动物克隆技术

• 细胞融合法。用仙台病毒或PEG介导融合，这种方法效果 很不稳定而
• 激活：
• 卵母细胞的激活涉及的因素很多，无论是受精引起的 卵母细胞激活还是人工的激活，都会引起卵母细胞发生一 系列的反应，这些反应是胚胎发育所必需的。其激活原理 是通过电刺激、钙离子载体等方法，使卵母细胞从MII期 中解放出来，并转到“受精”的状态。
• 胚胎移植：
• 重组克隆胚胎移植的受体母畜要选择皮毛颜色与供体 品种不同、繁殖性能强、体格稍大的当地品种，进行同期 发情处理，按常规方法移植代孕母畜（寄母）的子宫中， 待其发Baidu Nhomakorabea到产仔
• 1.胚 胎 克 隆： 使用的核供体细胞如果来自多细胞阶段 的胚胎，叫 做胚胎克隆。 • 2.体细胞克隆： 使用的核供体细胞来自动物的体细胞，叫做体细胞 克隆。
• 核供体细胞的准备：
• 在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的 二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组； • 其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下， 产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样， 能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程。 • 供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外， 核供体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。
精子进入带来的Ca2+浓度的上升和随后卵母细胞内 Ca2+的周期性波动。二是由与Ca2+浓度上升介导的信号传 递，导致MPF的降低。
•
• 重组胚的体内或体外培养
• 经融合和激活的重组胚移入中间受体作体内或体外培 养，观察重组胚的发育率。 • 羊、牛、猪的核移植胚常采用体内培养方法获得桑椹 胚和囊胚，即羊和牛的重组胚用琼脂包埋后移入休情期的 母羊结扎的输卵管中体内培养4-7d，发育至桑椹胚和囊胚。 • 猪的核移植重组胚移入同期化受体母猪输卵管内作体 内培养7d，发育为囊胚。 • 大鼠、小鼠和兔的核移植胚多作体外培养，发育至桑 椹胚或囊胚。
根据核卵供体的来源不同可分为胚胎细胞克隆动
物和体细胞克隆动物两种。
1996年 第一只成年体细胞克隆羊“多利” 诞生 1997年 一头用胎盘克隆而成的荷兰牛亮相。 1998年 两头由母牛细胞克隆而成的小牛在东京出生。 一个国际研究小组宣布克隆出了三代实验鼠 2000年 曾参与克隆“多利” 羊的英国公司培育了第一 批克隆猪 2001年 一头稀有品种的克隆亚洲牛诞生，两天后死亡。 2002年 法国研究人员克隆出兔子。 2003年 美国科学家推出了一匹克隆骡。 爱荷华州的研究人员称他们克隆出了一头濒临灭绝的爪哇 野牛。 2004年 美国加利福尼亚的一家公司培育出了第一只克隆猫。 这只猫后来成为第一只被卖出的克隆宠物。 2005年 韩国科学家宣布他们培育出了首条克隆狗叫“斯纳皮”
• 2.核受体动物的选择与细胞核的移出。 • 3.供体核的移入及原核的取出。 • 4.胚泡的体外试管培养。 • 5.代母的选择与胚泡移入子宫。 • 6.克隆动物的体内发育与出生。
•
去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。这是因 为在卵母细胞的细胞质含有某种特定的因子，可以使移植 核中所含有的基因表达程序发生重新排列，使已经分化了 的细胞重新回到发育过程的原点，同受精卵一样开始个体 发育过程。 • 卵母细胞的来源有两种方式：一是用激素对雌体进 行超排处理，从输卵管冲出体内成熟的MⅡ卵母细胞。二是 从屠宰场收集卵巢，吸出滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体 (COCs)，在体外培养成熟后作为受体。 • MⅡ期的卵母细胞已经成熟，维持的时间长，并且 有较高MPF(促成熟因子maturation promoting factor)活 性有利于供体细胞核的重编程。
动物克隆技术
1.概述（动物克隆的发展史） 2.动物克隆的原理，方法，步骤 3.动物克隆的应用 4.动物克隆的前沿发展
•
“克隆”( clone) ,是指一个细胞或个体以无性繁
殖方式产生遗传物质完全相同的一群细胞或一群个体。
• 术。 •
在动物繁殖学中，它是指不通过精子和卵子的受 精过程而产生遗传物质完全相同新个体的一门胚胎生物技
胚 胎 细 胞 核 移 植
体 细 胞 核 移 植
3.动物克隆的应用
动物克隆技术的应用
1. 克隆技术与转基因技术结合。体细胞核移植技术和转基因 技术的结合将对解决人类器官移植来源、医药生产和疾病 治疗、生物学基础理论研究等具有非常重要的意义。用基 因打靶技术筛选阳性细胞作供核体进行核移植，得到转基 因动物。制备转基因克隆动物， 进行生物药物生产。 2. 克隆技术与干细胞技术结合在体细胞克隆动物成功率低的 情况下，利用ES细胞进行克隆可以增加成功率。 3. 利用克隆技术，与干细胞技术结合，开展治疗性克隆可以 用患者本人细胞培育出新组织，用来治疗糖尿病、帕金森 氏症、神经损伤等多种疾病。 4. 动物克隆技术还有助于加速动物育种的进程。利用优良动 物品种的体细胞作核供体克隆动物，可以避免自然条件下 选种所受到的动物生育周期和生育效率的限制，从而大大 缩短育种年限，提高育种效率。
• 克隆步骤 • 体细胞克隆的主要技术程序与胚胎细胞基本克隆相同， 主要差别在供体细胞的选择。
• 随着克隆技术的发展和人们对核质关系认识的深 入，自然状态的 G0 期细胞（如卵丘细胞）和 G1 期细胞（胎
儿成纤维细胞），可直接移入去核卵母细胞中生产克隆胚 胎。 • S期的细胞核进入受体卵母细胞后会发生碎片化，而M期 和G2期容易造成多倍体。G0/G 1期细胞的获得常用的方法 是靠血清饥饿培养诱导，但长时间的血清饥饿会导致细胞 凋亡。
首条克隆狗- “斯纳皮”
• 性”。
克隆技术得以实现的理论基础在于“细胞的全能
•
细胞的全能性是指细胞包含个体的全套遗传信息， 在特定环境因素的调节下，可回到受精卵一样的状态，从 头开始发育成一个完整的生物个体，只有具备全能性的动 物组织细胞，才可用于克隆动物。
• 1.核供体动物的选择与细胞核的获得。
• 细胞核移植：
• 常用的核移植方法显微注射有两种，即胞质内注射和 透明带下注射。
• 胞质内注射：用一个外径5～8μm 的注核针吸取供体核后直 接注射进卵母细胞胞质内。 • 透明带下注射：把供体细胞核注射在透明带与卵母细胞之 间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融合。 • 细胞融合法。用仙台病毒或PEG介导融合，这种方法效果 很不稳定而
• 1.卵母细胞的去核：细管吸除法，紫外线照射法。 • 2.供体核的准备和移植：将供体胚胎分成单个卵裂球，每 个卵裂球即为供体核。 • 3.卵裂球与卵子的融合：将卵裂球和去核卵子融为一体， 形成单细胞结构。 • 4.卵子的激活：在正常受精过程中，精子穿过透明带及卵 黄膜时，引起卵子内钙离子浓度升高，卵子细胞周期恢复， 启动胚胎发育，这一现象称为激活。胚胎克隆时，通常用 一定强度的电脉冲作用卵母细胞。 • 5.克隆胚胎的培养