病理组织切片制作技术ppt课件
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支 气 管 肺 炎 小 叶 性 肺 炎
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动 脉 粥 样 硬 化 纤 维 斑 块
/AS/
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新月体性肾炎
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新 月 体 性 肾 炎
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肝细胞脂肪变
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临床病理学技术培训PPT组织切片与疾病诊断
化学品安全
对使用的化学品要有充分的了解，包括其性质、毒性、安全防护措施等。使用化学品时要 佩戴好个人防护用品，并在通风良好的环境下进行操作。对于易燃、易爆、有毒有害的化 学品要特别小心，严格按照规定进行存储和使用。
废弃物处理
实验过程中产生的废弃物要分类收集和处理。对于有害废弃物，如废液、废固等，要按照 国家和地方的相关规定进行处置，不能随意排放或丢弃。对于可回收的废弃物，如玻璃器 皿、金属器械等，要进行清洗和分类回收。
培训效果评估方法介绍
问卷调查法
通过设计问卷，收集学员对培训 内容、方式、效果等方面的评价
和建议。
考试测评法
设置与培训内容相关的考试题目 ，检验学员对知识的掌握程度和
应用能力。
实际操作评估法
观察学员在实际操作中的表现， 评估其技能水平和操作能力。
学员反馈收集及整理分析
设立反馈渠道
通过线上或线下方式，设立专门的反馈渠道，方 便学员随时提出意见和建议。
组织切片制备流程
取材
根据病变部位和性质，选择合适的 取材方法和器械，取得具有代表性 的组织块。
固定
将组织块放入固定液中，使组织细 胞内的蛋白质变性凝固，保持细胞 形态和结构。
脱水
用不同浓度的酒精逐渐脱去组织块 中的水分，以便于后续的包埋和切 片。
包埋
将脱水后的组织块放入石蜡或树脂等 包埋剂中，制成一定形状和大小的蜡 块或树脂块。
脱水
用梯度酒精逐渐脱去组织 块中的水分，以便于后续 的透明和浸蜡。
操作规范及标准流程介绍
透明
用透明剂替换出组织块中 的酒精，使组织块变得透 明。
浸蜡
将透明的组织块放入熔化 的石蜡中，使石蜡逐渐渗 入组织块内部。
包埋
对使用的化学品要有充分的了解，包括其性质、毒性、安全防护措施等。使用化学品时要 佩戴好个人防护用品，并在通风良好的环境下进行操作。对于易燃、易爆、有毒有害的化 学品要特别小心，严格按照规定进行存储和使用。
废弃物处理
实验过程中产生的废弃物要分类收集和处理。对于有害废弃物，如废液、废固等，要按照 国家和地方的相关规定进行处置，不能随意排放或丢弃。对于可回收的废弃物，如玻璃器 皿、金属器械等，要进行清洗和分类回收。
培训效果评估方法介绍
问卷调查法
通过设计问卷，收集学员对培训 内容、方式、效果等方面的评价
和建议。
考试测评法
设置与培训内容相关的考试题目 ，检验学员对知识的掌握程度和
应用能力。
实际操作评估法
观察学员在实际操作中的表现， 评估其技能水平和操作能力。
学员反馈收集及整理分析
设立反馈渠道
通过线上或线下方式，设立专门的反馈渠道，方 便学员随时提出意见和建议。
组织切片制备流程
取材
根据病变部位和性质，选择合适的 取材方法和器械，取得具有代表性 的组织块。
固定
将组织块放入固定液中，使组织细 胞内的蛋白质变性凝固，保持细胞 形态和结构。
脱水
用不同浓度的酒精逐渐脱去组织块 中的水分，以便于后续的包埋和切 片。
包埋
将脱水后的组织块放入石蜡或树脂等 包埋剂中，制成一定形状和大小的蜡 块或树脂块。
脱水
用梯度酒精逐渐脱去组织 块中的水分，以便于后续 的透明和浸蜡。
操作规范及标准流程介绍
透明
用透明剂替换出组织块中 的酒精，使组织块变得透 明。
浸蜡
将透明的组织块放入熔化 的石蜡中，使石蜡逐渐渗 入组织块内部。
包埋
《组织切片制作》PPT课件
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（三）切片制作 1．将洁净的载薄片涂薄层蛋白甘油放人烤片盒内待用。 2．将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块的组织切面暴露 出来修平，固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。 3．蜡块先固定在标本台上切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀 的螺丝同时调整刀与蜡块的切片距离使刀与蜡块贴紧后再固定 刀台螺丝，刀的角度为25度角。 4．调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为 5μm～7μm）。 5．修材。右手握旋转轮摇把按顺时针方向均匀地摇动直到组 织块切面完整暴露为止。
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2．单纯固定液 乙醇（酒精）、甲醛（福尔马林）、重铬酸钾、苦味酸、锇酸、丙酮、 冰醋酸
（1）乙醇（酒精）（alcohol） 优点： ①价格低，易购买，易溶于水，使用方便，95％浓度，无水乙醇100％； ②市售有两种：100%；95%； ③能硬化组织起固定作用； ④也是一种最常用的脱水剂。
固定液配制：甲醛1份与9份自来水混合即为10％（4%）浓度 的甲醛固定液。
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优点：①渗透力较强；②组织收缩小；③细胞核染色较好。 缺点： ①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉 淀物称“三聚甲醛”（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈 酸性，影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳 酸钙或碳酸镁，简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或 者白色粉笔作为中和剂。 ②酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒 状物，称为福尔马林色素，在切片上形成黑色小颗粒，不溶 于水和酒精，影响染色效果和切片的观察。
2．染色需要的试剂及染色液的配制：
① 0.5％～1％盐酸—酒精：用于细胞核染色分色。
配制：100ml的70％～80％酒精中加人0.5ml或者1ml的浓 盐酸。
病理学组织切片课件PPT
病理学在医学领域中具有广泛的 应用，包括临床诊断、法医学鉴 定、药物研发、生物医学研究等 。
病理学的发展历程和未来趋势
发展历程
病理学的发展经历了古代形态观察、近代病理学的建立和发展、现代病理学的 数字化和智能化等阶段。
未来趋势
随着科技的不断进步，病理学将朝着数字化、智能化、精准化和个性化等方向 发展，如数字化病理切片技术、人工智能辅助诊断等。
细胞大小、形状、染色深浅等 发生变化，可能提示病理状态
。
细胞数量改变
细胞增多或减少，可能与肿瘤 、炎症等病理过程相关。
细胞排列改变
细胞排列紊乱、排列密集或稀 疏，可能提示病变。
组织结构改变
组织结构破坏、萎缩或增生， 可能与器官功能异常或疾病有
关。
组织切片的分析步骤和注意事项
观察切片整体
观察病变特征
病理学组织切片课件
contents
目录
• 病理学概述 • 组织切片基础知识 • 病理学组织切片分析 • 病理学组织切片实例分析 • 病理学组织切片的诊断与鉴别诊断 • 病理学组织切片的教学与培训
01 病理学概述
病理学的定义和重要性
病理学定义
病理学是一门研究疾病病因、发病机 制、病理变化和结局的医学学科，旨 在揭示疾病的本质和发生发展规律。
损伤组织切片分析
损伤组织切片是用于观察和分析各种原 因引起的组织损伤的样本类型。
损伤组织切片的观察和分析有助于了解 损伤的性质、程度和范围，以及损伤对
周围组织的影响。
损伤组织切片的分析过程包括观察损伤 细胞的形态变化、坏死和凋亡情况，以 及损伤后修复和再生的情况，对于评估 疾病的预后和治疗方案具有指导意义。
应用
组织切片在病理学诊断、研究、教学等方面具有广泛的应用 ，是医学领域中非常重要的技术手段。
病理学的发展历程和未来趋势
发展历程
病理学的发展经历了古代形态观察、近代病理学的建立和发展、现代病理学的 数字化和智能化等阶段。
未来趋势
随着科技的不断进步，病理学将朝着数字化、智能化、精准化和个性化等方向 发展，如数字化病理切片技术、人工智能辅助诊断等。
细胞大小、形状、染色深浅等 发生变化，可能提示病理状态
。
细胞数量改变
细胞增多或减少，可能与肿瘤 、炎症等病理过程相关。
细胞排列改变
细胞排列紊乱、排列密集或稀 疏，可能提示病变。
组织结构改变
组织结构破坏、萎缩或增生， 可能与器官功能异常或疾病有
关。
组织切片的分析步骤和注意事项
观察切片整体
观察病变特征
病理学组织切片课件
contents
目录
• 病理学概述 • 组织切片基础知识 • 病理学组织切片分析 • 病理学组织切片实例分析 • 病理学组织切片的诊断与鉴别诊断 • 病理学组织切片的教学与培训
01 病理学概述
病理学的定义和重要性
病理学定义
病理学是一门研究疾病病因、发病机 制、病理变化和结局的医学学科，旨 在揭示疾病的本质和发生发展规律。
损伤组织切片分析
损伤组织切片是用于观察和分析各种原 因引起的组织损伤的样本类型。
损伤组织切片的观察和分析有助于了解 损伤的性质、程度和范围，以及损伤对
周围组织的影响。
损伤组织切片的分析过程包括观察损伤 细胞的形态变化、坏死和凋亡情况，以 及损伤后修复和再生的情况，对于评估 疾病的预后和治疗方案具有指导意义。
应用
组织切片在病理学诊断、研究、教学等方面具有广泛的应用 ，是医学领域中非常重要的技术手段。
《组织病理技术》课件
解决方案
采用适当的固定液和保存方法，优化 染色流程，使用防脱片胶，提高制片 质量。
新技术的应用与展望
新技术
数字化病理技术、人工智能辅助诊断、 组织芯片技术。
VS
展望
数字化病理技术将使病理诊断更加便捷和 准确；人工智能辅助诊断能够提高诊断效 率和准确性；组织芯片技术可用于药物筛 选和疾病模型研究。
组织病理技术的伦理与法规问题
组织病理技术的发展历程
19世纪初
随着显微镜的发明和应用 ，人们开始对组织结构和 细胞形态进行研究。
20世纪初
石蜡切片技术的出现，使 得组织病理技术更加标准 化和规范化。
20世纪末至今
随着科技的不断进步和应 用，组织病理技术不断发 展和完善，应用领域也更 加广泛。
02
组织病理技术的基本原理
组织样本的获取与处理
。
恶性程度评估
组织病理技术可以评估肿瘤的恶性 程度，判断肿瘤的侵袭性和转移风 险，为制定治疗方案提供依据。
预后判断
通过组织病理技术对肿瘤的病理特 征进行分析，可以预测患者的预后 情况，帮助医生制定后续治疗方案 。
移植组织鉴定
组织匹配
在器官移植中，组织病理技术用 于检测供体和受体之间的组织匹 配程度，确保移植组织的兼容性
根据处理方法的不同，组织病理 技术可以分为石蜡切片技术和冷 冻切片技术等。
组织病理技术的应用领域
01
02
03
临床病理诊断
通过组织病理技术对病变 组织进行观察和分析，为 临床医生提供准确的病理 诊断。
药物筛选
利用组织病理技术观察药 物对病变组织的影响，为 新药研发提供实验依据。
毒理学研究
通过组织病理技术观察化 学物质对组织结构和细胞 形态的影响，评估其毒性 和安全性。
采用适当的固定液和保存方法，优化 染色流程，使用防脱片胶，提高制片 质量。
新技术的应用与展望
新技术
数字化病理技术、人工智能辅助诊断、 组织芯片技术。
VS
展望
数字化病理技术将使病理诊断更加便捷和 准确；人工智能辅助诊断能够提高诊断效 率和准确性；组织芯片技术可用于药物筛 选和疾病模型研究。
组织病理技术的伦理与法规问题
组织病理技术的发展历程
19世纪初
随着显微镜的发明和应用 ，人们开始对组织结构和 细胞形态进行研究。
20世纪初
石蜡切片技术的出现，使 得组织病理技术更加标准 化和规范化。
20世纪末至今
随着科技的不断进步和应 用，组织病理技术不断发 展和完善，应用领域也更 加广泛。
02
组织病理技术的基本原理
组织样本的获取与处理
。
恶性程度评估
组织病理技术可以评估肿瘤的恶性 程度，判断肿瘤的侵袭性和转移风 险，为制定治疗方案提供依据。
预后判断
通过组织病理技术对肿瘤的病理特 征进行分析，可以预测患者的预后 情况，帮助医生制定后续治疗方案 。
移植组织鉴定
组织匹配
在器官移植中，组织病理技术用 于检测供体和受体之间的组织匹 配程度，确保移植组织的兼容性
根据处理方法的不同，组织病理 技术可以分为石蜡切片技术和冷 冻切片技术等。
组织病理技术的应用领域
01
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03
临床病理诊断
通过组织病理技术对病变 组织进行观察和分析，为 临床医生提供准确的病理 诊断。
药物筛选
利用组织病理技术观察药 物对病变组织的影响，为 新药研发提供实验依据。
毒理学研究
通过组织病理技术观察化 学物质对组织结构和细胞 形态的影响，评估其毒性 和安全性。
病理组织切片制作技术PPT课件
病理组织切片制作技术
• 病理组织切片制作技术概述 • 样本的收集与处理 • 组织切片的制备 • 病理组织切片的观察与诊断 • 病理组织切片制作技术的发展趋势
01
病理组织切片制作技术概述
切片制作的意义和目的
诊断疾病
教学质量
通过对病理组织进行切片制作，可以 观察组织结构和细胞形态，协助医生 诊断疾病。
环境控制
制作切片的实验室应保持清洁、干燥， 防止灰尘、温度等因素对切片质量造 成影响。
02
样本的收集与处理
样本的采集
手术切除
对于需要病理诊断的病例， 医生会进行手术切除病变 组织。
活检
通过穿刺或钳取的方式获 取少量病变组织用于病理 诊断。
尸检
对于死亡病例，通过尸检 获取病变组织。
样本的处理
清洗
利用人工智能技术对病理组织切片进行图像识别和分类，辅助医生 快速诊断。
辅助诊断系统
基于人工智能技术的辅助诊断系统，能够根据病理组织切片的特征， 提供初步诊断结果。
Hale Waihona Puke 预测模型利用人工智能技术构建预测模型，根据病理组织切片的特征预测疾病 发展趋势和预后情况。
THANKS
感谢观看
切片的染色
染色原理
染色是通过化学或物理方法使组织切 片着色，以突出或显现组织中的不同 结构。
常用染色方法
苏木精-伊红染色（HE染色）是病理 组织切片中最常用的染色方法，能较 好地显示细胞核和细胞质的结构。
切片的封固
封固剂选择
根据不同的染色方法选择合适的封固剂，如中性树胶、香柏 油等。
封固步骤
在染色和脱水完成后，用封固剂将切片固定在载玻片上，以 防止切片在观察和保存过程中发生脱落或损坏。
• 病理组织切片制作技术概述 • 样本的收集与处理 • 组织切片的制备 • 病理组织切片的观察与诊断 • 病理组织切片制作技术的发展趋势
01
病理组织切片制作技术概述
切片制作的意义和目的
诊断疾病
教学质量
通过对病理组织进行切片制作，可以 观察组织结构和细胞形态，协助医生 诊断疾病。
环境控制
制作切片的实验室应保持清洁、干燥， 防止灰尘、温度等因素对切片质量造 成影响。
02
样本的收集与处理
样本的采集
手术切除
对于需要病理诊断的病例， 医生会进行手术切除病变 组织。
活检
通过穿刺或钳取的方式获 取少量病变组织用于病理 诊断。
尸检
对于死亡病例，通过尸检 获取病变组织。
样本的处理
清洗
利用人工智能技术对病理组织切片进行图像识别和分类，辅助医生 快速诊断。
辅助诊断系统
基于人工智能技术的辅助诊断系统，能够根据病理组织切片的特征， 提供初步诊断结果。
Hale Waihona Puke 预测模型利用人工智能技术构建预测模型，根据病理组织切片的特征预测疾病 发展趋势和预后情况。
THANKS
感谢观看
切片的染色
染色原理
染色是通过化学或物理方法使组织切 片着色，以突出或显现组织中的不同 结构。
常用染色方法
苏木精-伊红染色（HE染色）是病理 组织切片中最常用的染色方法，能较 好地显示细胞核和细胞质的结构。
切片的封固
封固剂选择
根据不同的染色方法选择合适的封固剂，如中性树胶、香柏 油等。
封固步骤
在染色和脱水完成后，用封固剂将切片固定在载玻片上，以 防止切片在观察和保存过程中发生脱落或损坏。
组织切片技术PPT72页
2.1.3 组织取材注意事项
1.组织要求离体后30min内浸入固定液，尤其是开展分子生物学研究。 动物放血处死后立即取材，最好在心脏还在跳动时立即取材，马 上投入固定液中；
2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利，刀要足够长。切分组织块时，不
可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压。以免损伤组织； 3.组织块的大小
大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察 的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透 过，另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即使光 线可透过，也难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过 固定，脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较薄的 切片，再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及 其中某些化学成份含量的变化，组织切片也便于保存。
混合固定液：是用几种化学试剂，按一定的比例混 合配制而成的，由于各种试剂的优缺点互相弥补，因此 可产生较好的效果。
（1）甲醛固定液：
是一种还原剂，呈酸性，原液浓度为37%～40%，配成 固定液的浓度为4%，习惯上称为10%，配制时取甲醛原液 10ml，加蒸馏水（D.W）或缓冲液至100ml，为甲醛固定液 （10％福尔马林） 。
二甲苯是使用最广泛的一种透明剂，它具有渗透力强， 溶解石蜡量大，又易挥发的优点，其缺点是易使组织收缩， 变硬，变脆，因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情 而定
注意事项：
1.使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分 进入。
2.更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料 块干涸，另一方面能避免吸收湿气。
(3) Bouin’S液
苦味酸饱和水溶液 75ml
甲醛
25ml
冰醋酸
5ml
组织切片制作PPT课件
原则： 1、固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。 2、固定液为甲醛水溶液或以水配制的可用流水冲洗。 3、冲洗的时间与组织的种类，组织块大小和固定时间长短有关。 一般1024h。 方法：流水缓慢冲洗。小组织可不冲洗，多次换水浸泡即可。
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四脱水 组织经固定和水洗后含多量水分，水与透明剂、石蜡不能溶合，因此，在透
能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，而达到石蜡浸入组织块的目的。
常用透明剂：二甲苯
注意事项： 1、组织不能在二甲苯透明过久，在时间上应加以控制。 2、组织在入二甲苯透明前最好先放入纯酒精与二甲苯等量混合液中半小时至1 小时处理。 3、二甲苯透明，一般15至30分钟，其间需更换一次二甲苯。 4、对着光线观察组织呈半透明或透明状态即可。
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（２）混合固定液
波音(Bouin)氏固定液：
饱和苦味酸水溶液 75ml
甲醛
75ml
冰醋酸
5ml
渗透迅速，固定均匀，组织收缩小，切片着色良好。
卡诺氏(Carnoy)固定液：
无水乙醇
60ml
三氯甲烷（氯仿） 30ml
冰醋酸
10ml
固定速度快 ，可固定细胞浆和细胞核，尤其适宜染色体的固定.
析。 2 切取的组织必须新鲜。
取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形，发生自溶现象。
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3 切取组织，刀要锋利，动作要轻，不可来回切割，也不要挤压或牵拉组织， 以免组织变形或内部细胞结构受损伤而发生变化。
4 切取的组织块必须小而薄。 组织块的大小一般为0.5×0.5×0.2cm、1×1×0.3cm或 1.5×1.5×0.3~0.5cm，最厚不能超过0.5cm。
（2）伊红（曙红）酒精染液的配制：
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四脱水 组织经固定和水洗后含多量水分，水与透明剂、石蜡不能溶合，因此，在透
能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，而达到石蜡浸入组织块的目的。
常用透明剂：二甲苯
注意事项： 1、组织不能在二甲苯透明过久，在时间上应加以控制。 2、组织在入二甲苯透明前最好先放入纯酒精与二甲苯等量混合液中半小时至1 小时处理。 3、二甲苯透明，一般15至30分钟，其间需更换一次二甲苯。 4、对着光线观察组织呈半透明或透明状态即可。
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（２）混合固定液
波音(Bouin)氏固定液：
饱和苦味酸水溶液 75ml
甲醛
75ml
冰醋酸
5ml
渗透迅速，固定均匀，组织收缩小，切片着色良好。
卡诺氏(Carnoy)固定液：
无水乙醇
60ml
三氯甲烷（氯仿） 30ml
冰醋酸
10ml
固定速度快 ，可固定细胞浆和细胞核，尤其适宜染色体的固定.
析。 2 切取的组织必须新鲜。
取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形，发生自溶现象。
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3 切取组织，刀要锋利，动作要轻，不可来回切割，也不要挤压或牵拉组织， 以免组织变形或内部细胞结构受损伤而发生变化。
4 切取的组织块必须小而薄。 组织块的大小一般为0.5×0.5×0.2cm、1×1×0.3cm或 1.5×1.5×0.3~0.5cm，最厚不能超过0.5cm。
（2）伊红（曙红）酒精染液的配制：
病理学实验切片ppt
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
通过显微镜观察切片的组织结构 和成分，判断组织是否发生病变。
染色观察
通过染色判断组织中是否存在特定 的抗原或抗体，从而判断组织是否 发生病变。
免疫组化染色
通过免疫组化染色技术，对组织中 的抗原进行定位和定性分析，从而 判断组织是否发生病变。
切片保存与维护
保存环境
切片应保存在干燥、阴凉、通风 的地方，避免阳光直射和潮湿。
03 实验切片在病理学中的应 用
疾病诊断
诊断肿瘤
病理学实验切片可以用于诊断肿瘤， 通过观察细胞形态、组织结构以及染 色反应等特征，判断肿瘤的性质、类 型和分化程度。
鉴别良恶性肿瘤
判断预后
病理学实验切片还可以通过观察肿瘤 细胞增殖活性、组织学分级等因素， 预测患者的预后情况。
病理学实验切片可以鉴别良恶性肿瘤， 为治疗方案的选择提供依据。
切片厚度限制
切片厚度过大会导致组织结构失 真，影响病理诊断的准确性。
切片厚度过小则可能导致组织结 构细节丢失，无法准确判断病变
性质。
合适的切片厚度需要根据组织类 型和观察目的进行选择，一般而 言，厚度在3-5微米之间较为适
宜。
组织结构失真
由于切片过程中组织受到刀片 切割的机械力作用，可能会导 致组织结构变形。
详细描述
免疫组化切片是利用抗原-抗体反应的原理，通过标记抗体显示组织或细胞内的抗原。这种方法有助于确定肿瘤 的性质、来源和分化程度，对于肿瘤的诊断和分类具有重要意义。
原位杂交切片
总结词
原位杂交切片是利用核酸探针检测组织或细胞内核酸的切片。
详细描述
原位杂交技术是一种分子生物学技术，通过标记的核酸探针与组织或细胞内的核酸序列进行杂交，从 而检测特定基因的表达和定位。原位杂交切片在研究肿瘤发生、发展机制以及基因诊断方面具有重要 价值。
病理组织切片技术课件
取材
取材是病理组织切片制作的第一步，也是至关重要的一步。 取材时，应选择具有代表性的组织，并注意避免组织自溶和 腐败。同时，要确保取材器械的清洁和消毒，以避免污染和 交叉感染。
取材时，应根据不同的病理类型和病变情况，选择适当的取 材方法和取材量。对于小块病变组织，应尽量取全；对于大 块病变组织，应根据病变特点和部位，选择具有代表性的部 分取材。
固定
固定是病理组织切片制作中不可缺少的一步，其目的是使组织保持其生前的状态 ，防止组织自溶和腐败。常用的固定方法有：甲醛固定法、乙醇固定法和混合固 定法等。
固定液的浓度和固定时间对固定效果有很大影响。一般来说，固定液的浓度越高 、固定时间越长，固定效果越好。但固定时间过长会导致组织变硬，影响切片质 量。因此，应根据具体情况选择适当的固定液和固定时间。
切片质量
切片的质量直接影响到显 微镜观察的结果，因此制 备过程中需要保证切片的 平整、均匀和无气泡。
切片技术分类
01
02
03
04
石蜡切片
将样品包埋在石蜡中，然后进 行切片和染色，是最常用的切
片技术之一。
冰冻切片
将样品快速冷冻后进行切片， 主要用于快速病理诊断。
苏木素-伊红染色
对切片进行染色，以便在显微 镜下观察细胞的形态和结构。
脱水
脱水是病理组织切片制作中非常重要的一步，其目的是去 除组织中的水分，为后续的浸蜡和包埋做准备。常用的脱 水方法有：自然干燥法和人工脱水法等。
脱水液的选择和使用对脱水效果有很大影响。一般来说， 脱水液的浓度越高、脱水时间越长，脱水效果越好。但脱 水时间过长会导致组织变脆，影响切片质量。因此，应根 据具体情况选择适当的脱水液和脱水时间。
H&E染色
常规组织病理技术ppt课件
46
缺点： ●经酒精固定的标本对核的染色不良，也不利于 染色体的固定。 ●要证明细胞含的脂肪和类脂质时，不能用酒精 固定。 ●如要证明组织内的色素时，不宜以酒精作为固 定剂。 ●不适用于固定大块组织。 ● 酒精价格较贵。
47
80%-95%的酒精作为固定剂为好 高浓度酒精组织硬化显著,放置过久组织 收缩明显且质脆,不但影响制片, 组织形态也 不好。 很少单独使用
甲醛氧化 --- 蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素 避免长时间固定， 固定后流水冲洗
●尿酸结晶可被溶解。
44
甲醛固定液的配制:
（1）10% formalin
市售甲醛（浓度为37~40%） 1份
水
9份
(2)中性甲醛 以PH7.2-7.4PBS为溶液配制的甲醛固定液
45
优点： ● 如要证明尿酸结晶和保存糖类，则须用 100%酒精固定。 ●在已用别种固定液后，可用70%酒精较 久的保存组织。 ● 酒精既有固定作用，又有脱水作用。
染色
常规染色 染色的目的：增加组织在显微镜下的分辨率
HE染色 主要用以显示各种组织、细胞的一般形
态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修 复的过程。
常规染色 特殊染色
79
（一）染色原理
1、细胞核染色原理：核酸阴离子+苏木素阳离子→蓝色
2、细胞浆染色原理：蛋白质阳离子+伊红阴离子→伊红色
PH值低于蛋白质等电点
传统病理学技术
常规组织病理技术
（formalin固定 石蜡切片 HE）
现代新技术
7
免疫组化
HE
乳腺导管
8
免疫荧光
HE
9
结肠癌 EB病毒原位分子杂交
10
缺点： ●经酒精固定的标本对核的染色不良，也不利于 染色体的固定。 ●要证明细胞含的脂肪和类脂质时，不能用酒精 固定。 ●如要证明组织内的色素时，不宜以酒精作为固 定剂。 ●不适用于固定大块组织。 ● 酒精价格较贵。
47
80%-95%的酒精作为固定剂为好 高浓度酒精组织硬化显著,放置过久组织 收缩明显且质脆,不但影响制片, 组织形态也 不好。 很少单独使用
甲醛氧化 --- 蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素 避免长时间固定， 固定后流水冲洗
●尿酸结晶可被溶解。
44
甲醛固定液的配制:
（1）10% formalin
市售甲醛（浓度为37~40%） 1份
水
9份
(2)中性甲醛 以PH7.2-7.4PBS为溶液配制的甲醛固定液
45
优点： ● 如要证明尿酸结晶和保存糖类，则须用 100%酒精固定。 ●在已用别种固定液后，可用70%酒精较 久的保存组织。 ● 酒精既有固定作用，又有脱水作用。
染色
常规染色 染色的目的：增加组织在显微镜下的分辨率
HE染色 主要用以显示各种组织、细胞的一般形
态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修 复的过程。
常规染色 特殊染色
79
（一）染色原理
1、细胞核染色原理：核酸阴离子+苏木素阳离子→蓝色
2、细胞浆染色原理：蛋白质阳离子+伊红阴离子→伊红色
PH值低于蛋白质等电点
传统病理学技术
常规组织病理技术
（formalin固定 石蜡切片 HE）
现代新技术
7
免疫组化
HE
乳腺导管
8
免疫荧光
HE
9
结肠癌 EB病毒原位分子杂交
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4、肠道可在浆膜面贴上一层厚纸，以防 固定组织变形。
二、固定后处理及切片
(一)、洗涤与修切 (二)、脱水与透明
脱水：将组织块内水分置换的过程。 透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用 的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂 又能溶于包埋剂（石蜡），透明必须 适度 。
50%乙醇30-60min 70%乙醇1-2小时或过夜 80%乙醇1-2小时 95%乙醇1-1.5小时 100%乙醇30min 100%乙醇20min 1：1无水乙醇：二甲苯20min 二甲苯10-30min
5min 4、无水乙醇、 95%、80%、 70、 50%
梯度乙醇每级1-2min 5、蒸馏水1-2min
（二）、染色（HE染色法）
6、苏木素染液5～15min 7、蒸馏水（洗去多余的染液） 8、分色:1%盐酸-70 %乙醇分色30-60sec 8、蓝化:自来水冲洗（碱化，核蓝色）15-20min 9、蒸馏水（洗去多余的碱） 1-2min 10、逐级入50%、70%、85%乙醇，每级1-2min 11、伊红- 95%乙醇染液15sec～2min 12 、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级脱水，每级
3、使组织内各种物质成分产生不同的折 光率，以便染色后易于鉴别和观察。
4、使组织块硬化，便于制作薄片。
固定的注意事项
1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽 也应小于15×15mm。
2、固定液与组织块的比例应大于10：1。
3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固 定后再修整成小块，重新投入新配制 的固定液中继续固定。
(三)、浸蜡与包埋
52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在 60℃的温箱中进行。 1：1二甲苯：石蜡30min 石蜡一30min 石蜡二30min 石蜡三30min
（四）切片、粘片
1、切片前处理及切片 2、载玻片处理 3、粘片（展片） 4、烤片
三、脱蜡和染色
（一）、脱蜡 1、二甲苯Ⅰ5-10min 2、二甲苯Ⅱ1-2min 3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）
肺毛霉病病理HE染色
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
肺曲霉球菌丝45度分枝HE染色
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
（二）固定及目的：
应用化学试剂使组织或细胞中的无机 成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生 活状态的过程称为固定。
固定液是10%福尔马林溶液（4%甲 醛溶液），固定24小时以上。
固定的目的
1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止 自溶与腐败，使之尽量保持生前的状 态与结构。
2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖Байду номын сангаас酶等 成分转变为不溶性物质，以保持其原 有状态。
病理组织切片制作技术
实验内容
掌握组织材料的取材、固 定、脱水、透明、包埋、切片、 烤片、脱蜡、染色及封固的基 本操作。
一、取材及固定
（一）取材注意事项： 1、材料新鲜 2、组织块力求小而薄 3、勿使组织块受挤压 4、尽量保持组织的原有形态 5、熟悉取材部位
（一）取材注意事项：
6、选好组织块的切面 7、保持材料的清洁 8、切除不需要的部位
五、光镜观察
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍
放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
概括主要流程
取材 固定 脱水 透明 包埋
切片 封固 染色 脱蜡 烤片
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
•Thank you!
1-2min 13、1：1无水乙醇：二甲苯 、二甲苯 Ⅰ 、二甲
苯Ⅱ 各 5min
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
四、封固
滴加中性树胶，加盖玻片封 片。
二、固定后处理及切片
(一)、洗涤与修切 (二)、脱水与透明
脱水：将组织块内水分置换的过程。 透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用 的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂 又能溶于包埋剂（石蜡），透明必须 适度 。
50%乙醇30-60min 70%乙醇1-2小时或过夜 80%乙醇1-2小时 95%乙醇1-1.5小时 100%乙醇30min 100%乙醇20min 1：1无水乙醇：二甲苯20min 二甲苯10-30min
5min 4、无水乙醇、 95%、80%、 70、 50%
梯度乙醇每级1-2min 5、蒸馏水1-2min
（二）、染色（HE染色法）
6、苏木素染液5～15min 7、蒸馏水（洗去多余的染液） 8、分色:1%盐酸-70 %乙醇分色30-60sec 8、蓝化:自来水冲洗（碱化，核蓝色）15-20min 9、蒸馏水（洗去多余的碱） 1-2min 10、逐级入50%、70%、85%乙醇，每级1-2min 11、伊红- 95%乙醇染液15sec～2min 12 、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级脱水，每级
3、使组织内各种物质成分产生不同的折 光率，以便染色后易于鉴别和观察。
4、使组织块硬化，便于制作薄片。
固定的注意事项
1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽 也应小于15×15mm。
2、固定液与组织块的比例应大于10：1。
3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固 定后再修整成小块，重新投入新配制 的固定液中继续固定。
(三)、浸蜡与包埋
52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在 60℃的温箱中进行。 1：1二甲苯：石蜡30min 石蜡一30min 石蜡二30min 石蜡三30min
（四）切片、粘片
1、切片前处理及切片 2、载玻片处理 3、粘片（展片） 4、烤片
三、脱蜡和染色
（一）、脱蜡 1、二甲苯Ⅰ5-10min 2、二甲苯Ⅱ1-2min 3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）
肺毛霉病病理HE染色
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
肺曲霉球菌丝45度分枝HE染色
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
（二）固定及目的：
应用化学试剂使组织或细胞中的无机 成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生 活状态的过程称为固定。
固定液是10%福尔马林溶液（4%甲 醛溶液），固定24小时以上。
固定的目的
1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止 自溶与腐败，使之尽量保持生前的状 态与结构。
2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖Байду номын сангаас酶等 成分转变为不溶性物质，以保持其原 有状态。
病理组织切片制作技术
实验内容
掌握组织材料的取材、固 定、脱水、透明、包埋、切片、 烤片、脱蜡、染色及封固的基 本操作。
一、取材及固定
（一）取材注意事项： 1、材料新鲜 2、组织块力求小而薄 3、勿使组织块受挤压 4、尽量保持组织的原有形态 5、熟悉取材部位
（一）取材注意事项：
6、选好组织块的切面 7、保持材料的清洁 8、切除不需要的部位
五、光镜观察
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍
放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
概括主要流程
取材 固定 脱水 透明 包埋
切片 封固 染色 脱蜡 烤片
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
•Thank you!
1-2min 13、1：1无水乙醇：二甲苯 、二甲苯 Ⅰ 、二甲
苯Ⅱ 各 5min
考评项目赋标准分，对照考评内容和 考评办 法对考 评项目 进行考 评，评 出各考 评项目 的考评 实际得 分，考 评类目 下各考 评项目 考评实 际得分 之和为 该考评 类目的 考评实 际得分
四、封固
滴加中性树胶，加盖玻片封 片。