分光光度计的原理与使用
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法一、引言分光光度计是一种用于测定物质在不同波长下吸收或透射光的仪器。
它广泛应用于化学、生物、环境科学等领域的实验室研究和工业生产过程中。
本文将介绍分光光度计的使用原理和操作方法。
二、使用原理1.分光光度计基本构成分光光度计由光源、样品室、检测器和信号处理系统等组成。
光源通常使用可见光波段的白炽灯、氘灯或钨灯等。
样品室包含了样品槽和光路，用于将光从光源引导到样品上，并将样品吸收或透射的光引导到检测器上。
检测器一般是光电二极管或光电倍增管，用于将光信号转换为电信号。
信号处理系统对电信号进行放大、滤波和数值计算等处理，最终给出光吸收或透射的数值结果。
2.工作原理分光光度计的工作原理基于比耦光度计定律，即光强与样品中物质浓度成正比。
当光通过样品时，样品中的物质会吸收特定波长的光，导致光强减弱。
通过测量光源发出的光经样品后的光强，可以推导出样品中物质的浓度。
三、操作方法1.准备工作（1）将分光光度计放置在平稳的台面上，并接通电源。
（2）设置所需的工作波长和光强范围，确保仪器处于所需工作状态。
（3）清洁样品室和样品槽，确保无灰尘或杂质影响测量结果。
2.插入样品（1）打开样品室，将待测样品精确地放置在样品槽中，并确保样品紧密地与光路接触。
（2）关闭样品室，确保样品室的密封性。
3.零点校正（1）选择空白试样，即不含待测物质的样品，放置在样品槽中。
（2）按下零点校正按钮，使分光光度计记录下此时的光强值作为参考值。
4.测量样品（1）选择待测样品，放置在样品槽中。
（2）按下测量按钮，分光光度计会记录下此时样品吸收或透射的光强值。
（3）重复进行多次测量，以提高结果的准确性。
5.数据处理利用分光光度计提供的信号处理系统，对测量到的光强值进行相应的操作，如放大、滤波和数值计算等。
四、附件本文档无附加内容。
五、法律名词及注释（1）分光光度计：一种用于测定物质在不同波长下吸收或透射光的仪器。
分光光度计的使用原理
分光光度计的使用原理分光光度计是一种常用的实验仪器，用于测量溶液中各种成分的浓度、反应动力学和吸收光谱等。
分光光度计的使用原理主要是基于光的吸收和波长选择性。
分光光度计的主要部件包括光源、样品室、光栅、检测器和数据处理系统。
其中光源通常采用白炽灯、钨丝灯或氘灯等发出宽波长连续光源。
样品室是用来放置待测样品的空间，通常有双臂样品室和流通样品室两种形式。
光栅是分光光度计的核心组成部分，它是一个具有一定波长分辨能力的平面凹面反射镜。
检测器可以分为光电二极管、光电倍增管和光电二极管阵列等不同类型。
数据处理系统则是用来记录和处理测量结果的电子设备。
分光光度计的使用原理主要有两种，即比色原理和分光光度法。
首先，比色原理是基于溶液中吸收物质对特定波长的光的吸收程度与其浓度成正比的原理。
根据比色原理，当光通过样品室中的溶液时，吸收物质会吸收特定波长的光。
溶液中吸收的光的强度与吸收物质的浓度成正比，即样品吸收光强度的变化可以用来计算样品中吸收物质的浓度。
分光光度计常用的波长有紫外、可见和近红外等。
其次，分光光度法是通过光栅将光分散成不同波长的光束，并使用检测器测量各个波长的光强度。
分光光度计的光栅是一个具有一定波长分辨能力的平面凹面反射镜，它可以将入射的连续光分散成不同波长的光束，进而进入检测器。
检测器可以根据不同波长的光强度变化来计算样品中吸收物质的浓度。
在测量过程中，首先需要通过调节光源和光栅来选择适当的波长。
然后，待测样品被放入样品室中，光束透过样品后到达检测器，检测器记录各个波长下的光强度。
数据处理系统会将记录的光强度转化为吸光度，并根据吸光度与浓度之间的关系来计算样品中的目标物质浓度。
需要注意的是，分光光度计的测量结果还会受到一些其他因素的影响，如光束路径长度、背景光干扰、样品的色散和溶液的浓度范围等。
为了准确测量样品中的目标物质浓度，需要进行校正和控制这些因素。
综上所述，分光光度计的使用原理主要基于光的吸收和波长选择性。
分光光度计的使用
分光光度计的使用一、分光光度计的基本原理分光光度计是利用物质对特定波长的光吸收的原理来测量其浓度的仪器。
其基本原理是，通过可见光或紫外光源将特定波长的光线通过样品，然后检测经过样品后的光强度变化。
当物质吸收一定波长的光线时，吸收光线的强度与物质的浓度呈线性关系。
通过测量吸收光强的变化，可以推算出物质的浓度。
二、分光光度计的使用步骤1.打开仪器：首先打开分光光度计的电源开关，并等待一段时间，让仪器进行预热。
2.调节波长：选择合适的波长以适应被测物质的光吸收范围。
调节波长的方式因仪器不同而有所不同，通常通过旋钮、数字显示屏或软件界面等方式完成。
3.校准空白样本：将待测样品取出，放入容器中，并注入合适的溶剂制成空白样本。
将空白样本置于仪器上，按下校准按钮，以设定空白样本的吸光度为零基准。
4.加入待测样品：将待测样品加入容器中，注意保证样品的溶解度或稀释浓度适宜。
然后将样品置于仪器上，以便后续测量。
5.测量吸光度：按下测量按钮，仪器将自动扫描并记录样品的吸光度变化。
测量时间的长短与样品的吸光度变化速率有关。
6.计算浓度：利用仪器自带的软件或计算公式，根据测得的吸光度数据计算出样品的浓度。
三、分光光度计的注意事项1.玻璃容器：分光光度计通常使用玻璃容器来容纳样品，由于玻璃对紫外光的吸收较大，因此在紫外区域测量时需要使用石英或镀膜的玻璃容器。
2.样品制备：为保证测量结果的准确性，样品的制备应严格按照实验要求进行，避免样品中存在杂质或干扰物质。
3.清洗容器：在进行样品测量之前，应确保容器干净，无灰尘或杂质。
同时，使用纯净水或适当的溶剂来清洗容器，避免杂质对测量结果的影响。
4.光程：光程是指光线在样品容器中的传播距离，光程的选择应根据待测物质的吸光度范围进行，并尽量保持一致。
光程过长会降低灵敏度，而光程过短则易产生误差。
5.波长选择：根据实验需要选择合适的波长。
不同物质的最大吸收波长不同，选择错误的波长可能导致测量结果的不准确。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计是一种常用的光学仪器，用于测量溶液或气体中物质对特定波长的光的吸收或透射程度。
它的工作原理基于比尔-朗伯定律，即物质对光的吸收与物质的浓度成正比。
以下是关于分光光度计的使用原理及操作方法的详细介绍。
一、工作原理分光光度计的工作原理基于比尔-朗伯定律，它描述了物质溶液或气体对光的吸收或透射程度与物质的浓度之间的关系。
根据该定律，若吸光度为A，物质的浓度为c，吸光度与浓度之间存在一个线性关系，即A = εcl，其中ε为摩尔吸光系数，l为光程长度。
在分光光度计中，光源会通过一束光线产生可见光或紫外线，该光线通过一个狭缝，称为波长选择装置，以选择特定波长的光进行测量。
然后进入样品室，通过样品室中的溶液或气体，通过光电三极管（光敏元件）接收到另一端。
分光光度计会比较入射光和通过样品后的光的强度差异，通过转化为电信号进行测量和计算。
根据比尔-朗伯定律，通过对吸光度的测量，可以推算出溶液中物质的浓度。
二、分光光度计的操作方法1.打开分光光度计电源，待仪器启动完成，确保仪器工作正常。
2.校准仪器：选择所需波长，并将光路调整为100%T（透过率）或0%T（吸光度）。
根据操作手册的指示进行校准。
3.准备样品：使用准确的浓度称量所需样品，并使用溶剂稀释至合适的浓度范围。
4.装载样品：打开样品室并放置样品池，将样品注入样品池，并确保池中没有气泡。
5.设置参数：根据实验需要，在分光光度计上设置参数，如波长、采集速度等。
6.测量样品：选择所需波长，并将样品室对准该波长设置，调节入射光的强度。
7.记录数据：测量样品的吸光度，并将数据记录下来。
可以选择多次测量，以获得更准确的结果。
8.分析结果：根据吸光度值和已知浓度值之间的关系，计算出样品的浓度，或者在已知浓度下，确定样品的吸光度。
9.清洗仪器：在测量结束后，将样品室和样品池清洗干净，以防止可能的交叉污染。
关闭仪器电源。
10.维护仪器：定期进行仪器的维护和保养，包括清洁仪器的各个部件，并按照操作手册的要求更换或校准配件。
分光光度计的原理及应用
分光光度计的原理及应用1. 分光光度计的原理分光光度计是一种用于测量物质溶液中某种物质浓度的仪器。
其原理基于光的吸收和透射特性。
•光的吸收特性：物质在特定波长的光照射下，会吸收光束中的能量，导致光的强度减弱。
•光的透射特性：物质在特定波长的光照射下，会让光束透过并传播，导致光的强度没有明显的改变。
基于光的吸收和透射特性，分光光度计通过测量待检测物质的溶液对光的吸收程度来确定其浓度。
具体的原理如下：1.光源产生具有特定波长的光束。
2.光束通过一个称为样品池的透明容器中的溶液。
3.通过检测器测量光束透过溶液后的光强度。
4.根据光的吸收定律（比尔-朗伯定律），测量光的强度与物质浓度之间的关系。
分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律，该定律表示光强度与物质浓度呈指数关系。
通过测量光的强度，可以计算出溶液中特定物质的浓度。
2. 分光光度计的应用分光光度计在化学、生物分析、环境监测等领域被广泛应用。
以下列举了一些分光光度计的主要应用场景：2.1 化学分析•分子吸收光谱分析：分光光度计可用于测量化学反应中产生的吸收或产物的特征峰值，以确定物质的浓度。
•金属离子分析：通过测量金属离子在特定波长下的吸收特性，可用于测量金属溶液中金属离子的浓度。
2.2 生物学•蛋白质和核酸分析：分光光度计可用于测量蛋白质和核酸的浓度，并用于分析蛋白质和核酸的纯度。
•酶动力学研究：通过测量酶在特定底物浓度下的反应速率，可以研究酶的催化机制和动力学参数。
2.3 环境监测•水质监测：分光光度计可用于测量水中各种污染物质的浓度，如氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐等。
•大气监测：利用分光光度计测量大气中特定气体的浓度，如二氧化碳、一氧化碳等。
2.4 制药工业•药物浓度测量：分光光度计可用于药物中活性成分的测量，用于制药工艺控制和药物质量监控。
2.5 食品安全•残留农药检测：利用分光光度计测量食品中农药残留物的浓度，用于评估食品安全性。
总结：分光光度计作为一种常用的分析仪器，其原理基于光的吸收和透射特性。
分光光度计的原理及其应用
分光光度计的原理及其应用分光光度计是一种用于测量光的强度或吸收程度的仪器。
它基于光的波长选择性吸收的特性，通过测量样品吸收或透射光的强度变化来确定样品中物质的浓度。
分光光度计的原理主要包括：光源、单色仪、样品室、检测器和信号处理系统。
首先，分光光度计通过光源产生一束连续的白光。
这种白光包含了各种不同波长的光。
接下来，单色仪将白光中的不同波长的光分离出来。
单色仪通常由光栅或光柱组成，通过选择合适的光栅或光柱可以选择特定波长的光通过。
然后，选定的波长的单色光会通过样品室，与待测样品相互作用。
样品中的物质会吸收或透射掉特定波长的光，这会导致通过样品室的光的强度发生变化。
接着，检测器接收通过样品室的光，并将其转换为电信号。
检测器可以是光电二极管、光电倍增管或光电探测器等。
最后，信号处理系统对检测器输出的电信号进行放大和滤波，并将结果显示在检测器上。
通过比较样品吸收或透射光的强度与参考物质（通常是纯溶剂）的光强度，可以计算出样品中物质的浓度。
在生物化学分析中，分光光度计常用于测量生物分子的浓度，如蛋白质、核酸、酶等。
通过测定样品对特定波长的光的吸收程度，可以得到生物分子的定量信息，进而进行物质的定性和定量分析。
在环境监测中，分光光度计可以用来测量水体、大气等环境中的污染物浓度。
例如，通过测量水中特定色素或金属的吸光度，可以评估水污染的程度，提供重要的环境保护数据和决策依据。
在食品安全领域，分光光度计可以用于检测食品中的有害物质，如重金属、农药残留等。
通过测量食品样品中特定物质吸光度的变化，可以判断食品是否符合安全标准，确保食品质量和消费者的健康。
在药物研发中，分光光度计常用于评估药物溶解度、稳定性和药物与其他物质之间的相互作用。
通过测量药物在不同条件下的吸光度，可以提供药物研发和质量控制的指导。
在质量控制中，分光光度计可以用于监测产品质量的稳定性和一致性。
通过测量产品中特定成分的吸光度，可以确定产品是否符合预定要求，并及时采取措施进行质量控制，确保产品品质。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法1、引言1.1 本文档旨在介绍分光光度计的使用原理及操作方法，以便读者能够正确并有效地操作分光光度计。
2、分光光度计的原理2.1 光的特性2.1.1 光的波粒二象性2.1.2 光的频率和波长2.1.3 光的传播速度2.2 光的吸收和透射2.2.1 原子、分子和离子的能级2.2.2 原子、分子和离子的吸收和透射2.3 分光光度计的工作原理2.3.1 光源和单色器2.3.2 样品室和探测器2.3.3 数据处理和显示3、分光光度计的操作方法3.1 仪器准备3.1.1 确保光源和单色器正常工作 3.1.2 清洁样品室和探测器3.2 样品的处理3.2.1 准备待测样品3.2.2 设置参比样品3.3 测量操作3.3.1 设置光强度和波长范围3.3.2 执行空白测量3.3.3 执行样品测量3.4 数据处理3.4.1 计算吸光度3.4.2 绘制吸光度-波长曲线3.4.3 分析实验结果4、附件本文档不包含附件内容。
5、法律名词及注释5.1 光的波粒二象性：光既可以像波一样传播也可以像粒子一样进行相互作用5.2 光的频率和波长：光的频率和波长是决定光的颜色和能量的两个重要参数5.3 光的传播速度：光在真空中的传播速度为光速，约为每秒30万公里5.4 光的吸收和透射：光在物质中的传播过程中，有一部分能量被物质吸收，另一部分能量透过物质5.5 原子、分子和离子的能级：原子、分子和离子在能级上存在能量差距5.6 原子、分子和离子的吸收和透射：原子、分子和离子在特定波长的光作用下，会发生吸收或透射5.7 光源和单色器：分光光度计使用特定光源和单色器来产生特定波长的光5.8样品室和探测器：样品室用于容纳待测样品和参比样品，探测器用于测量吸收光强度5.9数据处理和显示：分光光度计将测量到的数据进行数字化处理并显示出来。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法第一章引言在科学研究、工程技术和质量控制等领域，分光光度计是一种常用的实验仪器。
本文将介绍分光光度计的使用原理及操作方法，旨在帮助用户更好地掌握该仪器的使用。
第二章使用原理1.分光光度计的基本原理分光光度计是利用物质对电磁辐射的吸收、衍射、散射、透过等现象进行测量的仪器。
其基本原理是利用光谱仪将可见光按波长进行分散，并通过吸收池测量样品对具有特定波长的光的吸收程度。
2.分光光度计的构成分光光度计由光源、光栅、样品池、检测器等组成。
光源产生可见光，并通过光栅将可见光分散成不同波长的光束。
样品池中的样品吸收特定波长的光，并由检测器测量吸光度。
第三章操作方法1.准备工作a.将分光光度计放置在水平台面上，避免故障发生。
b.打开仪器电源，并进行预热操作。
c.选择合适的波长和检测模式，根据实际需求进行设定。
2.校准仪器a.使用标准样品进行校准，确保仪器的准确性。
b.根据仪器型号和操作手册进行校准操作。
3.测量样品a.取适量样品放入样品池中。
b.关闭样品池盖，并进行波长调整，选择适合的波长。
c.记录初始吸光度值，并记录每次测量的时间。
4.数据处理a.根据实验要求，对测量的数据进行处理，如计算吸光度、研究光谱等。
b.可使用计算机软件进行数据处理和分析。
第四章附件1.操作手册●附录 A本文档所述内容的详细操作步骤和示范，请参阅附件 A。
2.校准记录表●附录 B根据本文档的校准要求，填写校准记录表格。
请参阅附件 B。
第三章法律名词及注释1.光谱仪：________指一种用于分析物质材料光谱特性的仪器。
2.吸光度：________指物质对光的吸收能力的数值表示，用于描述样品浓度和光透过能力之间的关系。
3.校准：________指通过对仪器进行细致调整和准确校验，使其满足精确测量要求的过程。
4.数据处理：________指对实验或测量所获得的原始数据进行分析、处理和解释的过程。
分光光度计法的原理及应用
分光光度计法的原理及应用原理介绍分光光度计是一种常用的化学分析仪器，用于测量溶液中溶质的浓度。
它基于可见光或紫外光通过样品溶液时的吸收特性进行测量。
分光光度计由光源、样品室、单色器、检测器和计算机等组成。
光源产生一个连续的宽谱光束，这个光束通过一个单色器，单色器的作用是将光束分解成特定波长的单色光。
然后，单色光通过样品室，进入检测器进行测量。
检测器接收到的光通过电路转换为电信号，然后传递给计算机进行处理和分析。
测量中，分光光度计会同时测量样品溶液和纯溶剂的透射光强，通过比较两者的差异，可以得到样品溶液中溶质的浓度。
这种测量方法被称为吸收光度法。
应用领域分光光度计法广泛应用于化学、生物、环境和药物等领域，以下是一些常见的应用场景：1. 生物化学在生物化学领域，分光光度计被用来测定生物分子的浓度。
例如，可以通过分光光度计测量蛋白质或核酸的浓度，这有助于研究生物分子的结构和功能。
2. 化学分析在化学分析中，分光光度计常被用来测量化合物的浓度。
通过测量样品溶液对特定波长的光的吸收，可以得到化合物的浓度信息。
这种方法被广泛应用于水质分析、环境监测和食品安全等领域。
3. 药物研发分光光度计还被广泛应用于药物研发过程中。
药物的吸收特性可以通过分光光度计进行测量，这有助于研究药物在体内的代谢和吸收情况，并为药物的合成和临床应用提供依据。
4. 环境监测在环境监测中，分光光度计可以用来检测水中各种化学物质的浓度。
例如，可以通过测量水中的氨氮、硝酸盐和磷酸盐等物质的浓度，来评估水的质量和污染程度。
5. 食品安全分光光度计也常被用于食品安全检测中。
例如，可以使用分光光度计来测量食品中的重金属、农药残留和添加剂等物质的浓度，以确保食品的安全性。
优势和局限性分光光度计具有以下优势：•精确度高：分光光度计可以提供高度准确的浓度测量结果。
•广泛适用性：不同波长的光可以被用于不同化学物质的测量，因此分光光度计适用于各种样品类型。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计的主要组成部分包括光源、样品室、光栅和光电检测器。
光源发出一束光线，经过光栅的光线会发生衍射，然后进入样品室，样品吸收一部分光线，剩余的经过光电检测器后被转化为电信号。
分光光度计会测量入射光和出射光之间的差异，据此计算溶液的吸光度。
操作分光光度计需要进行以下几个步骤：1.准备工作：打开分光光度计并等待预热，校准仪器，确保其准确度。
通常可以使用空白试剂即不含任何物质的溶液来进行校准。
2. 设置波长：根据实验需求设置所需的波长。
旋转光栅调节按钮或者键盘上的波长调节按钮，使仪器显示所需波长。
常见的波长范围是200-800 nm。
3.放置空白试剂：选择一种透明溶液作为空白试剂，将其转移到样品室中，确保样品室内无气泡和杂质。
关闭样品室。
4.零点调零：选择一个与空白试剂相近的波长，通过调节零点调零旋钮或键盘上的零点调零按钮，使光电检测器的读数为零。
5.测量样品：将需要测量的溶液转移到样品室中，确保样品室内无气泡和杂质。
关闭样品室。
根据实验需求选择适当的波长，并将分光光度计调至该波长。
6.讲样品的吸光度读数：记录分光光度计显示的吸光度读数。
如果需要对样品进行多次测量，可以重复步骤4和57.数据处理：根据实验需求，可以将吸光度读数与标准曲线进行比对，推断样品的浓度或其他信息。
在使用分光光度计时，还需要注意以下几个问题：1.波长选择：根据需要测量的物质的最大吸收波长，选择合适的波长。
在测量吸光度时，应选择吸收峰附近的波长，以提高测量的准确性。
2.样品制备：样品应尽量避免溶解剂或其他杂质的影响，应选择透明度高的溶液。
有时需要对样品进行稀释，使其浓度能够落在标准曲线范围之内。
3.校准和零点调零：在进行实验之前，应该进行仪器的校准和零点调零，以确保测量的准确性。
校准使用空白试剂进行，零点调零使用相近波长进行。
4.注意事项：在使用分光光度计时，样品室的门应完全关闭，以保证光路的稳定性。
分光光度计的原理与应用
分光光度计的原理与应用分光光度计的原理是基于比尔－伯朗定律，该定律描述了物质吸光度和其浓度之间的关系。
根据该定律，当一束不吸收或吸收很少的光通过一个透明介质时，光的强度将随着物质的存在而减弱。
光度计通过光源发出一束光，该光通过一个样品室，样品室中含有待测物质。
在样品室中，光与待测物质相互作用，部分光被吸收，剩余的光被传到光检测器。
光检测器将测量到的光强度与未经样品室的光强度做比较，计算样品的吸光度。
进一步，通过与一系列已知浓度的标准样品进行比较，可以得到待测物质的浓度。
1.生物化学分析：分光光度计可以用于测量生物样品中细胞、组织或蛋白质的浓度。
例如，在DNA研究中，分光光度计可以用于测量DNA溶液的浓度，从而确定DNA的含量和纯度。
2.药学应用：在药物研发和制造过程中，分光光度计可用于测量药物成分的浓度。
这对于确保药物配方的准确性和药物质量的一致性非常重要。
3.环境监测：分光光度计可以用于测量水、土壤和空气中的污染物浓度。
例如，对于水质监测，分光光度计可以用于测量水中有害物质如重金属、有机物和氨氮的含量，帮助监测水质的安全性。
4.食品分析：分光光度计可以用于食品中添加剂或有害物质的检测。
例如，可以使用分光光度计测量食品样品中其中一种添加剂的浓度，以确保食品的质量和安全。
5.质量控制：分光光度计广泛应用于生产环节中的质量控制。
通过测量和监控产品的组分浓度，可以确保产品的一致性和符合质量标准。
总结来说，分光光度计是一种常用的分析工具，可用于测量物质的浓度或含量。
其原理基于物质吸收特定波长的光，并通过测量被吸收或透射的光量来确定物质浓度的关系。
它在生物化学、药学、环境监测和食品分析等领域中具有广泛的应用。
分光光度计的原理及应用及例子
分光光度计的原理及应用1. 分光光度计的介绍分光光度计是一种用于测量样品溶液中光的吸收和透过性质的仪器。
它利用样品对特定波长的光的吸收现象来确定溶液中的物质含量。
分光光度计通常由光源、样品室、透射光检测器和信号处理器组成。
2. 分光光度计的原理分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律，即溶液中被测物质的浓度与吸光度成正比。
光通过样品室时，样品溶液中的物质会吸收特定波长的光。
吸光度的大小与物质的浓度成正比，通过测量吸光度可以确定样品溶液中物质的浓度。
3. 分光光度计的应用分光光度计在许多领域中得到广泛应用，以下是一些例子：•生物化学：在生物化学实验中，分光光度计常用于测量具有特定颜色的物质的浓度，如蛋白质、核酸等。
•环境监测：分光光度计可用于监测环境中的水质、空气中的污染物等。
通过测量特定波长的光的吸光度，可以确定样品中某些特定有害物质的浓度。
•药物研发：分光光度计在药物研发过程中也非常重要。
它可以用于测量某种药物在不同波长下的吸光度，从而确定药物的纯度和浓度。
•食品检测：分光光度计在食品行业中用于检测食品中的添加剂、防腐剂、色素等物质的含量，确保产品的质量和安全。
4. 实际应用例子以下是一些实际应用例子，展示了分光光度计在不同领域的使用：•在生命科学研究中，分光光度计可用于测量蛋白质和核酸的浓度。
科研人员可以通过测量样品在特定波长下的吸光度来确定样品中特定物质的浓度。
•在环境监测中，分光光度计可以用于监测水体中的有害物质浓度。
例如，通过测量水样在紫外光下的吸光度，可以确定水中的硝酸盐含量，从而评估水质状况。
•在药物研发过程中，分光光度计可用于测量药物的吸收特性。
例如，在药物溶液中测量特定波长下的吸光度，可以确定药物的浓度和稳定性。
•在食品检测中，分光光度计可用于检测食品中的添加剂和污染物。
通过测量食品样品在特定波长下的吸光度，可以确定食品中的某些物质的含量，并确保食品的安全性和质量。
5. 总结分光光度计是一种广泛应用于实验室和工业领域的仪器，用于测量溶液中光的吸收和透过性质。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法1. 使用原理分光光度计是一种用于测量溶液中吸光度的仪器。
其工作原理基于比尔－朗伯定律，即溶液中的吸光度与溶液中的物质浓度成正比关系。
分光光度计通过以下步骤来测量溶液的吸光度：1. 光源：分光光度计使用可见光、紫外光或红外光作为光源。
光源发出的光通过狭缝变窄并通过一系列的光学元件（如棱镜、电离室等）来保证光的稳定性和光谱的选择性。
2. 光的分离和选择：进入分光光度计的光线经过棱镜或光栅的分光作用，使不同波长的光分别出射，形成一个连续的光谱。
在测量特定波长的光时，分光光度计会旋转光栅或调节棱镜角度，使得待测波长的光通过。
3. 透射和吸收：分光光度计将选定波长的光通过样品溶液，样品溶液吸收部分光能，使得透射光的强度减弱。
4. 探测和记录：透射光通过光电探测器，其产生的电流经过放大并转换成可读数值。
这个数值与溶液的吸光度成正比，反映了溶液中物质的浓度。
2. 操作方法以下是使用分光光度计的一般操作方法：1. 打开仪器电源，并等待一段时间使其预热。
2. 调节仪器上的波长选择器，选择所需测量波长。
3. 调零：用空白试剂（即纯溶剂）进行初始测量。
将空白试剂放入光化池中，并按下测量按钮。
4. 采样：取得待测样品溶液，将其转移到光化池中。
5. 测量：按下测量按钮，分光光度计将测量样品溶液的吸光度。
6. 记录结果：将读取到的吸光度数值记录下来，并按需进行进一步计算或分析。
7. 清洗：使用纯溶剂清洗光化池和光学元件，以避免样品交叉污染。
请注意，具体的操作方法可能因不同品牌和型号的分光光度计而有所不同。
在使用仪器前，请务必参考仪器的使用手册，以获取准确的操作指南。
分光光度计的使用课件
当光通过障碍物或狭缝时，光线会发生衍射现象。衍射现象会导致光线的方向发 生变化，形成类似于干涉的明暗相间的条纹。分光光度计中的衍射光栅利用光的 衍射原理来分离不同波长的光线。
光的偏振与极化
光的偏振
当光通过某些介质时，其电矢量会相对于传播方向以一定角 度振荡，导致光的偏振现象。偏振现象可用于分析物质的晶 体结构和光学性质。
分光光度计的使用课件
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• 分光光度计基本原理 • 分光光度计基本构造 • 分光光度计使用方法 • 分光光度计实验技术 • 分光光度计应用实例 • 分光光度计维护保养与安全防护
01 分光光度计基本原理
光的吸收与散射
光的吸收
当光通过介质时，介质中的分子或原 子会吸收特定波长的光，导致光的强 度减弱。这种吸收现象可用于分析物 质中的特定成分。
药物代谢研究
通过测量药物在人体内的 吸收和代谢过程，可以研 究其动力学。
医学诊断
某些疾病可以通过测量人 体组织在特定波长下的透 射或反射光谱来进行诊断 。
06 分光光度计维护保养与安全防护
仪器维护与保养
01
02
03
04
仪器表面清洁
保持仪器表面清洁，避免使用 腐蚀性液体擦拭，以免对仪器
造成损害。
光学元件清洁
信号处理器
信号处理器是将检测器输出的电信号进行放大、处理和转换的装置，以便进行后续的数据处理和分析 。
03 分光光度计使用方法
样品制备与测量前的准备
01 02
样品制备
在开始测量之前，需要将待测样品进行适当处理，以适应分光光度计的 测量需求。例如，对于液体样品，可能需要摇匀、稀释或过滤以消除误 差。
误差来源 1. 比色皿不干净，导致吸光度测量值不准确。
分光光度计使用原理及操作方法简版修正
分光光度计使用原理及操作方法一、引言分光光度计是一种用于测量物质溶液中吸光度的工具。
通过测量不同波长下样品溶液对光的吸收情况，我们可以了解样品的浓度、反应速率以及其他相关信息。
本文将介绍分光光度计的基本工作原理以及操作方法。
二、分光光度计的工作原理分光光度计通过使用单色光源，将可见光分解成各个不同波长的光，然后通过样品溶液，测量透过样品的光的强度。
在分光光度计中，通常使用光栅或者晶体来分散白光。
根据光的波长和颜色不同，样品对光的吸收程度也不同，从而可以通过测量吸光度来推断样品中某种物质的浓度。
三、分光光度计的操作方法1. 准备工作：，确保分光光度计处于正常工作状态。
检查电源是否连接正常并打开，确认仪器的光源和检测器是否正常运行。
检查仪器是否进行了波长校准，确保测量结果准确可靠。
2. 调节波长：根据需要选择合适的波长进行测量。
可以通过旋转仪器上的刻度盘或者输入具体波长值进行调节。
校准仪器可以使用已知浓度的标准溶液进行，确保所选择的波长是准确的。
3. 设置参比：在测量之前，设置参比物使样品测量结果更加准确。
参比物可以是纯溶剂或者空白样品溶液。
将参比物放入光池中，并校准为零吸光度。
4. 放入样品：将待测的样品溶液转移到光池中，并确保没有气泡或者杂质进入。
关闭光池盖子并轻轻按压以确保样品充分覆盖光池。
5. 测量吸光度：启动测量程序，仪器将记录样品溶液在选择的波长下的吸光度值。
在测量前后进行参比物校准，以消除因仪器漂移等因素带来的误差。
6. 结果记录：测量完成后，记录测量结果并保存相关数据。
可以将数据导出或者打印出来供今后使用。
四、注意事项1. 在操作分光光度计之前，确保校准仪器并检查相关设备是否正常运行。
2. 在每次测量之前，务必进行参比物的校准，确保测量结果的准确性。
3. 避免样品溶液与仪器接触部件发生反应，以免影响测量结果。
4. 在操作过程中，避免光源受到外部干扰，如强光或者震动等。
5. 根据需要，定期清洁仪器以保持其正常工作状态。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法⒈ Introduction分光光度计是一种常用的分析仪器，用于测量物质对光的吸收和透过性。
本文将详细介绍分光光度计的工作原理及操作方法。
⒉原理⑴光的传播在分光光度计中，光源发出的光经过准直系统，通过进样口进入样品池。
光在样品池中被样品吸收或透过，并进入光电探测器。
探测器测量光的强度，通过计算得出样品的吸光度。
⑵吸光度测量原理光的吸光度（A）与样品的浓度（C）和摩尔吸光系数（ε）有关。
Beers定律表明吸光度与样品的吸收光程（b）和摩尔吸光系数（ε）之间存在线性关系，即A = εbC。
根据Beers定律，可以通过测量吸光度来确定样品的浓度。
⒊仪器组成及操作方法⑴仪器组成分光光度计由以下几个主要部件组成：光源，准直系统，进样口，样品池，光电探测器以及数显仪表等。
详细的仪器组成如下：⒊⑴光源：光源是分光光度计的核心部件，常用的光源有白炽灯、钨丝灯和氘灯等。
⒊⑵准直系统：准直系统用于使光线均匀、平行进入样品池。
⒊⑶进样口：进样口用于将待测样品引入样品池。
⒊⑷样品池：样品池是存放样品的容器，可以是玻璃或石英制成。
⒊⑸光电探测器：光电探测器用于测量光的强度，通常采用光电二极管或光敏二极管等。
⒊⑹数显仪表：数显仪表用于显示测量结果，包括吸光度、波长等。
⑵操作方法⒊⑴打开仪器电源，并预热一定时间，确保仪器处于正常工作状态。
⒊⑵调节仪器的参比光强度，使其达到最佳状态。
⒊⑶将样品放入样品池中，并选择所需测量的波长。
⒊⑷调节仪器的零点，使吸光度为零。
⒊⑸启动测量，记录吸光度和相关信息。
⒊⑹根据需要，可以进行多次测量和平均值计算，以提高测量结果的准确性。
⒋附件在本文档中未涉及附件。
⒌法律名词及注释⑴ Beers定律：一种描述溶液光学吸收规律的定律。
根据Beers定律，溶液的吸光度与溶液中溶质浓度和样品光程之间存在线性关系。
⑵摩尔吸光系数：摩尔吸光系数是一种物质对光的吸收能力的定量指标，通常用ε表示。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法一、分光光度计的原理分光光度计是一种测量样品溶液中吸收或透射光强的仪器。
它的基本原理是通过将可见光或紫外光通过样品溶液后，测量出光强的变化，从而得知样品溶液中物质的浓度或其他性质。
分光光度计的原理可以分为下面几个步骤：1. 光源发射：分光光度计通常使用可见光或紫外光作为光源。
这些光经过滤波器减少杂散光，通过准直系统形成平行光束。
2. 样品测量：经过准直系统形成的平行光束通过样品溶液，样品中吸收或透射一部分光。
被吸收的光与未经样品的光进行比较，通过这种比较可以得到吸光度或透光度。
3. 光电传感器检测：被吸收或透射后的光通过光电传感器检测并转化为电信号。
光电传感器常用的有光电二极管或光电倍增管。
4. 信号处理和显示：光电传感器转化的电信号经过放大和滤波处理后，通过计算机或显示器显示出吸光度或透光度的数值。
二、分光光度计的操作方法1. 准备工作：在使用分光光度计之前，需要进行准备工作。
这包括检查仪器是否处于正常工作状态，校准仪器的零点，确认样品槽或比色皿是否清洁干净。
2. 设定波长：根据需要测量的物质，设定合适的波长。
分光光度计通常具有可以选择波长的旋钮或按钮，通过旋转或按键来设定所需的波长。
3. 参比校正：为了确保测量结果的准确性，需要进行参比校正。
这可以通过将参比溶液放入样品槽，并记录下参比物质的吸光度或透光度值。
然后将样品溶液放入样品槽中进行测量。
4. 测量样品：将待测样品溶液放入样品槽中，确保溶液填满槽，并将样品槽放入分光光度计中。
根据需要选择透射模式或吸收模式，开始测量。
5. 记录和分析：根据测量结果记录样品的吸光度或透光度值。
可以根据所测得的数值进行进一步的数据分析和计算。
6. 清洁操作：在使用完毕后，及时清洁分光光度计的样品槽和其他部件，以确保下次使用时的准确性和可靠性。
三、注意事项1. 避免阳光直射：分光光度计的使用需要避免阳光直射，以免影响测量的准确性。
分光光度计的原理及使用方法
分光光度计的原理及使用方法一、分光光度计的原理。
1.1 基本概念。
咱先来说说啥是分光光度计。
这东西啊，就像是一个超级精密的眼睛，专门用来瞅那些咱们肉眼看不太清的光的奥秘。
它主要是根据物质对不同波长的光的吸收特性来工作的。
简单来说，不同的物质就像不同的人，对不同颜色（也就是不同波长的光）有着不同的喜好，有的特别爱吸收某种光，有的就不咋吸收。
1.2 光的吸收定律。
这里面有个很重要的定律，叫朗伯比尔定律。
这定律就像是分光光度计的灵魂。
打个比方，就像你把一块海绵放到水里，海绵能吸多少水是有一定规律的。
物质吸收光也是这样，光在通过溶液的时候，被吸收的光量和溶液的浓度以及光在溶液里走过的路程是有个定量关系的。
浓度越高，就像海绵越大，吸收的光就越多；光在溶液里走得越长，那吸收的光也越多。
这就是这个定律的大概意思，很神奇吧。
二、分光光度计的使用方法。
2.1 仪器预热。
在使用分光光度计之前啊，咱得先给它热热身，就像运动员上场前要做热身运动一样。
这预热是为了让仪器达到一个稳定的状态，这样测出来的数据才准确。
一般来说，按照仪器的说明书，预热个十几分钟到半小时不等。
这时候你就像在等待一个老朋友准备好，耐心点就对了。
2.2 样品准备。
接下来就是准备样品了。
这可不能马虎，就像做菜一样，食材准备不好，做出来的菜肯定不好吃。
样品的浓度啊、纯度啊都得合适。
如果浓度太高或者太低，就像炒菜盐放多了或者放少了，测出来的数据就会不准确。
而且样品要处理得干干净净，不能有杂质，不然就像饭里有沙子，会影响整个测量的结果。
2.3 波长选择。
波长的选择可是个技术活。
不同的物质在不同的波长下有最大的吸收峰，这就需要咱们像侦探一样去找到这个最佳波长。
这就好比你要找一个人的弱点，找到了就能一击即中。
一般是通过查阅资料或者做一些预实验来确定这个最佳波长。
2.4 测量操作。
一切准备就绪，就可以开始测量了。
把样品放到仪器里，然后按照仪器的操作步骤一步一步来。
分光光度计的原理与使用
分光光度计的原理与使用一、目的要求：1、学会紫外-可见分光光度计的原理和使用方法2、学会测量溶液的浓度.二、实验原理：1、分光光度计原理：分光光度计是目前化验室中使用比较广泛的一种分析仪器,其测定原理是利用物质对光的选择性吸收特性,以较纯的单色光作为入射光,测定物质对光的吸收,从而确定溶液中物质的含量.其特点是灵敏度高；准确度高；测量范围广；在一定条件下,可同时测定水样中两种或两种以上的物质组分含量等.分光光度计按其波长范围可分为可见分光光度计〔工作范围360～800nm〕、紫外-可见分光光度计〔工作范围200～1000nm〕和红外分光光度计〔工作范围760～400000nm〕等.2、在日常使用与维护当中应注意以下几点：第一,在使用仪器前,必须仔细阅读其使用说明书.第二,若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新调零与满度后,再测量.第三,指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上.若不是这种情况,需进行机械调零.第四,操作人员不应轻易触动灯泡与反光镜灯,以免影响光效率.第五,放大器灵敏度换挡后,必须重新调零.第六,比色皿使用时要注意其方向性,并应配套使用,以延长其使用寿命.新的比色皿使用前必须进行配对选择,测定其相对厚度,互相偏差不得超过2%透光度,否则影响测定结果.使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净〔测定有色溶液后,应先用相应的溶剂或〔1+3〕的硝酸进行浸泡,浸泡时间不宜过长,再用蒸馏水冲洗干净〕,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率.第七,比色皿架与比色皿在使用中的正确到位问题.首先,应保证比色皿不倾斜.因为稍许倾斜,就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致,还有可能使入射光不能全部通过样品池,导致测试准确度不符合要求.其次,应保证每次测试时,比色皿架推拉到位.若不到位,将影响到测试值的重复性或准确度.第八,干燥剂的使用问题.干燥剂失效将会导致以下问题：①数显不稳,无法调零或满度.②反射镜发霉或沾污,影响光效率,杂散光增加.因此分光光度计应放置在远离水池等湿度大的地方,并且干燥剂应定期更换或烘烤.第九,分光光度计的放置位置应符合以下条件：避免阳光直射；避免强电场；避免与较大功率的电器设备共电；避开腐蚀性气体等.3、吸光光度法测定溶液浓度原理基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法. 〔1〕光线：光线的波长： 200nm-400nm 紫外线,400-750nm可见光, >750nm 红外线光具有波粒二相性,波长不同,其能量不同.〔2〕物质的吸收光谱与颜色：A．物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为激发态而产生的光谱称为原子吸收光谱.激发态原子恢复到基态,则释放出特征波长的光子,形成原子发射光谱.不同的溶液其光谱不同,即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同,对某一特定波长的光存在吸收峰. B．可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成,当可见光穿过某一溶液时,由于特定波长的光被吸收而使溶液呈现相应的颜色.〔如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光<600nm>而成蓝色〕不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同. 〔3〕光吸收的基本定律〔Lambert-Beer 定律〕：一束平行单色光〔Io〕通过有色的透明溶液时,一部分的光可以透过溶液〔It〕,另一部分被溶液吸收〔Ia〕,还有一部分被器皿表面反射〔Ir〕,则：Io=It+Ia+Ir .那么,该溶液透光率为: T = It / Io .1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=Ig<Io/It>=Ig<1/T>=k2bk2 为吸光系数,为常数.与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关；A 为吸光度〔又称光密度O.D 或消光度E〕,当入射光波长、吸光溶液的浓度和温度一定时,A 与b 成正比.2． Beer 定律：设有一束平行单色光,通过浓度为c 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=lg<Io/It>=Ig<1/T>=k4ck2 为常数.由Beer 定律可知：当入射光波长、吸光溶液的厚度和温度一定时,A 与c 成正比.3． Lambert-Beer 定律：综合1.2.得： A=Kbc ,即：当入射光波长、吸光溶液的性质和温度一定时,A 与b、c 成正比.〔4〕吸光光度法的基本原理：1、不同物质,由于其分子结构和原子组成不同,故对光的吸收光谱不同〔如：CuSO4〕,在测定不同颜色的物质浓度时要用最大吸收的波长的入射光,这样测量的灵敏度最高.2、同一种物质,若浓度不同,则对同一波长的入射光的吸收能力〔吸光度〕也不同,且成正比关系.3、应此,利用特定波长的单色光〔通常用最大吸收波长的入射光〕照射不同浓度的某一溶液时,所得的吸光度大小应与溶液浓度呈线性关系,故可利用该线性关系通过计算或查标准曲线来求得未知溶液的浓度.〔5〕吸光光度法特点：1．灵敏度高：mg%级、甚至ug%级.2．准确度高：误差2-5%3．操作简便、快速,仪器设备不复杂,价格低廉,故应用广泛.三、实验器材：UV2000分光光度计四、实验步骤〔一〕 UV2000 型分光光度计的使用与注意事项1、插上插头,接通电源,打开暗箱盖,预热20min.* 注意：分光光度计在接通电源而不用时,必须打开暗箱盖,以免光电管老化.2、将准备好的试剂倒入比色杯中,用吸水纸擦去比色杯外侧水珠,并依次放入比色杯架中.* 注意：手拿比色杯毛面,试剂倒入杯中满2/3 即可,不得将比色杯放在仪器上.3、调节所需波长,选择功能至"T".4、调"0"：放入挡光板,按调"0"键调节.5、调"100%"：取出挡光板,盖上暗箱盖,调"100%",让光线通过"空白管".6、重复调"0"和调"100%"数次.7、将选择键由"T"调至"A",此时读数应由"100"至"0",若不为"0",可用"0%"键调节.8、拉动拉杆,分别读取"A 标"和"A 样".9、取出比色杯,弃去溶液,洗净晾干,备用.〔二〕计算1．利用标准管计算测定物含量：A 样=K 样b 样c 样A 标=K 标b 标c 标因为入射光的波长,溶液性质和温度以与比色杯的厚度都一样,即：K 样=K 标 b 样=b 标所以：A 样/ A 标= c 样/ c 标得：c 样= c 标×A 样/ A 标2．利用标准曲线进行计算：3．偏离Lambert-Beer 定律的原因1〕由于非但色光引起的偏离.2〕由于溶液本身原因引起的偏离：①由于介质不均匀引起的偏离②由于溶液中化学反应引起的偏离浓度的测定〔三〕CuSO4比色波长=650nm按上述操作步骤测定硫酸铜溶液A 样和A 标,按下式计算样品浓度：C 样 = C 标 * A 样 / A 标五、结果与思考1、如果用标准曲线法测定硫酸铜溶液浓度,该如何设计实验？2、分光光度计的维护要注意什么？3、比较各种分光光度计的使用范围.。
分光光度计的原理与使用
分光光度计的原理与使用分光光度计是一种常用的实验仪器，用于测量溶液或气体样品的吸收光谱。
它根据兰伯特-比尔定律和它的法贝定律，利用溶液对不同波长的光的吸收特性来确定溶液中特定化合物的浓度。
分光光度计由光源、单色器、样品室、光电传感器及相应的电子部件组成。
1.光源:光源发出全谱的光线，分光光度计中常用的光源有可见光源（如钨灯、氘灯）和紫外光源（如氙灯）。
光源发出的光由反射镜通过单色器的光栅进行色散，分散为不同波长的光线。
2.单色器:单色器的主要功能是将包含不同波长的光线分离开来，并选择出特定波长的单色光。
单色器一般采用光栅，光栅是由一系列平行凹槽组成的镜面，能够将光线按照不同的波长折射，使得特定波长的光线通过。
3.样品室:样品室是放置待测溶液的容器，一般是一个透明的玻璃或石英室。
在样品室中，待测溶液会吸收特定波长的光，吸收的程度与溶液中特定化合物的浓度成正比。
4.光电传感器:光电传感器接收从样品室中透过的光，并将其转换为电信号。
常用的光电传感器有光电二极管和光电倍增管等。
光电传感器输出的电信号大小与通过样品的光强度成正比。
5.电子部件:电子部件将光电传感器输出的电信号放大，并经过处理，最终通过显示器显示出来。
同时，通过电子部件可以对多个波长的光进行测量和处理，从而绘制出样品的吸收光谱。
1.打开分光光度计电源，并选择合适的光源和单色器波长。
2.校准光度计：将空样品室（只含溶剂）放入样品室架中，调节光强为零点。
校准的目的是消除仪器本身的误差。
3.准备待测溶液：将待测溶液放入样品室，并用合适的工具（如滴管）调整样品室中溶液的浓度。
4.放置样品室：将样品室放入样品室架中，确保样品室上下位置正确，光线能够透过样品室。
5.读取吸收光谱：选择合适的波长，打开光程控制调节，读取吸收光谱的数值。
6.计算浓度：根据吸收光谱的数值，利用已知的标准曲线或吸收光谱与浓度的关系，计算出待测溶液的浓度。
分光光度计广泛应用于化学、生物、环境等领域的实验研究中。
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分光光度计的原理与使用
一、目的要求：
1、学会紫外-可见分光光度计的原理和使用方法
2、学会测量溶液的浓度。
二、实验原理：
1、分光光度计原理：分光光度计是目前化验室中使用比较广泛的一种分析仪器，其测定原理是利用物质对光的选择性吸收特性，以较纯的单色光作为入射光，测定物质对光的吸收，从而确定溶液中物质的含量。
其特点是灵敏度高；准确度高；测量范围广；在一定条件下，可同时测定水样中两种或两种以上的物质组分含量等。
分光光度计按其波长范围可分为可见分光光度计（工作范围360～800nm）、紫外-可见分光光度计（工作范围200～1000nm）和红外分光光度计（工作范围760～400000nm）等。
2、在日常使用及维护当中应注意以下几点：
第一，在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书。
第二，若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新调零及满度后，再测量。
第三，指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。
若不是这种情况，需进行机械调零。
第四，操作人员不应轻易触动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。
第五，放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。
第六，比色皿使用时要注意其方向性，并应配套使用，以延长其使用寿命。
新的比色皿使用前必须进行配对选择，测定其相对厚度，互相偏差不得超过2%透光度，否则影响测定结果。
使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净（测定有色溶液后，应先用相应的溶剂或（1+3）的硝酸进行浸泡，浸泡时间不宜过长，再用蒸馏水冲洗干净），并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。
第七，比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。
首先，应保证比色皿不倾斜。
因为稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还有可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试准确度不符合要求。
其次，应保证每次测试时，比色皿架推拉到位。
若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。
第八，干燥剂的使用问题。
干燥剂失效将会导致以下问题：①数显不稳，无法调零或满度。
②反射镜发霉或沾污，影响光效率，杂散光增加。
因此分光光度计应放置在远离水池等湿度大的地方，并且干燥剂应定期更换或烘烤。
第九，分光光度计的放置位置应符合以下条件：避免阳光直射；避免强电场；避免与较大功率的电器设备共电；避开腐蚀性气体等。
3、吸光光度法测定溶液浓度原理
基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法。
（1）光线：
光线的波长： 200nm-400nm 紫外线，400-750nm可见光， >750nm 红外线
光具有波粒二相性，波长不同，其能量不同。
（2）物质的吸收光谱及颜色：
A．物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为激发态而产生的光谱称为原子吸收光谱。
激发态原子恢复到基态，则释放出特征波长的光子，形成原子发射光谱。
不同的溶液其光谱不同，即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同，对某一特定波长的光存在吸收峰。
B．可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成，当可见光穿过某一溶液时，由于特定波长的光被吸收而使溶液呈现相应的颜色。
（如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光(600nm)而成蓝色）不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同。
（3）光吸收的基本定律（Lambert-Beer 定律）：
一束平行单色光（Io）通过有色的透明溶液时，一部分的光可以透过溶液（It），另一部分被溶液吸收（Ia）,还有一部分被器皿表面反射（Ir）,则：
Io=It+Ia+Ir 。
那么，该溶液透光率为: T = It / Io 。
1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k2b
k2 为吸光系数，为常数。
与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关；A 为吸光度（又称光密度O.D 或消光度E），当入射光波长、吸光溶液的浓度和温度一定时，A 与b 成正比。
2． Beer 定律：设有一束平行单色光,通过浓度为c 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:
A=lg(Io/It)=Ig(1/T)=k4c
k2 为常数。
由Beer 定律可知：当入射光波长、吸光溶液的厚度和温度一定时，A 与c 成正比。
3． Lambert-Beer 定律：综合1.2.得： A=Kbc ,
即：当入射光波长、吸光溶液的性质和温度一定时，A 与b、c 成正比。
（4）吸光光度法的基本原理：
1、不同物质，由于其分子结构和原子组成不同，故对光的吸收光谱不同（如：CuSO4），在测定不同颜色的物质浓度时要用最大吸收的波长的入射光，这样测量的灵敏度最高。
2、同一种物质，若浓度不同，则对同一波长的入射光的吸收能力（吸光度）也不同，且成正比关系。
3、应此，利用特定波长的单色光（通常用最大吸收波长的入射光）照射不同浓度的某一溶液时，所得的吸光度大小应与溶液浓度呈线性关系，故可利用该线性关系通过计算或查标准曲线来求得未知溶液的浓度。
（5）吸光光度法特点：
1．灵敏度高：mg%级、甚至ug%级。
2．准确度高：误差2-5%
3．操作简便、快速，仪器设备不复杂，价格低廉，故应用广泛。
三、实验器材：
UV2000分光光度计
四、实验步骤
（一） UV2000 型分光光度计的使用及注意事项
1、插上插头，接通电源，打开暗箱盖，预热20min。
* 注意：分光光度计在接通电源而不用时，必须打开暗箱盖，以免光电管老化。
2、将准备好的试剂倒入比色杯中，用吸水纸擦去比色杯外侧水珠，并依次放入比色杯架中。
* 注意：手拿比色杯毛面，试剂倒入杯中满2/3 即可，不得将比色杯放在仪器上。
3、调节所需波长，选择功能至“T”。
4、调“0”：放入挡光板，按调“0”键调节。
5、调“100%”：取出挡光板，盖上暗箱盖，调“100%”，让光线通过“空白管”。
6、重复调“0”和调“100%”数次。
7、将选择键由“T”调至“A”，此时读数应由“100”至“0”，若不为“0”，可用“0%”键调节。
8、拉动拉杆，分别读取“A 标”和“A 样”。
9、取出比色杯，弃去溶液，洗净晾干，备用。
（二）计算
1．利用标准管计算测定物含量：
A 样=K 样b 样c 样
A 标=K 标b 标c 标
因为入射光的波长，溶液性质和温度以及比色杯的
厚度都一样，即：K 样=K 标 b 样=b 标
所以：A 样/ A 标= c 样/ c 标
得：c 样= c 标×A 样/ A 标
2．利用标准曲线进行计算：
3．偏离Lambert-Beer 定律的原因
1）由于非但色光引起的偏离。
2）由于溶液本身原因引起的偏离：
①由于介质不均匀引起的偏离
②由于溶液中化学反应引起的偏离
浓度的测定
（三）CuSO
4
比色波长=650nm
按上述操作步骤测定硫酸铜溶液A 样和A 标，按下式计算样品浓度：
C 样 = C 标 * A 样 / A 标
五、结果与思考
1、如果用标准曲线法测定硫酸铜溶液浓度，该如何设计实验？
2、分光光度计的维护要注意什么？
3、比较各种分光光度计的使用范围。