苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)
大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质
大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质李倩;徐美娟;夏海锋;饶志明【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2011(030)002【摘要】以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000.选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%.并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适PH值为6.0,在PH值2.0～6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好.K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用.醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性.酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47 μmol/(L·min).【总页数】6页(P267-272)【作者】李倩;徐美娟;夏海锋;饶志明【作者单位】江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122【正文语种】中文【中图分类】Q814【相关文献】1.Sulfolobus tokodaii strain 7高温酸性α-淀粉酶基因在大肠杆菌中克隆表达及其酶学性质 [J], 魏涛;孙浩;申玉龙;毛多斌2.牦牛MDHⅡ基因克隆表达及脂代谢候选基因关联性分析 [J], 陈露露;王会;王吉坤;柴志欣;王嘉博;陈智华;信金伟;姬秋梅;钟金城3.丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究 [J], 杨登峰;韦宇拓;周兴;黄志民;黄日波4.大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质 [J], 于平;刘航;朱鹏志;胡淳玉;杨柳贞;贺敏;马健5.鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达及多克隆抗体的制备 [J], 丁忠庆;刘胜旺;孔宪刚;宋铭忻因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苹果酸脱氢酶(MDH)的测定方法及在肝炎中诊断价值的研究
苹果酸脱氢酶（MDH）的测定方法及在肝炎中诊断价值的研究发表时间：2016-04-15T10:33:24.063Z 来源：《健康世界》2015年30期供稿作者：李彬先孟宪玲张晓梅王丹峰吴翠翠[导读] 北华大学附属医院 MDH是肝炎的诊断、判断病情、估计愈后、观察疗效的良好指标，可提高肝炎的早期诊断率。
北华大学附属医院吉林吉林市 132011摘要：目的苹果酸脱氢酶（MDH）的测定方法——速率法。
进一步探讨、研究MDH在肝炎诊断中的意义和价值。
方法建立了苹果酸脱氢酶的检测方法——速率法，并制备成试剂盒。
同时对120例健康体检者、120例肝炎病人和65例肝癌、65例肝硬化病人同时进行了MDH的检测分析。
结果肝炎病人血清中苹果酸脱氢酶明显升高，是对照组的5.2倍。
急性肝坏死时升高的更突出，是对照组的11.2倍，经统计学处理P<0.01。
肝炎的初期和病情的极期升高的幅度与严重性相关。
结论用速率法判定MDH快速、简便、准确、试剂样品的用量小，可用于各型自动生化分析仪。
MDH是肝炎的诊断、判断病情、估计愈后、观察疗效的良好指标，可提高肝炎的早期诊断率。
关键词：苹果酸脱氢酶；速率法；肝炎；肝硬化苹果酸脱氢酶发现于1910年，肝脏含量丰富，到目前为止分为线粒体中的M-MDH和位于胞浆中的C-MDH两种[1]，国外有人报道临床意义和测定方法，国内报道很少，临床应用主要用于肝炎的检测。
测定方法为分光光度法和比色法。
速率法未见有报道及试剂盒提供。
我们于2005年起对MDH的检测方法和对肝炎的诊断价值进行研究。
旨在于为肝炎的诊断提供新的敏感可靠的指标。
弥补肝功能常规组项的缺陷。
1 材料与方法1.1 试剂盒测定的原理在 340nm波长下，测定每分钟MDH吸光度的变化值（AA/分钟），计算MDH的活性。
1.2 试剂盒测定的方法及主要参数1.2.1 测定方法：速率法1.2.2 主要参数：反应温度37℃，测定时间60s，延迟时间：60s。
一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒[发明专利]
![一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ba0b711eaef8941ea76e05f1.png)
专利名称：一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：李彬先,孟宪玲,张晓梅,王丹峰,吴翠翠,孙亚臣,石宏,董理
申请号：CN201711137382.2
申请日：20171116
公开号：CN107841526A
公开日：
20180327
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物检测技术领域，公开了一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒，设置有相互粘贴的第一箱体和第二箱体；所述第一箱体的中部铆接有转轴，所述转轴上套装有转盘，所述转盘的外侧设置有若干检测盒；所述检测盒的内侧设置有药品盒；所述第二箱体内卡装有多个注射装置，所述第一箱体的顶部焊接有检测池，所述检测池的上端套装有药品添加盒。
该试剂盒敏感性高，特异性强，重复性好。
由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素吗，适于测定不同生物样品内的苹果酸脱氢酶活性，如细胞和组织培养上清液以及纯化所得的线粒体。
申请人：北华大学
地址：132000 吉林省吉林市滨江东路3999号
国籍：CN
代理机构：北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)
代理人：李静
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苏州科铭试剂盒总清单-5.3
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二氧化碳测定试剂盒(PEPC酶法)产品技术要求zhongshengbeikong
二氧化碳测定试剂盒(PEPC酶法)产品技术要求zhongshengbeikong 二氧化碳测定试剂盒（PEPC酶法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中二氧化碳的浓度。
1.1包装规格液体单剂型试剂（R）：20mL×4，校准品：3mL×1；试剂（R）：20mL×6，校准品：3mL×1。
1.2主要组成成分试剂（R）液体:磷酸烯醇式丙酮酸（PEP） 12.5mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC） 400U/L） 8.0mmol/L氯化镁（MgCl2苹果酸脱氢酶（MDH） 4100U/L还原辅因子 0.6mmol/L校准品液体：水溶液基质（1个浓度）碳酸氢钠目标浓度25.0 mmol/L(每批定值，详见值单) 2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：2.1.1试剂（R）应为浅黄绿色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.1.2校准品应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长400nm～420nm（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≥0.600；试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.015。
2.4准确度测定GBW06101，测定结果的相对偏差应不超过±10％。
2.5分析灵敏度对应于浓度为 25mmol/L的二氧化碳所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.010～0.080的范围内。
2.6重复性重复测试高、中、低浓度样本，变异系数（CV）应≤10%。
2.7批间差测试同一样本，批间差（R）应≤10%。
2.8线性范围在［3，60］mmol/L范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在（25，60］mmol/L范围内，线性相对偏差应不超过±10％；在［3 ，25］mmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±2.5mmol/L2.9试剂稳定性2.9.1效期稳定性原包装的试剂盒在2℃～8℃避光贮存，有效期为12个月。
二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC 酶法）说明书
二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC酶法）说明书【产品名称】二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC酶法）【包装规格】a)单一试剂：1×15mLb)单一试剂：2×40mLc)单一试剂：5×60mLd)单一试剂：2×100mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中二氧化碳的含量。
血液中CO2含量对人体内酸碱平衡的调节起着重要的作用。
增高：代谢性碱中毒，如幽门梗阻、柯兴综合征等。
呼吸性酸中毒，如呼吸中枢抑制、呼吸机麻痹等。
降低：代谢性酸中毒，如严重腹泻、肾功能衰竭等。
慢性呼吸碱中毒[1]。
临床上测定二氧化碳代谢性与呼吸性酸、碱中毒的辅助诊断，通常与pH值同时进行。
【检验原理】样本中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下，与磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）催化下，生成苹果酸，同时NADH被氧化成NAD+，NADH被氧化的程度与碳酸氢根的含量成正相关。
【主要组成成分】试剂主要组分三羟甲基氨基甲烷缓冲液250mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）10g/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）10KU/L苹果酸脱氢酶（MDH）8KU/L还原型辅酶I（NADH） 2.2g/L表面活性剂及稳定剂适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为12个月，生产日期、有效期见标签。
2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-14 00；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/ BS-600/BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。
苹果酸-天冬氨酸代谢对水稻镉吸收转运特性的影响
张昕，王惠君，薛卫杰，等.苹果酸-天冬氨酸代谢对水稻镉吸收转运特性的影响[J].农业环境科学学报,2023,42（10）：2147-2154.ZHANG X,WANG H J,XUE W J,et al.Effects of malate-aspartic acid metabolism on cadmium uptake and transport in rice[J].Journal of Agro-Environment Science ,2023,42（10）：2147-2154.苹果酸-天冬氨酸代谢对水稻镉吸收转运特性的影响张昕，王惠君，薛卫杰，王常荣，张长波，黄永春，刘仲齐*（农业农村部环境保护科研监测所农业农村部产地环境污染防控重点实验室，天津300191）Effects of malate-aspartic acid metabolism on cadmium uptake and transport in riceZHANG Xin,WANG Huijun,XUE Weijie,WANG Changrong,ZHANG Changbo,HUANG Yongchun,LIU Zhongqi *（Key Laboratory of Original Agro-Environmental Pollution Prevention and Control,Agro-Environmental Protection Institute,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Tianjin 300191,China ）Abstract ：To explore the roles of malate-aspartic acid metabolism in the processes of cadmium uptake and transport in rice plant,the distribution characteristics of cadmium and the change of aspartic acid and glutamate in different rice organs were examined by adding or spraying different concentrations of malic acid under cadmium stress.The results revealed that adding 0.5–1.5mmol·L -1MA significantly inhibited cadmium accumulation in the roots and shoots of rice seedlings.The cadmium content in the soluble fraction of root and shoot cells decreased by 23.8%–39.6%and 29.5%–39.7%,respectively.Simultaneously,the content of glutathione,aspartic acid,and glutamatein roots and shoots increased significantly,while the content of PC 2,PC 3and PC 4decreased significantly.During the grain-filling period,the activities of malate dehydrogenase and aspartate transaminase in developing grains increased by 63.0%–96.8%and 14.6%–22.6%,respectively.After foliar application of 5mmol·L -1malic acid three times at anthesis,the content of aspartic acid and glutamate in both vegetative organs and rice grains increased significantly.The transport efficiency of cadmium from the stem base to the top vegetativeorgans and rice grains decreased significantly,resulting in a 37.5%–55.4%decrease in rice cadmium.These results indicate that promoting the transformation between malate and aspartic acid or glutamate in cells can efficiently inhibit the uptake and transport of cadmium in the rice plants and significantly reduce the cadmium content in top vegetative organs and rice grains.Keywords ：rice;cadmium;malic acid;aspartic acid;glutamate;transaminase收稿日期：2023-01-12录用日期：2023-03-10作者简介：张昕（1994—），女，黑龙江哈尔滨人，博士研究生，从事植物营养学研究。
迈瑞生化项目SOP文件
丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/LL-丙氨酸750 mmol/L乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质
ｄｒ ｍ ａ ｉａ ｌ ｍ ｐ ｏ ｅ ｔ ｈｅ ｍ ａ ｔ ｂ ｌｔ ｆＭ Ｄ Ｈ ． Ｗ ｈｅ ａ ｏ ｃ ｔｃａ ｉ ｓｕｓ ｄ ａ ｕ ｔ ａ ｅ， ａ ｔｃ ｌｙ ｉ ｒ ｖ ｈｅｔ ｒ ｌｓ ａ ｉｉｙ ｏ ｎ ｏｘ ｌ ａ ｅ ｉ ｃ ｄ ｗａ ｅ ｓｓ ｂｓ ｒ ｔ
大肠 杆 菌 苹果 酸脱 氢酶 基 因 ｍｄ ｈ的克隆 、 高效 表 达及 酶 学性质
李 倩 ， 徐 美娟 。 夏 海锋 ， 饶 志明 叫 ， 。
（ ．江 南 大 学 工 业 生 物技 术 教 育 部 重 点 实 验 室 ， 苏 无 锡 ２ ４ ２ ；２ 江 南 大 学 生 物 工 程 学 院 ， １ 江 １１２ ．
苹 果 酸 脱 氢 酶 （ Ｃ １ １ １ ３ ， ｈ 广 泛 分 布 Ｅ ． ． ． ７ ｍｄ ）
公 司 ； ｉ、 Ｄ ： 自 Ｓｇ Ｔｒ Ｓ Ｓ 购 ｓ ｉｍａ公 司 ；还 原 型 酰 胺 腺
在动物组 织 、 生物 和植 物 中口 。它 是 一种 活性 较 微 强 的酶 ， 存在 于 乙醛 酸体 、 粒 体 、 氧 化 物 体 、 线 过 叶 绿体 、 细胞浆 、 以及 锥 虫 甘 油体 内。ｍ ｈ为多 聚 体 ｄ
ｔ ｅｅ ｚ ｍｅ ｋｎ ｔｃｃ ｎ ｔ ｎ ｓｏ ｈ ｎ ｙ ｉ ｅｉ ｏ ｓａ ｔ ｆＫｍ ｎ ａ ｄ Ｖｍａ ｓ０ ２ ５ ｍｍｏ／ ｎ ． ７ Ⅱ ｌ（ ・ｒｉ ） ｘ ｗａ ． ３ ｌ Ｌ ａ ｄ ０ ４ ｍｏ ／ Ｌ ａ ｎ ，
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中 图分 类 号 ： ８ ４ Ｑ １ 文 献 标 识 码 ：Ａ
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NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒说明书
NADP—苹果酸脱氢酶（NADP—MDH）试剂盒说明书NADP苹果酸脱氢酶（NADPMDH）试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做推测定测定意义：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培育细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是紧要的中心产物，连接多条紧要的代谢途径。
因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演侧紧要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
依据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD倚靠的MDH和NADP倚靠的MDH，NADPMDH重要存在于真核细胞中。
测定原理：NADPMDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光汲取下降。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的构成和配制：试剂一、提取液100mL×1瓶，在4℃保存；试剂二、液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂三、粉剂×1瓶，20℃保存；样本测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培育细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；依照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波碎裂细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至340nm，蒸馏水调零。
苹果酸脱氢酶(MDH)提取液
苹果酸脱氢酶(MDH)提取液简介：苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)是合成苹果酸的关键酶之一，催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化，参与众多生理代谢途径如TCA 循环C 4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH 在植物的生长发育中发挥着重要作用，广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上，为三羧酸循环中的一种酶，由于酶的来源不同，其某些性质也不尽相同。
MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
Leagene 苹果酸脱氢酶(MDH)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苹果酸脱氢酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。
2、配制苹果酸脱氢酶提取工作液：取出苹果酸脱氢酶提取液和PMSF，恢复至室温，混合，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF 的效率会有所下降。
3、加入预冷的苹果酸脱氢酶提取工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
4、离心，留取上清液即为苹果酸脱氢酶粗提液，保存，用于苹果酸脱氢酶的检测或其他用途。
计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%编号名称CS0431Storage 试剂(A):苹果酸脱氢酶提取液500ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml 4℃使用说明书1份注意事项：1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20-80℃。
2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苹果酸脱氢酶提取工作液稀释样品后重新测定。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
试剂盒基础知识
按试剂组成分类
单试剂优缺点
优点： 操作简便适用于各类生化分析仪，节约试剂位 缺点： 配方复杂（稳定剂、掩蔽剂），稳定性差，不 能完全避免内外源物质干扰。
按试剂组成分类
双试剂的特点
（1）可较彻底排除样品空白和内外源干扰物 （2）更加符合酶偶联反应的特性和过程 （3）试剂配方简单 （4）试剂稳定，便于储存，运输和使用 （5）可用抑制法直接测定某些同工酶
试剂盒基础知识
试剂盒的概念
把某一项临床生化分析测定项目的试剂及辅助用品配套 组装在一起，各组分在较长的保存期内稳定使用时按试 剂盒中的说明书操作。
试剂盒的要求
试剂盒所采用的测定方法特异性好、灵敏度、准确度、 精密度符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO等推荐 的指标。 试剂盒的储存期至少为1年。 水溶性、低粘度、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、 不污染环境。 所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、 IFC准确度 通常以回收率、定值血清的靶值范围、对照试验及干 扰试验的结果来分析判断。 精密度 试剂的瓶间差异、批内精密度和批间差异三组测定的 平均值之间应无显著差异，否则，试剂盒的均一性不符 合要求。 线性范围 指该试剂盒按其说明使用时可准确测量的范围。 抗干扰作用 双试剂型试剂盒主要优点是抗干扰作用。
液体双试剂的优点
提高了抗干扰反应的能力 在临床生化测定过程中，血标本除了含有待测物质外， 还含有各种酶、有机物、无机盐等物质，这些物质都会 干扰或参与测试反应，引起非特异性反应干扰，而双试 剂型试剂盒设计的一个主要目的就是为了克服这种干扰 反应。 排除样品中非测定成分的干扰，提高准确性
例如：ALT 内源性丙酮酸+NADH LDH 乳酸+NAD L-丙氨酸+α-酮戊二酸+NADH ALT 丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+NAD++H2O
小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)说明书
小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织匀浆及相关液体样本中苹果酸脱氢酶(MDH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)水平。
用纯化的小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入苹果酸脱氢酶(MDH)，再与HRP标记的苹果酸脱氢酶(MDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的苹果酸脱氢酶(MDH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：135 U/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
索莱宝 BC5490 苹果酸含量检测试剂盒（WST 显色法）说明书
苹果酸含量检测试剂盒（WST 显色法）说明书可见分光光度法货号：BC5490 规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 规格 保存条件 提取液一 液体30 mL×1瓶 2-8℃保存 提取液二 液体5 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体20 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×1瓶 -20℃保存 试剂三 液体12 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂四 液体50 μL×1支 2-8℃保存 试剂四稀释液 液体8 mL×1瓶 2-8℃保存 标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1. 试剂二：临用前加入13 mL 蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存4周；2. 试剂四：临用前按试剂四：试剂四稀释液=10μL ：1mL （约8T ）的比例稀释试剂四备用，现用现配，用多少配多少；3. 标准品：100μmol/mL 苹果酸标准液。
临用前取20μL 100μmol/mL 苹果酸标准液，加入480μL 蒸馏水，充分混匀，配制成4μmol/mL 苹果酸标准液；再取100μL 4μmol/mL 苹果酸标准液，加入900μL 蒸馏水，充分混匀，配制成0.4μmol/mL 苹果酸标准液使用，现配现用。
（实验中每管需要100μL ，为减小实验误差，故配制大体积）。
产品说明：L-苹果酸是三羧酸循环的中间产物，也是苹果酸-天冬氨酸穿梭的重要组成部分。
苹果酸-天冬氨酸穿梭是氧化磷酸化的还原当量跨线粒体膜运输过程所必需的。
在低等生物体内，苹果酸在苹果乳酸发酵的过程中转化为乳酸，同时产生CO 2。
苹果酸常用作食品和制药工业的添加剂，苹果酸的定量分析在啤酒、葡萄酒、奶酪和水果生产领域也具有至关重要的作用。
苹果酸脱氢酶催化苹果酸和NAD 生成草酰乙酸、NADH 和NH 4+，在1-mPMS 作用下，WST-1可与NADH 反应，产生水溶性Formazan ，在450nm 下有最大吸收峰，据此可计算苹果酸含量。
微生物中苹果酸脱氢酶研究现状及展望
微生物中苹果酸脱氢酶研究现状及展望肖景惠;张庆芳;于爽;逄飞;迟乃玉;王梦雨【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2018(037)008【摘要】苹果酸脱氢酶(MDH) EC 1.1.1.37是一类广泛存在于自然界生物体内的氧化还原酶,主要参与三羧酸循环(TCA)、乙醛酸循环、苹果酸-天冬氨酸循环等代谢途径.该酶可催化草酰乙酸和苹果酸之间的可逆转化,是细胞中心代谢通路中的关键酶之一.MDH广泛应用于心肌梗塞、急性实质性肝损伤、肝癌、肺癌的早期诊断,是常用的临床诊断用酶,并在生物制药、化工检测等领域也具有广泛市场需求.该文综述了微生物中MDH的蛋白结构、催化机制以及活性调节,并对其酶学性质、医疗诊断及免疫领域的应用、工业领域的应用以及生产方面,阐述了苹果酸脱氢酶的研究进展,以期为苹果酸脱氢酶的进一步开发和利用提供参考.【总页数】5页(P14-18)【作者】肖景惠;张庆芳;于爽;逄飞;迟乃玉;王梦雨【作者单位】大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心,辽宁大连116622;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心,辽宁大连116622;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心,辽宁大连116622;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心,辽宁大连116622;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心,辽宁大连116622;大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连116622;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心,辽宁大连116622【正文语种】中文【中图分类】TS201.25【相关文献】1.微生物资源在茶产业中的应用现状及展望 [J], 陈惠兰2.微生物碳酸酐酶在岩溶发育中的研究现状及展望 [J], 张小菊;杨翠珍;杨娟3.泡菜中微生物的研究现状及展望 [J], 生书晶;佘婷婷;严雪群;骆敏;孙婷琪;陈海峰;4.泡菜中微生物的研究现状及展望 [J], 生书晶;佘婷婷;严雪群;骆敏;孙婷琪;陈海峰5.海洋源低温微生物产苹果酸脱氢酶发酵条件优化 [J], 迟乃玉;肖景惠;倪瑞琪;于爽;张庆芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)
简介：
苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)是合成苹果酸的关键酶之一，催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化，参与众多生理代谢途径如TCA循环C4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH在植物的生长发育中发挥着重要作用，广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上，为三羧酸循环中的一种酶，由于酶的来源不同，其某些性质也不尽相同。
MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
Leagene苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)检测原理是在弱碱条件下，以草酰乙酸(OAA)作为显色底物，OAA在MDH催化下被NADH还原为苹果酸(Mal)，每催化1分子OAA消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(分光光度计)测定吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出苹果酸脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中苹果酸脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、研钵或匀浆器
2、离心管或试管
3、低温离心机
4、比色杯
5、分光光度计
操作步骤(仅供参考)：编号
名称TE0463
50T
Storage
试剂(A):MDH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃
试剂(C):MDH Assay buffer100ml RT
试剂(D):NADH1支-20℃
试剂(E):ddH2O10ml RT
使用说明书1份
1、配制MDH Lysis buffer工作液：取出MDH Lysis buffer和PMSF，恢复至室温，MDH
Lysis buffer：PMSF按一定比例混合，混匀，即配即用，不易久置，否则白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
2、准备样品：
①植物样品：取植物组织(根系)清洗干净，切碎，植物组织：MDH Lysis buffer工作液按一定的比例，加入预冷的MDH Lysis buffer工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
离心，留取上清液即为苹果酸脱氢酶粗提液。
短期4℃保存待用，长期-20℃冻存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于苹果酸脱氢酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用MDH Lysis buffer工作液进行适当匀浆，离心，取上清液，冻存，用于苹果酸脱氢酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的苹果酸脱氢酶，可以使用MDH Lysis buffer 工作液进行恰当的稀释。
3、配制NADH工作液：取出NADH，恢复至室温，准确溶解于ddH2O，混匀，4℃预冷
备用。
-20℃保存1周有效。
4、MDH加样：按照下表设置对照管(备选，一般可以不设对照管)、测定管，溶液应按照
顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的苹果酸脱氢酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
加入物(ml)对照管(备选)测定管
MDH Lysis buffer0.025—
待测样品—0.025
MDH Assay buffer 1.8 1.8
5、MDH测定：加入NADH工作液，立即以分光光度计(1cm光径比色杯)测定吸光度(记
为A0)并同时计时，每隔30s测定一次吸光度，其中至1min时吸光度记为A1，记录其变化。
Leagene建议加入NADH工作液后立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1-3min内，其后反应趋于平缓。
注意：该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADH的消耗速率，再进一步推算出苹果酸脱氢酶的量。
因此加入NADH工作液立即计时很重要，每次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
计算：
苹果酸脱氢酶活性定义：每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位。
液体样品MDH(U/ml·min)=ΔA/(0.01×t×0.025)
式中：ΔA=A0−A1(如有必要，可再减去对照最初1min的吸光度变化量)
0.01=每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位
t=1=检测时间(min)
0.025=待测样品体积(ml)
组织样品MDH(U/g·min)=ΔA/(0.01×t×W)
式中：ΔA=A0−A1(如有必要，可再减去对照最初1min的吸光度变化量)
0.01=每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位
t=1=检测时间(min)
W=待测样品鲜重或干重(g)
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20-80℃。
2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体
积。
4、该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADH的消耗速率，
再进一步推算出苹果酸脱氢酶的量。
因此加入NADH工作液立即计时很重要，每
次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
5、酶液的稀释度应尽量控制在A340/min下降范围在0.1-0.2之间，以便减少实验误差。
6、ΔA为反应最初1min内吸光度变化的绝对量，如有必要可减去对照液最初1min的吸
光度变化量。
7、所测样本的浓度过高，应用MDH Lysis buffer工作液稀释样品后重新测定。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TO1013丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。