酸性蛋白酶
酸性蛋白酶检测
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酸性蛋白酶检测
酸性蛋白酶（Acidic proteinase）是在酸性环境下作用于蛋白质肽键的一类蛋白酶，可将蛋白质水解为氨基酸、多肽以及游离氨基酸。
酸性蛋白酶的最适PH从2左右到4左右，能在低pH条件下有效水解蛋白质，广泛应用于酒精发酵、食品加工、酿造、饲料添加、皮革加工等领域。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性蛋白酶的活性变化。
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生化法测定酸性蛋白酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 酸性蛋白酶活性信息。
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蛋白酶
8.蛋白酶（酸性、中性、碱性）的特征与相应的发酵微生物菌。
答：中性蛋白酶生产菌枯草杆菌1.398,S114,172,放线菌166，栖土曲霉3.942；碱性蛋白酶生产菌地衣芽孢杆菌2709，短小芽孢杆菌289，209；酸性蛋白酶生产菌黑曲霉3.350，宇佐美曲霉537，肉桂色曲霉No.81，浆油工业用的米曲霉3042。
按酶的最适pH分类：①酸性蛋白酶，最适pH2.0-5.0。
②中性蛋白酶，pH7-8。
③碱性蛋白酶，pH9.5-10.5。
为方便起见，微生物蛋白酶常用此分类法。
酸性蛋白酶主要来源于哺乳动物的消化道, 如胃蛋白酶; 部分微生物是酸性蛋白酶的主要来源, 如:目前的商品酸性蛋白酶制剂主要是由黑曲霉发酵生产分子特性: 酸性蛋白酶的最适pH在2-5范围, 酶蛋白的等电点在pI3-5, 分子量MW30,000-35,000。
②催化特性: 酸性蛋白酶的最适温度因来源不同而有差异, 一般霉菌的蛋白酶的最适温度较高, 大部分在50-60℃范围, 而来源于动物胃粘膜的蛋白酶的最适温度较低, 一般在40℃左右, 但酸性蛋白酶的热稳定性都较差, 一般在50℃都很快失活, 此外, 酶的热稳定性还受到基质的pH的影响; 有些酸性蛋白酶不耐低温, 在低温条件下,很快失活。
许多酸性蛋白酶分子中含5-10%多糖，对酶的稳定有益。
中性蛋白酶是最早用于酶制剂工业化生产的蛋白酶, 目前的微生物生产的商品酶制剂的菌种主要有: 枯草杆菌、耐热解蛋白芽孢杆菌、灰色链霉菌、寄生曲霉、米曲霉、栖土曲霉。
除上述微生物生产中性蛋白酶外, 来源于植物的木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶等都属于中性蛋白酶。
①分子特性: 大部分微生物产生的中性蛋白酶属于金属蛋白酶, 一分子酶蛋白含有一个锌原子, 酶蛋白的分子量在35,000-40,000范围, 等电点pI 8-9, 微生物蛋白酶中, 中性蛋白酶的稳定性最差, 分子之间最容易发生自溶, 即使在低温条件下, 也会发生明显的自溶, 造成分子量明显降低。
酸性蛋白酶
酸性蛋白酶
蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能够水解（断裂）蛋白质，因此也被称为蛋白水解酶。
酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，能在低PH条件下，有效水解蛋白质，蛋白水解酶在许多的生理和病理过程中发挥着重要作用。
广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。
本产品是一种酸性蛋白酶制剂，在酸性条件下具有较高活性，由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌（Aspergillus）深层发酵而成。
它广泛应用于饲料、纺织、废水处理和果汁提纯方面。
促进酵母的生长与繁殖，提高发酵速度，从而缩短发酵周期和提高发酵设备的生产能力。
微粒体组成成分
微粒体组成成分微粒体是细胞内的一种细胞器，它在许多生物活动中都扮演着重要的角色，例如细胞吞噬、蛋白质降解、钙离子稳态调节、凋亡等。
微粒体的运作依赖于其特殊的组成成分，本文将对微粒体的组成成分进行详细介绍。
1. 膜微粒体的外周由一个双层膜包裹，这个膜是由细胞膜捏脆泡形成的。
微粒体膜的主要作用是隔离内部物质和细胞质，因此它的作用犹如一个过滤器。
2. 酸性蛋白酶微粒体中最重要的组成成分是酸性蛋白酶。
这种酶是一种水解酶，它只在酸性环境下才能活动。
微粒体的膜内环境pH值为4.8左右，恰好可以激活酸性蛋白酶。
酸性蛋白酶在细胞内的作用非常广泛，其主要功能是进行分解、清理和循环利用细胞内的有机物质。
3. 水解酶微粒体中的水解酶也是一种水解酶，它主要作用于碳水化合物、脂质和核酸的分解。
与其他酶不同的是，水解酶在微粒体内才能发挥作用，而且它是两个主要酶类中分子量较小的一个。
4. 氧化还原酶微粒体内的氧化还原酶通常被称为“细胞电解质泵”，因为它主要负责将阳离子从细胞内导出，同时将阴离子从外部引入细胞内。
氧化还原酶还能扩散氧化剂和还原剂，这些短链生化物质对细胞内物质的代谢过程至关重要。
5. 质膜微粒体的质膜通常是由蛋白质和脂类的复合物组成的，它能有助于保护微粒体内的酶和其他分子免受降解以及其他破坏性反应的侵害。
质膜还能限制微粒体内的活性氧物质向细胞内的其他区域扩散，保护细胞免受氧化损伤。
6. 钙递送系统微粒体的钙递送系统主要由钙离子递送蛋白、钙蛋白和其他的载体蛋白组成。
这些蛋白质能将钙离子通过微粒体膜内蛋白质通道输送到微粒体内，与其中的酶和其他蛋白质进行作用。
在这个过程中，钙蛋白则充当了钙离子递送蛋白的调节蛋白。
7. 钙解聚酶和其它酶微粒体内的酶被调节，是通过一系列复杂的酶簇进行的。
这些酶簇通常是由多个酶、蛋白质载体、钙离子递送蛋白组成的。
钙解聚酶能够通过与其他酶一起协同作用，促进细胞内的代谢过程。
综上所述，微粒体的组成成分虽然比较复杂，但每一种组成成分都有着自己独特的功能，为微粒体运作提供了必不可少的保障。
酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用_肖竞
到一株酸性蛋白酶的高产菌—— — ;##H，遗传性状非常 稳定 。 J8?5 OL> ’ <AA" + 等从 JPQP9870 BR>SD>9E?ET8R7P 中获得一种酸性蛋白酶，其最适作用温度为 6"K ， 在 G6K 或 66K ， 酶活 力 只有 最 大活 力 的 A"= ， 若 66K 保温 G"7E?，则活力减半，在 H"K 保持 <"7E?， 酶活力不足 <6= 。 UP? 3LE7>D0 等 ’ !""" + 利用转基因 技术将 3BCD09EFE>7 9E5?EB89>7 中的酸性蛋白酶基因导 入到酵母中，获得分泌该种酸性蛋白酶的酵母突变体
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酸性蛋白酶包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物 蛋白酶，适宜在酸性条件下水解蛋白质。酸性蛋白酶 用作动物饲料添加剂，可提高动物 & 特别是幼龄动物 ) 对饲料中蛋白成分的消化吸收率，促进其生长。此 外，它还用于制革工业中皮革的脱毛和软化，食品工 业中蛋白质的水解生产高档食品，医药工业中消化剂 和消炎剂的制造等。 近年来，随着集约化畜禽生产的发展，加剧了环 境污染。其中，氮是污染环境的主要物质，因而提高 饲料中蛋白类营养物质的利用效率，降低其排放就显 得尤为重要 。此外，由于我国蛋白质饲料资源严重 缺乏，需要寻求非常规蛋白资源，而动物对非常规蛋 白饲料的利用效率很低。研究表明在饲料中添加酸性 蛋白酶 + 可提高该类蛋白质的可消化性，因此酸性蛋 白酶的开发利用就显得非常重要。 ! 酸性蛋白酶的酶学性质 酸性蛋白酶是一类具有复杂理化性质的化合物， 不同微生物菌种分泌的酸性蛋白酶虽具有一些共同的 性质，但在底物特异性、抑制剂、激活剂等方面均存 在着一定的差异。 !" ! ,- 值 酸性蛋白酶作用的最适 ,- 值一般在 " . *，但不
蛋白酶结构
2.碱性蛋白酶
• 碱性蛋白酶在技术上采用细菌原生质体诱变处 理方法,从国内碱性蛋白菌生产菌2709枯草杆 菌中研究选育出若干稳定高性能菌株,在后处 理上,采用去渣盐析沉淀法,减少了蛋白酶的杂 质含量和产品特有的气味，提高了溶解速度, 与洗涤剂有更好的配伍性,延长了保质期。 • 碱性蛋白酶是由造育的地衣芽孢杆菌发酵而得， 主要成分为枯草杆菌蛋白酶，是一种内切酶， 催化部位为丝氨酸，分子量约为27300。
1.酸性蛋白酶
• 酸性蛋白酶的热稳定性较差，一般在50℃ 都很快失活，此外，酶的热稳定行还受到 基质的pH的影响；有酸性蛋白酶不耐低温， 在低温条件下，很快失活。许都酸性蛋白 酶分子中含有5-10%多糖，对酶的稳定有益
2.碱性蛋白酶性能
• 碱性蛋白酶是经细菌原生质体诱变方法造育的 2709枯草杆微生物通过深层发酵、提取及精制 而成的一种蛋白水解酶，属于一种丝氨酸脆外 高碱性蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成 多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力。 生产工艺是采用微滤超滤膜分离、喷雾干燥或 真空冷冻干燥等先进技术，广泛应用于食品、 医疗、酿造、丝绸、制革等行业。碱性蛋白酶 是目前市场上流行的洗涤添加剂，能大幅度提 高洗涤去污能力，特别对血渍、汗渍、奶渍、 油渍等蛋白类污垢,具有独特的洗涤效果。
3.中性蛋白酶
• 分子特性:大部分微生物产生的中性蛋白酶 属于金属蛋白酶，一分子酶蛋白含有一个 锌原子，酶蛋白的分子量在35000-40000范 围，等电点pH8-9,微生物蛋白酶中，中性蛋 白酶的稳定性最差，分子之间最容易发生 自溶，即使在低温条件下，也会发生明显 的自溶，造成分子量明显降低。
蛋白酶的制备 ————胰蛋白酶的制备
蛋白酶的制备 ————胰蛋白酶的制备
• （3）胰蛋白酶的分离 • 1. 将已激活的胰蛋白酶溶液按242g/L加入 细粉状固体硫酸铵，使溶液达到0.4饱和度， 放置数小时后，抽滤，弃去滤饼。 • 2．滤液按250g/L加入研细的硫酸铵，使溶 液饱度达到0.75，放置数小时，抽滤，弃去 滤液。
饲用酸性蛋白酶高产菌株选育及应用研究
酸性蛋白酶高产菌株选育及应用研究一、概述本项目2004年获得河南省科技攻关项目的立项支持，项目编号：0424240040。
酶是生物细胞原生质合成且具有高度催化活性的蛋白质。
人类早在认识酶之前就知道利用酶为生产和生活服务，例如酿造、鞣革及制造奶酪等已经有几千年的历史。
1897年Büchner发现磨碎的酵母仍然能够使糖液发酵产生酒精和二氧化碳。
二十世纪初，有更多的酶被发现和分离提纯，注意到了某些酶的作用需要有低分子物质（辅酶）的参加，并陆续认识了很多酶所催化的反应。
1926年Sumner第一次从刀豆中分离出脲酶并获得了该蛋白质的结晶。
30年代，J.Northrop 又连续分离出结晶的胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶。
今天已有500种酶得到结晶，2000多种酶得到鉴定，200种左右商品酶已经开发，但工业上应用的酶仅有50多种。
二次世界大战后抗生素工业的通风搅拌发酵技术的利用，使微生物酶制剂工业得到迅速发展。
20世纪40年代末，生产α-淀粉酶的液体深层发酵首先在日本实现了工业化生产，标志着现代酶制剂工业的开始。
20世纪50年代后期遗传工程、蛋白质工程等现代生物技术的研究成果，促使世界酶制剂工业持续地高速发展，成为生物工程四大主导产业中最早产业化的高技术产业。
由于酶制剂是一种绿色高效生物催化剂，具有高效、节能、安全和环保等特点，对酶制剂应用产业开发新产品、提高质量、节能降耗、保护环境重要意义；因此，这一产业的发展受到各国政府的高度重视，有着广阔的发展前景。
国际酶制剂市场目前保持着9％的增长速度，2010年世界酶制剂年销售额达160亿美元，目前已有一大批可用于工业发酵生产的各种胞外酶的微生物，如芽孢杆菌、大肠杆菌、放线菌、毛霉、黑曲霉、青霉、酵母等。
商品化的酶品种数量主要有糖化酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、凝乳酶、脂肪酶、DNA聚合酶、T4DNA连接酶、葡萄糖苷酶、葡萄糖异构酶、葡萄糖氧化酶、a-乙酰乳酸脱羧酶、乳酸脱氢酶、天冬氨酸转氨酶、延胡索酸酶、青霉素酰化酶、溶菌酶、链激酶、漆酶、植酸酶、复合酶等等。
酸性蛋白酶的作用机理
酸性蛋白酶与碱性蛋白酶生产工艺的不同之处？酸性蛋白酶是一种在酸性环境下（pH 2.5-4.0）催化蛋白酶水解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动植物蛋白质。
可用于毛皮软化，酒精发酵，啤酒、果酒澄清，动植物蛋白质水解营养液，羊毛染色，废胶片回收，饲料添加剂等等。
本品在酸性条件下有利于皮纤维松散，且软化液可连续使用，是当前理想的毛皮软化酶制剂；在酒精发酵中，添加酸性蛋白酶，能有效水解原料中的蛋白质，破坏原料颗粒粒间细胞壁的结构，有利于糖化酶的作用，使原料中可利用碳源增加，从而可提高原料出酒率；另一方面，蛋白质的水解提高了醪液中α-氨基态氮的含量，促进酵母菌的生长与繁殖，提高发酵速度，从而缩短发酵周期和提高发酵设备的生产能力。
碱性蛋白酶碱性蛋白酶是在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类,是一类非常重要的工业用酶,最早发现于猪胰脏。
碱性蛋白酶广泛存在于动、植物及微生物中。
微生物蛋白酶均为胞外酶,不仅具有动植物蛋白酶所具有的全部特性,还有下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单、快速、易于实现工业化生产等诸多优点。
1945年瑞士M等在地衣芽孢杆菌中发现了微生物碱性蛋白酶。
碱性蛋白酶是由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌2709，经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，其主要酶成分为地衣芽孢杆菌蛋白酶，是一种丝氨酸型的内切蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力，广泛应用于食品、医疗、酿造、洗涤、丝绸、制革等行业。
1、碱性蛋白酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，属于丝氨酸型内切蛋白酶，应用在食品行业可水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，形成具有独特风味的蛋白质水解液。
2、碱性蛋白酶成功应用于洗涤剂用酶工业，可添加在普通洗衣粉、浓缩洗衣粉和液体洗涤剂当中，既可用于家庭洗衣，也可用于工业洗衣，可以有效的去除血渍、蛋类、乳制品、或肉汁、菜汁等蛋白类的污渍，另外也可作为医用试剂酶清洗生化仪器等。
固态酸性蛋白酶工厂设计要点
固态酸性蛋白酶工厂设计要点固态酸性蛋白酶工厂设计要点随着生物技术的发展，固态酸性蛋白酶作为一种广泛应用于食品、饲料和制药等领域的酶类产品，受到了越来越多的关注和需求。
固态酸性蛋白酶工厂设计要点是确保生产过程稳定可靠、产品质量优良、生产效率高、环保可持续等。
本文将重点介绍固态酸性蛋白酶工厂设计的要点。
1. 工艺设计固态酸性蛋白酶的工艺设计是整个工厂设计的核心内容。
首先，需要确定采用何种固态发酵工艺，如床层发酵、筒式发酵、旋转式发酵等。
不同的发酵工艺具有不同的特点和适用性，需要根据产品特性和工程经验进行选择。
其次，需要优化发酵条件，包括发酵温度、pH值、发酵时间、培养基配方等。
通过合理的工艺设计，可以提高生产效率和产品质量。
2. 设备选择固态酸性蛋白酶生产需要一系列的设备来支持生产过程。
工厂设计要点之一就是选择合适的设备。
例如，发酵釜是必不可少的设备，需要选择具有良好控制性能和卫生性能的设备。
另外，还需要选择合适的固液分离设备、搅拌设备、干燥设备等。
设备选择需要考虑到工艺要求、产品特性和生产规模等因素。
3. 厂区规划固态酸性蛋白酶工厂的厂区规划需要考虑到生产流程、原材料输入、产出物输出、设备布局以及安全与环保等方面。
首先，根据生产流程进行合理的流程布局，确保原料与产出物能够顺利流动。
其次，按照设备选址和工艺流程，规划合理的设备布局，减少物料和人员的交互，提高工作效率和安全性。
此外，还需要规划储存和配送区域，确保原材料和产出物的安全和有效储存。
最后，需要考虑到环保要求，规划合理的废物处理和污水处理系统，确保工厂的环保可持续发展。
4. 质量管理固态酸性蛋白酶工厂设计要点之一就是建立完善的质量管理体系。
包括原材料的选择和采购、生产过程的控制与监测以及成品的检验与分析等。
原材料的选择需要保证质量稳定可靠，采购过程需要合理的供应商评价和合同管理。
生产过程需要严格控制，确保工艺参数的稳定性和一致性。
成品的检验和分析需要建立完善的实验室和检验体系，确保产品质量符合要求。
酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用
57酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用赵玉印1,范圣涛2,孙孟凌3孙勇4(1.龙口市七甲镇畜牧兽医工作站,山东龙口265700;2.龙口市下丁家镇畜牧兽医工作站,山东龙口265700;3.龙口市兰高镇畜牧兽医工作站,山东龙口265700;4.龙口市畜牧兽医工作站,山东龙口265700)摘要:随着我国畜牧业的发展,在一定程度上加剧了我国环境的污染程度。
在污染环境的物质中氮元素是其主要因素,并且在一定程度上影响了畜牧业的发展。
为了更好的推动我国畜牧业的发展,提高饲料中的蛋白类营养物质的使用效率,最大限度的降低污染物质的排放量对于畜牧业的发展是至关重要的。
如今,酸性蛋白酶可以作为动物饲料的添加剂,来提高动物对饲料中营养蛋白物质的吸收效果,帮助动物快速生长,实现快速推动我国畜牧业发展的目标。
关键词:酸性蛋白酶;畜牧业;作用机理引言酸性蛋白酶具有复杂理化性质的一类化合物,包括胃蛋白酶、凝乳酶以及一些微生物蛋白酶等,它可以在酸性条件下催化并水解蛋白质。
现如今在制革工业、以及饲料工业都得到了广泛的应用。
酸性蛋白酶是一种添加剂,可以起到促进幼龄动物生长发育的作用,同时也可以减少由于断奶而造成的应激现象,在畜牧业的应用十分广泛,并且是一种非常具有广阔发展前景的酶制剂。
本文将对酸性蛋白酶的概述及其酸性蛋白在畜牧业中的应用进行相应探究。
1酸性蛋白酶的概述1.1酸性蛋白酶的概念酸性蛋白酶是可以使蛋白质中的肽链断裂的水解酶,在我国很多行业的应用十分广泛,作用的形态也是非常多。
特别是在畜牧业中的饲料方面的作用效果十分明显。
对于生物来讲,生命体内的新陈代谢离不开酶的催化和水解作用,因此酶的作用就显得尤为重要。
在畜牧业中,酸性蛋白酶的作用也是十分重要的,特别是对于饲料中一些高分子化合物所起到的催化和水解作用,可以帮助幼小的动物吸收一些自身不能消化的营养物质来促进生长,使其在生长期间不会出现因为营养不良而阻碍幼小动物的发育。
1.2酸性蛋白酶的性质酸性蛋白酶是一种复杂的化合物,不同微生物分泌的酸性蛋白酶所具有生物性质也略有不同,但是所有的酸性蛋白酶都具有以下几个性质。
酸性蛋白酶生产工艺
酸性蛋白酶生产工艺1 蛋白酶、酸性蛋白酶1.1 蛋白酶的定义蛋白酶是催化肽键水解的一类酶，它可迅速水解蛋白质为胨、肽类，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。
同时大多数微生物蛋白酶都是胞外酶。
1.2 微生物蛋白酶分类微生物蛋白酶按其作用的最适pH可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶三类。
碱性蛋白酶为透明褐色液体，能与水混溶，最适温度50~60℃，最适pH8.5。
中性蛋白酶为金属酶，褐色颗粒或液体，易溶于水，最适温度45~55℃，最适pH5.5~7.5。
酸性蛋白酶为近乎白色至浅黄色无定型粉末或液体，易溶于水，最适温度45℃，最适pH2.5。
1.3酸性蛋白酶的概述酸性蛋白酶(acidic protease)在 1954 年首先由吉田在黑曲酶中发现。
该酶广泛存在于霉菌、和担子菌中，细菌中极少发现，其最适pH3~4，相对分子质量 30000~40000，等电点（pH3~5）。
酸性蛋白酶主要是一种羧基蛋白酶，大多数在其活动中心含有 2 个天冬氨酸残基。
酶蛋白中酸性氨基酸含量高，而碱性氨基酸含量低。
不同微生物的酸性蛋白酶其氨基酸组成虽有所差别，但性质基本相同，许多性质也与动物胃蛋白酶相似，其活动中心肽键也基本相似，它对 DFP、PCMP （对氯汞苯甲酸）EDTA不敏感，及但能为DNA（二重氮乙酰亮氨酸甲酯）EPNP及（1，2 环-3-对硝基苯养基丙烷），SDS（十二烷基磺酸钠）等抑制。
DNA，EPNP 之所以能引起酶失活是由于活性中心天冬氨酸残基被酯化。
DNA 只同有活性的酸反应，而同失活的酶不能反应。
P-BPB（对溴酚乙酰溴）虽然也可同酶的1个天冬氨酸残基反应，但同它反应的天冬氨酸的位置与以上两种抑制不一样，故不能引起青霉酸性蛋白酶失活。
1.4 酶的生产方法酶的生产方法主要有：提取分离法、生物合成法、化学合成法。
酶的微生物合成法主要有：液体深层发酵、固体培养发酵、固定化细胞培养、固定化原生质发酵。
酒精酸性蛋白酶在发酵中的应用
酒精酸性蛋白酶在发酵中的应用酒精酸性蛋白酶在酒精发酵中的应用在酿酒业中应用蛋白酶，可在玉米，木薯酒精酿造的发酵中起协同作用，具有溶解发酵原料的颗粒，促进微生物繁殖，分解蛋白质生成香味物质，降解酵母菌体蛋白酶等多种功能。
以提高产量和质量，并愈来愈受到人们的重视。
但目前，国产酒用酸性蛋白酶比较少，主要是由于菌种酶活力低，生产成本高，因而其酒用酸性蛋白酶的研究有待于进一步深入展开。
发酵速率提高和出酒率增加与酵母密切相关，酒精浓醪发酵时，高低物浓度和高酒精含量会限制酵母菌的生长繁殖，对酒精发酵产生强烈的抑制作用。
因此发酵工艺的改进和耐高浓度酒精酵母的选育是实现酒精浓醪发酵工业的关键。
酵母的生理状态及营养状况对改善高酒精浓度下酵母的生存率,提高酵母酒精发酵速率会产生很大影响。
在高浓度酒精发酵中主要是营养缺乏,而不是积累的酒精导致发酵活性降低的。
添加自由氨基酸FAN不但可以缩短发酵时间,而且提高了酒精的产量,增加了酵母的酒精耐性和存活率。
酸性蛋白酶作用产物是氨基酸，是酵母生长的最好营养物质和发酵的促进剂，在玉米原料中除含有大量的淀粉，还含有一定量的粗蛋白与淀粉紧密结合，影响淀粉的水解速度。
在发酵中添加酸性蛋白酶，通过水解蛋白酶，使一些难水解的淀粉释放出来，为淀粉酶的糖化作用创造条件，也为发酵酵母提供更丰富的营养。
基于此,本文对酒用酸性蛋白酶研究及其酒中酶学功能作用综述。
1 酒用酸性蛋白酶源研究国内目前用于生产酸性蛋白酶的菌种主要有黑曲霉和宇佐美曲霉等，黑曲霉主要用于固体发酵，而宇佐美曲霉主要用于液体发酵。
本文主要用于液体发酵。
宇佐美曲霉用于液体发酵，产酶活性在5600u/ml。
在此基础上，于丽萍等通过控制斜面培养成分和液体发酵的通气量提高宇佐美曲霉537产生的酸性蛋白酶活力，产酶活性提高20%左右。
并用20L自控发酵罐，是产酶活性提高7100u/ml。
在发酵罐中进行液体培养，通气量的大小与风量、搅拌速度、罐压三者有关。
酸性蛋白酶在酒精生产的应用
酸性蛋白酶在酒精生产的应用
酒精发酵过程中主要依靠酵母进行代谢,酵母的生长发育和繁殖对营养物质有一定的要求,包括碳源、氮源、磷源和一些微量元素。
对于氮源来说,酒精企业一般通过添加尿素和磷酸氢二铵来补充,但是随着食品安全标准完善提升,卫生部下发了《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》GB2760-2013,其中有“取消尿素在食品行业中应用”的规定,企业必须找到替代尿素的添加剂,酸性蛋白酶是最好的选择。
酸性蛋白酶与尿素均为酵母提供氮源、促进酵母生长需要,但两种产品提供的方式不同,酸性蛋白酶是将淀粉连接的蛋白质水解成氨基酸,直接供酵母利用,而尿素则是提供无机氮,并通过酵母转氨酶的作用转化成氨基酸,才能被酵母吸收利用。
由于尿素价格相对便宜、效果较好,国内外酒精行业一直在使用。
随着科技进步,酸性蛋白酶的成本越来越低,与添加尿素成本基本相当,酸性蛋白酶是一种理想的替代物。
本文主要是对酸性蛋白酶代替尿素的可行性进行研究,通过实验室小试,对液化、糖化、发酵各阶段进行了研究,发现酸性蛋白酶可以提高原料产酒率,抑制杂菌生长的结果。
为了进一步验证酸性蛋白酶在酒精生产中的应用,我们进行了扩大生产试验,对整个发酵过程进行研究对比,同样验证了酸性蛋白酶可以提高原料产酒率,对酵母的发酵有一定促进作用,最后对安全性和经济效益等内容进行综合评价,通过对比发现发酵过程中添加酸性蛋白酶具有一定优势。
根霉源酸性蛋白酶的初步研究
根霉源酸性蛋白酶的初步研究酸性蛋白酶可在酸性条件下降解蛋白质，由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此，被广泛用于食品、医疗工业及畜牧业生产中。
目前，酸性蛋白酶主要通过微生物发酵来生产的。
而工业上，酸性蛋白酶的生产菌只有黑曲霉、宇佐美曲霉和米曲霉等为数不多的菌株，通过筛选新的菌种，可以有效地解决目前行业中存在的酶活低及菌种老化的问题。
本研究通过酪蛋白透明圈法从实验室保存的几株菌株中筛选出一株产酸性蛋白酶菌株，命名为RN-11菌株，通过真菌ITS序列分子鉴定，再结合对其形态观鉴定的结果，将RN-11菌株确定为黑根霉（匍枝根霉）。
采用固态发酵培养法，通过单因素实验及响应面实验设计，确定了RN-11菌株产酸性蛋白酶最佳固态培养基组分为：250ml三角瓶中，麸皮15g，水10.6ml，蔗糖0.69g，硝酸钠1.0g，磷酸氢二钾0.042g。
理论最佳酸性蛋白酶活力为159.51U/g，验证试验得到的实际平均酸性蛋白酶活力为160.16U/g，比初始发酵培养基提高了5.1倍。
该菌株在最佳培养基初始pH值为2.5，装瓶量为27g湿基，接种量为1ml，培养时间为60h，培养温度26℃时，产酶量达到最高。
分别选择蒸馏水、0.05mol/L （pH3.5）的乳酸缓冲液、0.15mol/L的NaCl溶液、0.03mol/L磷酸缓冲液作为提取溶剂提取酸性蛋白酶。
结果表明：用0.05mol/L乳酸缓冲液浸提，酸性蛋白酶提取最完全。
还对影响酶提取的主要因素，如提取溶剂pH、提取时间、提取温度、浸提液和固体培养基的比率进行了研究，确立了最适的酶提取工艺。
结果表明RN-11酸性蛋白酶在用固体曲重量30倍的0.05mol/L的pH3.0乳酸缓冲液于30℃水浴中浸泡105min提取最完全。
通过硫酸铵分级沉淀、透析、SephadexG-75凝胶层析三步提取纯化了RN-11酸性蛋白酶。
酶的回收率为24.39%，纯化倍数为41.78。
酶学性质测定结果表明，经SDS-PAGE电泳， RN-11酸性蛋白酶的分子量约为70Kda。
酸性蛋白酶(Acid protease, ACP)试剂盒说明书
货号：MS2300 规格：100管/48样酸性蛋白酶（Acid protease, ACP）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：ACP是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。
该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。
测定原理：酸性条件下，ACP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，通过测定其吸光度增加，来计算ACP活性。
自备仪器和样品：水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、0.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
临用前加入 4mL 试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加入 20mL 蒸馏水溶解。
试剂五：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 支，0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培养液：直接测定。
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到680nm，蒸馏水调零。
2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。
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酸性蛋白酶
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酸性蛋白酶选来选去，还是隆科特好！
酸性蛋白酶是采用黑曲霉3.4310菌株，经液体深层发酵培养，再用其独特的生产工提取，精制而成的产品。
本产品是一种在酸性环境下（PH2.5-4.0）催化蛋白质酶解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动、植物蛋白质。
例如毛发软化，啤酒果酒澄清，动、植物蛋白质水解营养液，羊毛染色，废胶片回收；还可以进一步加工成医用级蛋白酶作为消炎和助消化剂，或试剂用蛋白酶；亦可以作为饲料添加剂等。
1、产品基本性质
项目指标
外观黄褐色粉末
酶活力u/g(ml) 20000-100000
pH适应范围 2.0-5.0 最适pH值为2.5-3.5
温度适应范围30-50℃，最适温度40℃，超过50℃失活严重
金属离子对酶活力的
被钙、镁离子激活，被铜、汞、铅离子所抑制影响
产品标准GB/T 23527-2009
1.1产品性状：浅棕色粉状制剂。
1.2作用方法：作用键内酶主要生成物质肽类和少量氨基酸。
1.3热稳定性：PH在
2.0-4.0条件以下比较稳定，超过50℃酶活不稳定，60℃以上很快失活。
1.4PH稳定性：PH
2.5-4.0之间稳定，低于2.5或高于4.0很快失活。
1.5最适作用温度：对0.5%酪蛋白在PH3.0左右，最适用温度范围30-50℃，最适用温度为40℃。
1.6酶的最适作用PH：在40℃条件下最适作用PH范围
2.5-4.0，最适作用PH
3.0。
1.7各种金属离子对酶活的影响：被Mn、Ca、Mg离子激活，被Cu、Hg、Al离子所抑制。
酶活力：5万-20万单位/克
2、应用工艺（根据试验情况进行调整）
1、白酒工业：
本品用以淀粉为原料的生产酒精及白酒行业，提高出酒率0.25%个酒分，提高发酵速度。
2、食品工业：
食品上用以淀粉改良，提高食品风味、改良品质，因能提高氨基酸含量
3、啤酒生产：
能有效阻断双乙酰生成，缩短啤酒成熟期。
4 饲料添加剂：提高饲料利用率。
5、毛皮软化：
提高上色率，手感丰满，增加毛皮光泽。
推荐实验的初始添加量从醪液的百万分之一开始。
推荐使用：先将酸性蛋白酶按1：20溶于35-40℃温水中，浸泡活化1小时，期间每15分钟搅拌一次。
酸性蛋白酶，厂家专业生产，期待您的来电。
3注意事项
1、此产品可完全溶于水，使用安全可靠。
操作时请勿直接与酶制剂接触，若有接触需及时用清水冲洗。
2、原包装打开后尽快使用，剩余部分需扎口保存。
3、本品在贮运中要避免雨淋和曝晒，禁止与有毒有害物质混运、混存。
4产品包装
1、本产品液体型采用25kg/200kg无毒塑料桶;固体型标准包装采用薄膜袋包装，每袋1kg。
也可按客户要求规格包装。
2、本品应存放于25℃以下阴凉干燥处，避免高温和阳光直射，保存半年。