胸腺素β4促进肝前体细胞分化为肝细胞的体外探究

天津医科大学硕士学位论文

珠及干细胞。肝细胞包括人和猪肝细胞，人肝细胞体外增殖困难，来源有限，

猪肝细胞的免疫原性及安全性受到质疑。肿瘤源性肝细胞的致瘤性及永生化肝细胞珠的非安全性使其应用受限，所以干细胞的增殖和分化研究成为目前研究

，的热点。

干细胞是一类具有具有自我复制更新和多向分化潜能的细胞ＬＩ３。。肝脏相关

干细胞按起源可分为肝内来源的肝干细胞及肝外来源的肝干细胞。肝内来源的肝干细胞又称为肝前体细胞，包括肝卵圆细剧１４１、小肝细胞样祖细膨１５】等，肝外来源的干细胞包括骨髓干细胞【１６１，问充质干细胞（ＭＳＣ）【ｌ７１，内皮祖细胞，胚胎干细胞，胰腺上皮祖细胞等。

肝前体细胞是由Ｆａｒｂｅｒ等在大鼠化学诱癌模型中首次发现１１８Ｊ，它是在肝脏

严重损伤、肝细胞大量坏死且增殖能力受限时，肝内汇管区及终末胆管树管出现一些胞质少，核呈卵圆形，核浆比例大，胞浆嗜碱性且浅染的小细胞群落，在特定条件下，可分化成为肝细胞和胆管上皮细胞，参与肝脏的修复再生。肝前体细胞表面存在许多生物标记蛋白，包括肝祖细胞标记物、肝细胞标记物及胆管细胞表面标记物。肝祖细胞标记物有ＯＶ６、ＣＤ３４、ｃ－ｋｉｔ掣１９’２０Ｊ，肝细胞标记物有波形蛋白、白蛋白等，胆管上皮细胞标记物有细胞角蛋白１９（ＣＫｌ９）、Ｙ．谷氨酰转肽酶（Ｙ．ＧＧＴ）等【２１１。近来，上皮细胞粘附分子（ＥｐＣａｍ）也被认为在辨认和标记肝前体细胞中具有重要意义【２２１。研究表明，多种细胞成分如肌成纤维细胞、库普弗细胞、肝星形细胞、陷窝细胞、免疫细胞及细胞外基质等组成的“干细胞龛”可容纳、供养肝前体细胞并保持肝前体细胞的自我更新［２３ｊ。

ＷＢ－Ｆ３４４细胞系是目前普遍公认的大鼠肝前体细胞系［２４】，与传统动物模型中分离出的肝前体细胞相比，具有生物学特性稳定、易于体外培养等优点，也有利于进一步迸行体内试验。ＷＢ．Ｆ３４４细胞系是Ｔｓａｏ等在１９８４年从雄性Ｆｉｓｃｈｅｒ－３４４大鼠分离并鉴定的【２５１。作者证实，ＷＢ．Ｆ３４４细胞表达纤连蛋白、甲胎蛋白（ＡＦＰ）及白蛋白（ＡＬＢ），弱表达Ｙ－ＧＧＴ，不表达葡萄糖．６．磷酸酶（Ｇ－６－Ｐ），表明其既表达肝细胞表面标志物，也表达胆管细胞的细胞标志物。随后，将ＷＢ．Ｆ３４４细胞移植到缺乏二肽基肽酶的大鼠，ＷＢ．Ｆ３４４细胞能够与缺乏二肽基肽酶的大鼠的肝细胞融合，且表达二肽基肽酶，分化的肝细胞能够表达白蛋白、转铁蛋白、抗胰蛋白酶ｄ，且形态与成熟肝细胞相同，说明ＷＢ．Ｆ３４４细胞具有分化为形态与功能与正常肝细胞一致的成熟肝细胞的潜能，也进一步证实ＷＢ．Ｆ３４４细胞是存在与肝内的肝前体细胞【２４】。我国学者口６，２７Ｊ也证实体外培养的