植物蛋白质提取方法

一、植物蛋白质提取

1. TCA-丙酮法

（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。

（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、

1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或

过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离

心15 分钟，弃上清。

（4）重复步骤（3）一次。

（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离

心15 分钟，弃上清。

（6）重复步骤（3）一次。

（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。

（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5

分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。

（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。

注意事项：

（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后

面丙酮处理中，尽量除去。

（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融

应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。

（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。

（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。