(完整版)沉淀反应
(完整版)免疫沉淀法原理及操作
免疫沉淀法是一种将蛋白质视为抗原，并利用抗体与之进行特异性结合的特性研究蛋白质间交互作用的生物技术。
这项技术可以从含有不同蛋白质的样品中，分离和浓缩出特定蛋白质，即纯化蛋白质，比如沈涛等在研究骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位中就用到这项技术来纯化ArgBP2蛋白。
其原理是在细胞裂解液中加入抗目的蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于sepharose beads上的proteinA/G，与细胞中有目的蛋白结合，就形成一种免疫复合物，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。
然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。
免疫沉淀的操作过程主要分三个阶段：第一步是制备抗原溶液，任何抗原溶液均可作为免疫沉淀的材料来源，一般采用细胞或组织制备的裂解物；第二阶段是对裂解物进行预处理，免疫沉淀要求抗原的纯度尽可能高，用不与待检抗原结合的非特异性抗体预处理，可以从抗原溶液中除去非特异性结合蛋白；最后阶段是免疫复合物的形成与纯化，即在预处理过后的裂解物中加入特异性抗体形成免疫复合物，然后将免疫复合物经蛋白A或蛋白G结合的琼脂糖或聚丙烯酰胺微珠等固相基质进行纯化。
蛋白A和蛋白G对抗体的Fc段有较高的亲和力。
蛋白A/G与抗体结合后，通过洗涤微珠即可除去未结合的蛋白，剩下与基质结合的即是纯化的抗原抗体复合物。
具体步骤可以如下进行：（1）收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30min, 12,000r/min离心30 min后取上清；（2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液将1μｇ相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；（3）免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 r/min速度离心 5 min,将protein A/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次；最后加入15μｌ的2×SDS 加样缓冲液，沸水煮10分钟；（4）SDS-PAGE, Western blotting或进行质谱分析。
蛋白质的沉淀反应(实验)
记录沉淀物的生成速度，可以反映蛋白质的稳定 性以及溶液中其他成分对蛋白质的影响。
离心后沉淀
通过离心实验，观察离心后上清液和沉淀物的变 化，判断蛋白质的溶解度和聚集状态。
蛋白质结构变化分析
紫外可见光谱分析
通过紫外可见光谱分析，观察蛋白质在沉淀前后吸收峰的变化， 判断蛋白质结构的变化。
傅里叶变换红外光谱分析
观察沉淀物
观察沉淀物的形态、颜色和质地，判断沉淀 是否完全。
绘制图表
将实验数据整理成表格或图表，便于分析和 比较。
测量数据
使用测量工具测量沉淀物的重量、体积等数 据，记录实验结果。
分析结论
根据实验结果和数据，分析蛋白质的沉淀反 应性质和条件，得出结论。
04
结果分析
沉淀现象分析
沉淀物形态
观察沉淀物的形态，如颗粒大小、颜色、透明度 等，以判断蛋白质的纯度和聚集状态。
酶
在某些情况下，可能需要 使用酶来水解蛋白质，以 促进沉淀或改变蛋白质的 构象。
pH调节剂
用于调节溶液的pH值，以 适应不同蛋白质的稳定性 和活性。
03
实验操作过程
准备阶段
实验材料
需要准备实验所需的蛋白质溶液、 沉淀剂、离心管、离心机等实验 器材。
实验原理
了解蛋白质的沉淀反应原理，即通 过改变蛋白质溶解度或电荷性质， 使其从溶液中析出。
沉淀剂
01
02
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
03
盐类
常用的沉淀剂包括硫酸铵、 氯化钠、磷酸钠等盐类， 通过增加离子强度使蛋白 质析出。
有机溶剂
如乙醇、丙酮等有机溶剂， 通过降低水分子与蛋白质 的结合力使蛋白质沉淀。
重金属盐
如硫酸铅、硝酸银等重金 属盐，与蛋白质结合形成 不溶性的复合物而沉淀。
5章 沉淀反应(免疫学)
3.方法评价
操作简便。 灵敏度较高，比双扩高约10倍。 分辨率低于双扩。
4. 临床应用
常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴 定等
(二) 火箭免疫电泳
火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中
加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形
似火箭，故称为火箭电泳。
1. 基本原理
一、透射免疫比浊法
（transmission turbidimetry）
(一) 基本原理
抗原抗体结合后形成的CIC引起液体介质出 现浊度改变，光线的透过量减少，被吸收 光线量与CIC形成量呈正相关，依所测吸光 度值推算待测抗原的量 。
二、散射免疫比浊法
（nephelometry）
1967年， Ritchie等
方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设 备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。
（四）临床应用
1．血清学诊断:出现沉淀线，表明存在相应的Ag或Ab.
2.
免疫化学分析:浓度、分子量、纯度、反应性 沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；反之则反
出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单 一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。
三、速率抑制免疫比浊法
(rate inhibition immunoturbidimetry)
是一种竞争性结合试验，主要用于测定半抗原和 药物等小分子物质。
试验时先将一定量的已知半抗原-载体（大分子） 与限量的特异性抗体发生反应，生成的免疫复合 物可形成一定的速率散射峰值。
待测抗原与抗体竞争结合，速率散射峰值降低， 降低程度与标本中的待测半抗原成正比。
第5章 沉淀反应 Precipitation
(完整版)免疫学及免疫学检验学+题库答案
一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence）10.最适比（optimalratio）11.带现象（zonephenomenon）第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原(immunogen)13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb)第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应免疫学及免疫学检验试卷第1页（共13页）20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫免疫学及免疫学检验试卷第2页（共8页）42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应(GVHR)60.血清学分型法二、填空题。
免疫学及免疫学检验试卷第3页（共13页）第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学。
(完整版)初、高中化学沉淀及颜色
高中化学常见沉淀物质1.红色Fe(SCN)]2+(血红色);Cu2O(砖红色);Fe2O3(红棕色);红磷(红棕色);液溴(深红棕色);Fe(OH)3(红褐色);I2的CCl4溶液(紫红色);MnO4-(紫红色);Cu(紫红色);在空气中久置的苯酚(粉红色).2.2.橙色:溴水;K2Cr2O7溶液.3.黄色:AgI(黄色);AgBr(浅黄色);K2CrO4(黄色);Na2O2(淡黄色);S(黄色);FeS2(黄色);久置浓HNO3(溶有NO2);工业浓盐酸(含Fe3+);Fe3+水溶液(黄色);久置的KI溶液(被氧化成I2)4.绿色:Cu2(OH)CO3;Fe2+的水溶液;FeSO4.7H2O;Cl2(黄绿色);F2(淡黄绿色);Cr2O35.蓝色:Cu(OH)2;CuSO4.5H2O;Cu2+的水溶液;I2与淀粉的混合物.6.紫色:KMnO4(紫黑色);I2(紫黑色);石蕊(pH=8--10);Fe3+与苯酚的混合物.7.黑色:FeO,Fe3O4,FeS,CuS,Cu2S,Ag2S,PbS,CuO,MnO2,C粉.8.白色:Fe(OH)2,AgOH,无水CuSO4,Na2O,Na2CO3,NaHCO3,AgCl,BaSO4,CaCO3,CaSO3,Mg(OH)2,Al(OH)3,三溴苯酚,MgO,MgCO3,绝大部分金属等.一、单质绝大多数单质：银白色。
Cu 紫红 O2 无 Au 黄 S 黄 B 黄或黑 F2 淡黄绿 C（石墨黑 Cl2 黄绿 C（金刚石）无 Br2 红棕 Si 灰黑 I2 紫黑 H2 无稀有气体无 P 白、黄、红棕。
二、氢化物 LiH等金属氢化物：白 NH3等非金属氢化物：无三、氧化物大多数非金属氧化物：无主要例外： NO2 棕红 N2O5和P2O5 白 N2O3 暗蓝ClO2 黄大多数主族金属的氧化物：白主要例外： Na2O2 浅黄 PbO 黄 K2O 黄 Pb3O4 红 K2O2 橙Rb2O 亮黄 Rb2O2 棕 Cs2O 橙红 Cs2O2 黄大多数过渡元素氧化物有颜色 MnO 绿 CuO 黑MnO2黑 Ag2O 棕黑 FeO 黑 ZnO 白 Fe3O4 黑 Hg2O 黑 Fe2O3 红棕 HgO 红或黄 Cu2O 红V2O5 橙四、氧化物的水化物大多数：白色或无色其中酸：无色为主碱：白色为主主要例外： CsOH 亮黄 Fe(OH)3红褐 HNO2 溶液亮蓝 Cu(OH)2 蓝 Hg(OH)2 桔红五、盐大多数白色或无色主要例外： K2S 棕黄 CuFeS2 黄 KHS 黄 ZnS 白 Al2S3 黄 Ag2S 黑 MnS 浅红 CdS 黄 FeS 黑棕 SnS 棕 FeS2 黄 Sb2S3 黑或橙红 CoS 黑 HgS 红 NiS 黑PbS 黑 CuS、Cu2S 黑 Bi2S3 黑FeCl3·6H2O 棕黄 Na3P 红FeSO4·9H2O 蓝绿 NaBiO3 黄Fe2（SO4）3·9H2O 棕黄 MnCl2 粉红 Fe3C 灰 MnSO4 淡红 FeCO3 灰 Ag2CO3 黄 Fe（SCN）3 暗红 Ag3PO4 黄 CuCl2 棕黄 AgF 黄CuCl2·7H2O 蓝绿 AgCl 白 CuSO4 白 AgBr 浅黄CuSO4·5H2O 蓝 AgI 黄 Cu2（OH）2CO3 暗绿盐溶液中离子特色： NO2- 浅黄 Cu2+或[Cu （H2O）4]2+ 蓝 MnO4- 紫红 [CuCl4]2- 黄 MnO42- 绿 [Cu（NH3）4]2+ 深蓝 Cr2O72- 橙红 Fe2+ 浅绿 CrO42- 黄 Fe3+ 棕黄非金属互化物 PCl3 无 XeF2、XeF4、XeF6 无 PCl5 浅黄氯水黄绿 CCl4 无溴水黄—橙 CS2 无碘水黄褐 SiC 无或黑溴的有机溶液橙红—红棕 SiF4 无 I2的有机溶液紫红六．其它甲基橙橙 CXHY（烃）、CXHYOZ 无（有些固体白色）石蕊试液紫大多数卤代烃无（有些固体白色）石蕊试纸蓝或红果糖无石蕊遇酸变红葡萄糖白石蕊遇碱变蓝蔗糖无酚酞无麦芽糖白酚酞遇碱红淀粉白蛋白质遇浓HNO3变黄纤维素白I2遇淀粉变蓝 TNT 淡黄 Fe3+遇酚酞溶液变紫焰色反应: Li 紫红 Ca 砖红 Na 黄 Sr 洋红 K 浅紫（通过蓝色钴玻璃） Ba 黄绿 Rb 紫 Cu 绿稀有气体放电颜色 He 粉红 Ne 鲜红 Ar 紫初中化学常见沉淀物质红褐色絮状沉淀--------Fe(OH)3浅绿色沉淀------------Fe(OH)2蓝色絮状沉淀----------Cu(OH)2白色沉淀--------------CaCO3,BaCO3,AgCl,BaSO4,(其中BaSO4、AgCl是不溶于 HNO3的白色沉淀,CaCO3 BaCO3是溶于HNO3 的白色沉淀),Mg(OH)2.淡黄色沉淀(水溶液中)----S微溶于水------------Ca(OH)2,CaSO4氧化反应：1、镁在空气中燃烧：2Mg + O22MgO 白色信号弹现象：（1）发出耀眼的白光（2）放出热量（3）生成白色粉末2、铁在氧气中燃烧：3Fe + 2O2Fe3O4现象：（1）剧烈燃烧，火星四射（2）放出热量（3）生成一种黑色固体注意：瓶底要放少量水或细沙，防止生成的固体物质溅落下来，炸裂瓶底。
3.4.2沉淀反应的应用(用)
使 之转化为疏松、易溶于酸的CaCO3。
化学法除锅炉水垢的流程图
水垢Ca成S分O4
CaCO3 Mg(OH)2
SO42－ + Ca2＋ 用饱和Na2C+O3 溶液浸泡数C天O32－
疏松的水垢
CaCO3 Mg(OH)2
CaSO4
写出除去水垢过程中发生的C所aC有O离3 子方程式
CaSO4 (s) +CO32- === CaCO3 (s) +SO42CaCO3 (s) +2H+ === Ca2++ CO2↑+H2O Mg(OH)2 (s) +2H+ === Mg2++2H2O
运用四段式（列平衡—讲条件—论移动—说结果） （3）这样真的能除尽Ag+吗？
由于沉淀溶解平衡的存在，生成沉淀的离子反应不可 能进行到底。我们所说的“沉淀完全，并不是使溶液中的 某种离子浓度真正等于零，实际上这是做不到的。化学上 常认为残留在溶液中的离子浓度小于10-5mol/L时, 沉淀 达到完全
（4）影响因素： ①内因：电解质本身的性质
饱用 氯盐 化酸 铵或 液 除去水垢
应用2：一些自然现象的解释
当我们外出旅游，沉醉于秀美的湖光山色 时，一定会惊叹大自然的鬼斧神工。石灰 石岩层在经历了数万年的岁月侵蚀之后， 会形成各种奇形异状的溶洞。你知道它是 如何形成的吗？
CaCO3
Ca2+ + CO32+
H2O+CO2
2HCO3-
课
时
小 结
CaSO4 (s) +CO32- === CaCO3 (s) +SO42-
（2）C请aC写O出3+发2H生+ =反==应Ca的2++离C子O2↑方+H程2O式。
凝集反应、沉淀反应
当抗原与相应抗体结合时，抗体的交联作 用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒 相互靠拢，聚集在一起。 当抗体的分子太少或分子量小，不能克服 相当厚度的离子云层时，则不能使颗粒聚 集。在凝集反应中IgM的作用远大于IgG。 为促使凝集现象的出现，可采取以下措施： 1、增加蛋白质和电解质，缩短颗粒间的距 离；2、增加溶液的黏稠度；3、用胰酶和 神经氨酸酶处理；4：以离心的方式克服颗 粒间的排斥力。
第五章
凝集反应
颗粒性抗原与特异性抗原结合后，在适当 的电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现 象，称为凝集反应。 可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合形成致 敏颗粒后，与相应的抗原或抗体结合，也 能发生凝集反应。
1
第一节 凝集反应的特点 凝集反应的发生分为两个阶段：1、抗原抗 体的特异性结合阶段；2、出现肉眼可见的 凝集现象。 颗粒性抗原在悬液中带负电荷，周围吸引 一层与之牢固结合的正离子，外面又排列 一层松散的负离子，构成一个双层电子云。 在松散层内界和外界间的电位差形成Z电位。 溶液中负离子强度越大，Z电位也越大，Z 电位使颗粒间互相排斥。
示意图
标准品抗原浓度测定
抗原浓度 1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找
不同病人抗原浓度测定
相应抗原浓度
35
单向扩散试验 （平板法）
沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法
Mancini曲线： 大分子抗原 时间扩散＞48h， 常数K＝C∕d2 普通坐标纸曲线
Fahey曲线： 小分子抗原 扩散时间24h 常数K＝logC∕d 半对数坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径
36
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为48h以 上,可见T3为直线，T1为反抛物线
(完整版)沉淀滴定反应
平衡常数对滴定曲线突跃范围的影响：
1、沉淀反应的KSP 越小，突跃越大。 2、突跃范围随滴 定剂和被测物浓度 增加而变大。
三、 沉淀滴定法
1. 摩尔(Mohr)法
a. 用AgNO３标准溶液滴定氯化物，以K2CrO４为指示剂 Ag＋ ＋ Cl－ ＝ AgCl
2S]
[S2 [S2
] ]
K K a1 a2 K sp , ZnS
＝5.67
K2
[H ]2 [Fe2 ][H
2S]
[S2 [S2
] ]
K K a1 a2 K sp ,FeS
＝1.84104
K2 K1
[Zn2 ] [Fe2 ]
3.24105
Zn2+ 沉淀完全时的pH值为：
1
[H ] (Ka1 [Zn2 ][H2S])2
KAgCl = [Ag+][Cl-]
该常数称为溶度积常数，用Ksp表示。
AnBm(s)
nAm+(aq) + mBn-(aq)
则Ksp, AnBm= [Am+]n[Bn-]m
同一类型的电解质，可以用Ksp直接比较溶解度的大 小，不同类型的难溶电解质，不能用Ksp比较。
例1、计算298K时AgCl、AgI的溶解度
(3) Q Ksp 时，溶液不饱和，若体系中有沉淀，
则沉淀会溶解
1
例：（1）往盛有1.0 dm3纯水中加入0.1 cm3浓 度为0.01 mol dm-3 的CaCl2和Na2CO3:
[Ca2+] = [CO32-] = 0.110-3 0.01/1.0 = 10-6 mol dm-3
Q = [Ca2+] [CO32-] = 10-12 < Ksp,CaCO3 = 5.1 10-9 因此无 CaCO3沉淀生成。
溶液的沉淀反应和溶解反应
溶液的沉淀反应和溶解反应一、引言在化学中，溶液是一种将溶质溶解在溶剂中形成的混合物。
溶液可以发生多种反应，其中包括溶液的沉淀反应和溶解反应。
本文将对这两种反应进行详细探讨，并分析它们在化学实验和工业中的应用。
二、沉淀反应1. 沉淀反应的定义沉淀反应是指当两种溶液混合时，溶液中某些离子会以无法形成溶解物的形态，在溶液中生成可见的固体颗粒沉淀的过程。
这种沉淀物通常是一种离子间的化合物。
2. 沉淀反应的实验现象在进行沉淀反应实验时，可以添加试剂A和试剂B的混合物。
当两者混合后，如果形成 visible solid particles，即可认为发生了沉淀反应。
例如，当添加氯化钠溶液到硝酸银溶液中时，会产生可见的白色氯化银沉淀。
3. 沉淀反应的化学方程式沉淀反应的化学方程式需要根据反应过程中产生的离子进行推导。
以下是一些常见的沉淀反应方程式示例：- AgNO3（硝酸银）+ NaCl（氯化钠）→ AgCl（氯化银）↓ + NaNO3（硝酸钠）- Pb(NO3)2（硝酸铅）+ 2KI（碘化钾）→ PbI2（碘化铅）↓ +2KNO3（硝酸钾）4. 沉淀反应的应用沉淀反应在日常生活和实验室中具有广泛的应用。
例如，在水处理过程中，通过沉淀反应可以去除水中的污染物。
实验室中常用沉淀反应来检测物质的存在和浓度，或者用于分离和纯化化合物。
三、溶解反应1. 溶解反应的定义溶解反应是指将固体物质通过与溶剂的相互作用转变为离子或分子，从而形成溶液的过程。
在溶解反应中，固体被溶解于溶液中而不产生新的物质。
2. 溶解反应的实验现象溶解反应的实验现象通常是固体物质完全消失，转变为液体或气体状态，并与溶剂形成均匀的混合物。
例如，将食盐颗粒加入水中，食盐颗粒会逐渐消失，形成透明的盐水。
3. 溶解反应的化学方程式溶解反应的化学方程式通常以离子或分子的形式表示。
以下是一些常见的溶解反应方程式示例：- NaCl（氯化钠）→ Na+（钠离子）+ Cl-（氯离子）- H2O（水）→ H+（氢离子）+ OH-（氢氧根离子）4. 溶解反应的应用溶解反应在日常生活和工业中起着重要作用。
沉淀反应(免疫学检验课件)
沉淀反应
沉淀反应
(precipitation)
可溶性抗原（细菌培养滤液、细胞或组织的 浸出液、血清蛋白等）与相应抗体在液相中特异 结合后，形成的免疫复合物受电解质影响出现的 沉淀现象。
反应中的抗原称为沉淀原（precipitinogen） 可以是类脂、多糖或蛋白质等；抗体称为沉淀素 （precipitin）。
❖ (3)溶液中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果 数量太小，溶液浊度变化太小，对光通量影响不大。
❖ (4)透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此 只能测定抗原－抗体反应的第二阶段，检测需抗原－ 抗体温育反应时间，检测时间较长。
❖ (5)检测用的抗体一般应选择亲和力较高的抗体，且在 检测中应保证抗体过量。
退。实际上在电泳的过程中受
负电荷多
－
电泳力 ＞
电渗力
抗体 负电荷少
电泳力 ﹤ 电渗力
+
步骤：
制板
3－4ml琼脂
打孔
孔间距3mm
加样
约7ul
抗体
抗原
电泳
总电流＝4mA x 1cm/板宽 x N(板数） 20—30分钟
三、免疫电泳技术
免疫电泳技术的用途
是散射比浊法的改良。一般在30～120min内比 浊
用于免疫沉淀反应的缺陷
(1)因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个待测 样本的吸收和散射效果，可测定结果不准确
(2)测定的仍是抗原－抗体反应的第二阶段，不适合快 速检测。
(3) 终点法存在反应本底（空白管），测定样本的含量 越低，本底比例越大，故在微量测定时，本底的干 扰是影响准确测定的重要因素。
（4）若反应时间过长，IC聚合形成沉淀则导致散射值 偏低。故需掌握最适时间比浊。
(完整版)沉淀反应
沉淀反应沉淀反应特点：沉淀反应是指可溶性抗原和相应抗体在特定的条件下特异性结合所出现的沉淀现象。
沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素、核酸等可溶性的小分子物质.一、概念可溶性抗原与其相应抗体特异结合，出现肉眼可见的免疫复合物，称为沉淀反应.沉淀反应属于体外抗原抗体反应，其反应也分两个阶段：第一阶段位抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小复合物,肉眼不可见；第二阶段为形成大的可见免疫复合物，如沉淀线、沉淀环等。
二、液相内的沉淀反应液相内的沉淀反应类型有絮状沉淀反应、环状沉淀反应和免疫浊度试验.1、絮状沉淀反应在电解质溶液中，可溶性抗原与相应抗体特异性结合,当抗原和抗体分子比例合适的时，可形成絮状或颗粒状的不溶性沉淀物.直接影响絮状沉淀的试验最重要的因素是抗原和抗体分子比例合适。
①抗原稀释法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗体反应②抗体稀释法抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应③方阵滴定法方阵滴定法即棋盘滴定法 (二维的，既稀释抗原也稀释抗体）2、环状沉淀反应先将适量已知抗血清价值毛细玻璃管(2~3mm）底部，再沿管壁缓缓加入等体积待测样品溶液，使样品与抗血清分层清晰。
如果样品中有与已知抗体对应的可溶性抗原,会在两种液体的交界面出现白色沉淀环。
3、免疫浊度试验⑴原理：在特殊缓冲液中，分子比例合适的可溶性抗原与相应抗体形成抗原抗体复合物，使反应液出现浑浊,其浊度与免疫复合物的量成正比，利用光学测量仪器结合自动分析检测系统检测，并与一系列的标准品对照，即可计算出被检抗原或抗体的含量.免疫浊度法按照仪器设计的不同，分为使用透射比浊仪的免疫透射比浊法和使用散射比浊仪的免疫散射法。
免疫浊度法可用于液体中的微量抗原、抗体及小分子半抗原（如药物等）的定量检测。
其优点是自动检测、操作简便快速、适合大批量标本检测、灵敏度高（可达毫微克水平）、且无放射性污染.A、免疫透射比浊法原理及用途：当抗原抗体特异结合形成IC时，溶液浊度增加.到一定波长的光线通过此溶液时,由于溶液中IC吸收光而导致透光量减少，利用透射比浊仪测量出溶液的入射光衰减，求得的溶液吸光度（A）可用于表示浊度。
《沉淀反应的应用-沉淀的转化》说课稿（全国实验说课大赛获奖案例）
《沉淀反应的应⽤-沉淀的转化》说课稿（全国实验说课⼤赛获奖案例）《沉淀反应的应⽤-沉淀的转化》说课稿⼀、使⽤教材⼈教版化学选修四《化学反应原理》第三章第四节⼆、实验器材⼲燥管（⾃制），注射器，⼩烧杯，铁架台，0.1mol·L-1AgNO3溶液，0.1mol·L-1 Na2SO4溶夜，0.1 mol·L-1K2CrO4溶液，0.1 mol·L-1Na2S溶液，0.1 mol·L-1MgCl2溶液，0.1 mol·L-1NaOH 溶液，0.1 mol·L-1KBr溶液，0.1 mol·L-1CuSO4溶液，0.1 mol·L-1KI溶液，0.1 mol·L-1Pb(CH3COO)2溶液。
三、实验创新要求/改进要点（1）实验仪器：⽤⼲燥管（⾃制）和注射器做实验仪器，增加课堂趣味性，使化学知识更贴近⽣活。
（2）现象明显：⼲燥管中每⼀次都保留适量浊液，连续性强，既能观察到明显的实验现象⼜⽅便学⽣做对照实验。
（3）两组实验相互对⽐，形成强烈反差，有助于帮助学⽣突破难点。
四、实验原理和实验设计思路：将⼲燥管切割后与导管、开关连成下图装置，可直观的帮助学⽣观察三种沉淀颜⾊的变化，有助于理解沉淀转化的本质。
沉淀转化的的本质是溶解平衡的移动，⼀般情况下，溶解度⼩的沉淀更容易向溶解度更⼩的沉淀转化。
涉及到的化学反应：2AgNO3 + Na2SO4 = Ag2SO4↓ + 2NaNO3Ag2SO4 + CrO42- ? Ag2CrO4↓ + SO42-Ag2CrO4 + S2- ? Ag2S↓ + CrO42-难溶物K sp溶解度/gAg2SO4 1.4×10-50.796Ag2CrO4 1.9×10-12 4.3×10-2Ag2S 6.3×10-50 1.3×10-16五、实验教学⽬标（1）知道沉淀转化的原理和⽅向；理解沉淀转化的实际应⽤。
初三化学有关酸碱盐化合物沉淀知识汇总
初三化学有关酸碱盐化合物沉淀知识汇总1、硫酸铜溶液跟铁反应：CuSO4+Fe=ZnSO4+Fe铁表面覆盖红色物质，溶液由蓝色变浅绿色2、碳酸钠跟盐酸反应：Na2CO3+2HCl=2NaCl+H2O+CO2↑有气泡产生固体逐渐减少3、碳酸氢钠跟盐酸反应：NaHCO3+HCl=NaCl+H2O+CO2↑有气泡产生固体逐渐减少4、石灰石跟稀盐酸反应：CaCO3+2HCl=CaCl2+H2O+CO2↑有气泡产生固体逐渐减少5、硝酸银跟稀盐酸反应：AgNO3+HCl=AgCl↓+HNO3有白色沉淀产生6、氯化钡跟稀硫酸反应：BaCl2+H2SO4=BaSO4↓+2HCl有白色沉淀产生7、氢氧化钙根碳酸钠溶液反应：Ca(OH)2+Na2CO3=2NaOH+CaCO3↓有白色沉淀产生8、硝酸银溶液跟氢氧化钠溶液反应：AgNO3+NaCl=AgCl↓+NaNO3有白色沉淀产生9、氯化钡溶液跟硫酸钠溶液反应：BaCl2+Na2SO4=2NaCl+BaSO4↓有白色沉淀产生1、氢氧化铜跟稀盐酸反应：Cu(OH)2+2HCl=CuCl2+2H2O蓝色沉淀消失2、氢氧化铜跟稀硫酸反应：Cu(OH)2+H2SO4=CuSO4+2H2O变成蓝色溶液3、氢氧化钠跟硫酸铜溶液反应：2NaOH+CuSO4=Na2SO4+Cu(OH)2↓有蓝色沉淀产生4、氢氧化钠跟氯化铁溶液反应：3NaOH+FeCl3=Fe(OH)3↓+3NaCl有红褐色沉淀产生初三化学所有酸碱盐的俗名，性质，用途第7单元酸碱盐1.酸碱指示剂（石蕊、酚酞）遇酸、碱溶液的变色情况；稀盐酸氢氧化钠溶液紫色石蕊试液红蓝无色酚酞试液无红2.常见的酸（1）常见酸的物理性质及用途：物理性质用途盐酸(HCl)浓盐酸是无色、有刺激性气味的液体，易挥发，在空气中冒白雾，有酸味。
重要化工产品。
用于金属表面除锈、制造药物（如盐酸麻黄素、氯化锌）等；人体胃液中的盐酸可帮助消化硫酸(H2SO4)浓硫酸是无色、粘稠、油状液体，有吸水性，溶于水时放热。
沉淀反应(免疫学检验课件)
一、单向琼脂扩散试验 （平板法）
抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形 成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。
本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性 均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。
单向免疫扩散试验
二、双向琼脂扩散试验 （平板法）
将抗原抗体分别加在琼脂糖凝胶不同的对应孔 中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白 色沉淀线。沉淀线的位置、形状以及对比关系，可 进行定性分析，如抗原或抗体的存在与否、相对含 量估计、相对分子量分析和性质分析。
方法评价：简便快速，只能定性。
二、絮状沉淀试验
原理：抗原溶液与相应抗体溶液混合，在电解质 存在的条件下，抗原与抗体结合出现可见的絮状 沉淀。由此可作为最适比测定的基本方法。
技术要点：
抗原稀释法
抗体稀释法
方阵滴定法
方法评价：简单、不需特殊设备，敏感度较低， 受抗原抗体比例影响非常明显。常用于滴定抗原 抗体反应的最适比例。
沉淀反应
前言
• 沉淀反应（precipitation )
•
可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适
当条件下而出现的沉淀现象。
•
沉淀反应分类
1.液相内沉淀试验 环状沉淀反应、絮状沉淀反应、 免疫比浊度分析。
2.凝胶内沉淀试验 单向琼脂扩散试验、双向琼脂 扩散试验。
3.凝胶免疫电泳技术 对流电泳技术、免疫电泳技 术、火箭电泳技术、免疫固定电泳技术。
三、免疫比浊度分析
根据抗原抗体在体内快速结合的原理
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
实验三蛋白质的性质实验(二)-沉淀反应
硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。
有机溶剂沉淀蛋白质
有机溶剂沉淀法
在蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，使蛋白 质沉淀析出的方法。
有机溶剂的作用
降低水的介电常数，消除或减少电荷间的相互作 用，使蛋白质失去水化层而聚集沉淀。
常用有机溶剂
乙醇、丙酮、甲醇等。
重金属盐沉淀蛋白质
01
02
03
重金属盐沉淀法
淀。
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的盐溶 液（如硫酸铵、氯化钠等），搅 拌均匀后静置，待蛋白质沉淀后
将上清液与沉淀分开。
结果分析
通过离心或过滤的方法收集沉淀， 测定沉淀的质量和蛋白质含量，
计算沉淀收率。
有机溶剂沉淀蛋白质
原理
有机溶剂能够降低水的介电常数， 使蛋白质分子间的静电荷作用减 弱，导致蛋白质凝聚成沉淀。
实验结果
在实验中，我们观察到加入有机溶剂后，蛋白质溶液逐渐浑浊，最 终形成白色沉淀。
结果分析
有机溶剂沉淀实验结果表明，有机溶剂能够有效降低蛋白质的溶解 度，促使其从溶液中沉淀出来。
重金属盐沉淀蛋白质结果分析
1 2
实验原理
重金属盐能够与蛋白质结合形成不溶于水的复合 物，从而降低蛋白质的溶解度，使其沉淀。
实验的应用与拓展
应用
本实验方法可用于初步分离和纯 化蛋白质，为后续蛋白质的结构 和功能研究提供基础。
拓展
本实验方法还可以应用于生物制 品、食品、药品等领域中的蛋白 质分离纯化，为相关产品的研发 和质量控制提供技术支持。
感谢您的观看
THANKS
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的有机溶 剂（如甲醇、乙醇等），搅拌均匀 后静置，待蛋白质沉淀后将上清液 与沉淀分开。
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沉淀反应
沉淀反应特点：
沉淀反应是指可溶性抗原和相应抗体在特定的条件下特异性结合所出现的沉淀现象。
沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素、核酸等可溶性的小分子物质。
一、概念
可溶性抗原与其相应抗体特异结合，出现肉眼可见的免疫复合物，称为沉淀反应。
沉淀反应属于体外抗原抗体反应，其反应也分两个阶段：第一阶段位抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小复合物，肉眼不可见；第二阶段为形成大的可见免疫复合物，如沉淀线、沉淀环等。
二、液相内的沉淀反应
液相内的沉淀反应类型有絮状沉淀反应、环状沉淀反应和免疫浊度试验。
1、絮状沉淀反应在电解质溶液中，可溶性抗原与相应抗体特异性结合，当抗原和抗体
分子比例合适的时，可形成絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。
直接影响絮状沉淀的试验最重要的因素是抗原和抗体分子比例合适。
①抗原稀释法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗体反应
②抗体稀释法抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应
③方阵滴定法方阵滴定法即棋盘滴定法（二维的，既稀释抗原也稀释抗体）
2、环状沉淀反应先将适量已知抗血清价值毛细玻璃管（2~3mm）底部，再沿管壁缓缓
加入等体积待测样品溶液，使样品与抗血清分层清晰。
如果样品中有与已知抗体对应的可溶性抗原，会在两种液体的交界面出现白色沉淀环。
3、免疫浊度试验
⑴原理：在特殊缓冲液中，分子比例合适的可溶性抗原与相应抗体形成抗原抗体复合物，使反应液出现浑浊，其浊度与免疫复合物的量成正比，利用光学测量仪器结合自动分析检测系统检测，并与一系列的标准品对照，即可计算出被检抗原或抗体的含量。
免疫浊度法按照仪器设计的不同，分为使用透射比浊仪的免疫透射比浊法和使用散射比浊仪的免疫散射法。
免疫浊度法可用于液体中的微量抗原、抗体及小分子半抗原（如药物等）的定量检测。
其优点是自动检测、操作简便快速、适合大批量标本检测、灵敏度高（可达毫微克水平）、且无放射性污染。
A、免疫透射比浊法原理及用途：当抗原抗体特异结合形成IC时，溶液浊度增加。
到一定波长的光线通过此溶液时，由于溶液中IC吸收光而导致透光量减少，利用透射比浊仪测量出溶液的入射光衰减，求得的溶液吸光度（A）可用于表示浊度。
在一定范围内A值与IC 值成正相关，若固定抗体量，则根据A值可以推算出抗原的量。
免疫透射法快速，检测可进行自动化，常用于临床体液蛋白的检测。
B、免疫散射比浊法原理及用途：当光束沿水平轴照射被检溶液时，碰到小颗粒的IC可导致光线偏转（光散射），用散射比浊仪可测定溶液散射光强度（I）。
当入射光波长固定时，I
值与IC值量成正比，即形成的IC越多散射光强度越强。
免疫散射比浊法又分为速率散射比浊法和终点散射比浊法。
C、免疫胶乳浊法原理及用途：将抗体吸附于胶乳颗粒表面，当与抗原结合时，胶乳颗粒发生凝聚，使透过光减少，吸光度值与胶乳凝聚物的两成正相关。
根据标准曲线即可得知待测标本抗原含量。
⑵直接影响浊度试验最重要的因素是
①抗原和抗体分子比例合适。
当反应液中抗原过量时，形成的IC（免疫复合物）分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。
当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。
②抗体的质量
免疫比浊法要求抗体的特异性强、效价高、亲和力强、并使用R型抗体（rabbit 来源兔子，量少，一般用于诊断；与之相对应的事H型抗体，horse 来源于马的抗体，量大，一般用于免疫的治疗）
④抗原抗体反应的溶液
抗原抗体反应液的最适PH值为6.5~8.5，一般常用PBS磷酸盐缓冲液作为免疫比浊法的反应液
⑤增浊剂
某些非离子型亲水剂对促进IC的形成有显著地增强作用，如聚乙二醇（PEG）、吐温-20
其作用是消除蛋白质（抗原或抗体）分子周围的电子云和水化层，促进抗原抗体分子靠近，结合形成大分子复合物。
三、凝胶内沉淀试验（固体内）
凝胶内沉淀试验是利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶内扩散，形成浓度梯度，在抗原与抗体浓度比例合恰当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。
凝胶的支持物的种类有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）等（前两者颗粒较大，分辨率较低，适合检测颗粒较大的抗原抗体复合物，后两者反之。
）
凝胶内沉淀反应类型有单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。
1、单向琼脂扩散试验是在琼脂凝胶内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂凝胶内自由扩散，如抗原和抗体特异结合，则可在分子比例合适处形成沉淀环。
⑴试管法：将一定量的抗体均匀混入约50℃的0.7%琼脂糖溶液中，注入小试管内，待琼脂糖冷却凝固后，在凝胶上层加抗原溶液，使待测抗原向下在凝胶中自由扩散，在抗原抗体分子比例恰当的位置形成沉淀环。
（少用）
⑵平板法：将一定量的抗体均匀混入月50℃的0.9%琼脂糖溶液中，迅速倾注在平板玻片上使其冷凝为凝胶板。
在此凝胶板上打孔，在孔中加入待测抗原，当抗原从孔内向外自由扩散时，如能和琼脂胶中的相应抗体特异结合，24~48h后则可形成沉淀环。
沉淀环直径与抗原浓度成正比，测定环的直径即可根据标准曲线计算标本中待测抗原的浓度。
①Mancini曲线适用于大分子抗原和长时间扩散（>48h）的结果，沉淀环的直径的平方
与抗原浓度呈线性关系
②Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理，用半对数纸画线，浓度对数与扩散环直径呈线性关系。
影响因素
①抗血清必须特异性强、效价高、亲和力强，在良好条件下保存
②每次测定都必须作标准曲线
③每次测定时必须用质控血清作质控
④注意双环现象（出现了两种抗原性相同成分）
⑥应用单克隆抗体测量多态性抗原时，测定值偏低；用多克隆抗体测量单克隆病时，测定
值偏高。
2、双向扩散试验
双向扩散试验是让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散，在比例恰当之处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。
①试管法：在试管中，先加入含已知抗体的琼脂糖凝胶，凝固后再加一层普通琼脂，最后
加入含有可溶性抗原的溶液，让下层抗体和上层抗原向中间琼脂凝胶层中自由扩散，在抗原与抗体分子比例合适处形成沉淀环。
②平板法：是检测抗原抗体的最基本、最常见的方法之一。
在琼脂板上相距适当地打一对孔（或者梅花孔、双排孔、三角孔等），在孔中分别加入可溶性抗原或抗体放置湿盒37℃18~24h后，当两者自由扩散区域相交时可特异性结合，在抗原抗体分子比例合适处可成肉眼可见的沉淀线。
根据沉淀先的位置可作如下分析：
A、抗原性质分析：特异性相对应的一对抗原与抗体只能形成一条沉淀线，两条沉
淀线如果完全平滑吻合，可判定两种抗原同一，如不吻合可判定非同一，若部
分吻合则判定为两种抗原部分成分相同。
B、分析抗原或抗体的相对分子量：两孔间沉淀弧一般弯向分子量大的蛋白质一方，
若为直线，说明抗原与抗体分子量非常接近或相等。
C、推测抗原或抗体相对含量：一般情况下，沉淀线靠近抗原孔提示抗体量大，沉
淀线靠近抗体孔则提示抗原量大。
不出现沉淀线则表明无相对应的抗原或抗体
或者抗原过量
D、测定抗体效价：不同浓度抗体与定量抗原双向自由扩散（抗体稀释法、抗原稀
释法、棋盘法），出现抗原抗体沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。