Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE)
乙酸缓冲液(0.05molL,pH4.3)
北京雷根生物技术有限公司
乙酸缓冲液(0.05mol/L,pH4.3)
简介：
乙酸缓冲液(0.05mol/L,pH4.3)由乙酸钠、氯化钠等组成，其乙酸钠浓度为0.05mol/L ，用乙酸调节pH 值至4.3，可以用于单克隆抗体的纯化等用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求操作。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 IH0335 Storage 乙酸缓冲液(0.05mol/L,pH4.3) 500ml RT 使用说明书 1份 编号 名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) CS0001
ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032
Masson 三色染色液 DH0006
苏木素伊红(HE)染色液 DF0135
多聚甲醛溶液(4% PFA) NA0030
Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE) NR0003
Lezol(总RNA 提取试剂) TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂比色法)。
常用缓冲液配置
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
L Tris-HCl
100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT
2mmol/L ATP
5mmol/L盐酸亚精胺（可选）
ml BSA（组分V）（可选）
3.适量分成小份后，-20℃保存。
17）10 mMATP
组份浓度：10 mMATP
配制量：20 ml
配制方法：
1.称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
2.加20 ml的25 mMTris-HCl（，搅拌溶解。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加的浓盐酸至的水中。
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
2.高温高压灭菌后，4℃保存。
Tris-乙酸电泳缓冲液
Tris-acetate、1mM EDTA(pH8.0)。TAE 是常用的 DNA 电泳缓冲液, 本试剂是 50 倍浓缩的 TAE，主要由 2M Tris-acetate，50mM EDTA 组成，使用时需用蒸馏水或去离子水稀释 50 倍 后使用。
Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE)
试剂盒储存条件： 室温保存。
试剂盒组成：
产品组成 规格
Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE) 使用说明书
100ml 100ml1来自500ml 500ml
1
有效期： 12 个月。
使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品简介： Tris-乙酸电泳缓冲液采用高纯度、高品质原料进行配制，可用于生命科学研究核酸提取
使用方法： 用蒸馏水或去离子水稀释到 1×后使用。
电泳知识
琼脂糖凝胶电泳知识：琼脂糖凝胶浓度（%）线状DNA分子分离范围（kb）0.3 5--600.6 1--200.9 0.5--71.2 0.4--61.5 0.2--32.0 0.1--2试剂及配制：50×TAE缓冲液:2 mol/L Tris-乙酸, 0.05 mol/L EDTA(pH 8.0)。
配制1000 ml 50×TAE缓冲液方法：Tris 242 g，冰乙酸57.1 ml，0.5 mol/L EDTA 100 ml，加入600 ml去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后.调pH 8.0，高温高压灭菌,4℃保存.1×TAE缓冲液的配制:量取20 ml的50×TAE缓冲液,再加入980 ml的去离子水.5×TBE缓冲液（Tris-硼酸）: 配制1000 ml 5×TBE缓冲液方法：Tris 54 g，27.5g硼酸，20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)。
加去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后.调pH 8.0，高温高压灭菌,4℃保存.溴化乙啶贮存液:10 mg/ml 溴化乙啶。
配制100 ml溴化乙啶贮存液方法：称取1 g溴化乙啶,置于100 ml烧杯中,加入80 ml去离子水后搅拌溶解.将溶液定容至100 ml后,转移到棕色瓶中.室温保存.。
6×上样缓冲液:0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,30%甘油（或40%蔗糖）。
配制10 ml 6×上样缓冲液方法：溴酚蓝25 mg二甲苯青FF 25 mg，甘油 3 ml，用6×TAE缓冲液定溶至10 ml,分装成1 ml/管.-20℃保存.琼脂糖凝胶电泳操作步骤：1). 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2). 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3). 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4). 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.常见问题及注意事项：1.配琼脂糖时应使其完全熔化后方可制胶.2.琼脂糖凝胶易于破碎,操作时要轻缓.3.电泳时应注意电源线路,预防触电.4.溴化乙淀具有致癌作用,配制及使用时应带乳胶或一次性塑料手套.并在专门的实验室内使用.5.紫外线对人体有损伤作用,开灯时间不宜太长,注意防护.6.DNA带形状模糊NA加样过多;电压太高;凝胶中有气泡.7.质粒DNA的存在形式有3种,①共价闭环DNA(cccDNA),常以超螺旋形式存在;②开环DNA(ocDNA),此种质粒DNA的两条链中有一条发生一处或多处断裂,因此可以自由旋转从而消除张力,形成松弛的环状分子;③线状DNA,因质粒DNA的两条链在同一处断裂而造成.因此质粒DNA电泳的结果中有可能出现三条泳带,它们的泳动速度为:cccDNA > 线状DNA > ocDNA. 添加来自TIANGEN的资料:1,琼脂糖:不同厂家＼不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同,影响DNA的迁移及其荧光背景的强度,应有选择的使用.2,凝胶的制备:凝胶中所加的缓冲液应该与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应该及时倒入板中,避免倒入之前凝固结块,倒入板中的凝胶应该避免出现气泡,以免影响电泳结果.3,电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和PH,应经常更新电泳缓冲液.4,样品加入量:一般情况下,0.5CM宽的梳子可加0.5微克的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片断的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清楚;反之,则应该适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或扩散,对于较大的DNA此现象更明显.5,DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品中应该使用同样的缓冲条件以消除这种影响.6,DNA迁移率取决于琼脂糖的浓度,迁移分子的形状及其大小.采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度.小片断DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以提高分辨率.。
常用缓冲液配置
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl , ,组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值浓HCl约70ml约60ml约42ml4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
2)10×TE Buffer , ,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1M Tris－HCl Buffer（，，）100ml20ml 500mM EDTA2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
4)3 M 醋酸钠组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
[VIP专享]TAE缓冲液
![[VIP专享]TAE缓冲液](https://img.taocdn.com/s3/m/bbb09e0c3b3567ec112d8a4f.png)
loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的 条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片 段大小在 4000bp 左右。 loading buffer 的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的 作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密 度，使样品密度大于 TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的 Buffer 是加有 SDS 的，一般都会写明。SDS 主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚
5.加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右
1.生物学的聚合酶链式反应
定义
聚合酶链式反应简称 PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction），
聚合酶链式反应
具体内容点击： 聚合酶链式反应，简称 PCR。聚合酶链式反应，其英文 Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种方法,由高温变性、低温退火及 适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的 DNA 得以迅速扩增,具有特异性强、灵 敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研 究,还可用于疾病病的诊断或任何有 DNA,RNA 的地方．聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称 PCR）又称无细胞分子克隆或特异性 DNA 序列体外引物定向酶促 扩增技术。 由美国科学家 PE（Perkin Elmer 珀金-埃尔默）公司遗传部的 Dr. Mullis 发明， 由于 PCRPCR 技术在理论和应用上的跨时代意义，因此 Mullis 获得了 1993 年诺贝尔化学 奖。
PCR中相关溶液的配制
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
琼脂糖凝胶电泳
一、实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA 片段的常用技术。
把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，而构型不同的DNA分子。
在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。
相对分子质量标准参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
在凝胶中加入少量溴化乙锭(ethidium bromide, EB)，其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种络合物，在254～365nm 波长紫外光照射下，呈桔红色荧光，因此也可对分离的DNA进行检测。
一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA片段。
本实验介绍琼脂糖凝胶的制备以及琼脂糖凝胶电泳在DNA片段分离中的应用方法。
二、仪器及试剂1.仪器及耗材：水平电泳槽、电泳仪、凝胶成像分析系统、微波炉、微量移液器、透明胶带、点样板或parafilm、100 ml或250 ml锥形瓶、量筒、吸头等。
2.试剂及配制：50×TAE缓冲液的配制：2 mol/L Tris-乙酸，0.05 mol/L EDTA（pH 8.0）配制1000 mlTris 242 g冰乙酸 57.1 ml0.5 mol/L EDTA 100 ml加入600 ml去离子水后搅拌溶解，将溶液定容至1 L后。
高温高压灭菌，室温保存。
1×TAE缓冲液的配制：称量20 ml的50×TAE缓冲液，再加入980 ml的去离子水。
溴化乙啶贮存液：10 mg/ml 溴化乙啶配制：100 ml称取1 g溴化乙啶，置于100 ml烧杯中，加入80 ml去离子水后搅拌溶解。
常用缓冲液配置
常用缓冲液配置集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl , ,组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
2)10×TE Buffer , ,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
4)3 M 醋酸钠组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
琼脂糖凝胶电泳配方与步骤(精)
� RNA 琼脂糖凝胶电泳:配制:1. 0.5M EDTA(pH=8.0 :100ml :称取 18.61g Na 2EDTA ·2H 2O (分子量 372.24 ,加 80ml ddH 2O 剧烈搅拌, 用 NaOH 调节 PH 值至 8.0(约需 2g NaOH . 高压灭菌,室温保存。
2. 50×TAEloading buffer:(Tris acetate-EDTA buffer 电泳缓冲液组分:2MTris-乙酸;100mM EDTA(pH=8.0500mL:称 121.1g Trisbase(分子量 121.14 ,加 800ml ddH 2O 溶解,加 57.1ml 乙酸和 50ml 0.5M EDTA 溶液(pH=8.0 ,搅拌, ddH 2O 定容至 500mL . 室温保存。
3. 1×TAEloading buffer:取 20ml 50×TAE, ddH 2O 定容至 1L. 室温保存。
4. 100×Sybergreen :500ul :取 495ul 1×TAE于 1.5ml 离心管,加入 5ul Sybergreen 原液混匀,4℃锡纸避光保存。
注意:Sybergreen 原液需稀释 10000倍;6×DNAloading buffer 上样缓冲液需稀释六倍,最终稀释倍数应不小于 1×。
步骤:1. 制备 1%琼脂糖凝胶 (大胶用 70ml, 小胶用 50ml ,我们用 30ml:称 0.3g 琼脂糖置于 100ml 锥形瓶中,加入 30ml 1×TAE ,瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸 3次,至琼脂糖全部融化,摇匀,即成 1.0%琼脂糖凝胶液。
2. 胶板制备 :取电泳槽内的有机玻璃内槽 (制胶槽洗干净 , 晾干 , 放入制胶玻璃板 . 取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好 , 形成模子 . 将内槽置于水平位置 , 并放好梳子 .将冷却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上 , 使胶液缓慢展开 , 直到整个玻璃板表面形成均匀胶层 . 室温下静置直至凝胶完全凝固 , 垂直轻拔梳子 , 取下胶带 , 将凝胶及内槽放入电泳槽中 . 添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 . 3. 加样 :样品制备:(10ul 体系 /样品槽于 0.25ml 离心管中样品 RNA (最后加 :2ul /3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen :0.1ulDEPC 水:至 10ul(注意 :加样前要先记下加样的顺序 . 分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完一个样品 , 应更换一个枪头 , 以防污染 , 加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面 .4. 电泳 :加样后的凝胶板立即通电进行电泳 , 电压 60-100V , 样品由负极 (黑色向正极(红色方向移动 . 电压升高 , 琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 . 当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 1cm 处时 , 停止电泳 .5. 电泳完毕后 , 取出凝胶 , 利用科 212凝胶成像系统 , 在紫外灯(trans UV 下观察拍照保存 .DNA 存在则显示出红色荧光条带 . RNA 完美提出应该是三条带:28, 18, 5.8。
琼脂糖跑胶
0.3 5--600.6 1--200.9 0.5--71.2 0.4--61.5 0.2--32.0 0.1--2试剂及配制：50×TAE缓冲液:2 mol/L Tris-乙酸, 0.05 mol/L EDTA(pH 8.0)。
配制1000 ml 50×TAE缓冲液方法：Tris 242 g，冰乙酸57.1 ml，0.5 mol/L EDTA 100 ml，加入600 ml去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L 后.调pH 8.0，高温高压灭菌,4℃保存.1×TAE缓冲液的配制:量取20 ml的50×TAE缓冲液,再加入980 ml的去离子水.5×TBE缓冲液（Tris-硼酸）: 配制1000 ml 5×TBE缓冲液方法：Tris 54 g，27.5g硼酸，20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)。
加去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后.调pH 8.0，高温高压灭菌,4℃保存.溴化乙啶贮存液:10 mg/ml 溴化乙啶。
配制100 ml溴化乙啶贮存液方法：称取1 g溴化乙啶,置于100 ml 烧杯中,加入80 ml去离子水后搅拌溶解.将溶液定容至100 ml后,转移到棕色瓶中.室温保存.。
6×上样缓冲液:0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,30%甘油（或40%蔗糖）。
配制10 ml 6×上样缓冲液方法：溴酚蓝25 mg二甲苯青FF 25 mg，甘油3 ml，用6×TAE缓冲液定溶至10 ml,分装成1 ml/管.-20℃保存.琼脂糖凝胶电泳操作步骤：1). 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2). 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止. 3). 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4). 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.常见问题及注意事项：1.配琼脂糖时应使其完全熔化后方可制胶.2.琼脂糖凝胶易于破碎,操作时要轻缓.3.电泳时应注意电源线路,预防触电.4.溴化乙淀具有致癌作用,配制及使用时应带乳胶或一次性塑料手套.并在专门的实验室内使用.5.紫外线对人体有损伤作用,开灯时间不宜太长,注意防护.6.DNA带形状模糊:DNA加样过多;电压太高;凝胶中有气泡.7.质粒DNA的存在形式有3种,①共价闭环DNA(cccDNA),常以超螺旋形式存在;②开环DNA(ocDNA),此种质粒DNA的两条链中有一条发生一处或多处断裂,因此可以自由旋转从而消除张力,形成松弛的环状分子;③线状DNA,因质粒DNA的两条链在同一处断裂而造成.因此质粒DNA电泳的结果中有可能出现三条泳带,它们的泳动速度为:cccDNA > 线状DNA > ocDNA. 添加来自TIANGEN的资料:1,琼脂糖:不同厂家＼不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同,影响DNA的迁移及其荧光背景的强度,应有选择的使用.2,凝胶的制备:凝胶中所加的缓冲液应该与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应该及时倒入板中,避免倒入之前凝固结块,倒入板中的凝胶应该避免出现气泡,以免影响电泳结果.3,电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和PH,应经常更新电泳缓冲液.4,样品加入量:一般情况下,0.5CM宽的梳子可加0.5微克的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片断的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清楚;反之,则应该适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或扩散,对于较大的DNA此现象更明显.5,DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品中应该使用同样的缓冲条件以消除这种影响.6,DNA迁移率取决于琼脂糖的浓度,迁移分子的形状及其大小.采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度.小片断DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以提高分辨率.。
经典实验室常用缓冲液配置方案
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl （pH7.4，7。
6, 8。
0)组份浓度：1 M Tris—HCl配制量：1 L配制方法：1。
称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中.2。
加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解.3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
浓HClPH值7。
4 约70ml7。
6 约60ml8.0 约42ml4. 将溶液定容至1 L.5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer（pH7。
4，7.6, 8。
0）组份浓度:100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1。
量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
100ml1M Tris－HCl Buffer（PH7。
4，7.6，8。
0)500mM EDTA(PH8.0）20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3。
将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存.3）1。
5 M Tris—HCl (pH8.8）组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1。
称量181。
7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8。
8.4。
将溶液定容至1 L.5。
高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4）3 M醋酸钠（pH5。
2）组份浓度:3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1。
称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2。
加入冰醋酸调节pH值至5.23。
TAE缓冲液
TAE缓冲液：电泳缓冲液Tris-乙酸TAE缓冲液成分及终浓度：1、2mol/L Tris碱2、1mol/L 乙酸3、100 mmol/L EDTA4、水配制1L的50×TAE缓冲液各成分用量：1、 Tris碱（242g）2、冰乙酸（57.1 ml）3、EDTA【200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）】4、水（补足1L）50×TAE缓冲液的配制方法：称下列试剂，1L烧杯Tris 242g Na2EDTA.2H2O 37.2g然后加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
加入57.1ml的醋酸，充分混匀。
加去离子水定容至1L，室温保存。
AE是使用最广泛的缓冲系统。
其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE 中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。
TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
loading bufferloading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。
loading buffer的功能主要有两个。
第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。
另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。
SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。
细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。
【2019年整理】TAE缓冲液
TAE缓冲液：电泳缓冲液Tris-乙酸TAE缓冲液成分及终浓度：1、2mol/L Tris碱2、1mol/L 乙酸3、100 mmol/L EDTA4、水配制1L的50×TAE缓冲液各成分用量：1、 Tris碱（242g）2、冰乙酸（57.1 ml）3、EDTA【200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）】4、水（补足1L）50×TAE缓冲液的配制方法：称下列试剂，1L烧杯Tris 242g Na2EDTA.2H2O 37.2g然后加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
加入57.1ml的醋酸，充分混匀。
加去离子水定容至1L，室温保存。
AE是使用最广泛的缓冲系统。
其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE 中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。
TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
loading bufferloading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。
loading buffer的功能主要有两个。
第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。
另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。
SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。
细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。
实验室常用缓冲盐配制
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值浓HCl7.4约70ml7.6约60ml8.0约42ml4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
100ml1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
常用缓冲液配置
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
TAE与TBE的区别及在凝胶电泳的应用
TAE是Tris-乙酸，缓冲容量小，但是溶解度大，易于储存TBE是Tris-硼酸，缓冲容量大，但是溶解度小，不易长期储存，易产生沉淀TAE与TBE的区别首先要知道 TAE 与 TBE 缓冲溶液的成份如下：50x TAE Buffer (Tris-Acetate-EDTA)242 gm Tris base57.1 ml Acetic acid 100ml0.5M EDTAAdd ddH2O to 1 liter and adjust pH to 8.5.10x TBE Buffer (Tris-Borate-EDTA)108 gm Tris base55 gm Boric acid9.3 gm Na4EDTAAdd ddH2O to 1 liter.The pH is 8.3 and requires no adjustment.它们的分别有下列几点：1. TBE 不能太浓 (它只可有 10 times)，因为 borate 会很容易沉淀，但一般有少许沉淀是不会有太大问题。
2. TBE 的 buffering capacity 比 TAE 高，用 TBE 来跑出来的 gel，分辨率 (resolution) 会比较高。
3. 因为 TBE 有 borate 离子 (ion)，它会影向酵素 (enzyme) 的工作。
因此，若要为分离出的 DNA 进行下一步酵素处理，如 cloning 或 restriction cut 的话，就要切记不要让DNA 碰上 borate ion。
4. TAE的 buffer capacity 比较差，gel 一般比较模糊，但它不会对影向酵素三种缓冲液的配制方法Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：242g Tris 碱57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释10倍。
常用实验试剂配制
1DEPC水(1‰) 1000ml 水1ml DEPC根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。
配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。
20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris1000ml DEPC水用HCL调ph至7.5，高压备用。
3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。
30.2% 甘油/0.1M tris20ml 甘油980ml 0.1Mtris4 20XSSC Nacl 175.3g（ph 7.0）柠檬酸钠88.2gDEPC水1000ml分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5 HEPES 溶液HEPES 23.8g(ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml6 50X Denhaldt′s 液聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g牛血清蛋白（BSA）0.2gDEPC 水20ml7 预杂交bufferDeinoized formanmid 5ml20X SSC 1.5ml1M HEPES 0.5ml50X Denhanldt′s液1ml龟精DNA 0.6ml(4ug/ul)DEPC水 1.4ml龟精要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。
杂交buffer分装后-20℃保存。
8Washing buffer(ph7.5) maleic acid 5.8gNACL 4.4gTween（吐温） 1.5ml定容至溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween9Maleic acid buffer(ph7.5) Maleic acid 5.8gNacl 4.4g定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl10Detection buffer(ph 9.5)0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)0.1M Nacl 2.9g定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl.11blocking reagent（封闭液）(2-8℃保存)(bottle 5) 5gmaleic acid buffer 50ml12blocking solution封闭液（新鲜配制）1mlMaleic acid buffer 10ml13抗体（AP）10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再稀释。
常见缓冲溶液配制
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
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北京雷根生物技术有限公司
Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE)
简介：
Tris-乙酸电泳缓冲液即Tris acetate-EDTA buffer ，简称TAE 。
1×TAE 工作液中含有40mM Tris-acetate 、1mM EDTA(pH8.0)。
TAE 是常用的DNA 电泳缓冲液, 本试剂是50倍浓缩的TAE ，主要由2M Tris-acetate ，50mM EDTA 组成，使用时需用蒸馏水或去离子水稀释50倍后使用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用蒸馏水或去离子水稀释到1×后使用。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 NA0030 NA0030 Storage 50×TAE 500ml 5L RT 使用说明书 1份 编号 名称 DC0032 Masson 三色染色液 NA0034 Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE) PE0025
SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×) PE0092
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(5×) PT0001
BCA 蛋白定量试剂盒 PW0082
丽春红S 染色液(1×Ponceau S) TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂比色法)。