献[1]丁国华1替硝唑制剂研究及临床应用概况1药学实践杂志,1998,16(6):333～3341[2]侯金成1替硝唑的剂型研究与临床综述1中国药业,1999,8(9)601[3]陈连剑等1替硝唑分散片的制备与质量控制1中国医院药学杂志,2004,24(6):328～3301[4]林东武,俞宁1药用辅料羟丙甲纤维素的应用1海峡药学,2003,15(1):77～781[5]王庆玲,姜宏,孙迎冬,等1替硝唑制剂的研究进展1中国药业,2001,10(7)641正交试验法优选中药巴布剂基质配方吕妍,齐红(济南市药品检验所　济南　250001)摘要:目的　选择以聚乙烯醇、明胶、聚丙烯酸钠、丙二醇制备巴布剂的最佳基质配比。

方法　采用L9(34)正交试验法,以成型巴布剂基质的剥离强度为衡量指标,评定不同基质配比下巴布剂的质量。

结果　巴布剂的最佳基质配比为明胶-聚丙烯酸钠-丙二醇(5∶5∶6)。

结论　采用此最佳基质配比可制备质量较佳的巴布剂基质。

关键词:正交试验　中药巴布剂　基质中图分类号:R943　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2006)02-0114-02Orthogonal testing method optimal preparation m atrix formula of C ataplasmof T raditional Chinese MedicineLüYan,Q I Hong(Ji′nan Institute for Drug Control,Ji′nan,250001)ABSTRACT:OB JECTIVE　To select the optimum proportion of matrix for the preparation process of Cataplasm of Tradi2 tional Chinese Medicine by PVA,gelatia,sodium polyacrylate,and propylene glycol1METH ODS　The L9(34)orthogonal test method was used and the stripping intensity was used as scale guideline to assess the cataplasm quality of different proportion of matrix1RESU LTS　The optimum proportion of matrix of Cataplasm was gelatia-odium polyacrylate-Propylene glycol(5∶5∶6)1CONC L USION　With this optimum proportion of matrix better quality Cataplasm can be prepared1 KE Y WOR DS:Orthogonal test;Cataplasm of Traditional Chinese Medicine;matrix 中药巴布剂是以水溶性高分子化合物或亲水性物质为基质,与中药提取物或粉末制成的外用贴膏剂。

产α-淀粉酶菌株产酶培养基组成优化正交试验PPT课件

产α-淀粉酶菌株产酶培养基组成优化正交试验ppt 课件
• 引言 • 材料与方法 • 结果与分析 • 讨论与结论 • 参考文献
01
引言
背景介绍
01
介绍产α-淀粉酶菌株在食品、饲料、生物能源等领域的应用价值。
02
阐述当前产α-淀粉酶菌株产酶水平较低的问题，强调优化培养基组成对提高产酶量的重要性。
够更好地促进菌株生长和酶产量。
优化方案确定确定最佳营Fra bibliotek成分组合完善培养基配方
根据正交试验结果，确定最佳的营养成分组合，以提高菌株的生长和α-淀粉酶的产量。
根据优化方案的结果，进一步完善培养基配方，以提高α-淀粉酶的生产效率和经济效益。
验证优化方案
通过实验验证优化方案的可行性，确保其在实际生产中具有可重复性和可扩展性。
试验器材
摇床、分光光度计、pH计、离心机等。
试验方法
菌种活化
将保存的菌种进行活化，恢复其活性。
种子培养
将活化后的菌种接种至种子培养基中，在适宜的温度和pH条件下进行培养，获得对数生长期的种子。
产酶培养
数据处理
将种子按一定比例接种至不同配方的产酶培养基中，在相同的条件下进行培养，测定不同培养基的酶活性和菌体生长情况。
参考文献2
正交试验设计在微生物培养基优化中的应用
参考文献3
产酶菌株培养基优化对酶活性的影响研究
THANKS
感谢观看
酶活性测定
在优化过程中，需要建立可靠的酶活性测定方法，以便准确测定菌株产酶的能力和水平。
结论
最佳培养基组成
通过正交试验，可以确定最佳的培养基组成，从而提高菌株的产酶能力。
最佳培养条件

甘蔗健康种苗繁殖培养基正交试验分析

ＦｉａＨＥＨｕ— ｉＣＮＹｅｇｉＬｎ — ｎＬａｇｙ，Ａｉ—ａＤＮＧＨａ—ｕ，ＡＮＡＮＬ— ，ｉ，ＨＥｕ－ｕ，ＵＯＱｉｇｗｅ，ＡＯＦｎ —ｅＴＮＪｎ，ＥｉａＹＧｎｙａｈＪｎｘａ，Ｉ－ｉＱＩｏｇｗｎｕ－ｉＬｗｅ，ｎ — ｅｎＱｉＹ
甘蔗糖业
２１年第６期，２１０１０１年ｌ２月
ＳｇｒａｅａｄＣａｅｕａ．，ｃ２１ｕａｃｎｎｎｓｇｒＮｏ６Ｄｅ．０１
甘蔗健康种苗繁殖培养基正交试验分析
樊而娜，何慧怡，陈月桂，罗青文，劳方业，谭嘉娜，邓海华，杨俊贤，李奇伟，齐永丈
ｂｓｄｕｆｒｔｅｔｒｅｖｒｔｓｗｅｅｄｆｅｅｔＡｍｏｇｔｅｆｕｌｎｒｗｔｅｕａｏｓｔｅｍｏｔｉｏｔｎｅｔｍｅｉｍｈｈｅａｉｉｒｉｒｎ．ｏｅｅｎｏｒａｔｇｏｈｒｇｌｔｒ，ｈｓｈｐｍｐｒｔａ
．
ＲＯＣ２，ｔｅｉｏｔｎａｔｒｗａＤＺ，ｆｌｗｅｙＮＡＡ，Ｐ３ｎ－２ｈｍｐｒｔｆｃｏｓＴａｏｌｏｄｂＰ３ａｄ６ＢＡ．Ｔｈｔｄｎｉａｅｈｔｔｅ３ｅｓｕｙｉｄｃｔｄｔａｈｃｍｂｎｔｎｏｅｃｎｅｔｔｎｏｈｒｗｔｅｕａｏｓｉｔｅｋｙｆｃｏｒｔｅｓｇｒａｅｈａｔｙｐａｔｏｉａｉｆｔｏｃｎｒｉｆｔｅｇｏｈｒｇｌｔｒｓｈｅａｔｒｆｈｕａｃｎｅｌｌｎｏｈａｏｏｈｐｏａａｉｇｅｃｅｃ，ａｄｔｅｅｏｅｓｅｉｌｍｅｉｍｈｕｄｂｅｓｒｅｅｒａｖｒｅｏｅｈｎｅｔｒｐｇｔｆｉｎｙｎｈｒｆｒ，ｐｃａｄｕｓｏｌｅｎｃｅｎｄｆａｉｔｔｎａｃｉｎｉｏｙｓ

正交试验设计经典案例

正交试验设计经典案例
一、L9(3^4)正交试验设计
这个实验设计是一个L9(3^4)正交试验设计，用于研究铜锌合金中锌的含量、冶炼时间、冷却速率和成型压力对铜锌合金硬度的影响。

在这个设计中，有四个因素（锌的含量、冶炼时间、冷却速率和成型压力）和三个水平（低、中、高）。

该试验的九个试验条件如下表所示。

2、L16(4^5)正交试验设计
这个实验设计是一个L16(4^5)正交试验设计，用于研究发酵生产中，发酵液pH 值、生物量、发酵温度、曲菌培养基和曲菌翻转次数对干酪根的质量影响。

在这个设计中，有五个因素（发酵液pH值、生物量、发酵温度、曲菌培养基和曲菌翻转次数）和四个水平（低、中低、中高、高）。

该试验的十六个试验条件如下表所示。

3、L16(4^5)正交试验设计
这个实验设计是一个L16(4^5)正交试验设计，用于研究太阳能集热器的建造，包括集热面积、集热器长度、集热器宽度、太阳能采集器的形状和位置对太阳能集热器效率的影响。

在这个设计中，有五个因素（集热面积、集热器长度、集热器宽度、太阳能采集器的形状和位置）和四个水平（低、中低、中高、高）。

该试验的十六个试验条件如下表所示。

以上这些都是经典的正交试验设计案例，这些设计都遵循着统计学中的一些原则和方法，有效地结合了多个因素的影响，将因素控制在一定范围内，从而帮助我们更好地理解问题并提出相应的解决方案。

正交试验设计

正交试验设计1 正交试验设计的概念及原理 1.1 基本概念利用正交表来安排与分析多因素试验的一种设计方法。

特点：在试验因素的全部水平组合中，仅挑选部分有代表性的水平组合进行试验。

通过部分实施的试验结果，了解全面试验情况，从中找出较优的处理组合。

考察增稠剂用量、pH 值和杀菌温度对豆奶稳定性的影响。

每个因素设置3个水平进行试验。

全面试验：可以分析各因素的效应，交互作用，也可选出最优水平组合。

全面试验包含的水平组合数较多，工作量大，在有些情况下无法完成。

若试验的主要目的是寻求最优水平组合，则可利用正交表来设计安排试验。

● 正交试验是用部分试验来代替全面试验的，它不可能像全面试验那样对各因素效应、交互作用一一分析； ● 当交互作用存在时，有可能出现交互作用的混杂。

● 虽然正交试验设计有上述不足，但它能通过部分试验找到最优水平组合，因而很受实际工作者青睐。

1.2 基本原理在试验安排中，每个因素在研究的范围内选几个水平，可以理解为在选优区内打上网格，如果网上的每个点都做试验，就是全面试验。

3个因素的选优区可以用一个立方体表示。

3个因素各取3个水平，把立方体划分成27个格点。

若27个网格点都试验，就是全面试验。

A2 A3A1B1C1B3 B2A 因素：增稠剂用量，A1、A2、A3B 因素：pH ，B1、B2、B3C 因素：杀菌温度，C1、C2、C33因素3水平33＝271.2 基本原理正交设计就是从选优区全面试验点（水平组合）中挑选出有代表性的部分试验点（水平组合）来进行试验。

A1B1C1 A1B2C2A1B3C3A2B1C2A2B2C3A3B1C3A3B2C1A3B3C2A2B3C1A1B1C3A1B3C1A2B1C1 A2B2C1A2B3C3A3B1C1A3B2C39个组合保证了A 的每个水平与B 、C 的各个水平在试验中各搭配一次。

任一因素的每个水平都与另外两个因素的每个水平相组合且组合１次。

正交试验优化添加天麻的黑木耳多糖发酵培养基

天麻（ｈｏａｒｉ）Ｒｉｍａｓｏａ为兰科为多年生寄生菌植物，ｚＧｔｄｅ以蜜环菌的菌丝或菌丝分泌物为营养来源。天麻主产于四川、云南、贵州，其干燥块茎富含天麻素，以入药。具有平肝、可息风、止痉作用，主治头痛眩晕、
肢体麻木、Ｊ惊风、，Ｌ＇ｂ癫痫抽搐等症。３文献研究表明，向培养基中添加适当的中药，可促进真菌的生长或者提高活性产物的产量Ｌ。本实验４Ｊ
０前
言
黑木耳（ｒｕａｉｒｕａ是一种药食两用真菌。它在分类学上隶属层菌纲，耳目，ＡｕｉｌｒＡｕｉｌ）ｃａｃ木木耳科，木耳
属。黑木耳性平，味甘，富含多糖，可以入药… 。研究发现，１黑木耳的生物学活性主要来自其产生的多糖成分，具有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗凝血、抗辐射等多种生物学活性［引。
１２培养方法．
斜面培养：于母种试管中切出黄豆大小菌丝块，接于斜面中部。２５℃培养７ｄ．
液体种子培养：培养好的斜面菌种切成黄豆大小，接到液体培养基中，支斜面接一瓶。５０ｍＬ三将转一０
角瓶装液量１０ｍ，５℃ ，５ｍｎ摇床培养４ｄ５Ｌ２１０ｒｉ，／．摇瓶发酵培养：５２０ｍＬ三角瓶装液量１０ｍＬ接种量为１％，０，０２５℃ ，５ｍｉ，１０ｒｎ摇床培养５ｄ／．
第６期
张大为，：交试验优化添加天麻的黑木耳多糖发酵培养基等正

中国被毛孢菌摇瓶发酵菌丝体培养基的正交优化实验

中国被毛孢菌摇瓶发酵菌丝体培养基的正交优化实验优化中华被毛孢的液体培养条件。

其方法是通过18srDNA及系统进化树对中华被毛孢进行鉴定分析，然后以中华被毛孢菌丝体生物量为指标,采用单因素试验和正交试瞪研究菌丝体液深层发酵的培养条件。

然而结果是单因素试验表明,最佳的氮源为蛋白陈，其次为牛肉膏;最佳碳源为葡萄糖,其次为蔗糖和麦芽糖。

正交设计试验表明，菌株的液体发酵的最佳配方:浓度1%葡萄糖+浓度0.5%蛋白胨+浓度0.1%酵母粉+浓度0.01%维生素B, +浓度0.05% KH,PO, +浓度0.05% MgSO;在该浓度培养下，菌丝体生物量可达到20.8g/L。

其次结论该方法优化了中华被毛孢的液体培养条件,为中华被毛孢的的开发利用提供依据。

珍贵药材冬虫夏草( Cordyceps sinensis) 的药用价值已引物。

以提取的基因组起广泛关注,但冬虫夏草的人工培育难度极大,野生资源稀DNA为模板,以上述设计引物为扩增引物，克隆真菌的缺。

为利用冬虫夏草的药用价值,对冬虫夏草真菌进行发酵18srDNA序列，测序,将测序的结果在NCBI上进行BLAST利用，是当前冬虫夏草开发的重要途径之一。

比对,选取部分同源序列和中华被毛孢的18S rDNA序列利智等的研究表明,中国被毛孢( Hisuella sinensis)是冬虫夏草用clustaLx软件包进行序列同源进化比对,将得到的结果运的真菌无性型" 0。

笔者先通过18srDNA及系统进化树对用MEGA4. 0软件采用邻位相连( Neighbor - joining)算法构所引进的冬虫夏草无性型进行分子鉴定,再研究菌丝体的液建系统进化树8]。

体培养工艺，以期为冬虫夏草的开发利用奠定基础。

接种方法与接种条件。

将不同培养基灭菌(121 C,1材料与方法30 min)冷却后,取4 ~5瓶生长良好的液体种子,用纱布过滤发酵液,得到菌丝体,将菌丝体转人玻璃匀浆器中研磨。

正交试验优化产生淀粉酶培养基

正交试验优化产生淀粉酶的培养基一、实验目的：1、掌握正交试验优化淀粉培养基的方法。

2、掌握用DNS法测淀粉酶活的方法。

二、实验原理：一般使用的培养基包括适合于代谢产物生成和菌体生成所需要的碳源、氮源、无机盐、和其他物质等以有利于最终代谢物的产生。

研究各个成分对在终产物的影响采用单因素的方法实验处理和次数比较多，考虑不到所有成分的综合影响，需要采用数理统计的方法优化培养基的成分。

正交试验设计可以以比较少的实验处理数来判断出培养基的成分的最佳组合。

淀粉酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解a—1，4—葡萄糖苷键生成葡萄糖。

碱性条件下，还原糖于3、5—二硝基水杨酸被还原为3—氨基—5—硝基水杨酸，还原糖则被氧化成糖酸及其他物质。

在一定范围内，还原糖的量与棕色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。

查标准曲线计算，可求出菌液中还原糖的含量，从而求出淀粉酶的活力。

三、实验材料：蛋白胨、牛肉膏、可溶性淀粉、Nacl、无菌水、0.1mol/L pH4.8醋酸缓冲液、酶液、DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸试剂）DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸试剂）的制备：甲液，溶解6.9g苯酚于15.2mL10%氢氧化钠中，并稀释至69mL，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。

乙液，称取22.5g酒石酸钾钠，加到300mL 10%氢氧化钠溶液中，再加入880mL 1%的3,5二硝基水杨酸溶液将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7-10天以后使用。

四、实验步骤：（1）培养基的配制（2）将上述培养基配配制好以后，每250mL三角瓶装入培养基100mL，于121℃下灭菌30min,冷却。

（3）冷却后接种（接种量为3%），置于28℃培养箱进行培养48h。

（4）测酶活：1. 绘制葡萄糖标准曲线，取25mL试管8支，按下表加入试剂。

将各管溶液混合均匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即用流动自来水冷却至室温，再向每管加入蒸馏水21.5mL，摇匀。

实验=利用正交试验优化最适培养基

实验利用正交试验设计选择和优化最适培养基一、实验目的1. 掌握单正交试验选择微生物最适发酵条件和培养基的基本方法；2. 掌握微生物摇瓶发酵实验的基本操作技术；3. 初步掌握用正交表试安排试验及对实验结果进行分析的方法。

二、实验原理对于一个生物作用过程，其结果或产物的得到受到多种因素的影响。

如发酵中，菌种接入量、酶的浓度、底物浓度、培养温度、pH 值、菌种生长环境中的氧气、二氧化碳浓度、各种营养成分种类及其比例等。

对于这种多因素的实验，如何合理地设计实验，提高效率，以达到所预期的目的是需要进行认真考虑和周密准备的。

正交实验法是安排多因素、多水平的一种实验方法，即借助正交表的表格来计划安排实验，并正确地分析结果，找到实验的最佳条件，分清因素和水平的主次，这就能通过比较少的实验次数达到好的实验效果。

现以灰黄霉素产生菌D-756为例，研究不同氯化物浓度及大米粉配比对灰黄霉素产生菌D-756变种发酵特性的影响。

试验共三个因素，每个因素取三个水平。

1. 确定试验的培养基组成成分（因素）和每种组成成分的含量（水平）影响试验指标的因素很多，由于试验条件的限制，不可能逐一或全面地加以研究，因此要根据已有的专业知识及有关文献资料和实际情况，固定一些因素于最佳水平，排除一些次要的因素，而挑选一些主要因素。

正交试验设计法正是安排多因素试验的有利工具。

当因素较多时，除非事先根据专业知识或经验等，能肯定某因素作用很小而不选取外，对于凡是可能起作用或情况不明或看法不一的因素，都应当选入进行考察。

因素的水平分为定性与定量两种，水平的确定包含两个含义，即水平个数的确定和各个水平数量的确定。

对定性因素，要根据试验具体内容，赋予该因素每个水平以具体含义。

定量因素的量大多是连续变化的，这就要求试验者根据相关知识或经验、或者文献资料首先确定该因素的数量变化范围，而后根据试验的目的及性质，并结合正交表的选用来确定因素的水平数和各水平的取值。

正交试验优化培养基因工程菌(E.coli／pGEX)产降血压肽培养基的组成

计划项目（３Ｊ０１０Ｋ６２）
１３１菌体浓度：．．比色法测定，０值表示。以Ｄ
维普资讯
吴亚丽等：正交试验优化培养基因工程菌（．ｏ／ｐＥ）ＥｃｉｌＧＸ产降血压肽培养基的组成
・７・７
１３２ＧＴ蛋白表达量的测定：．．Ｓ工程菌诱导结束后，从摇瓶发酵液中取０５ｍ。Ｌ置入１Ｌ的Ｅｐｎｏ离心管中，ｌ４Ｏ・ｉ～，．ｍ５ｐｅｄｒｆ４ＣＯ０ｒｍｎｃ，
％，酵母提取物１９％，．氯化钠０５％，．葡萄糖０５％，．另外Ｋ１ｍｌＬＭｇ１０ｍ］－。在适宜的发酵条件下，Ｃｍｏ・～，Ｃ１ｍｏＬ４使
用优化培养基可使ＧＴ融合蛋白的表达量达到１８ｇＬ占总蛋白的２Ｓ．・～，５％。
学实验室构建保存。１１２培养基．．Ｊ种子培养基：× Ｔ培养基，２Ｙ含胰蛋白胨１ｇ・～，６Ｌ酵母抽提物１ｇ－一，ＯＬ氯化钠５Ｌ，ｐ０一调Ｈ７。ｇ・．固体培养基：种子培养基加质量分数１．５％琼脂。
１２１种子活化．．
取一０℃ 下甘油管冻存之工程菌Ｅｏ．７．ｃｉｌＢ２涂布于２ＹＬ１ × Ｔ固体培养基上，￣培养２。３Ｃ７４ｈ１２２工程菌诱导表达．．从２× ＴＹＡ平板上挑取单菌落接种至４ｍＬ２× ＹＡ培养基，７Ｃ，５ｍｎ培养过夜；夜菌Ｔ３￣２０ｒ・ｉ过按１％接种量转接至２Ｌ含有不同无机离子的优５ｍ化基础培养基的２０Ｌ锥形瓶，７Ｃ，５５ｍ３￣２０ｒｍｎ，－ｉ培养至Ｏ６为０５时，ＩＴＤｏｏ．加ＰＧ至终浓度０４ｍｏ－一，７．ｍｌＬ３ ℃诱导５ｈ发酵结束。，

培养基设计中的正交设计法

培养基设计中的正交设计法正交设计法是一种科学的研究方法，广泛应用于各个领域，包括培养基设计。

在培养基设计中，正交设计法可以帮助研究人员系统地研究各种成分和条件对微生物生长的影响，从而优化培养基的配方。

本文将从正交设计法的概念、基本原理、实施步骤、优点和局限性等方面介绍其在培养基设计中的应用。

一、正交设计法的概念正交设计法是一种实验设计方法，它基于正交表来安排实验。

正交表是一种特殊的表格，其行和列分别代表实验中的各个因素和水平，表格中的每个单元格代表该因素在该水平下的实验结果。

通过正交表，研究人员可以系统地研究各种因素对实验结果的影响，找出最佳的实验条件。

二、正交设计法的基本原理正交设计法的基本原理是利用正交表的特性，以最小的实验次数获得最全面的实验结果。

具体来说，正交表的每一列都代表一个因素，每一行代表一个实验条件。

正交表的每一列都有多个水平，代表该因素的不同取值。

通过选择适当的正交表，研究人员可以确保每个因素在每个水平下都被测试到，而且每个实验条件都是唯一的。

这样，研究人员就可以通过少量的实验获得全面的实验结果。

三、正交设计法的实施步骤正交设计法的实施步骤如下：1.确定实验因素和水平：根据研究目的和实际情况，确定实验中需要考虑的因素和每个因素的不同水平。

2.选择适当的正交表：根据实验因素和水平的数量，选择适当的正交表。

一般来说，因素数不超过正交表的列数，水平数不超过正交表的行数。

3.制定实验计划：根据选择的正交表，制定实验计划。

每个实验条件都由正交表的一行来代表，每个因素的取值都由正交表的一列来代表。

4.进行实验：按照实验计划进行实验，记录实验结果。

5.分析实验结果：对实验结果进行分析，找出各个因素对实验结果的影响程度，找出最佳的实验条件。

四、正交设计法的优点和局限性正交设计法的优点主要表现在以下几个方面：1.实验次数少：由于正交表的特性，正交设计法可以用较少的实验次数获得全面的实验结果，大大减少了实验成本和时间。

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化作者：焉兆萍宋士良陆克文来源：《国外畜牧学·猪与禽》2019年第01期摘; 要：本文对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了筛选优化。

采用单因素试验和正交试验方法，确定该枯草芽孢杆菌的优化培养基为：豆粕40 g/L、玉米粉20 g/L、葡萄糖15 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、磷酸二氢钾1.5 g/L、硫酸镁0.5 g/L、硫酸铵0.35 g/L、酵母浸粉0.2 g/L、硫酸锰0.2 g/L、硫酸亚; ;铁0.1 g/L、碳酸钙0.1 g/L。

最适发酵条件为：初始pH 7.2，接种量5%，发酵温度35 ℃，摇床转速250 r/min。

关键词：枯草芽孢杆菌;发酵培养基;发酵条件中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2019）01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境;能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。

该菌已被我国农业农村部列入饲料添加剂目录名单，越来越多地被研制成微生物制剂，其制剂作为“绿色”饲料添加剂，在畜牧养殖业、饲料加工业中得到广泛应用，成为现代养殖业的一种常规添加剂，具有广阔的发展前景[1]。

枯草芽; 孢桿菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2];其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。

由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。

本文通过单因素试验与正交试验，对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了研究，确定其最佳发酵培养基和最适发酵条件，以最大限度地提高枯草芽孢杆菌的发酵菌数，降低生产成本，满足工业化发酵生产的要求。

树头发菌丝体最适培养基的正交试验研究

维普资讯
第４卷
第４期
邵阳学院学报（自然科学版Ｊ
Ｖｏ。Ｏ．ｌ４Ｎ４Ｄｅ，０７ｃ。０２
２００７年１２月
ＪｕａｏｈｏａｇＵｉｒｉ（Ｎｔｒｌｃｅｃｄｔｎ）ｏｒｌｆａｙｎｎｅｓｙａｕａＳｉｅＥｉｎＳｖｌｎｉｏ
ａｄｔｅｏｔｍｕｔｒｏｄｔｎｗｅｅｇｕｏｅ１ｇ／Ｌ，ｅｔｎ．ｎｈｐｉｍｕｃｌｅｃｎｉｏｓｒｌｃｓ５ｕｉｐｐｏｅ５０ｇ／Ｌ，ＰＯ２ｇＬｐ５８ＫＨ２Ｏ４．５／＇Ｈ．．
Ｋｅｗｏｄ：Ｐｅｕａｕｒｅｌｒｓｍｙｅｉｍ；ｒｏｏａｘｅｉｎｙｒｓｉｒｌｍｂｉｌＢｅ．ｎａ；ｅｌｕｏｔｇ丝体适宜的培养条件．果表明：头发茵丝体培养的各因素影响程度为培养基的ｐ值＞蛋白胨＞磷酸二结树Ｈ氢钾＞葡萄糖，适培养条件为：最葡萄糖１ｇ／Ｌ，白胨５０ｇ５蛋．／Ｌ，Ｈ２Ｏ４．５ＫＰ２ｇ／Ｌｐ值５８０，Ｈ．．
１２方法。
１．培养基正交试验设计．１２
选取葡萄糖、白胨、酸二氢钾、Ｈ值４因蛋磷ｐ个素，四因素三水平的正交试验Ｉ（）设置２个重以Ｊ３，９‘ 复，确定树头发菌丝体最佳培养条件，因素水平安各
排见表１．
头发菌丝体的培养条件，结果报道如下．
Ｋ２０。，ａ１。２ｇＮ４Ｈ０２ｇｅ１１ＨＰ４５ＮＣ０５，Ｈ）Ｐ４．，Ｃ３（％）０ｇ０（２０５Ｆ

采用L_93~4正交设计方法筛选血耳菌丝体液体培养基

食药兼用真菌[1 2
材料与方法
菌种试验试剂
� F. ) 流苏银耳 ( � F. )做了形态血耳引自华中农大菌种实验中心
� 血耳主要分 � 布于我 � 国华中地 � 区常见于 � 夏秋季 � 阔叶树葡萄糖蛋白胨牛肉膏蔗糖麦芽糖酵母粉枯干或朽 � 木上传统医学记载血耳 � 具有治疗 � 痢疾 � 妇科诸琼脂 ( 珠江牌天津市珠江卫生材料厂 ) M gS O 4 7H 2O � 病以及肝 � 炎等 � 功效主要分布于湖北保康 � 已经成功驯化麦麸 K H 2P O 4 VB 1 以上除注明外均为分析纯
摘要 � 采用正交设计方法以血耳
菌丝体的生物量为测量指标，对血耳菌丝体液体培养基进行了筛
选，结果表明血耳菌丝体液体培养的最适培养基为蔗糖 7. 5g � L - 1�麦芽糖 7. 5g � L - 1�麦麸 7. 5g � L - 1�牛肉膏 3. 5g � L - 1� � M gS O 4 � 7H 2O 0. 5g � L - 1�K H 2 P O 4 1.5g � L - 1�VB l 4 g � L - 1， H 自然�2 8 培养 9 6 h ，其生物量可达 4 . 2 9g � L- 1� 关键词 � 血耳；液体培养基；菌丝体；生物量；正交设计中图分类号� 646.9 文献标识码 � A 文章编号� 1 003 - 83 1 0 �2 0 09 � 01 - 003 6- 0 3
中国食用菌
2009 28 (1 ) 36 38 � � � � � � � 53-1054 /

正交试验培养基配方

D因素：T1=t1+t5+t9；T2=t2+t6+t7；T3=t3+t4+t8
A因素：X1=T1/3；X2=T2/3；X3=T3/3（A列的T值）
B因素：X1=T1/3；X2=T2/3；X3=T3/3（B列的T值）
C因素：X1=T1/3；X2=T2/3；X3=T3/3（C列的T值）
D因素：X1=T1/3；X2=T2/3；X3=T3/3（D列的T值）
A因素：RA=Xmax-Xmin (A列的X值）
B因素：RB=Xmax-Xmin (B列的X值）
C因素：RC=Xmax-Xmin (C列的X值）
D因素：RD=Xmax-Xmin (D列的X值）
菌种制备：斜面培养1周以上，30mL无菌水制成菌悬液使用。
正交表及试验方案
试验号
因素
发酵液酶活力单位
（U/mL）
A
B
C
D
淀粉
（g/瓶）
麸皮
（g/瓶）
无机氮源（0.4g/瓶）
1
0.5
0
(NH4)2SO4
t1
2
0.5
0.5
NH4Cl
t2
3
0.5
1.0
KNO3
t3
4
1.0
0
NH4Cl
t4
5
1.0
0.5
KNO3
1（A）
2（B）
3（C）
4（D）
1
1
1
1
1
2
1
2
2
2
3
1
3
3
3
4
2
1
2
3
5
2
2

正交试验确定最佳配比

1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
K1
K2 评分总和
K3
k1
k2 平均分
k3
R
菠萝汁、胡萝卜汁和番茄汁按照不同比例混合时，所得果蔬汁色泽、香气和滋味差别较大，
评分结果见表 3.
菠萝汁的制备
菠萝—去皮—0.5%盐水浸泡15min— 切块—打浆（菠萝∶
水为2∶1）— 离心分离（3000r/min，5min）— 4 层纱布过滤—菠萝汁
胡萝卜汁同上
番茄汁的制备工艺流程
新鲜番茄→热烫（90~95℃的沸水处理45~60s）-- 去皮_——破碎——打浆——离心分离（2000r/min，5min）—— 4 层纱布过滤番茄汁
复合果蔬汁的制备
复合果蔬汁的制备工艺流程如下：
菠萝汁、胡萝卜汁、番茄汁——混合——调配——脱气——灌装——密封——冷藏——产品
原料（500ml范围内）
生产成本计算
主料：菠萝60%
辅料：胡萝卜10%、番茄10%、水10% 白砂糖5%
添加剂：柠檬酸0.1%、羧甲基纤维素钠0.05%、黄原胶0.05%
胡萝卜的出汁率为32%到35%，番茄的出汁率为80到90%，菠萝的出汁率为80到85%
菠萝占60%要300ml需要用量350g番茄和胡萝卜各需50ml.胡萝卜用量100g番茄用量60g
500g菠萝2元。350g需要1.4元。番茄500g1.8元，100g0.36元。番茄500g1.8元,60g0.196元。
三种原辅料共1.4+0.36+0.196=1.956元

枯草芽孢杆菌培养基配方

枯草芽孢杆菌培养基配方枯草芽孢杆菌培养基的组分是由葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙等5种原料构成,采用L16(45)正交表,将5种原料作为枯草芽孢杆菌培养有影响的因素,通过试验数理统计的直观和理论分析,对其配方进行优化。

试验结果表明,当培养基的配方为无水葡萄糖3.50 g/L、蛋白胨0.83 g/L、酵母膏0.50 g/L、磷酸二氢钾0.35 g/L和碳酸钙0.25 g/L,温度(34±2)℃时,培养16 h即可达到生长峰值。

由于枯草芽孢杆菌光学密度(optical density,OD)与活菌数量的关系:y=0.5182x2+1.4462x+1.9714(r=0.996343),接种的枯草芽孢杆菌由1.9714×108cfu/mL提高到3.3124×108cfu/mL。

优化的枯草芽孢杆菌培养基条件能有效促进枯草芽孢杆菌生长。

培养基：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，或牛肉膏蛋白胨配方(1000ml)加10g的葡萄糖。

ph为7即可，温度30度到37度皆可——条件不是很苛刻，比较容易培养。

枯草芽孢杆菌常用培养基配方：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂枯草芽孢杆菌原生质体的制备1 培养枯草芽孢杆菌取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。

2. 收集细胞各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。

如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。

正交试验培养基配方

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