花药和花粉培养

2）表面消毒
3）接种
4）培养形成花粉植株。
花粉---愈伤组织---苗
花粉---胚状体---苗
wk.baidu.com选幼年树花蕾
第一节 花药和花粉培养技术
水稻花药培养过程：
旗叶鞘用70％酒精擦洗一遍
剥去旗叶鞘，取出稻穗
左手持穗，右手 用镊子取花药， 放无菌培养皿中
无菌水洗3次
10％漂白粉10 min
用接种环接种 到培养基上
花药和花粉培养
第一节 花药和花粉培养技术
花药培养是将花粉发育至一定阶段的花药接种到 人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤 组织进而分化成植株的技术。
第一节 花药和花粉培养技术
花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到 人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤 组织进而分化成植株的过程。
花粉囊 花粉囊壁 花药裂口 成熟花粉粒
三、单倍体植株染色体加倍的方法
1、自然加倍：花粉细胞核有丝分裂或核融合，染色体可 自然加倍，获得纯合二倍体。
2、人工加倍：用秋水仙素处理单倍体植物，可使染色体 加倍（溶液浸苗、处理愈伤组织和用含0.4%秋水仙素 的羊毛脂涂抹单倍体植株的顶芽、腋芽，可得到能结实 的二倍体植株）
3、将单倍体植株诱导的愈伤组织反复继代培养，再分化 可得到二倍体植株。
植物组织培养学
花药和花粉培养
花药和花粉培养
第5章 花药和花粉培养
本章主要内容： 花粉和花药培养技术 花粉和花药培养应用
花药和花粉培养
本章教学目的与要求
(1)掌握花药培养和花粉培养的区别； (2)了解花药最佳接种时期； (3)掌握花药培养的大致过程； (4)掌握花粉发育的四种途径； (5)掌握花粉培养的大致过程。
增殖分化培养基 MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖 30g+琼脂7g/L
生根培养基
第一节 花药和花粉培养技术
草莓花药愈伤组织,花药植株
第一节 花药和花粉培养技术
2、花粉培养
花粉培养成苗途径与花药培养比较: 相同点：
胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点：
第一节 花药和花粉培养技术
（二）激素种类和浓度
细胞分裂素可促进胚状体形成； 生长素可诱导愈伤组织形成。
细胞分裂素与生长素比值高时可诱 导愈伤组织分化苗
第一节 花药和花粉培养技术
（三）蔗糖浓度
较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低 浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。
第一节 花药和花粉培养技术
培养5天，花药变褐，20天后花药 裂开，长出淡黄色的花粉愈伤组织， 先长芽，后长根，形成幼苗。
第一节 花药和花粉培养技术
花药培养脱毒技术
1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒； 花药采取时期
单核期：花蕾4-6mm，花药1mm 花药诱导愈伤组织培养基
MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+ 琼脂7g/L
作业：
1、花药离体培养与单倍体育种是一回事吗？ 2、花药离体培养得到的植株一定是单倍体吗？ 3、花药离体培养与花粉离体培养一样吗？
第5章 花药和花粉培养
花药和花粉培养
第二节 花药和花粉培养的应用 ----单倍体植株育种
1、克服后代分离，缩短育种周期； 2、有利于筛选隐性突变体，选择效率高; 3、有利于隐性基因控制性状的选择 4、快速获得自交系的超雄株
第二节 花药和花粉培养的应用
大大缩短育种周期
花药和花粉培养
本章小结：
(1)花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养。 (2)花药培养一般选择花粉的单核期进行接种。 (3)花药培养包括：选择材料-消毒-接种培养-愈合组织 生成-分化出单倍体植株。 (4)花粉的发育途径包括：营养细胞发育、生殖细胞发 育、营养和生殖细胞同时发育及花粉均等分裂发育。 (5)花粉培养包括花粉的分离-预处理-培养过程。
油菜成熟花药的结构
第一节 花药和花粉培养技术
一、花药和花粉的培养方法：
（一）花粉发育时期：
1、适宜时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核靠边期)
营养细胞
生殖细胞
精子
雄配子体的发育
第一节 花药和花粉培养技术
❖花粉粒形态：
花粉粒即雄配子体。为2细胞花粉或3细胞花粉
2--细胞花粉
3--细胞花粉
第一节 花药和花粉培养技术
2、花粉发育时期的检测：
➢ 外部形态观察：在水稻中，一般叶枕距为5-
15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片 长度的1/2时，可能为单核靠边期的花粉。
➢ 压片染色法：是检测花粉发育时期的简便有
效方法，常用染色剂为醋酸洋红。
第一节 花药和花粉培养技术
（二）培养过程
1、花药培养过程：
1）预处理:低温冷藏是最常用的方法
花粉培养： 需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养
第一节 花药和花粉培养技术
花粉培养过程
消毒 取花蕾（镜检）
培养 愈伤组织发生
取花药
预培养数天
接种
分离花粉
第一节 花药和花粉培养技术
二、培养基
基本培养 基 激素种类 和浓度
蔗糖浓度
第一节 花药和花粉培养技术
（一）基本培养基：
MS和H培养基：适合双子叶植物花药培养； B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养； N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养。