细胞化学染色 ppt课件
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过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 糖原染色 非特异性酯酶染色 特异性酯酶染色 骨髓铁染色
细胞化学染色
7
（一)过氧化物酶(POX)染色
1、原理：
pox
H2O2
O
联苯胺
联苯胺蓝 +
亚硝基铁氰化钠
蓝黑色颗粒
细胞化学染色
8
2.试剂 (1)联苯胺酒精溶液： 取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml, 再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。 (2) 稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加 30%H2O21滴。 （3）瑞吉氏复染液
细胞化学染色
11
5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳 性是染色成功的标志(设对照片）。 在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳 性反应。
细胞化学染色
12
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈 阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
细胞化学染色
细胞化学染色
14
急性粒细胞白血病（M2a) 的POX染色 原始粒细胞均呈阳性
细胞化学染色
25
6.NAP阳性结果及积分判断标准
“－” 0分，胞浆中无阳性颗粒 “+” 1分，胞浆中含有少量颗粒 “2+” 2分，胞浆中含有中等量颗粒 “3+” 3分，胞浆中含有丰富的颗粒，但胞
核清楚 “4+” 4分，胞浆中含有丰富粗大的颗粒，
但胞核不清楚
细胞化学染色
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 1.中性成熟粒细胞（+）；2.中性成熟粒细胞（++）；3.中性成熟粒细胞（+++）；
细胞化学染色
急性淋巴细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞均呈阴性
细胞化学染色
急性早幼粒细胞白血病的POX染色 １.原始红细胞，呈阴性；其他早幼粒细胞均呈强阳性
细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞细胞，化呈学染弱色 阳性；其他原幼单核细胞呈阴性
细胞化学染色
3
2.细胞化学染色的目的 （1）辅助判断急性白血病的类型 （2）辅助血液系统等疾病的诊断与鉴别诊断
细胞化学染色
3.细胞化学染色的基本步骤：包括固定、显色反应、 复染。 （1）固定：为了保持细胞结构及化学成分的稳定性而 选用的方法。根据染色的目的，最常用的固定剂有甲 醛、甲醇、乙醇等。
4.中性成熟细粒胞细化学胞染（色 ++++）；5.淋巴细胞 （-）
细胞化学染色
28
NAP分级 细胞化学染色
29
7.临床意义
增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢 粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。
降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组
细胞化学染色
30
8.鉴别诊断
慢粒与类白：前↓；后↑。 PNH与AA：前↓；后↑。 急粒与急淋：前↓；后↑。 MDS与慢性再障：前↓；后↑。 病毒感染与细菌感染：前者无明显变化，后者↑。 恶组与反应性组织细胞增多：前↓；后↑。
细胞化学染色
9
3、染色方法 1、新鲜干燥涂片加联苯胺酒精溶液10滴，覆盖整
个髓膜，固定1-2min。 2、再加等量的稀H2O2，混匀后染色4－5min,勿倒
去染液直接流水冲洗。 3、瑞氏染液复染。
细胞化学染色
10
4、注意事项 （1）H2O2要新鲜配制，注意有效性 （2）标本要新鲜，最长不超过一周，时间长了酶活 性减弱。 （3）POX染色后，一定要冲洗干净，否则染料堆积 或浮于表面，影响瑞氏染色结果观察。
细胞化学染色
20
（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色
1.原理
（偶氮偶联法）
NAP
磷酸奈酚钠
磷酸+萘酚
PH9.2～9.8
偶联 萘酚+重氮盐
(坚固蓝RR盐)
不溶性有色沉淀物定位于胞浆
细胞化学染色
21
2.试剂
（1）固定剂：10％甲醛甲醇溶液
（2）Tris-Hcl缓冲液的配制：Tris粉〔三胺基甲
烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中,加浓HCL1-2滴，PH调
细胞化学染色
23
4.注意事项 (1) 重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳； (2) 坚固蓝RR盐应适量：过多易造成染色失败， 过少使反应减弱； (3) 每次都要做阳性对照； (4) 作用液新鲜配制，配好后要立即使用
细胞化学染色
24
5.结果观察:(对照片成熟中性粒细胞中出现棕
黑色颗粒为阳性细胞，说明染色成功) 正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外，其 它血细胞均为阴性。且正常阳性率＜40%，积分 值30～130分。
细胞化学染色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ31
（三）酯酶染色
概述 特异性酯酶染色 非特异性酯酶染色
细胞化学染色
概述
根据各类细胞所含酯酶特异性高低分为特异性 酯酶(SE)和非特异性酯酶(NSE)；特异性酯酶是指 氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特异性酯酶 根据水解基质液的PH不同，又分为中性NSE（α-醋 酸萘酚酯酶 ），酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶 ），碱性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）。
至9.2，4℃保存！
（3）作用(基质液): 磷酸萘酚钠
5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液
4ml
坚固蓝RR盐
5mg
（4）复染液：1%中性红
细胞化学染色
22
3.操作步骤 1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及 对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干； 2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干； 3、1%中性红复染1min
细胞化学染色检验
细胞化学染色
1
一、概述 二、细胞化学染色的基本方法 三、临床应用
细胞化学染色
2
一、概 述
1、概念： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门
科学，以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的 原理对血细胞内的各种化学物质（包括酶类、脂类 、蛋白质、糖类、铁、核酸等）作定性、定位、半 定量分析的方法。
细胞化学染色
5
（2）显色：通过不同的化学反应，最终形成稳定的 有色沉淀，使被监测的化学物质显示出来。包括 偶氮偶联法：如NAP、ACP及各种脂酶染色 普鲁氏蓝反应：如铁染色 雪夫（shiff）反应：如PAS染色 联苯胺法：如POX染色 （3）复染：使各种目的细胞能显示出来更便于观察
细胞化学染色
6
二、细胞化学染色的基本方法
6、临床意义 （1）正常分布 粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈 不同程度阳性。 单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。 淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。
细胞化学染色
19
（2）急性白血病的鉴别诊断 幼稚细胞POX阳性率≥3% ：急非淋（AML) 幼稚细胞POX阳性率＜3% ：急淋（ALL)
细胞化学染色
7
（一)过氧化物酶(POX)染色
1、原理：
pox
H2O2
O
联苯胺
联苯胺蓝 +
亚硝基铁氰化钠
蓝黑色颗粒
细胞化学染色
8
2.试剂 (1)联苯胺酒精溶液： 取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml, 再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。 (2) 稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加 30%H2O21滴。 （3）瑞吉氏复染液
细胞化学染色
11
5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳 性是染色成功的标志(设对照片）。 在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳 性反应。
细胞化学染色
12
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈 阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
细胞化学染色
细胞化学染色
14
急性粒细胞白血病（M2a) 的POX染色 原始粒细胞均呈阳性
细胞化学染色
25
6.NAP阳性结果及积分判断标准
“－” 0分，胞浆中无阳性颗粒 “+” 1分，胞浆中含有少量颗粒 “2+” 2分，胞浆中含有中等量颗粒 “3+” 3分，胞浆中含有丰富的颗粒，但胞
核清楚 “4+” 4分，胞浆中含有丰富粗大的颗粒，
但胞核不清楚
细胞化学染色
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 1.中性成熟粒细胞（+）；2.中性成熟粒细胞（++）；3.中性成熟粒细胞（+++）；
细胞化学染色
急性淋巴细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞均呈阴性
细胞化学染色
急性早幼粒细胞白血病的POX染色 １.原始红细胞，呈阴性；其他早幼粒细胞均呈强阳性
细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞细胞，化呈学染弱色 阳性；其他原幼单核细胞呈阴性
细胞化学染色
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2.细胞化学染色的目的 （1）辅助判断急性白血病的类型 （2）辅助血液系统等疾病的诊断与鉴别诊断
细胞化学染色
3.细胞化学染色的基本步骤：包括固定、显色反应、 复染。 （1）固定：为了保持细胞结构及化学成分的稳定性而 选用的方法。根据染色的目的，最常用的固定剂有甲 醛、甲醇、乙醇等。
4.中性成熟细粒胞细化学胞染（色 ++++）；5.淋巴细胞 （-）
细胞化学染色
28
NAP分级 细胞化学染色
29
7.临床意义
增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢 粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。
降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组
细胞化学染色
30
8.鉴别诊断
慢粒与类白：前↓；后↑。 PNH与AA：前↓；后↑。 急粒与急淋：前↓；后↑。 MDS与慢性再障：前↓；后↑。 病毒感染与细菌感染：前者无明显变化，后者↑。 恶组与反应性组织细胞增多：前↓；后↑。
细胞化学染色
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3、染色方法 1、新鲜干燥涂片加联苯胺酒精溶液10滴，覆盖整
个髓膜，固定1-2min。 2、再加等量的稀H2O2，混匀后染色4－5min,勿倒
去染液直接流水冲洗。 3、瑞氏染液复染。
细胞化学染色
10
4、注意事项 （1）H2O2要新鲜配制，注意有效性 （2）标本要新鲜，最长不超过一周，时间长了酶活 性减弱。 （3）POX染色后，一定要冲洗干净，否则染料堆积 或浮于表面，影响瑞氏染色结果观察。
细胞化学染色
20
（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色
1.原理
（偶氮偶联法）
NAP
磷酸奈酚钠
磷酸+萘酚
PH9.2～9.8
偶联 萘酚+重氮盐
(坚固蓝RR盐)
不溶性有色沉淀物定位于胞浆
细胞化学染色
21
2.试剂
（1）固定剂：10％甲醛甲醇溶液
（2）Tris-Hcl缓冲液的配制：Tris粉〔三胺基甲
烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中,加浓HCL1-2滴，PH调
细胞化学染色
23
4.注意事项 (1) 重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳； (2) 坚固蓝RR盐应适量：过多易造成染色失败， 过少使反应减弱； (3) 每次都要做阳性对照； (4) 作用液新鲜配制，配好后要立即使用
细胞化学染色
24
5.结果观察:(对照片成熟中性粒细胞中出现棕
黑色颗粒为阳性细胞，说明染色成功) 正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外，其 它血细胞均为阴性。且正常阳性率＜40%，积分 值30～130分。
细胞化学染色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ31
（三）酯酶染色
概述 特异性酯酶染色 非特异性酯酶染色
细胞化学染色
概述
根据各类细胞所含酯酶特异性高低分为特异性 酯酶(SE)和非特异性酯酶(NSE)；特异性酯酶是指 氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特异性酯酶 根据水解基质液的PH不同，又分为中性NSE（α-醋 酸萘酚酯酶 ），酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶 ），碱性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）。
至9.2，4℃保存！
（3）作用(基质液): 磷酸萘酚钠
5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液
4ml
坚固蓝RR盐
5mg
（4）复染液：1%中性红
细胞化学染色
22
3.操作步骤 1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及 对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干； 2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干； 3、1%中性红复染1min
细胞化学染色检验
细胞化学染色
1
一、概述 二、细胞化学染色的基本方法 三、临床应用
细胞化学染色
2
一、概 述
1、概念： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门
科学，以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的 原理对血细胞内的各种化学物质（包括酶类、脂类 、蛋白质、糖类、铁、核酸等）作定性、定位、半 定量分析的方法。
细胞化学染色
5
（2）显色：通过不同的化学反应，最终形成稳定的 有色沉淀，使被监测的化学物质显示出来。包括 偶氮偶联法：如NAP、ACP及各种脂酶染色 普鲁氏蓝反应：如铁染色 雪夫（shiff）反应：如PAS染色 联苯胺法：如POX染色 （3）复染：使各种目的细胞能显示出来更便于观察
细胞化学染色
6
二、细胞化学染色的基本方法
6、临床意义 （1）正常分布 粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈 不同程度阳性。 单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。 淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。
细胞化学染色
19
（2）急性白血病的鉴别诊断 幼稚细胞POX阳性率≥3% ：急非淋（AML) 幼稚细胞POX阳性率＜3% ：急淋（ALL)