高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺-最新文档资料
高效液相色谱_电化学检测法测定生_省略_样品中单胺类神经递质及其代谢产物_杨佳凤
单胺类神经递质及其代谢产物包括去甲肾上腺素（ＮＥ）、５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）、高香草酸（ＨＶＡ）、多巴胺（ＤＡ）、５－羟色胺（５－ＨＴ）。
它们是一类具有广泛生物学活性的物质，既是人体内一类非常重要的神经递质，在神经系统支配体内各个器官，调节各个系统的多种生理功能中处于关键地位［１］，也是重要的激素物质，它们和神经冲动、行为及大脑皮质的觉醒和睡眠节律等都有关系，在神经系统中起重要调节作用［２］。
近年来发现病理情况下它们与脑血管病、脑外伤关系密切，过量的单胺类神经递质能够产生大量的活性氧物质，引起神经细胞凋亡，其中一些疾病特别如帕金森病、高血压、交感神摘要：［目的］建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法。
［方法］色谱柱采用ＷａｔｅｒｓＣ１８反相色谱柱（３．９ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），流动相为水相（每５００ｍＬ中含辛烷磺酸钠１．２５ｇ，磷酸二氢钾６．８ｇ，乙二胺四乙酸１８ｍｇ，ｐＨ值３．３）∶甲醇∶乙腈＝７８∶１９∶３，流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３５℃；电化学检测器工作电极为玻璃碳电极，参比电极为银／氯化银（Ａｇ／ＡｇＣｌ）电极，工作电压为０．７Ｖ。
［结果］５种物质保留时间分别为：去甲肾上腺素３．６ｍｉｎ，５－羟吲哚乙酸４．５ｍｉｎ，高香草酸５．２ｍｉｎ，多巴胺６．２ｍｉｎ，５－羟色胺１１．９ｍｉｎ；线性范围均为２０～１０００μｇ／Ｌ，最低检测限为４～８μｇ／Ｌ。
［结论］此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物，简便，快速且灵敏度高。
关键词：高效液相色谱－电化学检测法；单胺类神经递质；代谢物中图分类号：Ｒ２８４．１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３－９０４３（２００７）０４－０１９２－０４ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏａｍｉｎｅｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒａｎｄｉｔｓｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎＹＡＮＧＪｉａ－ｆｅｎｇ，ＬＩＪｕａｎ，ＹＡＮＧＨｏｎｇ，ｅｔａｌ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＴＣＭＦｏｒｍｕｌａｅ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＴＣＭ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴＣＭ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１９３，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ａｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅＨＰＬＣ－ＥＣＤｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｍｏｎｏａｍｉｎｅｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒａｎｄｉｔｓｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］ＴｈｅＬＣｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＷａｔｅｒｓ＠ＯＤＳＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（３．９×５００ｍｍ，５μｍ）．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆＭｅｔｈａｎｏｌ－Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－Ｗａｔｅｒｐｈａｓｅ（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＢ８１．２５ｇ，ＫＨ２ＰＯ４６．８ｇ，ＥＤＴＡ１８ｍｇｉｎ５００ｍＬｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐＨ＝３．３）＝１９∶３∶７８．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓａｔａｆｌｏｗ－ｒａｔｅｏｆ０．８ｍＬ／ｍｉｎ．ＴｈｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｏｒｗａｓｅｑｕｉｐｐｅｄｗｉｔｈａｇｌａｓｓｃａｒｂｏｎｗｏｒｋｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｎｄａＡｇ／ＡｇＣｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅ．Ｔｈｅｗｏｒｋｉｎｇｖｏｌｔｗａｓ０．７Ｖ．Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｋｅｐｔａｔ３５℃．［Ｒｅｓｕｌｔｓ］Ｔｈｅｉｒｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｗｅｒｅ３．６ｍｉｎｆｏｒＮＥ，４．５ｍｉｎｆｏｒ５－ＨＩＡＡ，５．２ｍｉｎｆｏｒＨＶＡ，６．１ｍｉｎｆｏｒＤＡａｎｄ１１．９ｍｉｎｆｏｒ５－ＨＴｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｅｆｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗｅｒｅａｌｌｆｏｕｎｄｔｏｂｅｌｉｎｅａｒｏｖｅｒａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅｏｆ２０～１０００μｇ／Ｌ．Ｔｈｅｌｏｗｌｉｍｉｔｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｗａｓ４～８μｇ／Ｌ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ＴｈｅＨＰＬＣ－ＥＣＤｍｅｔｈｏｄｗａｓｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒ－ｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏａｍｉｎｅｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒａｎｄｉｔｓｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ－ＥＣＤj ＭｏｎｏａｍｉｎｅＮｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒj Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ高效液相色谱－电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物G杨佳凤，李娟，杨虹，潘桂湘，高秀梅G 基金项目：国家自然科学基金（３０６７２６３１）。
高效液相色谱同时检测生物样本中8种单胺类神经递质
分析化学 ( FENX I HUAXUE) 研究报告
第 3期
2009年 3月
Chinese Journal of Analytical Chem istry
330 8种单胺类神经递质
赵焕英 1, 2 段春礼 1 范春香 1 刘 琦 1 张 韬 1 杨 慧 3 1
将标准品定量混合并用标准品溶液稀释得到一浓度系列 ,取 20 μL 进样 ,对上述系列浓度各测定 3 次后 ,取其峰面积的平均值 ,以浓度 Y对峰面积 X 回归 ,各种物质的线性范围如表 1,相关系数都在 01994～0. 999之间 。当 S /N = 3时 , 检出限达 pmol/L 水平 。取混合标样 ,在含 8%甲醇流动相下 ,以 014 mL /m in固定流速连续进样 6 次 , 保留时间 RSD 为 0. 24% ～0. 68% ; 峰面积 RSD 为 0. 08% ～ 0143% ,重现性好 。将处理后的 1 份样品分成 5 份 ,其中 1 份作本底量 ,另外 4 份分别添加已知量的 8种标准液 。分别测出 8种物质在各样品中的含量 ,再根据检测本底量计算出 8种物质的回收率及标 准偏差 。
将动物快速断头 ,取脑 ,置于冰上剥离所要组织部位 ;称重后加入组织裂解液 ( 0. 01% L 2半胱氨酸 , 0. 2 mmol/L HC lO4 , 0. 5 mmol/L Na2 EDTA ) ,置 1. 5 mL 离心管中充分匀浆 ,然后再超生破碎两次 ,离心
2008208226收稿 ; 2008210208接受 本文系国家重点基础研究发展计划 (973 No. 2006CB500706) 、国家自然基金项目 (No. 30670655)和北京市教育委员会科技发展计划 面上项目 ( KM200610025002) 3 E2mail: zhaohy75@ sina. com
高效液相色谱—电化学检测法测定尿中多巴胺的含量
高效液相色谱—电化学检测法测定尿中多巴胺的含量
宋宁宁
【期刊名称】《中国职业医学》
【年(卷),期】1999(26)4
【总页数】2页(P64-64)
【关键词】高效液相色谱;尿;多巴胺;含量
【作者】宋宁宁
【作者单位】广西药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R446.122
【相关文献】
1.高效液相色谱-电化学法测定大鼠脑脊液中多巴胺含量的研究 [J], 黄小莹;张黎君;
2.高效液相色谱-电化学检测法测定尿中8-羟基脱氧鸟苷含量 [J], 王旗;贾光;闫蕾;王昕虹
3.高效液相色谱-电化学法测定大鼠脑脊液中多巴胺含量的研究 [J], 黄小莹;张黎君
4.用离子交换法预处理的高效液相色谱-电化学检测法测定尿中儿茶酚胺 [J], 蔡金莲;章连;赵伟康
5.用高效液相色谱电化学检测法测定鸡蛋中多巴胺的残留量 [J], 刘振秀;李德发因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺
高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺作者：张庆云高永光蔡美娜于丽伟梁国欣赵冠楠来源：《科学大众·教师版》2015年第07期摘要：多巴胺是人脑中一种重要的神经递质，帕金森病等神经系统病变与其含量异常有密切的关系。
目前常用的多巴胺检测方法有光谱法、高效液相色谱法、化学修饰电极法、传感器法、毛细管电泳法，本文就高效液相色谱法做一综述。
关键词：高效液相色谱法；多巴胺；检测中图分类号：R742.5 文献标识码：A 文章编号：1006-3315（2015）07-188-001多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。
另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。
所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。
本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA 的检测方法。
近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。
高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。
CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。
儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。
吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。
高效液相色谱法快速测定脑梗塞模型大鼠脑组织中多胺的含量
高效液相色谱法快速测定脑梗塞模型大鼠脑组织中多胺的含量何颖娜;尚京川;杨志强【摘要】目的:建立一种简便、灵敏和快速分离测定大鼠脑组织中腐胺、精脒和精胺等多胺含量的高效液相色谱法.方法:采用苯甲酰氯作为衍生化试剂,以1,6-己二胺为内标,采用polygocyl(250×4.6 mm5 μm)C18色谱柱,流动相为甲醇-水(62:38 V/V),流速1.0 mL/min,检测波长229 nm.结果:本法线性范围是1～2 000/mL,回收率大于90％.日内和日间变异系数为1.5％～4.2％.最低定量浓度为1 nmol/mL.结论:该方法符合生物样品分析要求,为脑组织中多胺的含量测定提供了一种简便、准确、灵敏度高的分析方法.【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2012(027)006【总页数】4页(P538-541)【关键词】多胺;高效液相色谱;固相萃取【作者】何颖娜;尚京川;杨志强【作者单位】河北医科大学中医学院,河北石家庄050091;重庆医科大学药物化学和生物材料研究室,重庆400016;河北瑞洲生物科技有限公司,河北石家庄050021【正文语种】中文【中图分类】R741多胺(polyamines)是指以腐胺(putrescine)、精胺(spermine)和精眯(spermidine)为代表的多个氨基的生物原物质。
多胺做为体内促进细胞生长的重要物质之一，对细胞的生长、增殖及组织的再生起着关键性作用。
在多种病理情况下(如肿瘤、脑损伤等)，多胺的代谢可发生明显的紊乱。
近年来的研究表明:脑组织的中多胺代谢的紊乱与多种脑损伤有密切关系，且损伤的程度不同变化不一，因此可以作为脑损伤严重程度的敏感指标［1］。
为了探讨脑梗塞后脑组织中多胺的含量变化，本文提出一种简便、灵敏、快速的多胺检测方法，用于大鼠脑组织中多胺含量的测定，获得满意的结果。
美国Angilent 1100高效液相色谱仪，UV 1100紫外检测器，Model TJ-R离心机(美国贝克曼公司)，QL-901漩涡混匀器(江苏海门市琪琳医用仪器厂)，固相萃取仪(美国安捷伦公司)，Bond-Elut C18固相萃取小柱(美国安捷伦公司)。
人体血液中多巴胺的正常浓度_解释说明
人体血液中多巴胺的正常浓度解释说明1. 引言1.1 概述多巴胺是一种重要的神经递质，它在人体中扮演着重要的角色，参与调节许多生理和心理过程。
正常的多巴胺浓度对于维持身体的健康和功能至关重要。
因此，了解人体血液中多巴胺的正常浓度范围以及影响其水平变化的因素对于全面了解多巴胺在身体中的作用是必不可少的。
1.2 文章结构本文将分为五个部分来详细探讨人体血液中多巴胺的正常浓度。
首先，在“多巴胺概述”部分我们将介绍多巴胺的定义、功能、来源和合成以及作用机制和调节方式。
接下来，在“血液中多巴胺浓度的正常范围”部分，我们将探讨测量多巴胺浓度的方法和技术，不同年龄和性别人群内血液中多巴胺水平的变化情况，以及多巴胺浓度与健康状况之间可能存在的关系。
然后，在“影响血液中多巴胺浓度的因素”部分，我们将重点讨论遗传因素、环境因素以及药物和草药对多巴胺水平的影响。
最后，在“结论”部分，我们将总结文章的主要内容并提出进一步研究的建议。
1.3 目的本文旨在全面了解人体血液中多巴胺的正常浓度范围，并探讨影响其水平变化的因素。
通过对多巴胺在人体内部的作用机制和调节方式的深入研究，我们可以更好地理解多巴胺与健康之间的关系，并为未来相关疾病的预防、诊断和治疗提供理论基础。
通过对遗传、环境以及药物等因素对多巴胺水平影响的分析，我们可以更全面地认识到这些因素如何与正常血液中多巴胺浓度产生联系。
这对于促进个体健康管理以及丰富治疗方法都具有重要意义。
2. 多巴胺概述：2.1 多巴胺的定义和功能：多巴胺是一种重要的神经递质，属于儿茶酚胺类物质，它在中枢神经系统起着关键作用。
多巴胺被广泛分布于脑部不同区域，如大脑皮层、边缘系统、丘脑和基底节等。
多巴胺具有调节情绪、认知、运动控制、奖赏机制和内分泌等功能。
它在情绪方面发挥重要作用，参与快乐感、欣喜和满足感等积极体验的产生。
此外，多巴胺还参与记忆形成和学习过程。
2.2 血液中多巴胺的来源和合成：血液中的多巴胺主要源自两个渠道：一是由脑部释放到外周系统中；二是肾上腺髓质合成分泌到血液中。
固相萃取—高效液相色谱—荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质
固相萃取—高效液相色谱—荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质作者：高慧邢燕汪洋来源：《中国测试》2017年第02期摘要：建立一种快速、准确测定人体尿液中肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺及5-羟色胺4种单胺类神经递质的方法。
尿液样品以Waters Oasis WCX固相萃取柱富集，依次用2 mL 20 mmol/L乙酸铵-甲醇溶液、2 mL甲醇淋洗杂质，最后用5 mL含2%甲酸的乙腈水溶液（85∶15，ν∶ν）提取被分析物。
经Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分离，以甲醇与乙酸钠溶液的不同配比设置流动相梯度，在荧光检测激发波长280 nm，发射波长340 nm条件下，测定人体尿液中4种单胺类神经递质的含量。
结果表明：4种单胺类神经递质的回收率为92.2%～104.8%，相对偏差为1.6%～3.1%，检出限为0.002～0.05 μg/mL。
该方法稳定、快速、简便，能满足人体尿液中多种单胺类神经递质的含量测定。
关键词：单胺类神经递质；固相萃取；高效液相色谱；荧光检测文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2017）02-0060-040 引言神经递质是神经末梢分泌的化学物质，在化学突触传递中担当信使的作用。
单胺类物质（MNTs）是最早发现的一类神经递质，包括多巴胺（DA）、肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺（5-HT）。
MNTs在中枢神经系统、外周植物神经系统和激素介导的内分泌及外分泌活动中起着极其重要的作用[1]。
固相萃取（solid-phase extraction，SPE）是近年发展起来的一种样品预处理技术，主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更可将分析物与干扰组分有效分离，正成为复杂样品纯化、富集的有效手段。
人体尿液中单胺类神经递质含量的准确检测，对嗜铬细胞瘤等相关疾病诊断、新药研制开发、药物疗效评价等方面有重要意义。
高效液相色谱-荧光检测法同时测定大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质
高效液相色谱-荧光检测法同时测定大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质赵燕燕;刘丽艳;韩媛媛;白洁;杜光玲;高茜【摘要】A method for the simultaneous detection of L-dihydroxyphenylalanine , norepinephrine, epinephrine , dopamine ,3,4-dihydroxyphenylacetic acid , serotonin hydrochloride, 5-hydroxyindole-3-acetic acid and homovanillic acid in the different sections of mouse brains was established by using high performance liquid chromatography ( HPLC ) with fluorescence detection and isocratic elution. Before analysis, the sample was deproteinized by 0.60 mol/L perchloric acid, followed by adjusting pH value of the sample with 1.20 mol/LK2HPO4, addition of 0.1 g/L L-cysteine as antioxidant and 0.50 mmol/LNa2EDTA as complexing agent. The separation column was a Shim-packC18 column ( 250 m m ×4.6 mm, 5 μm ) and the mobile phase ( pH 3.8 ) was 13％ methanol containing 50 mmol/L citric acid , 50 mmol/L sodium acetate . 0.5 mmol/L 1-heptanesulfonic acid sodium salt, 5 mmol/L triethylamine and 0.5 mmol/L Na2EDTA. The flow rate was 1.0 mL/min. The injection volume was 10 μL. The emission and excitation wavelengths were 330 nm and 280 nm , respectively. Under the optimized separation conditions, the calibration curves showed good linearity within the concentrations of 1.25 -5000 μg/L ( r＞0.9999 ). The limits of detection were between 0.20 - 5.00 μg/L, the average recoveries were between 94.83％and 99. l9％. and the relative standard deviations ( RSDs ) were between0.08％ and 2.51％. The advantages of the method include easy and prompt operation,high recovery, low detection limit, good separation effect, high accuracy and precision. The method has practical value for detecting 8 monoamine neurotransmitters in biological samples.%采用高效液相色谱-荧光检测法同时测定了大鼠不同脑区中的左旋多巴、去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、二羟基苯乙酸、5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸及高香草酸8种单胺类神经递质的含量.样品经组织裂解液(0.60 mol/L 高氯酸、0.50 mmol/L Na2 EDTA、0.1 g/L L-半胱氨酸的混合水溶液)处理后,冷冻离心得到上清液;上清液中加入高氯酸沉淀剂(1.20 mol/L K2 HPO4、2.00 mmol/L Na2 EDTA的混合水溶液)处理后,冷冻离心、过滤.在该优化的色谱条件下,8种单胺类神经递质在1.25～5 000μg/L范围内线性关系良好(r＞0.999 9),最低检出限在0.20～5.00μg/L之间,平均回收率在94.83%～99.19%之间,相对标准偏差在0.08%～2.51%之间.该方法具有操作简便、快捷、回收率高、检出限低、分离度好、结果准确可靠等优点,可以用于体内8种单胺类神经递质的同时检测与分析.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2011(029)002【总页数】6页(P146-151)【关键词】高效液相色谱;荧光检测;单胺类神经递质;脑;大鼠【作者】赵燕燕;刘丽艳;韩媛媛;白洁;杜光玲;高茜【作者单位】河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学化学与环境科学学院,河北,保定,071002;河北大学化学与环境科学学院,河北,保定,071002;河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学化学与环境科学学院,河北,保定,071002【正文语种】中文【中图分类】O658单胺类神经递质包括儿茶酚胺类化合物(去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺)、吲哚胺类化合物(5-羟色胺)及相关代谢产物(多巴胺代谢前体左旋多巴、多巴胺代谢产物二羟基苯乙酸和高香草酸、5-羟色胺代谢产物5-羟基吲哚乙酸)。
高效液相色谱_荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质_张璐璐
学报Journal of China Pharmaceutical University2010，41（4）：367－371高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质张璐璐1，冯芳1，2*，叶小敏1，朱杰1，马冯飞1（中国药科大学1药物分析教研室；2药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京210009）摘要建立高效液相色谱-荧光分析方法，研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。
脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析，采用Lichrospher C18柱（250mmˑ4.6mm，5μm），流动相为pH 3.06缓冲液（含1mmol/L庚烷磺酸钠；30mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液）-甲醇（85ʒ15）；流速：1.0mL/min；柱温：35ħ。
荧光检测：激发波长为280nm，发射波长为315nm。
采用建立的方法，鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、酪氨酸、色氨酸、3，4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质；对NE、DA和5-HT进行定量研究，确定它们的线性范围分别为2.4 471.0ng/mL（r=0.9996），2.6 519.5ng/mL（r=0.9994），2.4 469.3ng/mL（r= 0.9991），日内、日间RSD均小于9.0%，准确度达到限度要求，提取回收率大于90%。
本法专属性好，准确度高，可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。
关键词高效液相色谱-荧光分析；单胺类神经递质；相关物质；脑组织中图分类号R917文献标识码A文章编号1000－5048（2010）04－0367－05Determination of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse brain tissue by HPLC-FLDZHANG Lu-lu1，FENG Fang1，2*，YE Xiao-min1，ZHU Jie1，MA Feng-fei11Department of Pharmaceutical Analysis;2Key Laboratory of Drug Quality Control and Pharmacovigilance(Ministry of Education)，China Pharmaceutical University，Nanjing210009，ChinaAbstract To establish an HPLC-FLD method for the investigation of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse frontal cortex，hippocampus，striatum，and hypothalamus.Mouse brain samples were depro-teinized by perchloric acid and analyzed.The separation was carried out on a Lichrospher C18column(250mmˑ4.6mm，5μm).The mobile phase was composed of pH3.06buffer(including1mmol/L heptanesulfonic acidsodium salt，30mmol/L NaH2PO4-H3PO4solution)and methanol in the ratio of85ʒ15;the flow rate was1.0mL/min and the column temperature was35ʎC.Fluorescence detection:the excitation and emission wavelengthswere set atλex =280nm，λem=315nm.Under the optimized conditions，norepinephrine(NE)，dopamine(DA)，5-hydroxytryptamine(5-HT)，3，4-dihydroxy-phenyl acetic acid(DOPAC)，5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA)，tyrosine(Tyr)，and tryptophan(Trp)in mouse brain were detected.NE，DA，and5-HT were quantified.The line-arity ranges of NE，DA，and5-HT were2.4-471.0ng/mL(r=0.9996)，2.6-519.5ng/mL(r=0.9994)，and 2.4-469.3ng/mL(r=0.9991)，respectively.The intra-and inter-day precision was always lower than9.0%．The accuracy could attain the demands and the absolute recovery values were always higher than90%．The pro-posed method has good specificity and accuracy.It could be used to analyze the content differences of monoamine neurotransmitters and related substances in different mouse brain areas.Key words HPLC-FLD;monoamine neurotransmitter;related substances;brain tissueThis study was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973858)763*收稿日期2010-03-12*通讯作者Tel：025－83271301E-mail：fengfang1@基金项目国家自然科学基金资助项目（No.30973858）学报Journal of China Pharmaceutical University第41卷单胺神经递质，如去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）是中枢神经系统中非常重要的生物活性物质，它们的前体是酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp），酸性代谢产物有3，4-二羟苯乙酸（DOPAC）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）等。
高效液相色谱_电化学法测定大鼠血液和脑组织中单胺类物质的含量
第25卷第2期2006年3月 分析测试学报FENXI CESH I X UEBAO(J ournal of Ins tru m en talAnal ys i s)V ol 25No 290~92高效液相色谱/电化学法测定大鼠血液和脑组织中单胺类物质的含量谭炳炎1,郑 琳1,冯 翔2(1.中山大学 公共卫生学院 中心实验室,广东 广州 510080;2.中山大学 公共卫生学院 营养学系,广东 广州 510080)摘 要:建立了高效液相色谱/电化学检测法测定大鼠脑组织和血液中单胺递质及其代谢产物的方法。
能同时测定去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、3,4-二羟基苯乙酸(DO PAC)、多巴胺(DA)、高香草酸(HAV)、5-羟色胺(5-HT),并能和内标3,4-二羟卞胺(DHBA)分离良好。
本方法快速、简便,回收率为92%~105%,线性范围2 8~680ng/mL,检出限为0 05ng(S/N=3)。
本方法已应用在服用中药的大鼠下丘脑组织及血液的测定中,数据显示,本法能满足测定要求。
关键词:高效液相色谱;电化学检测;单胺类神经递质中图分类号:O657 1 文献标识码:A 文章编号:1004-4957(2006)02-0090-03D eter m i nati on o fM onoa m i ne T rans m itters i n R at Blood and Brai n T issues byH i gh Perf or m ance L i qu i d Chro m atographyTAN B ing-yan1,Z H E NG Lin1,FE NG X iang2(1.Central L aboratory,Schoo l o f Pub lic H ealth,Sun Y at-sen U n i versity,G uangzhou 510089,China;2.D epart m ent o fNutritiona l Sc i ences,School o f Publi c H ea lth,Sun Y a t-sen U n i versity,G uangzhou 510089,Ch i na) Abstrac:t A m ethod was developed to deter m i n e m onoa m ine trans m itters and their m etabo lites in rat blood and brain tissues by h i g h perfor m ance li q u i d chro m atog raphy w ith electroche m i c al detection.No r-ep i n ephri n e(NE),ep i n rphri n e(E),3,4-d i h ydr oxypheny lacetic acid(DOPAC),dopa m ine hydrochlo-ride(DA),ho m ovan illi c ac i d(HVA),and5-hydr oxytrypta m i n e(5-HT)cou l d be deter m i n ed si m ulta-neously and disti n ctly separated fro m i n ter nal standar d(3,4-dihydroxybenzyla m ine,D H BA)by th is m ethod.The recoveries of these co mpounds w ere bet w een92%and105%and the li n ear range w as2 8-680ng/m L.The detecti o n li m itw as0 05ng(S/N=3).This m ethod was app lied to deter m i n i n gt h e m onoa m i n es i n hypothala mus tissues of rats upon taking traditional Ch i n ese m ed ici n e,and satisfac-to r y resu lts w ere achieved.Key words:H i g h perfor m ance li q u i d chr o m atography;E lectroche m i c al detecti o n;M onoa m ines单胺类神经递质包括去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E),多巴胺(DA),5-羟色胺(5-HT)等物质。
高效液相色谱_荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质
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安徽医科大学学报 A cta U n iversita tis M ed icina lis A nhu i 2009 Dec; 44 (6)
急性白血病 1 185例次住院患者血流感染特点及危险因素分析
秦 慧 ,杨明珍 ,宋万灯 ,武琳琳 ,缪华伟 ,程 歆 ,吴 炜 ,刘沁华 ,王永庆
安徽医科大学学报 A cta U n iversita tis M ed icina lis A nhu i 2009 Dec; 44 (6)
·773·
1. 4 统计学处理 数据结果以 x ±s表示 ,采用线 性回归最小二乘法计算单胺类神经递质的标准曲 线。
2 结果
2. 1 标准色谱图 实验得到各标准物质谱图见图 1, 3种标准物质都达到了基线分离 。得到了小鼠脑 组织匀浆样品的色谱图 (图 2) ,除了多巴胺前有一 大的未知峰与多巴胺未达到基线分离外 ,其余各种 化合物均达到基线分离 。标准液和脑匀浆样品中的 NE、DA 和 52HT的峰之间分离较好 (样品中 DA 与 杂质峰的分离尚有待改善 ) 。
相关系数 0. 999 7 0. 999 9 0. 998 9
2. 3 回 收率 和精 密度 的测 定 按 113 操 作 , 按 0110 g脑 (湿重 )加入 110 m l的比例加入低 、中 、高 浓度的标准溶液 ,于同日内分别测定 NE、DA 和 52 HT加入量的对照品脑组织匀浆样品 ,每种加入量样 品平行测定 5次 ,计算各种标准物不同浓度的脑组 织匀浆样品回收率 ,结果如表 3。连续测定混合标 准液 5次 , NE、DA 和 52HT的峰面积日内测定的相 对标准偏差分别为 217%、215%和 314%。
图 1 3种神经递质混合标准溶液色谱图 (1: NE; 2: DA; 3: 52HT)
光谱法检测大脑神经递质多巴胺
光谱法检测大脑神经递质多巴胺作者：张庆云蔡美娜程铭张丽赵朋董浩垚来源：《科学大众·教师版》2015年第07期摘要：多巴胺是人脑中一种重要的神经递质，帕金森病等神经系统病变与其含量异常有密切的关系。
目前常用的多巴胺检测方法有光谱法、高效液相色谱法、化学修饰电极法、传感器法、毛细管电泳法，本文就光谱法做一综述。
关键词：荧光法；化学发光法；检测中图分类号：O65 文献标识码：A 文章编号：1006-3315（2015）07-158-001多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。
另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。
所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。
本文就多巴胺的光谱法检测作一综述。
利用光谱法测定多巴胺是通过测定DA在被测定波长处的光吸收度来定量测定DA，包括荧光法和化学发光法等，这些方法简便、快速、有效，是DA检测中最常用的方法。
1.荧光法汤涛等[2]报道利用铁氰化钾氧化DA生成多巴胺三羟吲哚，再利用锌离子提高其荧光强度定量测定荧光，从而来测定DA。
这种方法不需要对DA进行分离纯化即可达到目的，操作简便易行，分析速度快，但灵敏度仍难以满足临床检验的需要。
研究发现，在碱性条件下，邻苯二甲醛和B-巯基乙醇（OPAME）可与DA发生化学反应生成一种异吲哚类荧光物质，经400nm光波激发，产生462nm荧光，荧光强度与DA的浓度在一定范围内呈良好的线性关系。
此种方法被称为荧光分光光度法，优点是线性范围宽，灵敏度较高，分析速度快，操作简便，无需昂贵的试剂和仪器。
目前，已成功应用于盐酸多巴胺在药物制剂中含量的测定。
多巴胺的测定.doc
荧光法测定大鼠脑组织和血液中单胺类物质的方法探讨：1、主要仪器：荧光分光光度计（日本产，SHIMADZU RF-5301 PC）；组织高速分散器（上海产，XHF-1）；冷冻离心机（上海产，TGL-16G）；恒温水浴箱；旋涡混合器等。
2、试剂：剂来源除标明外均为国产分析纯级，试剂配制使用双蒸水。
（1）标准品：重酒石酸去甲肾上腺素；盐酸多巴胺；5-羟色胺硫酸肌酐；5-羟吲哚乙酸为瑞士Fluka产品。
（2）混合标准储存液的配制：分别精确称取上述标准品各 50mg，用 0.01N 盐酸配制成 100 ml 混合标准储存液（500ug/ml），置4℃冰箱保存，临用前稀释成1.25ug/ml应用液。
（3）酸性正丁醇：每升正丁醇加入浓盐酸0.85ml，混匀。
（4）正庚烷。
（5）0.1% OPT-10N 盐酸溶液：邻苯二甲醛为瑞士 Fluka 产品，临用前用 10N 盐酸稀释成0.001% OPT-10N盐酸溶液。
（6）0.25%半胱氨酸溶液：用0.1N盐酸新鲜配制。
（7）碘试剂：配制0.02N碘液和5%碘化钠（以70%乙醇溶解），临用前以1∶1体积比混合。
（8） 1/15 M ，PH=7.2的磷酸盐缓冲液。
（9） 0.33M碳酸氢钠溶液。
（10）碱性亚硫酸钠溶液：25%亚硫酸钠与5N氢氧化钠在临用前以1∶9体积比混合。
（11）0.1M EDTA 试剂：用1M醋酸钠溶液配制，以10N氢氧化钠调节pH至7.0。
3、实验方法：⑴标本处理：大鼠断头处死，立即取血及脑组织。
脑组织用冰生理盐水冲洗，去除血膜、嗅球和小脑，沿脑中线剖开，取一半脑组织吸干水分称重，加入10倍体积的冰酸性正丁醇，用组织分散器匀浆备用。
血液静置凝固后用冷冻离心机分离血清，立即加入10倍体积冰酸性正丁醇摇匀。
⑵提取过程：同时制备标准管和空白管，与血、脑标本在相同条件下按下图流程进行提取，获得水相A和水相B。
⑶NE、DA的测定步骤：各管取水相A 0.5ml，按下列流程进行操作：①水相A 0.5ml＋1/15M 磷酸盐缓冲液 1.5ml＋0.1M EDTA 0.4ml＋碘液0.2ml②混匀、静置 3min＋碱性磷酸钠（新配）0.4ml③混匀、静置 3min+5N 醋酸 0.4ml④混匀，80℃水浴，冷却⑤测NE荧光测度，激发波长为 382/488⑥继续沸水浴 20min，冷却⑦测DA荧光测度，激发波长 325/385。
HPI.C-ECD法检测黑腹果蝇头部多巴胺含量
HPI.C-ECD法检测黑腹果蝇头部多巴胺含量摘要：本文采用Inertsil ODS-SP 5色谱柱，W ATERS ECD 2465检测器，以NaH2PO4、氯化钠、EDTA、辛烷磺酸钠、甲醇等组成的离子对试剂为流动相的高效液相色谱-电化学检测联用（HPLC-ECD 法）检测系统，建立了高灵敏度、高分离度检测模式生物明星黑腹果蝇的头部多巴胺的含量的方法，具有良好的实验研究意义。
关键词：高效液相色谱-电化学检测联用多巴胺能神经元多巴胺多巴胺(dopamine，DA)是模式生物黑腹果蝇多巴胺能神经元的一种重要的神经递质，其含量微小的变化，与很多神经系统的生理和病理生理有关。
因此，对果蝇头部DA含量动态的检测在多巴胺能神经元相关的疾病的研究中具有重要意义。
1 实验仪器和试剂日本岛津20A型高效液相色谱系统；美国W ATERS ECD 2465电化学检测器；分析天平（奥豪斯CP214）；PH值检测仪（赛多利斯PB-10酸度计）；KT-300Y超声波清洗机。
perchloric acid: sigma-aldrich 244252-100ML;Na-octylsulfonate:sigma74882-10G-F;EDTA-Na2:sigma 318892-500ML;甲醇:sigma 34860-4X4L-R;氯化钠、磷酸二氢钠均为国药分析纯。
2 高效液相色谱的条件（1）5L流动相的配制：①磷酸二氢钠（HPLC级）:0.25mol;②NaCl(HPLC级)：0.04mol;③EDTA-Na2[sigma: 318892-500ML]：0.05mol/L*10mL; ④Na-octylsulfonate[sigma 74882-10G-F]:2.7870g;⑤Methanol:625mL.用MilliQ水定容至5L,pH值=6.0,然后经0.22μm水相滤膜过滤。
（2）waters EC2465参数设置：Range=10nA,Ec=+640mV,Filt=5s, Temp=30℃（3）岛津高效液相色谱系统：流速1mL/min,样品保存温度4℃，进样5μL，分析时间35min。
氨基酸类神经递质含量测定
一、样品处理
方法1 方法 【高效液相色谱法检测小鼠脑组织中氨基酸类神经递质 】 脑组织称重， 倍体积的甲醇 脑组织称重，加入 9倍体积的甲醇 水，冰浴匀 倍体积的甲醇/水 离心，上清液低温保存。 浆；离心，上清液低温保存。 衍生化反应：小脑组织液加入乙睛，混匀离心， 衍生化反应：小脑组织液加入乙睛，混匀离心， 二硝基氟苯， 取上清液加入 NaHCO3和2,4 -二硝基氟苯，混匀， 二硝基氟苯 混匀， 暗中衍生 (水浴 65 ℃ )，进样。 水浴 ，进样。
方法5 方法 【高效液相色谱 - 质谱 - 质谱法测定脑组织中氨基酸类神经递质】 脑组织称重， 脑组织称重，加入 HCl，冰浴超声粉碎 匀浆 ，冰浴超声粉碎, 液加入内标，离心取上清加入甲醇 甲醇， 液加入内标，离心取上清加入甲醇，振荡 30 s， ， 离心，上清液备用。 离心，上清液备用。 衍生化反应：组织液60 吹干， 衍生化反应：组织液 ℃加热并 N2吹干，取 出后加入盐酸正丁醇 盐酸正丁醇， 出后加入盐酸正丁醇，60 ℃衍生化反应 30 min。 。 吹干，残渣用甲醇 醋酸铵水溶液 甲醇-醋酸铵 60 ℃ 加热并 N2吹干，残渣用甲醇 醋酸铵水溶液 溶解，过滤后待用。 溶解，过滤后待用。
二、测试方法
方法1 方法 【高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质 】 液相色谱仪系统：购自日本岛津， 液相色谱仪系统：购自日本岛津，RF-10AXL荧光 日本岛津 检测器 色谱条件：色谱柱为Agilent C18柱 色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱 (4.6 mm× 150mm，5µm)，采用梯度洗脱。流动相 × ， ，采用梯度洗脱。 缓冲液。 A为甲醇，流动相 为醋酸钠缓冲液。柱温 ℃，进 为甲醇，流动相B为醋酸钠缓冲液 柱温30℃ 样量20µL。 样量 。 荧光检测波长： 荧光检测波长：激发光波长为 340 nm，发射光 ， 波长为 450 nm。 。
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高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺
多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。
另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。
所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。
本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。
近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。
高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。
CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。
儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。
吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对
样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～
3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）
4.2%～10.3%。
衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。
这些试剂可用于尿样和一些经提纯的组织样品中的儿茶酚胺类物质的测定，但对血浆中CAs的测定灵敏度较低。
CAs与1，2一二苯基乙二胺有特异性反应，用离子交换树脂柱萃取，经过简单的提纯过程，就可以进行血浆、血红细胞和尿样中CAs的测定。
Nohta等用柱前衍生化方法测定了血浆和尿样中的CAs。
Ragab等用上述试剂作为HPLC法化学发光检测CAs 的灵敏前置柱衍生剂，测定了CAs和异丙肾上腺素，检出限为400～120amol。
目前，日本Hitachi公司已研制出基于1，2一二苯基乙二胺衍生化反应的HPLC法CAs自动分析仪，并已投放市场[5]。