动物蛋白质的胃蛋白酶消化率(体外消化)

动物蛋白质的胃蛋白酶消化率（体外消化）

一、适用范围：

本方法适用于动物性原料品质的判定。

二、原理：

用脱脂的样本在一个热的胃蛋白酶溶液中，稳定地不断搅拌约16小时，予以消化。测定它的蛋白质含量。这种方法不能用于植物蛋白质饲料原料或混合饲料，因为，它们所含复杂的碳水化合物是不能被胃蛋白酶消化的。将溶解了的蛋白质全部作为可消化的，并用其对粗蛋白质的百分率来表示。

三、设备：

1、恒温水浴振荡器：45±2℃。

2、测定粗蛋白质的全套设备。

3、过滤装置。

4、索氏脂肪浸提器。

四、试剂：

除测定粗蛋白质用的试剂外，尚需以下试剂：

1、0.2%胃蛋白酶溶液的配制：先稀释6.1ml盐酸到1L。在使用前，现配0.2%胃蛋白酶溶液。

2、所有胃蛋白酶应具有1：3000的活性。

3、加热稀盐酸至42—45℃，然后加入胃蛋白酶2g,轻轻地搅动，使其溶解（此时不要加热！）。即得在0.75mol/L盐酸中的0.2%胃蛋白酶溶液。

五、测定步骤：

1、准确称取1g脱脂试样，放入300ml碘量瓶内，加入经过预热（42—45℃）的0.2%胃蛋白酶溶液150ml，盖好塞子，在45℃下边搅拌边消化16小时，消化后用滤纸过滤，然后用温水洗净滤纸上的不消化物。将不消化物连同滤纸转入消化管中，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定不消化物中的粗蛋白质含量。

2、另取1份脱脂分析试样，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定其粗蛋白质含量。然后，根据消化的和不消化的粗蛋白质含量计算出试样的胃蛋白酶消化率。

六、测定结果计算与分析：

1、计算：

动物蛋白质胃蛋白酶消化率（%）= A-B

×100 A

式中：A—试样中粗蛋白质的含量（%）。

B—试样中的不消化物粗蛋白质的含量（%）。

2、分析：

合格的鱼粉，其粗蛋白质的胃蛋白酶消化率应不小于85%；羽毛粉应在75%以上。

植物油脂检验不皂化物测定法GB 5535-85

本标准适用于商品植物油不皂化物的测定。

油脂中不皂化物即油脂皂化时，与碱不起作用的，不溶于水的物质，包括留醇，脂溶性维生素的色素等。

一、仪器和用具：

锥形瓶：250 ml

冷凝管

恒温水浴锅

电炉

分液漏斗：250 ml

量筒：50 ml

索氏抽提器

电热恒温烘箱

烧杯、试剂瓶等

天平：感量0.001 g

二、试剂：

1.0N氢氧化钾乙醇溶液

0.5N氢氧化钾水溶液

乙醇、乙醚

中性乙醚乙醇混合液(2：1)

三、操作方法：

称取混匀试样5g（W）注入锥形瓶中，加1.0N KOH乙醇溶液50 ml，连接冷凝管，在水浴锅上煮沸约30 min，煮到溶液清澈透明为止。用50 ml蒸馏水将皂化液转移入分液漏斗中，加入50 ml乙醚，趋温热时猛烈摇动1 min后，静止分层。将下层皂化液放入第二只分液漏斗中，每次用50 ml乙醚提取两次。合并乙醚提取液，加水20 ml轻轻旋摇，待分层后，放出水层，每次再加水20 ml猛烈振摇洗涤两次。

先后用0.5N KOH水溶液和水各20 ml，充分振摇洗涤一次，如此再洗涤两次。最后用水洗至加酚酞指示剂时不显红色为止。

用索氏抽提器回收乙醚，将抽提瓶中的残留物在105℃温度下烘1h，冷却称重，再烘30 min，直至恒重为止。将儿重后的残留物溶于30 ml中性乙醚乙醇中，用0.02N氢氧化钾滴定至粉红色。

四、结果计算：

油脂中不皂化物含量按下列公式计算：

不皂化物（%）=

W VN

W)

28

.0

(

1001

式中：W1——残留物重量，g

W——试样重量，g

V——滴定所消耗的氢氧化钾溶液体积，ml

N——氢氧化钾溶液的当量浓度

0.28——每毫克当量的油酸重量，g

双试验结果允许差不超过0.2%，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第一位。

过氧化值的测定

一、适用范围：

本方法适用于油脂及动物性原料的测定。

二、原理：

油脂氧化过程中，产生的过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘；以硫代硫酸钠溶液滴定，计算含量。

三、试剂：

1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热加速溶解，冷却后贮于棕色瓶中。现用现配。

2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀。

3、0.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液：称取5g硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）（或3g无水硫代硫酸钠），溶于1000ml水中，缓缓煮沸10分钟，冷却。放置两周后过滤备用。

4、1% 淀粉指示剂：称取可溶性淀粉0.5g，加入少许水调成糊状倒入50ml 沸水中调匀，煮沸，现用现配。

四、测定步骤：

精确称取2—3g混匀的样品，置于250ml碘量瓶中，加30ml三氯甲烷冰乙酸混合液，使样品完全溶解；加入1.00ml饱和碘化钾溶液。紧密塞好瓶塞，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置5min，取出加75ml水，摇匀。立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定，至淡黄色时，加1ml淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为终点。同时作空白试验。

五、测定结果的计算与分析：

1、计算：

X=[（V-V0）×N×0.1269]/m

式中：X—样品的过氧化值，%。

V—样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。

V0—空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。

N—硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度，mol/L。

0.1269—1N硫代硫酸钠1ml相当于碘的克数。

2、分析：

油脂新鲜，其过氧化值不应大于0.15%。

附：0.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液的标定

1、标定：

精确称取0.15g于120℃烘3小时至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于25ml水，加2g碘化钾及20ml硫酸溶液（20%），摇匀，于暗处放置10min。