弧菌

中国（1993年）等亚洲国家
似乎来源于埃尔托生物型
2013-7-29
20
O139霍乱弧菌定义
印度株（MO45）耐O/129
对IV噬菌体不裂解
命名为O139群霍乱弧菌
2013-7-29
21
O139霍乱弧菌病原体来源
EVC流行株O抗原变异 ?
非O1霍乱弧菌获产毒基因 ?
2013-7-29
霍乱流行病学特点（1）
霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播 迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将 其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类 烈性传染病 霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍 蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱 弧菌污染的食物而致病
2013-7-29
23
快速诊断
标本 增菌培养 碱性蛋白胨水
直接涂片 动力、制动 试验
分离培养（TCBS、碱性平板） 血清学鉴定 初步报告 生化鉴定分型 确诊报告
霍乱弧菌检验程序
微生物检验－标本采集
发病早期采集标本 以“米泔水”样便为主，及时送检 卡－布培养基保存 严密包装，专人送检
2013-7-29
10
O1与O139霍乱病原菌特征
在外界环境中存活能力霍乱O139弧菌强于O1群 霍乱弧菌EVC， EVC强于CVC
与O1群霍乱弧菌EVC一样，霍乱O139也有产毒株 与非产毒株之分
O139霍乱弧菌产毒株所致疾病的临床表现和体 征与O1群霍乱弧菌所致霍乱无区别
2013-7-29
11
霍乱病原体的致病因子
毒素：霍乱肠毒素CT、辅助霍乱肠毒素 Ace
定居因子：脂多糖LPS、毒素协同调节菌 毛A
2013-7-29
12
致病机制
正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍 乱弧菌 但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时， 霍乱弧菌可以从胃进入肠道。 进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜 表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细 胞表面繁殖 产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素 （ CT）而致病 O1群和O139群的致病机制和过程是一样的
2013-7-29
41
临床意义
具有嗜盐性 存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾 类和贝壳及盐渍加工的海产品中 主要引起食物中毒和急性腹泻 是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见 病原菌 胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、 低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性， 恢复较快，病程2~3天，通常为自限性 还可引起伤口感染和菌血症
2013-7-29 8
霍乱病原体
古典型霍乱弧菌（CVC）：1817-1923年引 发6次霍乱弧菌世界大流行(正霍乱弧菌) 埃尔托型霍乱弧菌（EVC）：1961-至今第7 次世界大流行(副霍乱弧菌) O139霍乱弧菌（BVC）: 1992年-至今引发 O139型霍乱
2013-7-29
9
2013-7-29
抵抗力

抵抗力弱 不耐热，90℃ 1min即被杀死 淡水中不超过2日，但海水中能存活47天以上 耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡
微生物检验
1. 检验程序
微生物检验
2. 标本采集: 可采集患者的粪便，肛门拭子 和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水或 卡-布运送培养基中送检
2013-7-29
18
霍乱预后及危害
霍乱属烈性传染病，一旦爆发和流行，累及 面广，病死率高，对人民身体健康以及国民
生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对
外贸易等造成直接影响
2013-7-29
19
O139霍乱发源地
1992年9月19日印度南部城市马德拉斯，12月孟 加拉国出现流行影响全印度，继而扩散到泰国、
致病物质
通过菌毛的粘附 毒素
耐热直接溶血素(TDH）
分子量为21 000，有2个亚单位组成，能耐100℃10min不被破坏 溶血毒性，TDH对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶 血 细胞毒性，对多种培养细胞如Hela细胞、FL细胞、L细胞及鼠心 肌细胞有细胞毒性 心脏毒性，可导致心电图异常表现如ST-T改变、房室传导阻滞、 室颤或心跳骤停及心肌损伤 肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢进 其结构基因tdh也存在于其他致病性弧菌当中
2013-7-29
第一节
弧菌属
弧菌属共有36个种。其中有12个种与人类 感染有关 霍乱弧菌 引起霍乱 副溶血弧菌 引起食物中毒
临床意义
主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、 败血症等 氧化酶均阳性 除麦氏弧菌外 能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感 钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生 长，称为嗜盐菌 多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上 可呈现α、β或不溶血菌落。 在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板， 许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落
16
霍乱流行病学特点（2）
霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-10月份， 7-9月为发病高峰 人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和 流行
2013-7-29
17
霍乱预后及危害
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时 效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病 死率可高达20%-50%
伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本 菌的初次分离
2013-7-29 40
副溶血弧菌
“副溶血”是为了纪念首次发现时该菌的特 殊溶血现象： 普通血平板呈r或a溶血，但在含7％高盐甘 露醇的人O型血或兔血的平板上呈ß 溶血。该 溶血现象称神奈川现象。现已证明产生该现 象的菌株（KP＋）即为产毒株
22
全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发现霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多个国家 1993年传入我国后，即在新疆南部柯坪县发 生霍乱O139引起的暴发，报告病例数202例， 死亡4例
2013-7-29
2013-7-29 39
TCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落 神奈川现象＋：致病性副溶血性弧菌能溶解人 或兔红细胞，不溶解马红细胞 嗜盐性选择平板: 较大，圆形，隆起，稍浑浊， 半透明或不透明，无粘性 SS平板: 扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有 辛辣味，不易刮下，48h后牢固粘着培养基上， 部分菌株不能生长 麦康凯平板: 部分菌株不生长
25
检验方法－显微镜检查
涂片染色： -标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列 动力观察： -压滴法或暗视野镜检，注意运动方式 制动试验： -诊断血清与菌体结合，动力消失
2013-7-29
26
形态染色
革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽胞，无荚膜（O139有薄的荚膜） 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列
弧菌科及检验
弧菌科共同特征
革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞， 多数有鞭毛、有菌毛。 需氧兼性厌氧 具有一端单一鞭毛、运动迅速 氧化酶＋ 发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
2013-7-29 2
抵抗力
可在河水、井水及海水中存活20天左右 对热、干燥和光敏感；100℃1~2min即死亡 怕酸耐碱，在正常胃酸中仅能生存4min 对常用消毒剂敏感，0.5ppm氯15min能杀死 对庆大霉素耐药
副溶血性弧菌
2013-7-29
Βιβλιοθήκη Baidu
38
副溶血性弧菌－生物学性状
革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽 胞，无荚膜 营养要求 不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5 ％NaCl，超过8%不能生长无盐培养基不生 长 最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长， 最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
2013-7-29
35
鉴定
生化反应：氧化酶、粘丝试验、霍乱红反应 发酵蔗糖，动力阳性 赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性 可以在无盐培养基上生长 在含有高于6%氯化钠的培养基上不能生长 确定血清群：O群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以 确定是否为O1或O139群 确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血 清型别 确定生物型： CVC EVC 第Ⅳ组噬菌体裂解试验(106)： + -/(+) 多粘菌素B敏感试验(50U)： S R 鸡红细胞凝集试验(2.5%): -/(+) +/(-) V-P试验、溶血试验(1%羊)： +/(-) 2013-7-29 36
弧菌科种类
弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属
2013-7-29
3
三个菌属的鉴别
试验
肌醇 粘丝试验 鸟氨酸 精氨酸
150 μgO/129
弧菌属
－ ＋/(－) ＋/－ ＋/－ S ＋ ＋/－
气单胞菌属 邻单胞菌属
－ － － ＋/－ R － － ＋ － ＋ ＋ S － －
4
TCBS生长 耐盐（7％）
TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色 菌落
普通血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻琼脂上产生β 溶血现象，称为神奈川现象（KP） 嗜盐性选择平板: 较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或 不透明，无粘性 SS平板: 扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不 易刮下，48h后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长 麦康凯平板: 部分菌株不生长 伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分 离
霍乱弧菌（VP）
引起烈性肠道传染病霍乱的病原体 O1（古典生物型和ElTor生物型）、 O139 O139是新的流行菌株
2013-7-29
7
霍乱弧菌分类
根据菌体抗原（O抗原）不同分成200多 个霍乱弧菌血清群，其中： O1群霍乱弧菌：根据菌体抗原成分不同分 成3个血清型：ABcc小川型、AC稻叶型、 ABC彦岛型,以小川型和稻叶型为常见流行 型别 非O1群霍乱弧菌：除O1外余下的霍乱弧菌 统称(不凝集弧菌，NAG)
霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色
4号琼脂、庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）
生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰 褐色菌落中心
2013-7-29 32
2013-7-29
33
分离培养
标本接种碱性蛋白胨水增菌6－8小时，转种TCBS 或庆大霉素琼脂， TCBS：出现黄色菌落 庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落
CT的致病机理
典型的A、B亚单位型外毒素 A亚单位为毒性成份，B亚单位与肠壁细胞GM1受 体结合，释放A亚单位入细胞 A亚单位激活胞内的腺苷环化酶，使胞内环磷酸 腺苷（cAMP）浓度升高，细胞分泌增加，大量肠 液积聚，形成严重水样便和脱水休克，循环衰竭 而死亡
2013-7-29
14
作用机制示意图
3.分离培养与鉴定
(1)增菌培养 标本接种1%NaCl碱性胨水或4%NaCl蛋白胨水 中进行选择性增菌 (2)分离培养 标本直接接种或增菌后接种TCBS平板或嗜盐菌 选择平板 TCBS平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径 1~2mm微突起菌落 嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混 浊、半透明或不透明、无粘性菌落
耐热直接溶血素相关溶血素（TRH），生物学特性与 TDH相似
生物学特性
1. 形态
革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜， 无芽胞
2. 抗原结构
耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶 血性弧菌的O抗原有13种 鞭毛抗原，不耐热，无型特异性
3．培养特性
营养要求不高 在无盐培养基上不能生长，最适合生长的 氯化钠浓度为3.5%，超过8%不能生长 最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长， 最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
2013-7-29
27
霍乱弧菌电镜照片
2013-7-29
29
霍乱弧菌
革 兰 染 色
鞭 毛 染 色
培养特性
兼性厌氧 营养要求不高 耐碱不耐酸，常用pH8.4－9.2碱性培养基 在液体培养基中形成菌膜 菌落圆形、较大、扁平
2013-7-29
31
霍乱弧菌常用培养基
碱性蛋白胨水 碱性琼脂平板 硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板 （TCBS）