滋养层细胞表面抗原2蛋白在鼻咽癌中的表达及其与微血管密度的关系

滋养层细胞表面抗原2蛋白在鼻咽癌中的表达及其与微血管

密度的关系

陈顺金;吴笑英;何锦添;王凤平;叶伟标;李伟滔

【摘要】目的:研究滋养层细胞表面抗原2(Trop2)蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与肿瘤微血管密度(MVD)的关系,探讨Trop2蛋白在鼻咽癌发生发展的作用及临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测40例鼻咽癌组织及20例慢性鼻咽炎组织中Trop2蛋白的表达情况,并采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算MVD,统计分析鼻咽癌组织中Trop2蛋白的表达与临床病理参数及MVD之间的关系.结果:与慢性鼻咽炎组织比较,Trop2蛋白在鼻咽癌组织中的表达明显升高(P＜0.05).Trop2蛋白在鼻咽癌组织中的表达与患者性别、年龄无关(P＞0.05),与鼻咽癌TNM分期及淋巴结转移密切相关(P＜0.05),鼻咽癌组织中Trop2蛋白的表达与MVD呈显著正相关关系(r=0.579,P＜0.05).结论:鼻咽癌组织中Trop2蛋白的表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移及MVD密切相关.Trop2蛋白可通过促进肿瘤内血管增生,从而促进鼻咽癌的生长和侵袭转移.

【期刊名称】《广西医科大学学报》

【年(卷),期】2019(036)006

【总页数】5页(P939-943)

【关键词】鼻咽癌;滋养层细胞表面抗原2;免疫组织化学;CD105;肿瘤微血管密度【作者】陈顺金;吴笑英;何锦添;王凤平;叶伟标;李伟滔

【作者单位】广东省东莞市人民医院耳鼻喉科,东莞523000;广东省东莞市人民医

院耳鼻喉科,东莞523000;广东省东莞市人民医院耳鼻喉科,东莞523000;广东省东

莞市人民医院检验科,东莞523000;广东省东莞市人民医院病理科,东莞523000;广

东省东莞市人民医院病理科,东莞523000

【正文语种】中文

【中图分类】R473.73

鼻咽癌是我国南方地区常见的头颈部恶性肿瘤，其发病率占头颈部恶性肿瘤的首位。虽然近年来对鼻咽癌的诊治已经取得了很大进展，但还是存在预后较差的特点，主要原因是鼻咽癌发生部位较为隐蔽且初发症状不明显，加上不少患者对鼻咽癌早期症状知晓匮乏，导致患病后无法获得早期就诊，多数患者在确诊时已处于中晚期[1]。因此，研究鼻咽癌的发生发展对早期诊断、治疗鼻咽癌及其预后的评判提供

重要的线索及依据。近年来，随着分子生物学的发展，越来越多的蛋白质分子生物标记物应用于鼻咽癌的诊断、治疗及预后判断。

滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell-surface antigens 2，Trop2)蛋白是一种40 ku的跨膜糖蛋白，它属于肿瘤相关钙信号转导子基因家族成员，最

初是在人的滋养层细胞中得到鉴定[2]。目前已有研究证明，Trop2蛋白在鼻咽癌

中的表达与肿瘤细胞的增殖及EB病毒感染强相关[3]，但是Trop2蛋白在鼻咽癌

组织中的表达与血管生成关系尚鲜有报道。因此，本研究分析Trop2蛋白在鼻咽

癌中表达情况及其与肿瘤微血管密度(microvesse1 density，MVD)的相关性，以探讨Trop2蛋白在促进血管生成中的作用及临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象选取2017年1月至2018年1月广东省东莞市人民医院耳鼻喉科收

治的鼻咽癌患者40例作为研究组，所有患者均经病理证实为鼻咽癌，其中男33例，女7例；年龄23～79岁，平均(48.7±13.2)岁；依据中国鼻咽癌2008临床

分期标准，临床分期Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期28例。另选取同期行鼻咽活检且

经病理证实为慢性鼻咽炎患者20例作为对照组，其中男9例，女11例；年龄22～57岁，平均(40.9±10.0)岁。两组年龄、性别比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。本研究已取得本院医学伦理委员会批准，所有患者及家属均知情同意，并已签署知情同意书。

1.2 主要试剂兔抗人Trop2多克隆抗体(Abcam公司)；HRP标记山羊抗兔及羊抗鼠抗体(Earthox公司)；通用SP试剂盒、DAB KIT (北京中杉金桥公司)；兔抗人CD105多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.3 免疫组织化学检测所有标本均在手术中标本离体后30 min内完成取材，10%甲醛固定，石蜡包埋。常规石蜡切片、二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水，枸橼酸盐修复液高压修复3 min，免疫组化笔在检测组织外围1～2 mm处划圈，3%H2O2孵

育20 min阻断内源性过氧化物酶，PBS洗涤3次后加入适量10%正常羊血清在

室温下封闭15 min，倾去血清，滴加兔抗人Trop2多克隆抗体(1∶500稀释)或兔抗人CD105多克隆抗体(1∶200稀释)，4 ℃过夜，PBS洗涤3次后加入二抗，室温孵育30 min。PBS洗涤3次后，DAB显色、苏木精复染、梯度酒精脱水、二

甲苯透明、中性树胶封片。同时，以自身对照作为阳性对照，以PBS代替一抗作

阴性对照。

1.4 免疫组织化学结果判定标准 Trop2蛋白免疫组织化学染色阳性反应呈现棕黄

色颗粒，阳性细胞为细胞着色且明显高于背景或背景不着色。免疫组化结果采用双盲法，2名主治医师以上有经验的病理科医师共同进行，结果不一致时协商统一判定结果。参考相关文献[3]，根据染色阳性细胞数目百分比分为4级：<1%计0分，1%～10%计1分，>10%～50%计2分，>50%计3分；染色强度按肿瘤细胞着

色的深浅计分：无着色计0分，黄色为弱阳性计1分，浅棕色为中等阳性计2分，棕褐色为强阳性计3分；两项之和：0～3分为无表达或低表达，4～6分为高表达。CD105表达结果判定及MVD计算参照Tomasz[4]报道的方法进行。CD105表达结果判定：以血管内皮细胞呈棕黄色染色为CD105阳性，微血管计数以被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇作为1个血管计数。避开肿瘤坏死或出血区域，先在低倍镜(×100)下选择新生血管最丰富的“热点”(“hotspot”)区，然后在高倍镜(×400)下计数单个微血管，每例标本观察1张切片，选取高倍镜视野(×400)

下3个视野范围内的微血管数值，计算平均值作为该例切片的MVD值。

1.5 统计学方法采用SPSS 20.0软件对数据进行统计处理。计量资料以均数±标准差表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，

P<0.05为差异有统计学意义，相关分析采用非参数Pearson等级相关分析。

2 结果

2.1 Trop2蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系镜下可见，Trop2蛋白阳性表达在鼻咽癌组织的细胞膜上，在鼻咽癌组织的细胞膜上可见到

较多的棕色颗粒，但是在慢性鼻咽炎组织中较少见到棕色颗粒(图1)。Trop2蛋白在鼻咽癌组织中表达(65.0%)明显高于慢性鼻咽炎组织(15.0%)(χ2=11.421，

P<0.05)。

2.2 Trop2蛋白在鼻咽癌中的表达与临床病理特征的关系 Trop2蛋白在鼻咽癌组

织中的表达与患者性别、年龄无关(P>0.05)，与鼻咽癌TNM分期，淋巴结转移密切相关(P<0.05)，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期者Trop2蛋白的表达显著高于Ⅰ～Ⅱ期者，有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者，比较差异具有统计学意义(P<0.05)，

见表1。

2.3 CD105标记的MVD结果用CD105标记鼻咽癌组织中的MVD，镜下见

CD105阳性染色均为棕(黄)色，主要位于血管内皮细胞胞膜(图2)，结果表明，高