高效液相色谱法测定栽培射干中次野鸢尾黄素的含量.

高效液相色谱法测定栽培射干中次野鸢尾黄素的含

量

【摘要】目的应用高效液相色谱法测定栽培射干中次野鸢尾黄素的含量，考察其药材的内在质量。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为TSK ge1 ODS 80 TS250 mm×4.6 mm；流动相为甲醇?擦姿崴?溶液（pH=3）∶53%∶47%；流速为1 ml/min；检测波长为266 nm；柱温35℃。结果次野鸢尾黄素在

0.0118～0.118 μg范围内与色谱峰面积呈线性关系（r=0.999 9）；平均加样回收率为99.84%，RSD为2.059%，次野鸢尾黄素的含量为0.1252%。结论该法简便、准确、灵敏度高，栽培射干中的次野鸢尾黄素的含量大于0.10%，符合《中国药典》要求。【关键词】高效液相色谱法射干次野鸢尾黄素Abstract：ObjectiveTo determine irisflorentin in cultivated Belamcanda chinensis(L.)DC by HPLC,and to inspect the quality of its ingredients.MethodsUsing HPLC with T SK ge1 ODS Column80(250 mm×4.6 mm),the mobile phase was composed of a mixture of methanol-phosphoric aicd aqueous soluton (pH=3)∶53%∶47%,the flow rate was 1 ml/min,the UV detection wavelength was set at 265 nm,and the temperature was at 35℃.ResultsIrisflor entin showed linear relationship with peak areas in the range of 0.0118～0.118 μg(r=0.999 9).The average recovery was 99.84%,RSD was 2.509%.ConclusionThe method is simple,rapid and accurate.The quantity of irisflorentin in Cultivated Belamcanda Chinensis(L.)DC exceeds 0.10% and meets the Chinese Pharmacopoeia. Key words：HPLC; Belamcanda

chinensis(L.)DC ; Irisflorentin 射干是鸢尾科射干属植物射干的干燥根茎，为常用中药，始载于《神农本草经》，列为下品。味苦、性寒，入肝、肺经。具有清热解毒，利咽祛痰的功效，主要用于咽喉疼痛，肺痈，痰咳气喘等症，为治疗喉痹咽痛之要药［1］。射干中异黄酮类成分具有抗炎、抗病毒、抑菌和消除自由基作用。次野鸢尾黄素为射干中有效成分之一。随着射干野生资源的日益减少，为保护资源，近年来对射干的生物学、引种和栽培已有越来越多的研究。本文采用HPLC法测定了栽培射干中次野鸢尾黄素的含量。根据测量结果，对其进行质量评价。 1 器材和试药戴安P680高效液相色谱仪，UVD170U检测器，四元梯度泵，HKZJZ-830171BAF；戴安变色龙高效液相数据处理系统；色谱柱：TSK ge1 ODS 80TS（250 mm×4.6 mm）；预处理柱：Allechc18（美国）；AP-9908S滤过器（Automatic Science Lastrument Co.Ltd）;BP-211D型十万分之一分析天平（西德Sartorius）；甲醇、磷酸：分析纯；重蒸馏水。对照品：次野鸢尾黄素（批号：1557-200101 20 mg/支）购自中国药品生物制品检定所。药材来源：2005??11??12采自团凤县射干GAP种植基地的栽培射干，经本院刘合刚教授鉴定，原植物为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC。 2 方法与结果 2.1 色谱分离条件流动相：甲醇?擦姿崴?溶液（pH=3）：

53%∶47%；流速：1 ml/min；柱温35℃。检测波长：266 nm；进样量：5 μl ［2］。 2.2 对照品溶液的制备精密称取次野鸢尾黄素对照品1.47 mg，置25 ml容量瓶中，加入适量甲醇充分溶解后，定容至刻度，得对照品溶

液浓度为58.8 μg/ml，精密吸取以上对照品溶液1～5 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配成11.76 μg/ml的溶液，作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备药材经干燥后粉碎，过四号筛，取样品约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液［3］。 2.4 方法学考察 2.4.1 标准曲线及线性范围分别精密吸取上述对照品溶液1，2，4，6，8，10 μl进样，按以上色谱分离条件，进行HPLC测定。以对照品进样量与峰面积作图，呈线性关系，见图1。回归方程为Y=0.829 3X-0.060 4，r=0.999 9。线性范围在0.011 8～0.118 μg之间。2.4.2 精密度实验精密吸取对照品溶液5 μl重复进样5次，分别记录峰面积，计算RSD为1.3%，表明仪器精密度良好。结果见表1。表1 精密度实验（略） 2.4.3 稳定性实验按供试品样品溶液的制备方法制备栽培射干1的溶液，分别在0，2，4，6，8 h各进样5 μl。结果见表2。计算RSD为

1.4%，表明样品溶液至少在8 h内稳定。表2 稳定性实验（略）

2.4.4 重现性实验精密称取同一批的射干粉末5份，按供试品样品溶液的制备方法制备样品溶液，进样5 μl，测定次野鸢尾黄素的含量。结果见表3。计算RSD为1.1%，表明本方法重现性良好。表3 重现性实验（略）

2.4.5 加样回收率实验精密称取5份已知含量的射干样品粉末各0.1 g，分别加入次野鸢尾黄素对照品溶液2 ml（浓度为58.8 μg/ml），按样品的制备方法制备供试品样品溶液，测定次野鸢尾黄素的含量，计算回收率，平均回收率为99.84%，RSD为2.509%，证明该方法稳定可靠。结果见表4。表4 加样回收率实验（略） 2.5 样品的含量测定按上述供试品样品溶液的制备方法和色谱分离条件，进样5 μl，测得团凤GAP种植基地的3批不同批号的栽培射干中的次野鸢尾黄素的含量。结果见表5及图2～3。表5 药材中次野鸢尾黄素的含量（略） 3 讨论本实验说明用HPLC法测得射干中次野鸢尾黄素的含量，重现性好、回收率高、稳定可靠，此法可用于测定射干中次野鸢尾黄素的含量。根据测定结果，栽培射干中的次野鸢尾黄素含量＞

0.10%，符合《中国药典》规定。【参考文献】［1］钟鸣.中药射干现代研究进展［J］.中药材，2001，24（12）：904. ［2］万月生，孙国祥.RP-HPLC测定射干抗病毒注射液中次鸢尾黄素含量［J］.中南药学，2004，2（3）：133. ［3］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：200.