第一节 植物细胞工程实验室设置与培养条件.ppt.Convertor

第一章植物细胞工程原理与技术
第一节实验室设置及培养条件
第二节培养基
第三节植物材料的接种
一实验室设置及内部设备
二培养环境条件
第一节实验室设置及培养条件
一实验室设置及内部设备
实验室建设应考虑的问题：
1、实验的性质2、实验室的规模
细胞工程实验室:
基本实验室:准备室、无菌操作室、培养室
辅助实验室：细胞学实验室、生化分析实验室
接种室应用推拉门，设有缓冲间，面积2m2为宜。进入接种室前更衣换鞋，减少带入接种室杂菌。
接种室主要设备
超净工作台
每次实验前要用紫外灯灭菌20min，关掉紫外灯开始工作，工作过程中注意一直开着吹风机。
无菌操作用具
离心机
细胞融合仪
◆
接种用具
3、培养室
用于接种材料的培养。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。
贮藏室
温室
基本实验室
1、准备室
完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装及高压灭菌；器皿、材料的洗涤等工作。
主要设备
纯水器工作台药品厨天平电磁炉冰箱玻璃器皿酸度计高压灭菌锅干燥箱等
◆
培养容器
2、无菌操作室（接种室）
用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
2.培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。
◆固体培养基可加进活性炭来增加
通气度,以利于发根。
◆液体培养时，可考虑采取振荡培
养的方式，以增加通气性。
（五）、气体
（六）渗透压
（七）培养基成分
思考题：
1、植物细胞工程实验室的基本组成？
2、植物离体培养的环境条件？
★不同波长的光对细胞的分裂和器官的
分化有影响。
2.光质
★红光促进杨树愈伤组织的生长，
蓝光阻碍其生长。
（二）光照
3.光照时间
10－16h
光照长短对试管内花的形成是个重要影响因素，在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加，而促进生长。
（二）光照
（二）湿度
1.瓶内的湿度：
主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。
宽度一般为60cm。
2、空调
3、时控器自动开灯、关灯
4、温度自动记录仪
5、摇床
培养室主要设备：
培养箱
辅助Hale Waihona Puke Baidu验室
1、细胞学实验室：对培养材料进细胞学鉴定和研究。
由制片室和显微观察室组成。
主要设备:切片机、磨刀机、温箱及切片染色设备；
实体显微镜、倒置显微镜、生物显微镜、
照相设备
显微观察室
生化分析实验室
植物细胞工程实验室布局
2.环境湿度：过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。一般为70－80%。
（二）湿度
培养基适宜PH值5.0－6.5，一般为
（四）pH值
（五）气体
1.培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。
可用棉塞或特制的封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。
南
北
二 培养条件
1.一般控制在
25土2℃。最低15ºC，最高35ºC。
2.不同植物最适温度不同。如百合20℃；月季25－27℃。
（一）温度
（二）光照
1.光强1500－3000lux★影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。
★愈伤组织一般在黑暗或弱光下诱导；光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。
控制：温度、光照、湿度。
培养室主要设备：
1、培养架放置培养物，每层顶部装有灯管进行照明，可用灯管数量来调节光照强度。培养架多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔40cm左右，培养架高
1.7m左右。培养架长
度根据日光灯长度设计，
如采用40W日光灯，则
长1.3m，30W的长lm，