白血病免疫分型
白血病免疫分型的诊断标准
9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。
急性白血病免疫学分型
（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。
前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。
见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。
急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。
白血病免疫分型初筛方案
白血病免疫分型初筛方案白血病免疫分型初筛方案白血病是一种由于造血干细胞异常增殖引起的恶性血液病，其临床表现及预后差异较大。
对于白血病患者的治疗和预后判断，准确的分型至关重要。
近年来，随着免疫学研究的进展，白血病的免疫分型成为了一个重要且具有指导意义的方面。
本文将介绍白血病免疫分型的初筛方案，以及其对临床的意义和应用。
一、什么是白血病免疫分型？白血病免疫分型是通过检测白血病患者的免疫表型，即细胞上表达的抗原和细胞表面标记物，来确定白血病的类型和亚型。
目前，常见的白血病免疫分型方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫电镜等。
二、为什么需要白血病免疫分型？白血病患者的治疗和预后与其分型紧密相关。
不同类型的白血病具有不同的临床表现、生物学特点和预后，准确的分型对于指导个体化治疗非常重要。
免疫分型不仅可以帮助医生确定病情严重程度、制定个体化治疗方案，还可以对患者的预后做出评估。
对于一些疑难病例，免疫分型还有助于确定病理诊断和鉴别诊断，减少误诊和漏诊的发生。
三、白血病免疫分型的初筛方案目前，国际上广泛应用的白血病免疫分型初筛方案主要是基于流式细胞术。
这一方法具有快速、准确、多参数检测的特点，使得它成为了白血病免疫分型的首选工具。
白血病免疫分型的初筛方案通常包括以下几个方面的内容：1. 纵向免疫分型纵向免疫分型主要是通过检测白血病细胞表面的免疫表型，确定白血病的类型和亚型。
对于怀疑白血病的患者，医生通常会进行一系列免疫标记物的检测，如CD45、CD34、CD13、CD33、CD14、CD15等。
这些标记物可以帮助医生确定白血病患者的分型，指导后续的治疗和预后评估。
2. 横向免疫分型横向免疫分型则是通过比较不同类型的白血病细胞表面的免疫表型，辅助鉴别白血病的类型和亚型。
在横向免疫分型中，医生通常会检测同一类别不同亚型的白血病患者的共同抗原和独特抗原，以确定其具体的亚型。
3. 免疫细胞化学分析免疫细胞化学分析是一种通过检测白血病细胞内特定抗原的染色反应，来确定白血病的类型和亚型的方法。
急性白血病免疫分型
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点
我国急性白血病免疫分型的四色方案
我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。
因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体，涉及多个造⾎系列的抗原。
但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。
⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性，有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案，供参考。
本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病（APL）1.3急性髓细胞⽩⾎病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红⽩⾎病（AML-M6）z急性巨核细胞⽩⾎病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病1.6 混合表型⽩⾎病1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查2.抗体的选择：根据检测的⽬的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病，可以根据CD45/SSC图型进⾏初步判断。
髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下⽅，且多数⽩⾎病细胞SSC较低（除去⼤颗粒APL 患者）。
急性白血病免疫分型课件
11
ＡＬＬ免疫分型 －－五分法：
• 五分法： Common型 型 B细胞型
未分化型 T细胞型 前B细胞
• 表型
SmIg+
DR/CD9/CD10+ 复杂
CD2/CD5+ CyIg
23
与AML预后有的抗原
6。Ly+AML： CR率低
占AML43%， CR46%，合并 CD34+38%，PgP+15%， （其中 CD2+AML7.7%，CD7+AML22%， CD19+13%）， Ly-AML：CR73%
7。CD7+AML： CR率低，
占AML22%， 合并CD34+75%， PgP+55%，（ M1：42%，M2：18%， M4：28%，M5：9%，M3：0%） CR35%
5
T细胞系抗原
T 细胞进入胸腺后：
（早） CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
（中）CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR-
（晚）CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+，
CD7+CD2+CD3+CD4-CD8+TCR+ CD7+CD2+CD3+CD4+CD8-TCR+
24
与AML预后有的抗原
8。CD19+AML： CR率较低，
占AML13%，合并CD34+67%，PgP+33%， （M2：16%，M5：25%），CR50%。
我国急性白血病免疫分型的四色方案
中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性白血病的重要依据之一。
因准确的诊断需要选择一定数量的抗体，涉及多个造血系列的抗原。
但目前国内甚至国际上没有规范化的方案可以借鉴。
而国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案，供参考。
本方案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性白血病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞白血病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进行鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),皮质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞白血病（APL）1.3急性髓细胞白血病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红白血病（AML-M6）z急性巨核细胞白血病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥大细胞白血病1.6 混合表型白血病1.7 对上诉急性白血病治疗后检测MRD的标志进行筛查2.抗体的选择：根据检测的目的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性白血病:对于急性髓细胞白血病，可以根据CD45/SSC图型进行初步判断。
髓系白血病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下方，且多数白血病细胞SSC较低（除去大颗粒APL患者）。
再根据CD34、CD117、CD38、HLA-DR、CD123的表达进行判断。
急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型
三、急性白血病系别诊断标准
• EGIL诊断标准缺点： • （1）关于阳性定义，因为影响因素众多，有时存在歧义； • （2）对于某些覆盖率低、特异性高的标志，给予分值低或者未纳入，如CD64、CD14； • （3）对某些常见伴系表达标志予以极低分值，如CD7，未考虑荧光强度的差异； • （4）对于相对特异、在某系别易于伴发的标志，未考虑差异对待，如cCD79a、CD10
三、急性白血病系别诊断标准
• 鉴于几乎没有任何标志是绝对敏感和特异的，做全标志有助于降低误诊风险，因此 在系别筛查时如果出现系别标志表达过多或者过少，或者伴系表达标志的强度超过 标本中残留的正常细胞时，首先应该做全两个诊断标准涉及的相关系别标志，必要 时甚至需要增加CD371等新的髓系标志。
• 在此过程中可以选择一步法或者两步法。选择一步法的实验室，以目前常用3激光8 色机型为例，可供参考的5管法见表3；选择两步法的实验室，第一步进行系别筛查， 包括髓系MPO（或者CD33）和CD117，T系CD7和cCD3、B系CD19和CD22，根据 采用仪器型号不同可能有差异，4色方案可以参考2015年4色流式细胞术中国专家共 识，3激光8色推荐方案见表3。
三、急性白血病系别诊断标准
三、急性白血病系别诊断标准
• 注意几个标志的FCM检测： • （1）MPO：使用克隆号8E6、MPO-7的抗体需要小心，因为均有在B-ALL表达的
报道；阳性阈值虽然大多数沿用10%，但是建议结合荧光强度，并且不典型病例应 该做全其他髓系标志，并结合细胞化学和免疫组化MPO检测结果；FCM破膜处理 可能会使粒细胞的侧向角光散射（side scatter，SSC）降低，从而影响CD45/SSC设 原始细胞门的精确度，导致假阳性结果，正确的方法应结合原始细胞标志修订设门。
白血病免疫分型的诊断标准
9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
门位置处出现
白血病流式免疫分型举例
T-ALL
在CD45/SSC点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟 淋巴细胞比较CD45弱表达
Ta ng ca i xi a.00 1
R3
R4
R5 100
R1 R2
101
102
103
CD4 5 PerCP-Cy5.5
104
CD5、CD7、 cCD3、 CD34阳性
• 幼稚细胞群体的FSC和SSC信号与M0相似，Blasts >90%。
免疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移
七、注意事项
1.标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常 放置24小时后检测,但标本采集后应在3-4天 内测定完毕。若标本采集后不能及时测定， 勿预先固定和冰箱内保存。
2.滴加单克隆一抗时，格外小心避免混淆。 3.滴加二抗、显色剂时无需分开。 4.整个检测过程中自固定后标本均应保持湿
润，不能干燥，直至复染后方能使其干燥。
韩茂芬，女，57岁 住院号：165004 感染科—27床 2004年10月6日骨髓片
CD7
攀胜甫，男，42岁 住院号：166298 消化科—4床 2004年11月27日骨髓片
杨雨甜，女，1岁3个月 住院号：167108 小儿科—13床 2004年11月29日骨髓片
前言
白血病和肿瘤细胞骨髓转移的诊断主要靠骨髓 细胞病理学诊断。骨髓细胞病理学诊断的方法 主要有细胞形态学、细胞化学染色、免疫细胞 化学染色、 细胞遗传学以及分子生物学。根据 文献报道，根据细胞形态对白血病进行分型的 准确性是64%～77%。细胞形态学和细胞化学 结合可使准确性达86% [2] ，但对于AML-M0 、 M7 、M5a 、MAL 鉴定有一定的困难。而免疫 细胞化学染色在一定程度上可以解决此类问题。
二、免疫细胞化学染色理论基础
（一）白血病免疫分型 各种血细胞来源于多能干细胞，经过分化
发育而成为成熟的血细胞。这些血细胞在分化 发育过程中，在其表面出现不同阶段的特异性 分化抗原，利用各种特异性单克隆抗体和酶联 免疫方法测定这些抗原，从而精确测定细胞类 型及不同的分化阶段。白血病细胞具有与其对 应的分化抗原,因此利用分化抗原可对白血病进 行免疫学分型。
3.PBS冲洗，5分钟×3。
4.滴加非免疫动物血清50μl，室温孵育10 分钟。
5.根据形态学初检选择需要标记的第一抗 体滴在圆圈内并做好记号，然后将玻片 置于湿盒内室温下1.5小时或4℃ 过夜。
白血病免疫分型
白血病免疫分型
白血病免疫分型：
1、胸腺移植
胸腺移植是一种利用病人的免疫系统抗白血病的新方式。
病人将在手术当中收集胸腺，将其根据个人情况调节，再移植回病人体内，可以促进病人免疫力对抗白血病，从而获得疗效。
2、肿瘤抑制剂治疗
肿瘤抑制剂治疗是通过治疗肿瘤细胞阻断细胞的生长，从而达到抗白血病的目的，一般与化疗联合使用，可以获得较好的疗效。
3、血液干细胞移植
血液干细胞移植是指把病人本身或从其他捐助者那里获取的血液干细胞，通过放射线、化疗等手段，灭活病人体内的血细胞，然后再将血液干细胞移植回体内，由其自动重建新的血系给病人，使其免疫力能抗白血病，从而获得疗效。
4、免疫疗法
免疫疗法是指对病人的免疫体系开展抗白血病的改造，例如，将病人的有效抗体、转基因细胞等植入体内，用以增强病人的抗白血病免疫力，以实现抗病毒和抗炎，达到治疗目的。
5、免疫抑制剂
免疫抑制剂是指利用特定药物来抑制人体免疫系统，也就是进行免疫抑制，从而实现抗病毒的目的。
免疫抑制剂对抗白血病的疗效可以通过阻断病毒的复制，抑制炎症状态，减少体内抗病毒抗体的数量来达到。
白血病细胞的免疫分型
白血病细胞的免疫分型正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。
因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。
由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。
近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。
国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM），此外还有免疫组化法，电镜和荧光显微镜也可以帮助诊断。
其中流式细胞术（F CM）和免疫组化法较为常用。
流式细胞术中，白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
因为FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。
另一个重要理由是至今尚未发现白血病的特异抗原。
所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。
这群细胞充盈于骨髓。
抗原表达与其相应系列/阶段的血细胞无明显差异。
与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。
单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。
因此，近年来主张用设门（gating）方法。
即用CD45与侧向角（side scatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原。
其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。
白血病免疫分型
白血病免疫分型白血病的免疫分型主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测，我们可以判断出白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型是诊断白血病的重要标准，对于白血病选择化疗药物以及估计预后是非常重要的。
白血病的免疫分型最早由欧洲提出来，它主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测从而判断出，白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型一般是对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测。
1、白血病的诊断需要骨髓穿刺、骨髓液免疫分型、染色体和基因检查以进一步诊断，骨髓细胞学诊断白血病的准确性仅为70%左右。
如果同时增加白血病的免疫分型，白血病的明确诊断准确率可以接近100%。
2、白血病免疫分型是指对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测，可以进一步区分急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病和慢性髓系白血病等类型。
同时还需要检查融合基因的染色体，以便对白血病诊断后的预后进行分层，并制定个性化的化疗方案。
建议平时多进行体育锻炼，增强自身免疫力。
急性白血病是造血干细胞的克隆性恶性疾病，发病时骨髓中异常的原始细胞大量增殖并浸润各种器官组织，正常造血受到抑制。
急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病，这两类还可分成多种亚型。
白血病的分型采用MIC分型，即形态学、免疫学和细胞遗传学结合的分型。
根据白血病细胞免疫学标志，不仅可将急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病进行区别，而且还可将T细胞和B细胞急性淋巴细胞白血病加以区别。
白血病免疫分型的基础
白血病免疫分型的基础白血病是一类以恶性克隆性造血干细胞增殖为特征的血液系统恶性肿瘤。
根据白血病患者免疫系统的表现和特征，可以将白血病分为多种免疫分型。
免疫分型对于指导白血病的治疗和预后评估具有重要意义。
白血病的免疫分型主要基于白血病细胞表面标志物的检测结果，通过免疫学方法对白血病细胞进行分类。
根据不同的免疫分型，可以更好地了解白血病的发展过程和预后情况，为临床治疗提供指导。
一、急性淋巴细胞白血病（ALL）的免疫分型急性淋巴细胞白血病是一种起源于淋巴细胞前体的恶性肿瘤。
根据ALL细胞表面的免疫表型，可以将ALL分为常见型、T-ALL、B-ALL 和非T非B淋巴细胞白血病。
1. 常见型ALL：常见型ALL细胞表面表达CD10、CD19、CD20等B 细胞标志物，具有较好的预后。
2. T-ALL：T-ALL细胞表面表达CD2、CD3、CD4、CD5等T细胞标志物，预后较差，易发生中枢神经系统浸润。
3. B-ALL：B-ALL细胞表面表达CD19、CD20等B细胞标志物，预后因不同的表型差异而有所不同。
4. 非T非B淋巴细胞白血病：非T非B淋巴细胞白血病细胞表面不表达典型的T细胞或B细胞标志物，预后较差。
二、慢性淋巴细胞白血病（CLL）的免疫分型慢性淋巴细胞白血病是一种起源于成熟淋巴细胞的恶性肿瘤。
根据CLL细胞表面的免疫表型，可以将CLL分为ZAP-70阳性型和ZAP-70阴性型。
1. ZAP-70阳性型：ZAP-70阳性型CLL预后较差，易发生淋巴结肿大和外周血细胞减少。
2. ZAP-70阴性型：ZAP-70阴性型CLL预后相对较好，疾病进展较慢。
三、急性髓系白血病（AML）的免疫分型急性髓系白血病是一种起源于骨髓干细胞的恶性肿瘤。
根据AML细胞表面的免疫表型，可以将AML分为M0-M7七个亚型。
1. M0亚型：M0亚型AML细胞表面不表达常见的髓系标志物，预后差。
2. M1亚型：M1亚型AML细胞表面表达CD13、CD33等髓系标志物，预后相对较好。
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正常人血液白细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：单核细胞 R3：中性粒细胞 R4：嗜酸性粒细胞 R5：原始细胞
正常人骨髓有核细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：粒系细胞 R3：单核细胞 R4：原始细胞 R5：幼红细胞
白血病细胞的特性
白血病细胞的异常表现在： 抗原系列异常和时间异常
CD15
CD1a
CD64
2008年WHO细胞系别确定标准
髓系：MPO（流式细胞术、免疫组化或者细胞化 学） 或单核系分化（非特异性酯酶弥漫性阳性， 或者CD11c、CD14、CD36、CD64、溶酶体， 两个及以上阳性） T系：胞浆CD3（流式使用抗CD3ε链的抗体；免 疫组化使用的多克隆抗体会检测到非T细胞特异性 的CD3ζ链） 或胞膜CD3（MPAL中比较罕见） B系：CD19强表达加下述标志中至少一个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10 或CD19弱表达加下述标志中至少两个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10
髓片
POX染色
AML-M0
AML-M1
AML-M2
AML-M3
AML-M3v
AML-M4EO
AML-M4b
AML-M5b
AML-M6
AML-M7
AML免疫分型总结
192例AML病例中免疫分型结果示髓系抗原CD13、CD33、 MPO最常见，其次CD117也是髓系比较敏感的指标，在 原始细胞百分比高的AML亚型中有较高的阳性率。
白血病免疫分型---CD45-SSC设门
CD45是白细胞的共同抗原成分,所有人类白细胞均表达CD45，包括 淋巴细胞、单核细胞、多形核细胞、嗜酸、嗜碱性细胞、胸腺细胞、 脾细胞、扁桃腺细胞以及骨髓前体细胞。 造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高低紧密相关，即分化 程 度 高 的 细 胞 CD45 表 达 量 高 ， 分 化 程 度 低 的 细 胞 CD45 表 达 量 低 （淋 巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞，在红细胞中不表 达。 SSC是侧向角参数，反应细胞的颗粒度（成熟粒细胞>单核细胞>原 幼 细 胞 > 淋 巴 细 胞 ） 。 目 前 ， 国 际 上 采 用 CD45—SSC 设 门 （Gating），可将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分 型的准确性。
应用积分方案把急性白血病分为四大类型
单表型急性白血病：某一系列积分大于2分，其他系列为0分。 表达某一系列抗原为主的白血病（伴髓系分化抗原表达的ALL和
伴淋系分化抗原表达的AML）：某一系列积分大于2分，伴有 另一系列抗原的表达，但积分小于2分或等于2分。 双表型急性白血病：至少两个系列同时大于2分。 未分化型急性白血病：所有系列积分均小于或等于2分。
AML免疫分型总结
尽管CD14是单核细胞比较特异标记，在M4和M5中表达 反而较低，这可能与CD14主要表达于成熟单核、弱表达 于幼单核，而原始单核细胞表面无表达有关，其对单核细 胞白血病的诊断价值有限，应与其他单抗和细胞化学染色 结合判断。 21例M5中，CD64和CD15阳性率均大于80%，而HLADR 100%阳性，CD34和CD117表达不定，提示CD64和 CD15同时强阳性伴HLA-DR高表达提示M5可能性大， 与文献报道一致。
有文献报道M3缺乏CD117的表达，而本组资料中有 84.6%的M3病例表达CD117,与Paitta和zheng jine报 道的结果一致。这一差异可能与各研究的病例数较少或所 使用的单克隆抗体来源不同有关。
39例病例中有34例CD34与DR均为双阴性，因此强自发荧 光、CD34与DR双阴性并且表达相关髓系抗原对于M3与 其他亚型AML的鉴别诊断具有一定参考价值。
弱抗原结合强荧光素 弱荧光素结合强抗原
欧洲组ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ血病免疫分类的标志积分系统（EGIL）
积分 B淋巴细胞系
T淋巴细胞系
髓系
2
cCD79a
c/mCD3
MPO
cIgM
抗TCR
cCD22
1
CD19
CD2
CD117
CD20
CD5
CD13
CD10
CD8
CD33
CD10
CD65
0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
Monocytoid maturation
白血病的形态学
白血病免疫分型的特点
白血病免疫分型诊断与形态学比较更客观、更精确(淋系、 M0、M6 、M7及MAL) 属于同一种FAB型的病例，可能具有不同的免疫表型 覆盖率高于基因及染色体，尤其对淋巴系统 慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤 敏感性高于形态及染色体，可达103-104 ----微小残留白血病 比染色体及基因分析快捷，但特异性比之差 目前，免疫分型对粒-单核细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有 一定困难.亦受主观因素的影响
白血病免疫分型
中国医科大学附属盛京医院血液研究室 张继红
Contents
1
血细胞抗原分化
2
流式细胞术检测白血病免疫分型
3
AML免疫分型特点总结
4
ALL免疫分型特点总结
5
其他白血病免疫分型分析
血细胞分化体系图
B lymphoid maturation
T lymphoid maturation
Neurotrophil maturation
丧失系列规律性（lineage infidelity) : 过高，过低，不表达，交叉
丧失分化发育的阶段性（differentiation asynchrony) : 早期与晚期抗原同表达
免疫分型诊断时的四个步骤
根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来 源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等 根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分 型。如：早前B，前B，普通B… 伴系表达抗体（对检测MRD有意义） 靶向抗体指导治疗（CD52，CD33，CD20） 注意抗体组合的问题：PE，APC，PerCP，FITC
急性髓细胞白血病
亚型 M0 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7
典型的免疫标记 CD34,CD33,CD13 MPO,CD34,CD33,CD13 MPO,CD34,CD15,CD13 MPO, CD33,CD13(HLA-DR阴性) MPO,CD33,CD15,CD14,CD13 MPO,CD33,CD14,CD13 CD33,GlyA CD33,CD41,CD42b,CD61