斐林试剂与班氏试剂
【生、化】斐林试剂和班氏试剂
斐林试剂和班氏试剂斐林试剂和本宇试剂的使用方法及原理不尽相同。
斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂,二者的使用方法及原理、成分也有区别,下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。
斐林试剂和双缩脲试剂斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液(斐林试剂中还有酒石酸钾钠)和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同:(1)溶液浓度不同CuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05 g/mL;CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01 g/mL。
(2)使用原理不同斐林试剂是新配制的溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。
用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。
具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。
颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
(3)使用方法不同斐林试剂使用时,先等体积混合甲、乙两液,而后立即使用,反应需要加热(有时不加热也反应);双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。
斐林试剂和班氏试剂关于斐林试剂和班氏试剂,可用下面的例题引出其异同点:例:你可用什么方法,检验人的尿液中是否含有糖?答案:方法一:在试管中加入人的尿液0.1mL,加入班氏糖定性试剂1mL,混合均匀后,将试管放入盛有开水的烧杯中,加热煮沸1min~2min,若试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀,说明尿液中含有糖。
方法二:取少许尿液加水稀释后,加入刚配制好的斐林试剂,沸水浴加热后,若出现砖红色沉淀,则说明尿液中含有糖。
方法三:取少许尿液加水稀释后,加入少许Cu(OH)2悬浊液(新制)加热,若出现砖红色沉淀,则说明尿液中含有糖。
高中生物实验常用的试剂(归纳总结)
生物学中常用的试剂:1。
斐林试剂: 成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法:将斐林试剂甲液和乙液混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色。
2。
班氏糖定性试剂:为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
3。
双缩脲试剂:成分:0。
1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液).用法:向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀。
如待测中存在蛋白质,则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ:用法:取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色).5.二苯胺:用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色.6。
甲基绿:用于鉴定DNA.DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红:检测RNA,呈红色7、50%的酒精溶液:用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液:用于医学临床上的消毒灭菌.9、95%的酒精溶液:冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA10、15%的盐酸:和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11。
龙胆紫溶液或醋酸洋红:碱性染料,用于染色体染色时,前者呈深蓝色,后者呈红色改良苯酚品红染液:检测染色体,红色健那绿:检测线粒体,专一性让线粒体染色呈蓝绿色12。
20%的肝脏、3%的过氧化氢、3。
5%的氯化铁:用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。
(新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶)13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液:用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验.14.碘液:用于鉴定淀粉的存在。
遇淀粉变蓝。
遇糖原变红15。
丙酮:用于提取叶绿体中的色素16。
层析液:(成分:20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93号汽油)可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开.17。
二氧化硅:在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分.18。
班氏试剂的配制与鉴定结果
班氏试剂的配置取无水硫酸铜1.47g,溶于100ml热水中,冷却后稀释到150ml,取柠檬酸钠173g,无水碳酸钠100g和600ml水共热,溶后冷却并加水至 850ml,再将冷却的150ml硫酸铜倾入即可。
鉴定糖尿的结果沸水浴加热后的现象葡萄糖含量(g/dl)透明蓝色无加热时无变化,仅冷却后有少量沉淀微量,约0.5以下加热1分钟后即出现少量黄绿色沉淀少量,约 0.5-1加热10-15秒后即出现土黄色沉淀中量,约1-2加热时很快出现多量砖红色沉淀大量,约2以上班氏试剂与斐林试剂比较:首先,两者的配方不一样。
斐林试剂主要由质量浓度为0.1gmL-1的NaOH溶液和质量浓度为0.05gmL-1的CuSO4溶液配制而成。
其中0.1gmL-1的NaOH溶液称为斐林试剂甲,0.05gmL-1的CuSO4溶液称为斐林试剂乙。
而班氏试剂的配方为:①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;②50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜,制成CuO4溶液;③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠?Na2CO3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。
其次,两者在反应原理上略有差别。
利用斐林试剂鉴定时,斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。
而班氏试剂中Cu(OH)2的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,与柠檬酸钠?Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2+和OH-结合,生成Cu(OH)2,Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基反应产生砖红色沉淀。
第三,两种试剂的保存方式不同。
斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠?Na2CO3为一对缓冲物质,产生的OH-数量有限,与CuSO4溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。
班氏试剂与菲林试剂的比较
班氏试剂与菲林试剂的比较班氏试剂的配置取无水硫酸铜1.47g,溶于100ml热水中,冷却后稀释到150ml,取柠檬酸钠173g,无水碳酸钠100g和600ml水共热,溶后冷却并加水至850ml,再将冷却的150ml硫酸铜倾入即可。
鉴定糖尿的结果沸水浴加热后的现象葡萄糖含量(g/dl)透明蓝色无加热时无变化,仅冷却后有少量沉淀微量,约0.5以下加热1分钟后即出现少量黄绿色沉淀少量,约0.5-1加热10-15秒后即出现土黄色沉淀中量,约1-2加热时很快出现多量砖红色沉淀大量,约2以上班氏试剂与斐林试剂比较:首先,两者的配方不一样。
斐林试剂主要由质量浓度为0.1g·mL-1的NaOH溶液和质量浓度为0.05g·mL-1的CuSO4溶液配制而成。
其中0.1g·mL-1的NaOH溶液称为斐林试剂甲,0.05g·mL-1的CuSO4溶液称为斐林试剂乙。
而班氏试剂的配方为:①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;②50mL 加热的水中加入8.5g无水硫酸铜,制成CuO4溶液;③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠?Na2CO3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。
其次,两者在反应原理上略有差别。
利用斐林试剂鉴定时,斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。
而班氏试剂中Cu(OH)2的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,与柠檬酸钠?Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2+和OH-结合,生成Cu(OH)2,Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基反应产生砖红色沉淀。
第三,两种试剂的保存方式不同。
斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈反应产生Cu(OH)2,Cu(OH)2很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠?Na2CO3为一对缓冲物质,产生的OH-数量有限,与CuSO4溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。
高中生物实验试剂配制方法
高中生物实验试剂的配制、用途及用法1、斐林试剂——用于可溶性糖的鉴定配制:试剂甲:取10g氢氧化钠放入容量瓶(或有刻度的烧杯)中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂甲。
试剂乙:取5g硫酸铜放入容量瓶(或有刻度的烧杯)中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。
使用:用时临时配制,将4~5滴乙液滴入2mL甲液中,现配现用。
2、班氏试剂——用于可溶性糖的鉴定配制:称取86.5g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶于400 mL水中。
另称8.65g 硫酸铜溶于50mL热水中。
将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠——碳酸钠溶液中,边加边搅拌,搅匀后补足水量至500mL。
如有沉淀可过滤, 此混合液可长期使用。
3、双缩脲试剂——用于蛋白质的鉴定配制:A液:取10g氢氧化钠放入容量瓶(或有刻度的烧杯)中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。
B液:取1g硫酸铜放入容量瓶(或有刻度的烧杯)中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。
使用:用时先加A液2mL摇匀后,再滴入3~4滴B液,摇匀观察。
4、苏丹Ⅲ试剂——用于脂肪的鉴定配制:将0.1g苏丹Ⅲ干粉溶于100mL体积分数为95%的酒精中,加热使其充分溶解,成为饱和乙醇溶液,过滤后倒进试剂瓶密封保存备用,可保存数月。
5、苏丹Ⅳ试剂——用于脂肪的鉴定配制:将0.1g苏丹Ⅳ干粉溶于50mL丙酮中,再加入体积分数为70%的酒精50mL,充分混合后即可使用。
6、二苯胺试剂——用于DNA的鉴定A液:将1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
费林试剂、班氏试剂与尿糖试纸
费林试剂、班氏试剂与尿糖试纸这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在,在医学上用来检验糖尿病,其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化,但成份略有不同:
费林试剂:即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液。
分为菲林试剂A和费林试剂B,A为CuSO4溶液,B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液,使用时将A、B
等体积混合即成费林试剂。
班氏试剂:即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液,又叫本尼迪克特(Benedict)试剂,它与醛反应的结果是与费林试剂一致的,只是比费林试剂更稳定,所以在临床化验中更常使用。
尿糖试纸:又叫硫酸铜试纸,呈白色, 带兰色斑点,用于糖尿病患者的尿糖测试。
每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克, 碳酸钠80毫克,氢氧化钠235毫克。
尿糖试纸法快速、方便,试纸的正确使用方法为:将试纸条放在尿液中浸湿,一秒钟后取出,在一分钟内观察试纸的颜色,并与标准色板对照,根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度。
斐林试剂和班氏试剂
斐林试剂和班氏试剂斐林试剂和班氏试剂是生物化学领域中常用的实验试剂,它们在分子生物学研究、酶学研究、生物医学和生物工程等领域都有着广泛的应用。
本文将分别介绍斐林试剂和班氏试剂的特点、用途和操作方法。
一、斐林试剂斐林试剂是一种常用的酶标仪底物,它的化学名称为p-氨基苯甲酸亚甲基酯。
斐林试剂的特点是具有良好的溶解性和稳定性,且在酶催化反应中产生的产物具有较高的吸光度。
因此,斐林试剂常用于测定酶的活性、酶动力学研究以及酶抑制剂的筛选。
斐林试剂在酶活性测定中的应用主要基于其与酶催化产物的反应。
当酶催化反应进行时,斐林试剂被酶催化生成对应的产物,该产物能与斐林试剂反应生成有色产物,使溶液颜色发生明显的变化。
通过测定产物的吸光度变化,可以间接测定酶的活性。
操作斐林试剂时,首先需要将其溶解于适当的溶剂中,常用的溶剂有甲醇、乙醇等。
然后将溶解好的斐林试剂加入酶反应体系中,反应一定时间后,通过分光光度计测定产物的吸光度变化,从而计算出酶的活性。
二、班氏试剂班氏试剂是一种常用的酶抑制剂,其化学名称为苯胺甲酸。
班氏试剂的特点是具有较强的抑制酶活性的能力,可以选择性地抑制一些特定的酶。
因此,班氏试剂广泛应用于酶抑制剂的筛选、酶机制研究以及药物研发等领域。
班氏试剂的抑制机制主要是通过与酶结合形成酶-底物复合物,从而阻碍酶底物的结合和催化反应的进行。
班氏试剂与酶之间的结合是可逆的,一般情况下,班氏试剂的抑制效果与其浓度成正相关。
因此,在实验中可以通过调节班氏试剂的浓度来研究酶的抑制效果。
操作班氏试剂时,首先需要将其溶解于适当的溶剂中,常用的溶剂有甲醇、乙醇等。
然后将溶解好的班氏试剂加入酶反应体系中,反应一定时间后,通过测定酶活性的变化来评估班氏试剂的抑制效果。
总结斐林试剂和班氏试剂是生物化学研究中常用的实验试剂。
斐林试剂主要用于测定酶的活性和酶动力学研究,而班氏试剂主要用于酶抑制剂的筛选和酶机制研究。
在实验操作中,需要将斐林试剂和班氏试剂溶解于适当的溶剂中,然后加入酶反应体系中进行实验。
药物分析实验-药物鉴别
药物分析鉴别方法总结一、葡萄糖注射液1、用斐林试剂(0.1 g/ml的氢氧化钠和0.05 g/ml的硫酸铜试剂)反应生成砖红色沉淀加热的条件下原理:具有醛基,醛基遇斐林试剂有砖红色沉淀生成。
2、班氏试剂:在试管中加入葡萄糖注射液0.1mL,加入班氏糖定性试剂1mL,混合均匀后,将试管放入盛有开水的烧杯中,加热煮沸1min~2min ,若试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀,说注射液中含有葡萄糖。
3、可用溴水来鉴别葡萄糖,葡萄糖能被溴水氧化成葡萄糖酸,使溴水褪色。
原理:葡萄糖的醛基具有还原性,溴水能将其氧化,使溴水褪色。
结果:三小时后,溴水褪色。
4、分光光度法:利用分光光度计测量容易的吸光度,与标准溶液吸光度比较。
5、银镜反应:葡萄糖分子中的醛基,有还原性,能与银氨溶液反应:被氧化成葡萄糖酸。
6、比旋度测定法:原理:葡萄糖分子结构中有 5 个不对称碳原子,具有旋光性,为右旋体。
比旋度是旋光性物。
7、红外光谱:测量样品溶液的红外光谱,与标准溶液的红外光谱图比较。
8.薄层色谱法9.高效液相色谱法二、阿司匹林肠溶片1、三氯化铁法:本品水溶液加热放冷后,与三氯化铁溶液反应,呈紫堇色。
原理:受热分解产生水杨酸和乙酸,水杨酸的酚羟基与三氯化铁,呈紫堇色。
2、水解反应:阿司匹林与碳酸钠溶液加热水解,得水杨酸钠及醋酸钠,加过量稀硫酸酸化后,则生成白色水杨酸沉淀,并产生醋酸的臭气。
3、红外光谱法4、薄层色谱5、高效液相色谱法:在含量测定项下记录的色谱中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
6.紫外光谱法7.核磁共振法三、维生素 E 软胶囊1. 氧化还原法:原理:维生素 E 侧链上的叔碳原子易自动氧化,生成相应的羟基化合物,本品的乙醇溶液与硝酸供热,则生成生育酚,溶液显橙红色。
2、维生素 E 具有较强的还原性,与三氯化铁作用,被氧化成生育酚,后者与2,2'-联吡啶作用生成血红色的络合物。
3、薄层色谱法,结果供试品溶液色谱中在与对照品溶液色谱相应位置上显深蓝色的斑点,空白对照无干扰。
高中生物实验常用的试剂(归纳总结)
生物学中常用的试剂:1.斐林试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法:将斐林试剂甲液和乙液混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色。
2.班氏糖定性试剂:为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
3.双缩脲试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法:向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀。
如待测中存在蛋白质,则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ:用法:取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5.二苯胺:用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。
6.甲基绿:用于鉴定DNA。
DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红:检测RNA,呈红色7、50%的酒精溶液:用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液:用于医学临床上的消毒灭菌。
9、95%的酒精溶液:冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA10、15%的盐酸:和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11. 龙胆紫溶液或醋酸洋红:碱性染料,用于染色体染色时,前者呈深蓝色,后者呈红色改良苯酚品红染液:检测染色体,红色健那绿:检测线粒体,专一性让线粒体染色呈蓝绿色12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁:用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。
(新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶)13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液:用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
14.碘液:用于鉴定淀粉的存在。
遇淀粉变蓝。
遇糖原变红15.丙酮:用于提取叶绿体中的色素16.层析液:(成分:20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93号汽油)可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开。
17.二氧化硅:在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分。
斐林试剂与班氏试剂
斐林试剂与班氏试剂高中生物教材(实验修订本)的有关实验中用到了斐林试剂和班氏试剂,二者都可用于鉴定可溶性还原糖,但两种试剂的配制、反应原理及使用方法均有所不同,教材只介绍了斐林试剂的配制和使用方法,对班氏试剂的配制和反应原理没做任何解释。
班氏试剂是如何配制的?与斐林试剂的配制、反应原理有何不同?学生对此有较多疑问,现解释如下。
1.斐林试剂的配制、使用方法及反应原理斐林试剂由甲液(0.1g/mlNaOH)和乙液(0.05g/mlCuSO4)组成,用于鉴定可溶性还原糖,使用时将等量的甲、乙液混合均匀,取适量加入待测液,此时溶液呈蓝色。
沸水浴加热2min左右,即可观察到有砖红色沉淀生成,说明待测液中有可溶性还原糖。
甲、乙液混合时,生成了Cu(OH)2,而新制的Cu(OH)2在还原性糖的作用下,被还原为CuO砖红色沉淀。
实验过程中,必须先把甲、乙液等量混合均匀,使Cu(OH)2充分生成。
如果先后或者分别把NaOH和CuSO4溶液加入到含有还原性糖的组织提取液中,其中的有机酸会与NaOH迅速反应,使反应物中没有Cu(OH)2或者Cu(OH)2量不足,从而使还原性糖与Cu(OH)2的反应不能进行或现象不明显,影响还原性糖的鉴定。
2.班氏试剂的配制、使用方法及反应原理班氏试剂一般用于尿糖的测定,有时也用于其他实验中可溶性还原糖的鉴定。
配制方法:取柠檬酸钠86.5g和无水碳酸钠50g放入1000ml锥形瓶中,加水350ml,加热至溶解。
另取100ml锥形瓶加入硫酸铜8.65g,加水约50ml,加热溶解。
待二者冷却至室温,将硫酸铜溶液慢慢倒入前液,随时搅匀,并补足水量至500ml。
使用时,取1ml班氏试剂加入试管,加入糖尿病患者的尿液0.1ml,混匀后沸水浴加热,可观察到溶液开始为蓝色,后来出现黄绿色、土黄色或砖红色沉淀,分别反映出患者尿液中糖含量的多少,结果见下表。
沸水浴加热后的现象葡萄糖含量(g/dL)透明蓝色无加热时无变化,仅冷却后有少量沉淀微量,约0.5以下加热1min后即出现少量黄绿色沉淀少量,约0.5~1加热约10~15s即再现土黄色沉淀中量,约1~2加热时很快出现多量砖红色沉淀大量,约2以上班氏试剂在配制过程中,当把硫酸铜溶液倒入由柠檬酸钠和无水硫酸钠配制的溶液中时,硫酸铜与硫酸钠和柠檬酸钠相遇,能产生出一种可溶性的又能离解出Cu2+的可溶性络盐,即柠檬酸钠此时能防止氢氧化铜沉淀的形成,做了一种亲水性掩蔽络合物形成剂。
高中实验中涉及的试剂
菲林试剂是质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液(甲液)和质量浓度为0.05g/ml的CuSO4溶液(乙液)。
用法:将菲林试剂甲液和乙液等体积混合,再将混合后的菲林试剂倒入待测液,水浴加热。
若待测液中存在还原糖,则出现砖红色沉淀。
(提示:用菲林试剂检测还原糖时,必须现配现用)班氏试剂为蓝色溶液,和葡萄糖混合废沸水浴会出现砖红色沉淀,班氏试剂常用于尿糖的测定。
成分是质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液(A液)和质量浓度为0.01g/ml的CuSO4溶液(B液)。
用法:向2ml待测液中先加入1mlA液,摇匀。
再加入3~4滴B液,摇匀,如待测液中存在蛋白质,则溶液呈紫色。
制备,取苏丹Ⅲ颗粒溶于体积分数为95%的酒精中,摇匀,即位苏丹Ⅲ染液,用于脂肪检测,可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染液染成红色)。
用于坚定DNA。
在沸水浴中,DNA遇二苯胺就会被染成蓝色。
用于坚定DNA和RNA。
常温下,DNA遇甲基绿会被染成绿色,RNA遇毗罗红就会染成红色。
冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝聚DNA。
将质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精等比例混合即可。
可用于解离根尖。
质量分数为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液,可将染色体染成紫色,通常染色为3~5min效果最佳。
(提示:也可用于醋酸洋红溶液染色)用于比较过氧化氢酶和Fe3+对过氧化氢的催化效率。
(提示:新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶)用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用。
用于鉴定淀粉的存在,碘与直链淀粉为蓝色,与支链淀粉为紫红色。
易挥发,对人体有害,故在用它提取叶绿体中色素的时候,要在研钵上方遮一张纸。
可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开。
在色素的提取和分离的实验中,在研磨绿色叶片时加入,功能是使研磨充分。
研磨绿色叶片时加入,可中和有机酸,从而防止在研磨时破坏叶绿体中的色素。
相当于质量分数为30%的蔗糖溶液,比植物细胞也的浓度大,可用于质壁分离实验。
费林试剂、班氏试剂与尿糖试纸
费林试剂、班氏试剂与尿糖试纸
这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在,在医学上用来检验糖尿病,其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化,但成份略有不同:
费林试剂:即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液。
分为菲林试剂A 和费林试剂B,A为CuSO4溶液,B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液,使用时将A、B 等体积混合即成费林试剂。
班氏试剂:即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液,又叫本尼迪克特(Benedict)试剂,它与醛反应的结果是与费林试剂一致的,只是比费林试剂更稳定,所以在临床化验中更常使用。
尿糖试纸:又叫硫酸铜试纸,呈白色, 带兰色斑点,用于糖尿病患者的尿糖测试。
每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克, 碳酸钠80毫克,氢氧化钠235毫克。
尿糖试纸法快速、方便,试纸的正确使用方法为:将试纸条放在尿液中浸湿,一秒钟后取出,在一分钟内观察试纸的颜色,并与标准色板对照,根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度。
斐林试剂和班氏试剂
斐林试剂和班氏试剂以斐林试剂和班氏试剂为标题,写一篇文章。
斐林试剂是一种常用的生化试剂,广泛应用于生物学和医学研究中。
它是一种常用的蛋白质定量试剂,主要用于测定蛋白质样品中的浓度。
斐林试剂基于洛杉矶方法,利用蛋白质与试剂中铜离子反应生成紫色化合物的原理进行测定。
斐林试剂的原理是基于蛋白质与铜离子的络合反应。
在试剂中,铜离子与蛋白质中的蛋白质酪氨酸残基、组氨酸残基和精氨酸残基反应,生成紫色络合物。
这个反应具有高度的特异性和灵敏性,可以在低浓度下准确测定蛋白质的含量。
斐林试剂的使用方法相对简单。
首先,将待测的蛋白质样品与斐林试剂混合均匀,反应一段时间后,通过分光光度计测定吸光度。
根据标准曲线,可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。
斐林试剂的测定结果准确可靠,被广泛应用于生物学和医学研究领域。
而班氏试剂是一种常用的糖类定性试剂,主要用于检测还原糖和非还原糖。
班氏试剂可以通过与糖分子中的羟基反应,产生蓝色或红色的沉淀物,从而判断糖的存在与否。
班氏试剂的原理是基于糖与试剂中的铜离子反应生成氧化物的反应。
在试剂中,铜离子与糖的羟基反应生成氧化物,氧化物进一步与试剂中的蛋白质和酸性条件下的羟基反应形成蓝色或红色的沉淀物。
根据沉淀物的颜色和形态变化,可以判断样品中是否含有还原糖或非还原糖。
班氏试剂的使用方法相对简单。
首先,将待测的样品与班氏试剂混合均匀,并加热反应一段时间。
然后观察样品的颜色和形态变化,根据颜色和形态的变化可以判断样品中是否含有还原糖或非还原糖。
班氏试剂的结果直观可靠,被广泛应用于食品科学和生物学研究领域。
斐林试剂和班氏试剂都是常用的生化试剂,分别用于蛋白质和糖类的定量和定性分析。
它们的原理基于与特定分子的反应,通过颜色的变化或沉淀物的形成来判断样品中的目标分子的存在与浓度。
这些试剂的使用方法简单,结果准确可靠,被广泛应用于生物学和医学研究中。
无论是测定蛋白质的浓度还是检测糖类的存在与否,斐林试剂和班氏试剂都是不可或缺的工具。
探究02 斐林试剂和班氏试剂-2023-2024学年高一生物教材疑点难点问题权威解读(人教版201
红色沉淀的逐渐变化,反应较快时, 直接观察到红色沉淀。
柠檬酸钠作为络合剂,由碳酸钠提供 碱性。CuSO4与柠檬酸钠溶液和Na2CO3 溶液混合时生成柠檬酸络铜离子,柠 檬酸络铜离子与葡萄糖中的醛基反应 生成砖红色沉淀。
醛糖含游离的醛基,具有很好的还原性。碱性溶液中的重金属 离子如是一种弱氧化剂,能使醛糖(还原剂)的醛基氧化为羧 基,产物称为醛糖酸,金属离子自身被还原。
新教材•人教版•必修一
补充说明 2.1 斐林试剂和班氏试剂
一.斐林试剂和班氏试剂
一.斐林试剂和班氏试剂 1.试剂配制方法
斐林试剂甲液: 0.1g/mLNaOH
斐林试剂乙液: 0.05g/mLCuSO4
使用时:甲液和乙液等量混合均匀后再注入 (高中认为是新制的氢氧化铜)
一.斐林试剂和班氏试剂 1.试剂配制方法 (1)斐林试剂
一.斐林试剂和班氏试剂 3.反应原理
必出指出:斐林试剂反应和班氏试剂反应虽然被用作还原糖的 检验,但不能给出定量的醛糖酸产物,因为所用的碱性条件会 引起糖碳架的断裂和分解。
一.斐林试剂和班氏试剂 3.反应原理
许多酮糖也是还原糖,例如果糖,因为它在碱性溶液中能够异化为醛糖
Ba(OH)2
单糖在碱催化下的酮-烯醇互变异构
试剂中的酒石酸钾钠或柠檬酸用作螯合剂,与Cu2+络合以防止 形成Cu(OH)2而使Cu2+沉淀。
一.斐林试剂和班氏试剂
3.反应原理
(1)斐林试剂
(2)班氏试剂
其本质是铜离子和酒石酸形成 的配合物——酒石酸合铜(高 中认为是新制的氢氧化铜)。
在与醛糖共热(高中人教版生物必 修一中为60℃水浴加热)时, 蓝色 消失,析出红色的氧化亚铜沉淀。 在氧化亚铜析出过程中, 反应液的 颜色可能经过由蓝色→绿色→黄色→
高考生物必备知识点:高中生物实验常用试剂
高考生物必备知识点:高中生物实验常用试剂查字典生物网的小编给各位考生整理了2019年高考生物必备知识点:高中生物实验常用试剂,希望对大众有所帮助。
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小编保举:高考绩绩不理想,专科成绩也能上本科高考生物必备知识点:高中生物实验常用试剂概括如下:1、斐林试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法:将斐林试剂甲液和乙液等体积混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热或直接加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色。
2、班氏糖定性试剂:为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后滚水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
3、双缩脲试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法:向待测液中先到场2ml甲液,摇匀,再向此中到场3~4滴乙液,摇匀。
如待测中存在卵白质,则呈现紫色。
4、苏丹Ⅲ:用法:取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5、二苯胺:用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(滚水浴)会被染成蓝色。
6、甲基绿:用于鉴定DNA。
DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
7、50%的酒精溶液:在脂肪鉴定中,用苏丹Ⅲ染液染色,再用50%的酒精溶液洗去浮色。
8、75%的酒精溶液:用于杀菌消毒,75%的酒精能渗入细胞内,使卵白质凝固变性。
低于这个浓度,酒精的渗透脱水作用减弱,杀菌力不强;而高于这个浓度,则会使细菌表面卵白质迅速脱水,凝固成膜,妨碍酒精透入,削弱杀菌能力。
75%的酒精溶液常用于手术前、注射、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。
9、95%的酒精溶液:冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。
10、15%的盐酸:和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11、龙胆紫溶液:(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色,可将染色体染成紫色,通常染色3~5分钟。
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斐林试剂与班氏试剂
高中生物教材(实验修订本)的有关实验中用到了斐林试剂和班氏试剂,二者都可用于鉴定可溶性还原糖,但两种试剂的配制、反应原理及使用方法均有所不同,教材只介绍了斐林试剂的配制和使用方法,对班氏试剂的配制和反应原理没做任何解释。
班氏试剂是如何配制的?与斐林试剂的配制、反应原理有何不同?学生对此有较多疑问,现解释如下。
1.斐林试剂的配制、使用方法及反应原理
斐林试剂由甲液(0.1g/mlNaOH)和乙液(0.05g/mlCuSO4)组成,用于鉴定可溶性还原糖,使用时将等量的甲、乙液混合均匀,取适量加入待测液,此时溶液呈蓝色。
沸水浴加热2min左右,即可观察到有砖红色沉淀生成,说明待测液中有可溶性还原糖。
甲、乙液混合时,生成了Cu(OH)2,而新制的Cu(OH)2在还原性糖的作用下,被还原为CuO砖红色沉淀。
实验过程中,必须先把甲、乙液等量混合均匀,使Cu(OH)2充分生成。
如果先后或者分别把NaOH和CuSO4溶液加入到含有还原性糖的组织提取液中,其中的有机酸会与NaOH迅速反应,使反应物中没有Cu(OH)2或者Cu(OH)2量不足,从而使还原性糖与Cu(OH)2的反应不能进行或现象不明显,影响还原性糖的鉴定。
2.班氏试剂的配制、使用方法及反应原理
班氏试剂一般用于尿糖的测定,有时也用于其他实验中可溶性还原糖的鉴定。
配制方法:取柠檬酸钠86.5g和无水碳酸钠50g放入1000ml锥形瓶中,加水350ml,加热至溶解。
另取100ml锥形瓶加入硫酸铜8.65g,加水约50ml,加
热溶解。
待二者冷却至室温,将硫酸铜溶液慢慢倒入前液,随时搅匀,并补足水量至500ml。
使用时,取1ml班氏试剂加入试管,加入糖尿病患者的尿液0.1ml,混匀后沸水浴加热,可观察到溶液开始为蓝色,后来出现黄绿色、土黄色或砖红色沉淀,分别反映出患者尿液中糖含量的多少,结果见下表。
沸水浴加热后的现象葡萄糖含量(g/dL)
透明蓝色无
加热时无变化,仅冷却后有少量沉淀微量,约0.5以下
加热1min后即出现少量黄绿色沉淀少量,约0.5~1
加热约10~15s即再现土黄色沉淀中量,约1~2
加热时很快出现多量砖红色沉淀大量,约2以上班氏试剂在配制过程中,当把硫酸铜溶液倒入由柠檬酸钠和无水硫酸钠配制的溶液中时,硫酸铜与硫酸钠和柠檬酸钠相遇,能产生出一种可溶性的又能离解出Cu2+的可溶性络盐,即柠檬酸钠此时能防止氢氧化铜沉淀的形成,做了一种亲水性掩蔽络合物形成剂。
当利用班氏试剂测定还原性糖时,还原性糖在这种碱性溶液中能将Cu2+还原为Cu+,Cu+再与OH-合成黄色的CuOH,加热后,CuOH即变成砖红色的氧化亚铜(CuO)沉淀。
综上所述,斐林试剂与班氏试剂在配制和使用上均有所不同,不能混为一谈。
另外,斐林试剂不稳定,必须现配现用,而班氏试剂配制好以后可较长时间保存。