脲酶活性的测定

实验三 大豆制品中脲酶活性的测定
2010.10.30
动物营养与饲料学
脲酶测定
一、实验目的
1、掌握大豆制品中脲酶活性的测 定原理 2、熟悉掌握用PH增值法测定大豆 熟悉掌握用PH增值法测定大豆 PH 制品中脲酶活性
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二、 测定原理
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2、称量瓶应塞紧 3、关于固定质量称量法 4、通常： 通常： 0.02<△ 0.02<△PH≤0.3 加工适度 △PH<0.02 加工过度 △PH>0.3 加工不够
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2、空白试验： 空白试验： 准确称取0.200 0.001g样品于 0.200± 准确称取0.200±0.001g样品于 称量瓶中，加入10ml0.05mol/L 10ml0.05mol/L磷 称量瓶中，加入10ml0.05mol/L磷 酸盐缓冲溶液，加塞混合， 酸盐缓冲溶液，加塞混合，置于 30℃水浴中 水浴中。 30℃水浴中。 3、样品试验与空白试验的制备应相 分钟，并且每隔5 隔5分钟，并且每隔5分钟搅拌内 容物一次。 容物一次。
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2、重复性： 重复性：
每个样品应取两个平行样测定， 每个样品应取两个平行样测定， 以其算术平均值为结果。 以其算术平均值为结果。
七、注意事项
1、关于酸度计的使用
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4、30分钟后，相隔5分钟将样品与空 30分钟后，相隔5 分钟后 白试验的称量瓶从水浴中取出， 白试验的称量瓶从水浴中取出，将 上层液体移入5ml烧杯中， 5ml烧杯中 上层液体移入5ml烧杯中，在从水 浴中取出刚达5分钟时， 浴中取出刚达5分钟时，分别测定 此种上层液体的PH PH值 此种上层液体的PH值。
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脲பைடு நூலகம்测定
六、结果的计算
1、计算公式： 计算公式：
样品试验的PH值与空白试验的PH 样品试验的PH值与空白试验的PH值 PH值与空白试验的PH值 两者之间的差异，则为脲酶活性的指数， 两者之间的差异，则为脲酶活性的指数， 即： 脲酶活性 = 试样的PH测定值-空白的PH测定值 试样的PH测定值-空白的PH PH测定值 PH测定值
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三、仪器及试剂
1、仪器
分析天平、样品粉碎机、 分析天平、样品粉碎机、样品分析 恒温水浴、酸度计、称量瓶、 筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、 移液管、 移液管、角匙等
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五、测定步骤
1、样品试验： 样品试验： 准确称取0.200±0.001g样品 准确称取0.200±0.001g样品 0.200 于称量瓶中，加入10ml 10ml尿素缓冲 于称量瓶中，加入10ml尿素缓冲 溶液，加塞混合，然后置于30℃ 溶液，加塞混合，然后置于30℃ 水浴中， 水浴中，在混合操作时称量瓶切 勿倒置。 勿倒置。
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶 液混合， 30℃保持30分钟 保持30分钟， 液混合，在30℃保持30分钟，尿素酶催化 尿素水解产生氨， 尿素水解产生氨，由于尿素水解释放的氨 是碱性的，可使溶液PH值升高， PH值升高 是碱性的，可使溶液PH值升高，试样溶液 与空白溶液的PH值之差， PH值之差 与空白溶液的PH值之差，即可间接表示出 氨量的多少。 氨量的多少。 NH2CONH2+ 尿素酶 2NH3 ↑ + CO2
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2、试剂
0.05mol/L磷酸盐缓冲液、尿素缓 磷酸盐缓冲液、 磷酸盐缓冲液 冲溶液等
四、试样的选取和制备
选取具有代表性的试样，粉碎至40 选取具有代表性的试样，粉碎至40 四分法”缩减至200 300g， 200～ 目，用“四分法”缩减至200～300g， 密闭保存，以防试样组分变化或变质。 密闭保存，以防试样组分变化或变质。