胞浆、胞核提取(细胞)

胞浆/胞核提取（细胞）

一、胞浆蛋白的提取

1、估计细胞的量

5*1051*1065*106

Cytosol Extraction Buffer A(ul) 25 50-100 300-500 Cytosol Extraction Buffer B(ul) 1.2-1.5 3-6 18-30

Nuclear Extraction Buffer (ul) 5-10 20 100

2、每个培养皿PBS洗两次，吸干PBS（冰上操作）

3、每个培养皿加入150ul CEB-A,把细胞刮下，每个皿刮80次，直到无滑腻感，说明细胞全部刮下，将细胞转入EP管，注射器抽吸10次左右，充分裂解细胞

4、冰上孵育20min,每5min震荡10s

5、离心1000*g，4℃，5min,把上清液吸入新EP管内，为胞浆蛋白，沉淀物包含粗制核蛋白（尽量把上清吸干净）

一、细胞胞核蛋白的提取

1、粗制核蛋白由上述步骤5得到，去除膜成分，用100ul CEB-A加入5ul CEB-B，漩涡震荡10s，冰上孵育1min，在低温离心机中以1000*g，4℃，5min,倒上清，并收集细胞碎片

2、用100ul CEB-A清洗细胞核碎片，1000*g，4℃，5min,去上清

3、加入70-100ul 冰的NEB转移到粗制细胞核中涡旋

4、将EP管放到冰上孵育30min，并间隔震荡5次

5、1200*g，4℃，5min

6、将含有核蛋白的上清液转移到新的离心管中，-20℃保存