实验九 人体X-染色质的观察

四、实验方法
1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法
⑴ 取材：漱口3~4次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取 口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮 2~3下，涂在载玻片上； ⑵ 固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余 醋酸； ⑶ 染色：加一滴石炭酸品红染色2min； ⑷ 制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片； ⑸ 镜检：低倍→高倍。
六、作业
1. 观察50个女性可数的细胞，并计算巴氏小
体细胞所占的百分比。
2. 绘制3个典型的显示X染色质的细胞。
2.莱昂氏假说 (Lyon hypothesis)
1961年 M.F.Lyon提出：
① 正常雌性哺乳动物体细胞中的两条 X染色体之一在遗传性状表达上是 失活的； ② 在同一个体的不同细胞中， X染色 体失活是随机而恒定的；
③ 失活现象发生在胚胎发育的早期。
3.剂量补偿效应 (dosage compensation)
X染色质
箭头所示为巴氏小体 （女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一
个X染色质，但事实上由于个体的生理状态、染色
方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不
同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。 正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为 10~30%，有的可高达50%以上，在男性间期 细胞核中则平均低于1%。
（1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno 提出45，X≠46，XX；47XXY≠46，XY， 这两个不等式是否成立的疑问。 （2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但 45，X与47，XXY实际是两种综合症。 （3）修正：1974年，失活的X染色体上并非 全部基因都呈莱昂化失活。
5. X染色质检查的应用
Байду номын сангаас
五、观察结果
X染色质的辨别：
（1）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是：
① 核质呈网状或细颗粒状分布 ② 核膜清晰，核无缺损 ③ 染色适度 ④ 周围无杂菌 在高倍镜下进一步观察。
（2）高倍镜下观察X染色质的形态特征及所在部位：
X染色质是一结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大小 1~1.5μm ； 形态：微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核 膜边缘或靠近内侧。
2. 发根毛囊细胞的X染色质（Barr小体）显示方法
⑴取材：拔取女性带毛囊细胞的头发，置于载玻片上； ⑵固定：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸（或5mol/L盐酸） 固定5min，吸掉多余的醋酸；
⑶染色：用镊子将软化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品红
染色2~3min； ⑷制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片； ⑸镜检：低倍→高倍。
由于雌性体细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩（也 称为Lyon化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞 中都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。
Barr小体的数目 ＝ X染色体数目 － 1
4.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）
X染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定 和性染色体异常的一种辅助诊断方法。
例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征
（XO） 、其它性染色体异常的患者如XXX，
XXYY等。
三、实验材料、器具和药品
材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。 器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌 牙签等。 药品： 60%醋酸 、45%的醋酸 、 石炭酸品红。
实验九 人类X染色质的观察
哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院 遗传学教研室 2010年3月
一、实验目的
1. 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法； 2. 识别X染色质的形态特征及所在部位。
二、实验原理
1. X-染色质的发现
1949年M.L.Barr等研究发现： 雌猫神经元细胞间期核内——凝缩的深染小体。 进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种 结构。 而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为 Barr小体（巴氏小体）。 研究表明，巴氏小体是X染色体异固缩的结果，也称为X染 色质或X小体，在细胞周期中比有活性的X染色体复制稍晚。