实验二细菌基本形态及特殊形态观察

思考题
（1）观察细菌染色片时应如何调节光线？ （2）油镜观测时，是否可以除香柏油以外的其它液体作介质？
目镜
物镜
10 X 100X
⑵ 显微镜的分辨率
油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。
原因： ◆ 油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜 ◆ 油Biblioteka Baidu汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜
◆ 分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R）
R=λ∕2NA
(λ为入射光波波长； NA为显微镜数值孔径)
NA= η.sinθ
汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。
3 荚膜染色
主要成分多为糖 类，无色透明且 不易着色常用负 染色观察。负染 色是将细菌细胞 和背景着色，从 而把无色透明、 不着色的荚膜结 构衬托显现出来。
菌体 荚膜
菌胶团：
多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。
菌胶团
4 芽孢染色
细菌芽孢壁厚而致密，透性
五 实验报告
绘 大肠杆菌 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌形态示意图
绘 荚细菌荚膜 枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图
菌 名：枯草杆菌 放大倍数：16×100 X
细菌形态示意图绘图要求：
① 选择形态典型的部分细菌细胞绘图。 ② 仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大小比例应 适宜，且形态上应有所区分。 ③ 细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘空心图）。 注明菌名、放大倍数。
细菌鞭毛直径极微小 （约10---20nm）,一般 用电镜观察，但采用特 殊染色后，在普通光镜 下也可观察到。其原理 是先用媒染剂处理，使 之沉积于鞭毛上，从而 加粗鞭毛外观直径，然 后再进行染色。
有鞭毛的菌体可以运动。
三 实验材料
▲细菌基本形态标本片：大肠杆菌片 枯草杆菌片 金黄色葡萄球菌片
▲ 细菌特殊形态标本片：钾细菌荚膜片 枯草芽孢杆菌芽孢片
１ 普通光学显微镜的结构
（1 ) 机械系统 包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等
（2 ) 光学系统 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。
２ 普通光学显微镜的光学成象原理
（1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积 。
目镜 ：
物镜
低倍镜：10X 高被镜：40X 油镜：100X
低，难于染色，但一旦被染
色又难于脱色。因此先用强
着色力的染料（孔雀绿）处
理，并同时加热，使菌体以
及芽孢均着色，后使菌体脱
色，而芽孢保留原色，经复
染（蕃红），菌体与芽孢分
芽
孢
菌 体
别以不同颜色显现。
菌芽 体孢
对有芽孢的菌体进行简单染 菌体 色（只用一种染料染色）。 菌体和芽孢着色情况如何？
芽孢
5 鞭毛染色 及运动观察
▲土壤菌体培养液
四 实验内容及步骤
1 细菌基本形态观察 2 细菌特殊结构观察 3 细菌运动性观察悬滴片的制作。
1 细菌基本形态观察
学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察——
大肠杆菌 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌
菌体
2 细菌特殊结构观察
学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察细菌特殊结构—— 芽孢
钾细菌荚膜（高倍镜） 枯草芽孢杆菌芽孢（油镜）
实验二 细菌基本形态及 特殊形态观察
一 目的要求
1 了解普通光学显微镜原理及构造。 2 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。★ 3 用油镜观察细菌基本形态。 4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢及观察有鞭毛细菌的运动。
二 基本原理
１ 普通光学显微镜的结构 ２ 普通光学显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色 4 芽孢染色 5 鞭毛染色及细菌运动
η为标本、物镜之间介质的折射率。 θ为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的
一半。
η低倍镜= η高倍镜=η空气=1.0 ， η油镜η香柏油=1.52 θ低倍镜< θ高倍镜< θ油镜 ， sinθ低倍镜< sinθ高倍镜< sinθ油镜
NA低倍镜< NA高倍镜< NA油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。
菌胶团
荚膜 菌体
3 细菌运动性观察悬滴片的制作。
土壤细菌菌悬液培养液。
观察注意要点： （光线要暗）
油镜使用主要步骤
▲观察前准备 ：显微镜的准备和调试视野明亮 ▲低倍镜观察 ▲高倍镜观察（此步可以省略） ▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦 ▲显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗）
注意 ！！！ —— 显微镜调焦方法