细胞化学染色 ppt课件
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第十章 细胞核与染色体(共62张PPT)
— 哺乳类45S，果蝇38S
45S rRNA
32S rRNA 20S rRNA
28S rRNA 5.8S rRNA
18S rRNA
5S rRNA
rRNA的加工
核糖体亚单位的装配
核糖体组成：蛋白质+rRNA rRNA前体结合蛋白质—核糖核蛋白体颗粒； 核糖核蛋白体—大亚基和小亚基； 5SrRNA合成后转运至核仁参与核糖核蛋白体
致密纤维组分
核仁内电子密度最高的区域，位于浅染区的周围；
所含主要成分为正在转录的rRNA，此外还有一些RNA结
合蛋白； 颗粒组分
由直径15-20 nm的颗粒构成，是不同加工阶段的核糖
核蛋白体。
2 核仁的功能 rRNA前体的合成、加工 核糖体亚单位的装配
rRNA前体的合成及加工
rDNA的初级产物为rRNA前体
数量，位置、大小相对恒定，可作为鉴别特定染色 体的一个标志。
核仁组织区
位置：位于染色体的次缢痕部位； 含有编码核糖体的rRNA基因；
功能：在间期缔合核仁。
随体
位置：位于染色体末端的球形染色体节段
是鉴别染色体的一个重要标志 —— 通过次缢痕与染色体主体部分相连
端粒
是染色体末端富含Ｇ的重复序列； 作用：维持染色体的稳定性
Gp210位于孔膜区，功能包括：介导核孔复合体与核被膜连接；
—— X染色体失活
概念：构成真核生物染色体的基本结构蛋白， rRNA前体的合成及加工
核型（karyotype） ：染色体组在有丝分裂周期的表现，包括染色体的数目、大小和形态特征。
1号染色体中的DNA包装倍数
主动运输的选择性：
富含带正电荷的赖氨酸和精氨酸。 组成：DNA、组蛋白、非组蛋白、少量RNA。
45S rRNA
32S rRNA 20S rRNA
28S rRNA 5.8S rRNA
18S rRNA
5S rRNA
rRNA的加工
核糖体亚单位的装配
核糖体组成：蛋白质+rRNA rRNA前体结合蛋白质—核糖核蛋白体颗粒； 核糖核蛋白体—大亚基和小亚基； 5SrRNA合成后转运至核仁参与核糖核蛋白体
致密纤维组分
核仁内电子密度最高的区域，位于浅染区的周围；
所含主要成分为正在转录的rRNA，此外还有一些RNA结
合蛋白； 颗粒组分
由直径15-20 nm的颗粒构成，是不同加工阶段的核糖
核蛋白体。
2 核仁的功能 rRNA前体的合成、加工 核糖体亚单位的装配
rRNA前体的合成及加工
rDNA的初级产物为rRNA前体
数量，位置、大小相对恒定，可作为鉴别特定染色 体的一个标志。
核仁组织区
位置：位于染色体的次缢痕部位； 含有编码核糖体的rRNA基因；
功能：在间期缔合核仁。
随体
位置：位于染色体末端的球形染色体节段
是鉴别染色体的一个重要标志 —— 通过次缢痕与染色体主体部分相连
端粒
是染色体末端富含Ｇ的重复序列； 作用：维持染色体的稳定性
Gp210位于孔膜区，功能包括：介导核孔复合体与核被膜连接；
—— X染色体失活
概念：构成真核生物染色体的基本结构蛋白， rRNA前体的合成及加工
核型（karyotype） ：染色体组在有丝分裂周期的表现，包括染色体的数目、大小和形态特征。
1号染色体中的DNA包装倍数
主动运输的选择性：
富含带正电荷的赖氨酸和精氨酸。 组成：DNA、组蛋白、非组蛋白、少量RNA。
细胞化学染色
颗粒 什么关系
POX
如果原粒出现颗粒POX一定阳性吗？NO 如果幼淋出现颗粒POX一定阴性吗？YES
若POX阳性，肯定是髓系的。 有颗粒+POX阴性 做酯酶双染及免疫分型 （存在一部分是POX阴性的白血病，MDS转白，CML急变，HAL ） 无颗粒+POX阴性 +临床及形态 淋系 （1%做免疫分型，M0）
4.异常细胞MPO的变化 ①分化差的原始粒细胞及原始单核细胞MPO可为
阴性，如M2，并不是所有原始细胞均阳性。M5a， 原始单核细胞常阴性。 ②MDS：原始细胞POX常阴性，发育异常的下阶 段粒细胞POX可为阴性。 ③MDS转白，CML转白，HAL，原始粒细胞POX 可为阴性，但不能诊断为M0，因为原始粒细胞不 像幼稚淋巴细胞，且可能为发育异常，并不是分化 差。 ④反之，如果典型原始粒细胞POX阴性，应考虑到 是否为MDS转化而来。
急性白血病类型鉴别：
急性粒细胞白血病：阳性率常≥3%，呈现弥散 状，颗粒状或块状阳性；
急性单核细胞白血病：呈弱阳性（弥散状）或 阴性；
急性淋巴细胞、巨核细胞性白血病：阴性。
急性白血病MPO反应强弱顺序： M3>M2>M6(粒)，M4，M1>M5>HAL
2.嗜天青颗粒（紫红色，非特异性颗粒，阿氏颗粒）：
干 4、复染：E液20min
积分计算
据兰色颗粒所占胞浆面积、颗粒大小、多少及染色强度来判断。 阴性为胞浆内无兰色颗粒。 正常值：正常人积分一般为40－100分
级别
+ ++ +++ ++++
兰色颗粒占 颗粒大小 胞浆面积 （％）
第三章 细胞化学染色
第三章 第二节 细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞，呈弱阳性；其他原幼单核细胞呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
【临床意义】
1.帮助鉴别急性白血病的类型 2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化 活性增高：见于再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细
其他为阳性。
第三章 第二节 细胞化学染色
第三章 第二节 细胞化学染色
四、过碘酸-雪夫（PAS）反应
【正常血细胞的染色反应 】
1.粒细胞系统 分化差的原始粒细胞呈阴性，分化 好的原始粒细胞至中性分叶核粒细 胞均呈阳性，并随着细胞的成熟而 逐渐增强；嗜酸性粒细胞中颗粒之 间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中 的嗜碱性颗粒呈阳性。
2.红细胞系统 有核红细胞及红细胞均呈阴性。 3.单核细胞系统 分化差的原始单核细胞呈阴性，
第三章 第二节 细胞化学染色
（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色
【临床意义 】
1.急性单核细胞白血病 单核系细胞多呈阳性，阳性 反应能被氟化钠抑制。
2.急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阴性或弱阳性， 阳性反应不能被氟化钠抑制。
3.急性早幼粒细胞白血病 早幼粒细胞呈强阳性，阳 性反应不能被氟化钠抑制。
第三章 第二节 细胞化学染色
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈阴性； 3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
帮助鉴 别急性 白血病 的类型
临床意义
是辅助判断急性白 血病细胞类型的首选、 最重要的细胞化学染色
成熟中性 粒细胞过 氧化物酶 活性的变 化
第三章 第二节 细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞，呈弱阳性；其他原幼单核细胞呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
【临床意义】
1.帮助鉴别急性白血病的类型 2.成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化 活性增高：见于再生障碍性贫血、感染、急性淋巴细
其他为阳性。
第三章 第二节 细胞化学染色
第三章 第二节 细胞化学染色
四、过碘酸-雪夫（PAS）反应
【正常血细胞的染色反应 】
1.粒细胞系统 分化差的原始粒细胞呈阴性，分化 好的原始粒细胞至中性分叶核粒细 胞均呈阳性，并随着细胞的成熟而 逐渐增强；嗜酸性粒细胞中颗粒之 间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中 的嗜碱性颗粒呈阳性。
2.红细胞系统 有核红细胞及红细胞均呈阴性。 3.单核细胞系统 分化差的原始单核细胞呈阴性，
第三章 第二节 细胞化学染色
（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色
【临床意义 】
1.急性单核细胞白血病 单核系细胞多呈阳性，阳性 反应能被氟化钠抑制。
2.急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阴性或弱阳性， 阳性反应不能被氟化钠抑制。
3.急性早幼粒细胞白血病 早幼粒细胞呈强阳性，阳 性反应不能被氟化钠抑制。
第三章 第二节 细胞化学染色
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈阴性； 3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
一、过氧化物酶（POX）染色
帮助鉴 别急性 白血病 的类型
临床意义
是辅助判断急性白 血病细胞类型的首选、 最重要的细胞化学染色
成熟中性 粒细胞过 氧化物酶 活性的变 化
第三章 第二节 细胞化学染色
骨髓检查PPT课件
21
病例一
男，37岁。乏力近两个月，面色、精神差。 一直在 其它医院按胃炎﹑肠炎治疗，效果不佳。体检：重 度贫血貌，巩膜轻度黄染。舌乳头轻度萎缩，舌面 光滑发红、舌痛。心肺(-)，肝、脾、淋巴结不大。 双下肢对称性感觉麻木，腱反射减弱，精神抑郁。
血常规检查结果： Hb 30g/L(两月前125g/L)，PLT 120×109/L, WBC 6.5×109/L, Nsg 60%(5叶以上核者占5%), L 37%, M 3%。 红细胞明显大小不等, 可见一定 数量的大红细胞。
两系均减少。 • 慢粒巨核系细胞早期增多，晚期减少。慢淋巨核
系细胞晚期减少。
33
慢性白血病血液学特征共同点
• 血象：红细胞及血红蛋白早期减少不明显。 • 白细胞计数增高。 • 中性粒细胞比值减少，血小板计数减少者为晚期
间长 比例增高 粒红比例下降
8
9
10
11
12
再生障碍贫血（aplastic anima AA）
各种原因所导致骨髓造血干细胞增生、分 化障碍和（或）及造血微环境损伤导致全血 细胞减少的一组综合征。 贫血 感染 出血
13
再生障碍贫血（aplastic anima AA）
急性再障 慢性再障 增生程度：减低或极度减低 幼红细胞比例低、粒细胞比例低
外周血和骨髓中可见血细胞数量明显增多并见大量各 阶段幼稚和成熟细胞。
慢性粒细胞性白血病—中、晚幼粒细胞明显增多，杆 核与分叶核及嗜酸、嗜碱均增多。
慢性淋巴细胞性白血病—以小淋巴细胞增多为突出表 现，在早期此类细胞可占65-75%，而到晚期则可达到 90-98%。
32
慢性白血病血液学特征共同点
• 骨髓增生活跃或明显活跃。 • 粒系（或淋巴系）显著增生。 • 慢粒红系细胞早期增生，晚期受抑制，慢淋粒红
病例一
男，37岁。乏力近两个月，面色、精神差。 一直在 其它医院按胃炎﹑肠炎治疗，效果不佳。体检：重 度贫血貌，巩膜轻度黄染。舌乳头轻度萎缩，舌面 光滑发红、舌痛。心肺(-)，肝、脾、淋巴结不大。 双下肢对称性感觉麻木，腱反射减弱，精神抑郁。
血常规检查结果： Hb 30g/L(两月前125g/L)，PLT 120×109/L, WBC 6.5×109/L, Nsg 60%(5叶以上核者占5%), L 37%, M 3%。 红细胞明显大小不等, 可见一定 数量的大红细胞。
两系均减少。 • 慢粒巨核系细胞早期增多，晚期减少。慢淋巨核
系细胞晚期减少。
33
慢性白血病血液学特征共同点
• 血象：红细胞及血红蛋白早期减少不明显。 • 白细胞计数增高。 • 中性粒细胞比值减少，血小板计数减少者为晚期
间长 比例增高 粒红比例下降
8
9
10
11
12
再生障碍贫血（aplastic anima AA）
各种原因所导致骨髓造血干细胞增生、分 化障碍和（或）及造血微环境损伤导致全血 细胞减少的一组综合征。 贫血 感染 出血
13
再生障碍贫血（aplastic anima AA）
急性再障 慢性再障 增生程度：减低或极度减低 幼红细胞比例低、粒细胞比例低
外周血和骨髓中可见血细胞数量明显增多并见大量各 阶段幼稚和成熟细胞。
慢性粒细胞性白血病—中、晚幼粒细胞明显增多，杆 核与分叶核及嗜酸、嗜碱均增多。
慢性淋巴细胞性白血病—以小淋巴细胞增多为突出表 现，在早期此类细胞可占65-75%，而到晚期则可达到 90-98%。
32
慢性白血病血液学特征共同点
• 骨髓增生活跃或明显活跃。 • 粒系（或淋巴系）显著增生。 • 慢粒红系细胞早期增生，晚期受抑制，慢淋粒红
血液学血细胞化学染色
二、必要性
从形态学观察，存在较多的主观性； 有些原始细胞形态较相似，难以鉴别； 结合细胞化学染色，提高疾病的诊断率。
三、临床应用
1. 辅助判断急性白血病的细胞类型 2. 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别
诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
白血病的诊断：MICM分型
12~44%， I~II型（ I型为主），无Ⅲ 型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒 红细胞。
四、临床意义
铁染色是评估铁缺乏最实用的方法，是 反映储存铁的金标准，是临床应用最广 泛的细胞化学染色之一。
1. 缺铁性贫血： 外铁（－），内铁<10%； 治疗有效后，内外铁 。 2. 铁粒幼细胞性贫血： 外铁；内铁阳性率，环形铁粒幼 红细胞增多，可见粗颗粒的Ⅲ、Ⅳ型 铁粒幼红细胞。
二、过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）
一、原 理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含 有过氧化物酶(POX)，它可分解H2O2释放出新生 态的氧，后者氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不 溶性沉淀，定位于胞质内酶所在的活性部位。
二甲基联苯胺法（DAB）原理
【原理】
四甲基联苯胺 （无色）
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈 蓝绿色。
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒； Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒； Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒
铁粒幼红细胞(sideroblast)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
阴性反应或阳性率< 3%(残留原粒细胞)
ALL
ALL
原粒阴性
原粒弱阳性
原粒阳性
早幼粒 强阳性
考马斯亮蓝法显示细胞中的微丝课件
通过对染色结果的观察和分析， 发现微丝在细胞中的分布和形态 具有组织特异性，与细胞的生理
功能密切相关。
对未来研究的建议
进一步探讨考马斯亮蓝法染色显示细 胞中微丝的机制，以及染色效果的影 响因素，为该方法的优化和应用提供 理论依据。
深入研究微丝在细胞中的功能和作用 机制，以期为相关疾病的治疗和药物 研发提供新的思路和靶点。
微丝排列
分析微丝在细胞内的排列 情况，是否呈现有规律的 排列方式。
微丝交联
观察微丝之间是否存在交 联，交联的密度和形式如何。
数据分析与解 释
数据收集
收集不同实验条件下的染色结果 数据，包括染色效果、微丝形态、
排列和交联情况等。
数据分析
对收集到的数据进行分析，比较 不同实验条件下的染色效果和微
丝结构差异。
考马斯亮蓝法显示 细胞中的微丝课件
• 引言 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论 • 注意事项与局限性 • 参考文献
01
引言
微丝简介
微丝是一种由肌动蛋白聚合形成的纤维 状蛋白质结构，是细胞骨架的重要组成 部分。它们在细胞形态维持、细胞运动、 物质运输等许多细胞活动中发挥关键作
用。
样品制备
将培养的细胞进行固定，常用的 固定剂包括甲醇和冰醋酸，固定 后使用适宜的缓冲液洗涤细胞。
考马斯亮蓝染色
染色液配制
洗涤
将考马斯亮蓝加入适量的甲醇溶液中， 搅拌均匀后过滤，得到染色液。
染色完成后，使用缓冲液洗涤细胞样 品，去除多余的染色液。
染色过程
将固定和洗涤后的细胞样品加入染色 液中，染色时间根据实验需求而定， 一般为10-30分钟。
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细胞化学染色检验
2.细胞内铁 观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞，计算 出铁粒幼红细胞的百分比（即细胞内铁阳 性率）。铁粒幼红细胞是指胞质中出现蓝 色铁颗粒的幼红细胞，根据蓝色铁颗粒多 少、粗细分为：I型、II型、III型、IV型及环 形铁粒幼红细胞。环形铁粒幼红细胞是指 幼红细胞胞质内蓝色颗粒在5星以上，围绕 核周三分之一以上者，成熟红细胞中出现 铁颗粒称为铁粒红细胞。
临床用途：
①辅助判断白血病细胞的类型的。不同的细胞系列， 其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同，随着细胞的分化阶段 及病理生理状态变化，这些物质的含量也会发生相应改变。因此根据 细胞化学染色结果的不同，可推断细胞的所属系列。因此临床上细胞 化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。 ②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。在病理情况下，血细胞的化 学物质的成分及含量会发生改变，据此可以辅助疾病的鉴别诊断。如 中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。
二：中性粒细胞碱性磷酸染色（NAP）
Kaplow偶氮偶联法： 成熟中性粒细胞碱性磷 酸酶在PH9.6左右的碱性环境中，能水解基质液 中的磷酸萘酚钠底物，释放萘酚，后者与重氮盐 偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶 活性所在之处。
【参考范围】： 1.细胞外铁（+）~（++），约2/3人为 （++），约1/3为（+）。 2.细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率在 12%~44%。以I、II型为主，无环形铁粒幼 红细胞 及铁粒红细胞。
【临床意义】：铁染色是临床应用最广泛 的细胞化学染色之一，主要用于缺铁性贫 血和环形铁粒幼红细胞增多性贫血的诊断 和鉴别诊断。 1.缺铁性贫血 外铁（-）；内铁＜10%； 治疗有效后，内外铁↑。 2.铁粒幼细胞贫血 外铁↑；内铁阳性率↑，环形铁粒幼红细胞 增多。
细胞化学染色(lishai)
正常血细胞的染色反应
淋巴细胞系统 大多数阴性，少数阳性。 巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应 的程度随细胞的发育成熟而增强。
临床意义
◆红细胞系统疾病
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中 幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些 红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。
◆白细胞系统疾病
ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或 块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性细颗粒状
过氧化物酶染色
Peroxidase stain, POX
染色原理（四甲基联苯胺法）
H2O2
溶酶体颗粒中的ＰＯＸ
H2O＋O2
四甲基联苯胺
O2
联苯胺蓝
O2
联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠
蓝色物质
（沉淀）
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程 度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性 单核细胞系统 阴性或弱阳性（颗粒少而 细） 其他血细胞 阴性
细胞化学染色的基本步骤 固定
显示
保持细胞结构及化学成分不变，并使血 膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏
形成稳定的有色沉淀，显示出被检 测的化学物质
复染
既能显示细胞结构又能清楚地看出细 胞化学染色结果
细胞化学染色的种类
过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色
（SBB) 过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色 酯酶染色 酸性磷酸酶染色（ACP) 铁染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
PAS临床意义
MA 幼红细胞呈阴性反 应
AML-M6 幼红细胞呈阳性反 应
ALL
AML-M6
AML-M6 PAS(+)
细胞化学染色
2021/10/10
3838
2021/10/10
CE
39
非特异性酯酶染色（α-NAE）
1. 原理：
α-NAE
α-醋酸萘酚
α-萘酚
7.4~7.6
重氮盐
形成不溶性有色沉淀 定位于胞浆内酶所在 位置
(坚固盐B)
2021/10/10
4040
2.试剂
（1）固定液：甲醛
（2）作用液:
α-醋酸萘酚 丙酮 磷酸盐缓冲液 固蓝B盐
2021/10/10
1111
5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳 性是染色成功的标志(设对照片）。 在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳 性反应。
2021/10/10
1212
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈 阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
2021/10/10
2021/10/10
5050
4.注意事项 （1）所用染色缸及器具应十分清洁、干燥。 （2）雪夫氏染液应避光密封保存，变红则失效。 （3）放入雪夫氏溶液之前，用蒸馏水洗涂片， 而且一定要完全干燥，若有水，试剂变色失效。
2021/10/10
5151
（4）染色时间和温度应相对恒定，一般37℃效果最 好。 （5）染好的标本不能久放，8天后渐退色，因此应及 时观察。
13
2021/10/10
1414
急性粒细胞白血病（M2a) 的POX染色 原始粒细胞均呈阳性
2021/10/10
15
急性淋巴细胞白血病的POX染色
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞均呈阴性
2021/10/10
16
急性早幼粒细胞白血病的POX染色
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6、临床意义 （1）正常分布 粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈 不同程度阳性。 单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。 淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。
细胞化学染色
19
（2）急性白血病的鉴别诊断 幼稚细胞POX阳性率≥3% ：急非淋（AML) 幼稚细胞POX阳性率＜3% ：急淋（ALL)
4.中性成熟细粒胞细化学胞染（色 ++++）；5.淋巴细胞 （-）
细胞化学染色
28
NAP分级 细胞化学染色
29
7.临床意义
增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢 粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。
降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组
细胞化学染色
30
8.鉴别诊断
慢粒与类白：前↓；后↑。 PNH与AA：前↓；后↑。 急粒与急淋：前↓；后↑。 MDS与慢性再障：前↓；后↑。 病毒感染与细菌感染：前者无明显变化，后者↑。 恶组与反应性组织细胞增多：前↓；后↑。
细胞化学染色
25
6.NAP阳性结果及积分判断标准
“－” 0分，胞浆中无阳性颗粒 “+” 1分，胞浆中含有少量颗粒 “2+” 2分，胞浆中含有中等量颗粒 “3+” 3分，胞浆中含有丰富的颗粒，但胞
核清楚 “4+” 4分，胞浆中含有丰富粗大的颗粒，
但胞核不清楚
细胞化学染色
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 1.中性成熟粒细胞（+）；2.中性成熟粒细胞（++）；3.中性成熟粒细胞（+++）；
细胞化学染色
11
5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳 性是染色成功的标志(设对照片）。 在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳 性反应。
细胞化学染色
12
1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈 阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性
细胞化学染色
细胞化学染色
14
急性粒细胞白血病（M2a) 的POX染色 原始粒细胞均呈阳性
细胞化学染色
3
2.细胞化学染色的目的 （1）辅助判断急性白血病的类型 （2）辅助血液系统等疾病的诊断与鉴别诊断
细胞化学染色
3.细胞化学染色的基本步骤：包括固定、显色反应、 复染。 （1）固定：为了保持细胞结构及化学成分的稳定性而 选用的方法。根据染色的目的，最常用的固定剂有甲 醛、甲醇、乙醇等。
细胞化学染色
5
（2）显色：通过不同的化学反应，最终形成稳定的 有色沉淀，使被监测的化学物质显示出来。包括 偶氮偶联法：如NAP、ACP及各种脂酶染色 普鲁氏蓝反应：如铁染色 雪夫（shiff）反应：如PAS染色 联苯胺法：如POX染色 （3）复染：使各种目的细胞能显示出来更便于观察
细胞化学染色
6
二、细胞化学染色的基本方法
细胞化学染色
23
4.注意事项 (1) 重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳； (2) 坚固蓝RR盐应适量：过多易造成染色失败， 过少使反应减弱； (3) 每次都要做阳性对照； (4) 作用液新鲜配制，配好后要立即使用
细胞化学染色
24
5.结果观察:(对照片成熟中性粒细胞中出现棕
黑色颗粒为阳性细胞，说明染色成功) 正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外，其 它血细胞均为阴性。且正常阳性率＜40%，积分 值30～130分。
至9钠
5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液
4ml
坚固蓝RR盐
5mg
（4）复染液：1%中性红
细胞化学染色
22
3.操作步骤 1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及 对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干； 2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干； 3、1%中性红复染1min
细胞化学染色
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（三）酯酶染色
概述 特异性酯酶染色 非特异性酯酶染色
细胞化学染色
概述
根据各类细胞所含酯酶特异性高低分为特异性 酯酶(SE)和非特异性酯酶(NSE)；特异性酯酶是指 氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特异性酯酶 根据水解基质液的PH不同，又分为中性NSE（α-醋 酸萘酚酯酶 ），酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶 ），碱性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）。
细胞化学染色检验
细胞化学染色
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一、概述 二、细胞化学染色的基本方法 三、临床应用
细胞化学染色
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一、概 述
1、概念： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门
科学，以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的 原理对血细胞内的各种化学物质（包括酶类、脂类 、蛋白质、糖类、铁、核酸等）作定性、定位、半 定量分析的方法。
细胞化学染色
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3、染色方法 1、新鲜干燥涂片加联苯胺酒精溶液10滴，覆盖整
个髓膜，固定1-2min。 2、再加等量的稀H2O2，混匀后染色4－5min,勿倒
去染液直接流水冲洗。 3、瑞氏染液复染。
细胞化学染色
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4、注意事项 （1）H2O2要新鲜配制，注意有效性 （2）标本要新鲜，最长不超过一周，时间长了酶活 性减弱。 （3）POX染色后，一定要冲洗干净，否则染料堆积 或浮于表面，影响瑞氏染色结果观察。
过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 糖原染色 非特异性酯酶染色 特异性酯酶染色 骨髓铁染色
细胞化学染色
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（一)过氧化物酶(POX)染色
1、原理：
pox
H2O2
O
联苯胺
联苯胺蓝 +
亚硝基铁氰化钠
蓝黑色颗粒
细胞化学染色
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2.试剂 (1)联苯胺酒精溶液： 取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml, 再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。 (2) 稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加 30%H2O21滴。 （3）瑞吉氏复染液
细胞化学染色
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（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色
1.原理
（偶氮偶联法）
NAP
磷酸奈酚钠
磷酸+萘酚
PH9.2～9.8
偶联 萘酚+重氮盐
(坚固蓝RR盐)
不溶性有色沉淀物定位于胞浆
细胞化学染色
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2.试剂
（1）固定剂：10％甲醛甲醇溶液
（2）Tris-Hcl缓冲液的配制：Tris粉〔三胺基甲
烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中,加浓HCL1-2滴，PH调
细胞化学染色
急性淋巴细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞均呈阴性
细胞化学染色
急性早幼粒细胞白血病的POX染色 １.原始红细胞，呈阴性；其他早幼粒细胞均呈强阳性
细胞化学染色
急性单核细胞白血病的POX染色 1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；
3.原始单核细胞细胞，化呈学染弱色 阳性；其他原幼单核细胞呈阴性