肥达试验和沉淀反应实验报告

实验报告

二者均在正常值内，患伤寒的可能性小；

H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应；O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染；

一般间隔1~2周复查，若抗体效价比前次结果增高2~4倍，则具有诊断价值。

实验报告

任务二：打孔

1.待琼脂板凝固后在琼脂板中间部分打四个孔，孔径3mm，孔距10mm。在左上角打一个孔作为标记。用胶头滴管吸去空上废液。

提示：

（1）打孔时要小心，勿使琼脂层脱离载玻片或琼脂板底层开裂，以免加样时顺裂缝或底部散失。一旦出现裂缝或脱离现象，可向孔内滴加少许温琼脂加以弥补或将琼脂板在火焰高处来回通过几次补底。

（2）在琼脂板左上角打上标记孔，有助于确定正负极方向和样本上样位置，通常情况下，有标记孔侧，放置于正极端。

任务三：加样

1.如下图所示加样，用移液枪每个孔加10微升对应液体：

C：人待测血清；D：人阳性血清；E：抗人血清抗体/诊断血清

提示：

（1）抗原和抗体在一定的pH条件下，由于带电荷量的多少及分子量大小不同，在电场中以不同的速度作定向移动。在pH8.6的缓冲液中，多数蛋白质抗原物质带负电荷，在电场作用下向阳极移动，而其抗体大多为Y球蛋白，等电点较高，带负电荷较少，且分子量较大，电泳速度慢，受电渗作用影响向负极移动。

（2）加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。

（3）抗原、抗体的量应相接近时容易出现沉淀带，反之不易发生，如抗原过多，可造成假阴性结果，可通过稀释抗原加以解决。

任务四：正确放置琼脂板至电泳槽

1.向电泳槽中加入约2/3体积的pH8.6 0.05mol/L巴比妥溶液，将加好样的琼脂板放入电泳槽，有标记孔的一侧放在正极端。

2.用纱布条搭在琼脂板两侧，以便电泳。

提示：

（1）电泳时抗原、抗体电极方向不可放反。

（2）搭桥时应注意与凝胶接触紧密，否则会使电流不均匀，致使沉淀线歪斜、不均匀。

任务五：确定电泳电压

1.设置电泳仪Us=6V，Is=4mA，Ts=60：00

提示：

电压、电流增大时，电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形，可将琼脂融化，电流过大抗原抗体蛋自易变性，干扰实验结果；电压过低时沉淀线出现的时间会延长。