医学分子生物学试题答案

名词解释：

基因是核酸中贮存遗传信息的遗传单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。

基因组（gencme）：细胞或生物中，一套完整单倍体遗传物质的总和（包括一种生物所需的全套基因及间隔序列）称为基因组。基因组的功能是贮存和表达遗传信息。

SD序列(Shine-Dalgarno sequence,SD sequence) 是mRNA能在细菌核糖体上产生有效结合和转译所需要的序列。SD序列与16S rRNA的3’末端碱基(AUUCCUCCAC-UAG-5’)互补，以控制转译的起始

分子克隆：克隆（clone）：是指单细胞纯系无性繁殖，现代概念是将实验得到的人们所需的微量基因结构，引入适当的宿主细胞中去，在合适的生理环境中进行无性繁殖，从而利用宿主的生理机制繁衍人们所需要的基因结构，并进行表达。由于整个操作在分子水平上进行，所以称为分子克隆（molecular cloning）。

动物克隆(Animal cloning)就是不经过受精过程而获得动物新个体的方法.

基因诊断：就是利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构

（DNA水平）及其表达水平（RNA水平）是否正常，从而对疾病做出诊断的方法。

基因治疗就是将有功能的基因转移到病人的细胞中以纠正或置换致病基因的一种治疗方法，是指有功能的目的基因导入靶细胞后有的可与宿主细胞内的基因发生整合，成为宿主细胞遗传物质的一部分，目的基因的表达产物起到对疾病的治疗作用。

转基因动物就是把外源性目的基因导入动物的受精卵或其囊胚细胞中，并在细胞基因组中稳定整合，再将合格的重组受精卵或囊胚细胞筛选出来，采用借腹怀孕法寄养在雌性动物（foster mother）的子宫内，使之发育成具有表达目的基因的胚胎动物，并能传给下一代。这样，生育的动物为转基因动物。

探针：在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记。这种带有一定标记的已知顺序的核酸片段称为探针。

限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）是一类专门切割DNA 的酶，它们能特异结合一段被称为限制酶识别顺序的特殊DNA序列并切割dsDNA。

载体：要把一个有用的基因（目的基因-研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。

限制性片段长度多肽性分析(RFLP):DNA片段长度多态性分析（restriction fragment length polymer-phism,RFLP）基因突变导致的基因碱基组成或(和)顺序发生改变,会在基因结构中产生新的限制性内切酶位点或使原有的位点消失. 用限制酶对不同个体基因组进行消化时，其电泳条带的数目和大小就会产生改变，根据这些改变可以判断出突变是否存在。

简答题：

1.蛋白质的生物合成过程中的成分参与，参与因子，作用？

mRNA是合成蛋白质的“蓝图（或模板）” tRNA是原料氨基酸的“搬运工”

rRNA与多种蛋白质结合成核糖体作为合成多肽链的装配机（操作台）

tRNA

mRNA是合成蛋白质的蓝图，核糖体是合成蛋白质的工厂，但是，合成蛋白质的原料——20种氨基酸与mRNA的碱基之间缺乏特殊的亲和力。因此，需要转运RNA把氨基酸搬运到核糖体中的mRNA上

rRNA

核糖体RNA（rRNA）和蛋白质共同组成的复合体就是核糖体，核糖体是蛋白质合成的场所。核糖体的大小亚基在行使翻译功能即肽链合成时聚合成整体，为蛋白质的合成提供场所。

mRNA

携带遗传信息，在蛋白质合成时充当模板的RNA。从脱氧核糖核酸（DNA）转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸（RNA）。它在核糖体上作为蛋白质合成的模板，决定肽链的氨基酸排列顺序。

核糖体：

容纳mRNA，并能沿着mRNA由5’——3’移动，由tRNA解读其密码；氨基酰位点（A位点），可结合氨基酰-tRNA（AA-tRNA）；肽酰基位点（P位点），可结合肽酰基-tRNA（肽-tRNA）；肽酰基转移酶中心，是形成肽键的位点等。

起始因子（IF）:翻译起始所需要的催化性蛋白质。促使核糖体和mRNA正确结合

延伸因子（EF）:蛋白质合成过程，帮助进入的氨基酸残基与肽链之间形成酰基，使肽链得以延长的一类蛋白质因子。

释放因子（RF）：识别终止密码子引起完整的肽链和核糖体从mRNA上释放的蛋白质

翻译起始时，第一个氨基酸一般是蛋氨酸，其氨基要甲酰化，予以保护。氨基酰tRNA进入A 位肽键的形成蛋白质合成的终止肽链的延伸

2.核酸技术

（1）PCR技术的基本原理：

PCR技术在模板DNA、dNTP、Mg2+、合适Buffer等条件下，用耐热的Taq聚合酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸3个步骤的反复循环（25∼30次）过程，使目的DNA呈指数扩增。

DNA模板的热变性：将待扩增DNA加热到94℃左右，使双链DNA解开成为单链，并

游离于反应体系中作为模板。

模板与引物的结合（退火或复性）：将体系温度降至合适温度（52℃左右），使加

入的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。

引物延伸：将体系温度升到72℃左右，Taq聚合酶催化dNTP按碱基互补原则连接在

DNA引物3ˊ端，使链延伸，形成两条与模板互补的新链。

参数

变性温度与时间：一般选择： 94℃，30秒

退火温度与时间：取决于引物长度、浓度和G+C含量，一般选择为Tm - 5℃

延伸温度与时间：一般选择： 70℃∼75℃

循环次数：取决于模板浓度，一般循环：30次

[引物是根据已知序列的模板DNA待扩增区两端而设计的一对寡核苷酸小片断，长度一般为15∼30个碱基。

RNA作为模板时，需要：RNA cDNA PCR, 称此为RT-PCR]

（2）Southem印迹杂交法(Southern blot hybridization)

又称为Southern杂交，即DNA-DNA杂交分析。是研究DNA图谱的基本技术，主要用于基因组DNA 的分析，如在基因组中特异基因的定位及检测等，亦可用于分析重组质粒和噬菌体。在遗传诊断DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。

提取DNA→限制性内切酶酶切→琼脂糖凝胶电泳→DNA用碱变性→变性的DNA转移

到硝酸纤维素膜→加入DNA探针→显影或显色检测杂交信号→证实DNA靶分子是

否含有目的基因片段。

Northem印迹杂交法(Northern blot hybridization)

又称为Northern杂交，即RNA-DNA杂交分析。是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。