DNA和RNA提取方法及原理
rna提取方法及原理
rna提取方法及原理RNA是一种生物大分子，具有非常重要的生物学功能，在生物研究中有着广泛的应用。
为了研究RNA的功能和结构，科学家们需要从细胞中提取出RNA。
本文将介绍RNA提取的几种常用方法及其原理。
一、酚/氯仿法酚/氯仿法是RNA提取的一种经典方法，它基于RNA和DNA的物理性质差异进行分离。
该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织经过低温致裂，使细胞膜破裂释放出RNA。
2. 酚酸提取：加入酚酸溶液，与DNA形成两相体系。
RNA主要溶于上层的酚酸相中，而DNA则主要溶于下层的酚氯仿相中。
3. 氯仿提取：将上层的酚酸相与下层的酚氯仿相分离，得到含有RNA的上层液体。
4. 沉淀：通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀，然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀，最后用水溶解得到纯净的RNA。
酚/氯仿法的原理是利用RNA和DNA的溶解度差异以及RNA在酚酸上层相中的亲和力较大，从而实现RNA的提取。
二、硅胶膜柱法硅胶膜柱法是一种常用的RNA提取方法，它使用硅胶膜柱与试剂盒结合，以实现RNA的高效提取。
该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织破碎，并加入试剂使RNA不受降解酶的影响。
2. 结合：将破碎后的细胞溶液与硅胶膜柱结合，RNA结合到硅胶膜柱的表面。
3. 洗涤：通过洗涤剂洗去杂质和其他污染物，保留纯净的RNA在硅胶膜柱上。
4. 解吸：将洗涤后的硅胶膜柱加入含有RNase-free水的管中，使RNA从硅胶膜柱中解离。
5. 沉淀：通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀，然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀，最后用水溶解得到纯净的RNA。
硅胶膜柱法的原理是利用硅胶膜柱的高亲和性和离心过滤来纯化RNA，同时通过试剂的作用保护RNA免受降解酶的影响。
三、磁珠法磁珠法是一种高效且易于自动化的RNA提取方法，它利用磁珠表面的化学基团与RNA分子进行特异性结合。
该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织破碎，并加入试剂使RNA稳定。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法及原理：1.酚/氯仿法：酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏，使DNA从细胞内溶解出来，然后利用氯仿的重度稠化剂作用，将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。
2.盐溶液法：盐溶液法是一种温和的DNA提取方法，适用于多种植物和动物样品。
其原理是将样品细胞裂解后，加入高浓度盐溶液中，通过离心分离出DNA上层液相。
3.硅胶柱法：硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法，可去除杂质并提高DNA的纯度。
该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附，去除杂质，然后通过洗脱得到纯净的DNA。
这种方法常用于分离较小的DNA片段。
4.酶解法：酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化，将DNA释放出来。
常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。
RNA提取方法及原理：1.酚酸法：酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异，利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA，然后利用酚酸与蛋白质和DNA 形成复合物，分离RNA。
2.硅胶柱法：硅胶柱法也适用于RNA提取。
与DNA的硅胶柱法不同的是，RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤，除去污染物。
该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。
3.离心收集法：离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。
根据RNA在水相中的溶解性，通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来，然后加入酒精沉淀纯化。
4.硅酸盐法：硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法，通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA，并在洗涤步骤中去除杂质，从而得到纯净的RNA。
分离dna和rna的方法及其原理
分离dna和rna的方法及其原理嘿，咱今儿就来讲讲分离 DNA 和 RNA 的那些事儿！你可别小瞧这分离的活儿，这里头学问大着呢！先来说说 DNA 吧，那可是生命的密码呀！要把它从一堆细胞混合物里给揪出来，就像是在茫茫人海中找到那个特别的人。
那怎么找呢？这就有办法啦！比如说沉淀法，就好像是让 DNA 自己慢慢沉淀下来，就像沙子在水里会沉底一样。
通过一些特殊的试剂，让其他杂质飘走，DNA 就乖乖地留下来啦。
这不是挺神奇的嘛！还有离心法，把混合液放到离心机里，“呼呼”一转，DNA 就被甩到一边去了，就像把不同的东西用大力气给分开一样。
再讲讲 RNA 呀，它也很重要呢！分离 RNA 的方法也有不少。
有一种方法是利用它和其他物质亲和力的不同，就好比人和人之间关系有亲有疏。
通过合适的条件，让 RNA 紧紧抓住我们想要它抓住的东西，其他的就可以被洗掉啦。
你想想看，细胞里那么多东西，要把 DNA 和 RNA 准确地分离出来，这得多不容易呀！这就好像在一个大杂烩里，要精准地挑出特定的豆子和米粒一样。
这些方法背后的原理呢，其实就是利用它们各自的特性。
DNA 和RNA 有着不同的化学性质和物理性质，我们就根据这些来想办法把它们分开。
就像每个人都有自己的特点，我们根据这些特点来区分不同的人一样。
在实验室里，科学家们就像是侦探，通过各种巧妙的方法和技术，一点点地把 DNA 和 RNA 从复杂的体系中分离出来。
这可不只是简单的操作，这是在探索生命的奥秘呀！而且哦，这些分离方法可不是随便弄弄就行的，得特别精细、特别小心。
要是不小心弄错了一步，那可能就前功尽弃啦！这可真是一点都马虎不得呢。
你说，这分离 DNA 和 RNA 的事儿是不是特别有意思？它们就像藏在细胞里的宝贝，等着我们去发现、去挖掘。
咱可得好好了解了解这些方法和原理，说不定哪天我们自己也能动手试试呢！这难道不令人兴奋吗？这就是科学的魅力呀，总是能让我们看到那些隐藏在微小世界里的奇妙之处。
DNA和RNA的提取与纯化
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4.苯酚抽提法 苯酚作为蛋白变性剂，同时可抑制DNA 酶的降解作用。 苯酚处理后，蛋白质分子溶于酚相，而DNA 溶于水相， 离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并水相，用 乙醇沉淀DNA.
5.水抽提法 利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐 溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中，使DNA 充分溶解 于水中，离心后收集上清液，在上清中加入NaCl调节至 2.6 mol/L，加入2倍体积的95%乙醇，立即用搅拌法搅出， 然后用不同浓度的乙醇洗涤。空气干燥。
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不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方 法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及 所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的 DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法， 以获得可 用的DNA大分子。
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（一）DNA提取的基本原理
DNA分子是极离太更易溶于水。 酸性溶液中，DNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
生物细胞中大部分DNA集中在细胞核，多以脱氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在。而DNP在盐溶液中的溶解度受盐溶液浓度 的显著影响，0.14 mol/L NaCl溶液中最低，仅为水中溶解度 的1%，浓度升高，溶解度增加，到1 mol/L时，比纯水高2倍。 而核糖核蛋白(RNP)在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小， 在0.14 mol/L NaCl的溶解度较大。据此，可分享DNP和RNP.
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2. 天然DNA的来源和用途
天然DNA包括染色体DNA,病毒DNA(噬菌体 DNA),质粒DNA,线粒体及叶绿体DNA等,可从不 同的生物体中提取.
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•染色体DNA.原核和真核生物均含有染色体DNA. 其分子巨大,可长达106kb,小的也有1000kb左右.是生物界
核酸提取的原理
核酸提取的原理
核酸提取是一种用来从生物样本中分离和纯化核酸（DNA或RNA）的技术。
其原理基于核酸在细胞中的特定性质和化学
特性。
下面是核酸提取的原理步骤：
1. 细胞破碎：首先，将生物样本（如细胞、组织或血液）收集到离心管中，并使用生理盐水或缓冲液洗涤样本以去除杂质。
然后，采用机械、化学或热能等方法，破碎细胞膜和细胞核，使细胞内的核酸释放到溶液中。
2. 蛋白质去除：为了去除细胞破碎后溶液中的蛋白质和其他杂质，可以使用蛋白酶、蛋白质沉淀剂或有机溶剂等方法进行蛋白质的沉淀或显色反应。
这一步骤可以有效地除去干扰物，使核酸纯化更加纯粹。
3. DNA和RNA分离：如果需要纯化DNA和RNA，则可以使用亲水性柱、酸性沉淀剂或硅胶膜等吸附剂。
这些吸附剂可以特异性地结合DNA或RNA，并将其与其他杂质分离开来。
根据吸附剂的不同，可以选择适当的提取方法。
4. 封闭或洗脱：提取后的核酸通常需要保存或进一步分析。
可以将其封闭在储存液中，以避免降解。
此外，还可以使用适当的缓冲液来洗脱核酸，以备后续实验使用。
总的来说，核酸提取的原理是通过破碎细胞、去除蛋白质、分离DNA或RNA，并最终纯化核酸。
这一过程涉及到细胞破碎、蛋白质去除、核酸分离和后续处理等多个步骤，可以根据具体
实验需求进行调整和优化。
这些步骤中的关键是选择合适的试剂和技术，以获得高质量和高纯度的核酸提取产物。
DNA和RNA提取原理及常见问题分析
硅质材料的吸附 或用异丙醇沉淀浓缩RNA。 经DEPC 处理的水溶解RNA
材料准备及裂解
RNA的提取
尽量使用新鲜材料，条件允许的情况下现取现提 组培细胞及血液应尽量离心去除培养液和上清，消化系统的组 织选取杂质少的部位, 细菌和酵母需要匀浆处理。 对不能马上提取的样品切成小块后立即投入液氮冷冻，或投入 专门的RNA样品储存液中保存（动物的脾脏及消化系统中RNA 非常容易降解，同时DNA的含量丰富，操作应格外的快速小 心）。 液氮研磨时不要使液氮挥发净，随时补充；加入裂解液并且彻 底而迅速地匀浆。
杂质的抽提
RNA的提取
采用有机（酚/氯仿）抽提时应充分混匀 离心分离两相时，应保证一定的转速和时间，使蛋白质、多糖 和DNA分布到中间层和有机相中，RNA留在水相中 对脂肪含量较多的样品注意不要吸入油质层，可以再次用有机 溶剂抽提
RNA的沉淀和溶解
RNA的提取
含RNA的水相过吸附柱，通过去蛋白液和漂洗液去除蛋白多糖 等杂质 或使用异丙醇沉淀RNA应充分的混匀并放置10min左右离心收集 沉淀，70％乙醇洗涤，晾干 用经DEPC处理过的水或专门的试剂来洗脱或溶解RNA 样品收集后或需长期保存时应置于－70℃ 或加入RNase抑制 剂，分装使用
提取RNA的注意事项
经常更换新手套。因为皮肤和实验室用品上可能有 RNase，会导致RNase污染。 使用灭过菌的塑料制品和枪头避免交叉污染。 应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在 150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。 使用有效的RAase抑制剂
DNA提取常见问题
问题二：DNA降解。 原因
1.
1.
DNA提取过程及原理
DNA 提取过程及原理一、实验原理从细胞中别离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核糖核蛋白。
如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。
盐溶法是提取DNA的常规技术之一。
在制备核酸时，通常是用研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。
利用DNA不溶于的NaCl溶液而RNA能溶于的NaCl溶液这一性质可以将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。
别离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。
去除蛋白的方法有3种：①用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质。
用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而DNA那么溶于上层水相，用两倍体积95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸别离，也可从材料中直接提取出DNA。
③用苯酚处理，然后离心分层，一样可以将DNA 与蛋白质别离开来。
这时DNA溶于上层水相，蛋白变性后那么停留在酚层内，吸出上层水相，参加两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。
反复使用上述方法屡次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA 制品。
本实验采用CTAB法从植物幼苗中提取基因组DNA。
为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA杂质，可用RNA酶进行处理。
另外，生物材料中还含有大量的脂肪物质和多糖，这些物质在用盐溶液别离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即可被除去。
核酸纯化目标：纯化后的核酸样品中不应该存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的重金属离子；其它生物大分子物质如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度；排除RNA分子污染。
操作考前须知：尽量简化操作步骤，缩短提取过程减少各种有害因素对核酸的破坏；减少化学因素对核酸的降解，一般pH4-10；减少物理因素如机械切力、高温对核酸的降解。
提取步骤：破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质、多糖和脂类分子，去除RNA，去除盐类、有机溶剂等杂质。
DNA与RNA提取方法
DNA与RNA提取方法DNA及RNA提取的方法有很多种，常用的方法包括酚-氯仿法、离心法、磁珠法、膜结合法和柱式纯化法等。
酚-氯仿法是最早用于DNA与RNA提取的方法之一，它利用酚和氯仿的差异溶解力来分离DNA/RNA和蛋白质。
首先，将待提取的细胞裂解并加入含有酚的溶液中，酚能破坏细胞膜和核膜，使DNA/RNA释放到溶液中，然后加入氯仿，形成两相体系。
DNA/RNA会在两相之间进行分配，DNA/RNA会富集在上层的酚相中，而蛋白质则富集在下层的氯仿相中。
最后，利用离心将两相分离，然后从上层分离出DNA/RNA即可。
离心法是用于分离DNA/RNA和其他细胞组分的一种常见方法。
通过离心的方式来分离细胞组分，离心力可以使大分子的DNA/RNA和小分子的蛋白质等有差异的质量在离心仪中发生分离。
首先，将待提取的细胞离心，将细胞沉淀，然后将沉淀的细胞裂解，并加入适当的缓冲液使DNA/RNA释放到溶液中。
再次进行离心，使DNA/RNA沉淀到底部，上清液中只剩下其他细胞组分，最后将底部的DNA/RNA沉淀收集，即可得到纯化的DNA/RNA。
磁珠法是一种通过磁性珠子来选择性纯化DNA/RNA的方法，它的原理是磁性珠子上特定的配体能够与DNA/RNA结合。
首先，将待提取的细胞裂解，并加入磁性珠子，磁性珠子上的配体与DNA/RNA结合形成复合物，然后用磁力将复合物沉淀到底部，上清液中只剩下其他细胞组分。
然后，去除上清液，用适当的缓冲液洗涤磁性珠子上的复合物，最后用缓冲液溶解复合物，即可得到纯化的DNA/RNA。
膜结合法是一种通过特定质量的薄膜来选择性吸附DNA/RNA的方法。
膜上的小孔可以使DNA/RNA通过，而使大分子如蛋白质等无法通过。
首先将待提取的细胞裂解，并加入适当的缓冲液，使DNA/RNA完全释放到溶液中。
然后，将溶液滴在膜上，通过重力或离心使DNA/RNA通过膜上的小孔，将DNA/RNA捕获在膜上，上清液中只剩下其他细胞组分。
第六章DNA和RNA的提取
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除
（二）基因组DNA的提取－ CTAB法
组份
CTAB提取缓冲液的改进配方
Tris-HCl EDTA NaCl （pH8.0） （pH8.0） 100 mM 20 mM 1.4M CTAB 3%(W/ V) PVP40 5%(W/ V) β-巯基乙醇 2%（V/V） 使用前加入
主要方法： (1)浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。 1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液 2) 与含有少量异戊醇的氯仿一起摇荡,使乳化 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
质粒DNA的提取
使用处于对数期的新鲜菌体 （老化菌体导致开环质粒增加）
质粒DNA－碱裂解法
碱裂解法原理
染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分 子，而质粒DNA为共价闭合环状分子； 当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共 价闭环的质粒DNA在回到中性pH时即恢复其天然构象； 变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉 淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相 中，从而可通过离心将两者分开。
磁珠
磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的 物，从而达到分离目的。
（三）基因组DNA－其它方法
浓盐法：
利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离
有机溶剂抽提法：
有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用
密度梯度离心法：
利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物
dna、rna共抽提
二、实验方法
将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 min，离去残留的洗涤液。取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入30-50 L 洗脱液，静置3 min,12,000 rpm 4℃ 离心2 min，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
二、实验方法
对于已知病毒载量和病毒种类的样本，如果样本中只含有 DNA 病毒，提取液DNA 浓度≤105copies/μl 时，可以采用 OMEGA 试剂盒
若样本中只含有RNA 病毒，提取液RNA浓度≤108copies/μl时，可采用 QIAGEN试剂盒
提取液 DNA 浓度 ＞ 105 copies/μl 时，可以采用QIAGEN 试剂盒
利用某些固项介质，在某些特定的条件下，选择性地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特点，实现核酸与蛋白质及盐的分离。
二、实验方法
准备:无水乙醇、生理盐水、1.5mL离心管。取出析出液和洗涤液，按以下操作:a)析出液: 4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀;9mL加入51mL无水乙醇，混匀。b)洗涤液: 9mL加入21mL无水乙醇，混匀;18mL加入42mL无水乙醇，混匀。c)配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37C溶解，摇匀后使用。
经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等)和盐(如 Tris、EDTA、NaCI 等)。
盐的作用：提供一个合适的裂解环境(如Tris)，抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如EDTA)、维持核酸结构的稳定(如 NaCI)等。
去污剂：通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。
裂解体系中加入蛋白酶:利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法：1.酚/氯仿方法：这是最早应用的DNA提取方法之一，适用于绝大多数生物样本。
原理是利用酚酸抽提DNA，酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，而DNA在酚相沉淀。
然后用氯仿提取，分离DNA与酚相中的蛋白质和RNA。
最后通过乙醇沉淀纯化DNA。
这种方法可以得到高质量的DNA，但操作过程相对繁琐。
2.硅胶基质法：硅胶基质可吸附DNA，该方法使用硅胶膜或硅胶粉末来固定DNA，通过洗涤去除杂质，最后用洗脱液从硅胶上洗脱DNA。
这种方法具有简便和高纯度的优点，适用于大规模提取DNA。
3.盐酸法：盐酸法以酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物的原理，通过加入盐酸将DNA沉淀下来，然后经过洗涤和乙醇沉淀纯化。
这种方法适用于提取纯度要求不高的DNA。
RNA提取方法：1.酚酸提取法：这是最常用的RNA提取方法之一、原理类似于DNA的酚/氯仿法，通过酚酸将核酸与蛋白质和其他杂质分离。
然后通过氯仿脱脂，去除酚相中的蛋白质，并且获得RNA水相。
最后通过乙醇沉淀纯化RNA。
这种方法适用于大多数样品，得到的RNA纯度较高。
2.硅胶基质法：与DNA提取类似，它也适用于RNA的提取。
通过硅胶膜或硅胶粉末结合RNA并洗脱，用洗脱液分离RNA与杂质。
这种方法适用于大规模提取RNA。
3.氯仿法：这是一种较为简便的RNA提取方法，它通过氯仿脱脂去除脂质和其他杂质，并且能够同时去除DNA。
最后用乙醇沉淀纯化RNA。
这种方法适用于需要较快速提取RNA的情况。
DNA和RNA提取的基本原理都是通过分离和纯化DNA或RNA与其他杂质的物质。
酚酸提取法和硅胶基质法同属于酚酸法，都是通过酚酸和氯仿来分离DNA或RNA与蛋白质和其他杂质。
其中酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，并且DNA或RNA在酚相中沉淀，而蛋白质和RNA在氯仿相中溶解。
然后通过洗脱和纯化步骤，从酚酸相中提取DNA或RNA。
盐酸法与酚酸法不同，它是通过酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物来分离DNA与其他杂质。
DNA和RNA 的分离及显色
显色反应：
核糖与地衣酚（3,5-二羟甲苯）试剂反应呈鲜绿色。脱 氧核糖与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，而核糖无 此反应。
RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而 转变成糠醛，后者与 3,5- 二羟甲苯反应呈鲜绿色，该 反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂，反应产物在670 nm处有最大吸收。
RNA在20~250微克范围内，光吸收与RNA浓度 成正比。地衣酚反应特异性较差，凡是戊糖均 有此反应。RNA和其他杂质也能给出类似的颜 色。
二苯胺反应根据对去氧戊糖的特异的显色反应进行 DNA定量的方法。 其原理是DNA经酸处理，使从嘌呤核苷酸中游离出 的去氧核糖在乙醛存在下和二苯胺反应，然后测定 反应液的蓝色。由于它不与RNA反应，所以可用来 定量测定全核酸中的DNA含量。
三、实验材料
1、材料 干酵母 2、仪器 台式天平 电子天平 沸水浴 离心机 3、器材 普通试管 20 mL×7（干燥） 锥形瓶 100 mL×2 量筒 50 mL×1 移液器 1 mL×3 2 mL× 2 10 mL×1 滴管×2 洗耳球×2 滤纸 漏斗 试管架 移液器架 试管夹 玻棒
3、地衣酚反应中，干扰RNA测定的因素有哪些？如 何能够减少它们的影响？ 4、提取RNA过程中为什么要严格控制时间、温度、 pH值？
Thanks for
your patience!
0.8
1
0.8
1
苔黑酚 （ml) 二苯胺 （ml) 反应
2
2
2 2
在通风橱内，沸水浴5分钟
注意：
地衣酚显色法特异性较差，凡是戊糖均 有此反应。因此，测 RNA 含量时可先测定 DNA的含量，再计算出RNA的含量
思考题
1、本实验中分离DNA和 RNA方法的原理是什么？
DNA和RNA提取方法和原理
DNA和RNA提取方法和原理DNA和RNA提取是生物学和分子生物学研究中的常用实验操作，用于从生物样本中分离纯化DNA和RNA分子。
这些分子是研究生命现象、基因表达和遗传变异等重要信息的关键组成部分。
本文将介绍DNA和RNA提取的方法和原理。
1.细胞破碎：细胞壁和细胞膜是阻碍DNA和RNA提取的障碍，因此需要将细胞破碎以释放核酸。
破碎方法包括化学破碎（如酚酸法和硫酸法）、物理破碎（如超声波和研磨法）和酶解法。
其中，酸性酚酸法常用于DNA提取，而三氯醋酸/酚酸法常用于RNA提取。
2.蛋白质去除：细胞破碎后，需要去除细胞中的蛋白质，避免其干扰后续的核酸纯化过程。
蛋白质去除一般采用酶解酶和蛋白酶K等进行蛋白酶解；也可以通过酚酸法或硅胶柱纯化法去除蛋白质。
4.测量：核酸提取后需要测量其质量和浓度，以确保提取得到的DNA或RNA质量和浓度足够纯净。
常用的测量方法包括紫外吸收光谱法、膜基固定法和荧光标记法等。
1. 细胞破碎：细胞破碎能够使核酸从细胞内释放出来。
酸性酚酸法是一种常用的DNA提取方法。
其原理是酚酸具有分解细胞膜和脱氧核糖核酸酶（DNase）的作用，使DNA得以稳定保存。
该方法通过加入酸性酚酸溶液破坏细胞膜和核酸酶，随后通过离心沉淀DNA。
2.蛋白质去除：蛋白质是核酸提取中的一个重要干扰物，需要进行去除。
蛋白质去除常用的方法是酚酸/氯仿相间萃取法。
该方法通过加入酚和氯仿，蛋白质溶解于氯仿相中，核酸溶解于酚相中，然后进行萃取。
3.核酸纯化：核酸纯化是将核酸从其他组分中分离出来。
硅胶负载法是一种常见的DNA和RNA纯化方法。
该方法通过将DNA或RNA选择性地吸附到硅胶柱上，然后经过洗涤和洗脱步骤来获得纯化的核酸。
硅胶柱有高选择性地吸附核酸的特性，而其他多肽、脂肪和杂质则不能与硅胶选择性地结合。
总结起来，DNA和RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，其方法主要包括细胞破碎、蛋白质去除和核酸纯化等。
不同的提取方法和原理根据实验需求和样本特性的不同进行选择。
DNA与RNA提取的区别及注意事项
DNA与RNA提取的区别及注意事项DNA与RNA提取的区别及注意事项引言：DNA和RNA是生物体内两种重要的核酸分子，它们在遗传信息的传递和蛋白质合成中起着关键作用。
DNA提取和RNA提取是生物学研究和分子诊断中常用的实验技术。
本文将探讨DNA与RNA提取的区别，包括提取方法、提取的样本类型及注意事项，以帮助我们更好地理解和应用这两种技术。
一、DNA提取与RNA提取的方法1. DNA提取方法：DNA提取技术旨在从细胞或组织样本中分离出DNA分子。
DNA提取方法一般包括以下几个步骤：1) 细胞破碎：将样本中的细胞破碎，使DNA被释放出来；2) 蛋白质去除：利用蛋白酶等方法去除样本中的蛋白质污染；3) DNA纯化：通过溶液浓缩、离心等步骤，去除样本中的杂质，使DNA得到纯化。
2. RNA提取方法：RNA提取技术旨在从细胞或组织样本中分离出RNA分子。
RNA提取方法一般包括以下几个步骤：1) 细胞破碎：将样本中的细胞破碎，使RNA被释放出来；2) RNA保护：由于RNA容易被外界核酸酶降解，需使用RNA保护试剂保护RNA的完整性；3) 蛋白质去除：利用蛋白酶等方法去除样本中的蛋白质污染；4) RNA纯化：通过溶液浓缩、离心等步骤，去除样本中的杂质，使RNA得到纯化。
二、DNA提取与RNA提取的样本类型1. DNA提取的样本类型：DNA提取适用于多种生物样本，包括：1) 细胞：体液中的白细胞、培养细胞等；2) 组织：肌肉组织、肿瘤组织等；3) 体液：血液、唾液、尿液等。
2. RNA提取的样本类型：RNA提取也适用于多种生物样本，但需要更加谨慎处理，以保持RNA 的完整性。
常见的样本包括：1) 细胞：培养细胞、血液中的白细胞等；2) 组织：肝脏、心脏、肺等；3) 体液：血液、唾液、尿液等。
三、DNA提取与RNA提取的注意事项1. 样本采集：1) 注意采集样本时的卫生防护，避免外界污染；2) RNA提取时需快速处理，以防RNA被降解。
核酸提取原理及方法
核酸提取原理及方法核酸提取是指从细胞、组织或病毒中分离纯化出来的DNA或RNA分子。
核酸提取的过程包括以下几个步骤。
1. 细胞破碎：首先需要将目标细胞破碎，破碎细胞的方法可以选择机械破碎、化学破碎或酶解等。
机械破碎可以通过高速离心、超声波处理等方法实现，化学破碎则可以使用表面活性剂或蛋白酶K等物质，酶解则是利用特定酶降解细胞壁。
2. 蛋白质消化：细胞内的蛋白质需要消化在提取核酸的过程中，可以使用蛋白酶、高盐离心等方法使蛋白质失活和沉淀。
高盐离心可通过加入高盐溶液，使蛋白质和核酸形成络合物，然后离心，使蛋白质沉淀，核酸在上清液中。
3. 去除杂质：在提取的过程中，会存在一些杂质如RNA、酶和多肽，这些物质会影响纯化核酸的质量和浓度。
可以通过酶切、RNA去除试剂等方法去除这些杂质。
酶切是利用特定的核酸酶对RNA进行消化，RNA去除试剂则是通过特定试剂与RNA结合形成沉淀，然后进行离心分离。
4. 纯化：纯化的目的是除去核酸提取过程中的其他杂质，获得纯净的核酸分子。
常用的纯化方法有酚/氯仿法、琼脂糖凝胶电泳法、硅胶纯化法和离心柱纯化法等。
酚/氯仿法是利用酚和氯仿疏水性差异的原理，将核酸分子转移到酚相中，然后进行重溶解和沉淀分离。
琼脂糖凝胶电泳法则是利用琼脂糖凝胶孔径大小的差异，通过电场的作用将核酸分子从琼脂糖凝胶中分离出来。
硅胶纯化法是利用硅胶对DNA和RNA分子的亲和性，将核酸与硅胶结合，然后通过洗脱和浓缩得到纯化的核酸。
离心柱纯化法则是利用柱体内特定的亲和基质，选择性地结合核酸分子，然后洗脱和收集纯化的核酸。
5. 检测：最后核酸提取的纯度和浓度可以通过吸光度测量或荧光染料法进行检测。
吸光度测量通过核酸溶液吸收紫外光的特性来计算核酸的浓度和纯度。
荧光染料法则是利用特定荧光染料与核酸结合形成荧光复合物，通过荧光信号的强度来计算核酸的浓度和纯度。
综上所述，核酸提取的方法和原理主要包括细胞破碎、蛋白质消化、去除杂质、纯化和检测等步骤。
RNA的提取方法及原理
RNA的提取方法及原理RNA提取原理RNA提取时，加氯仿后分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。
DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和DNA脱离，DNA进入水相。
但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离，否则DNA会释放到水相。
不管有酚也好，没有酚也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA的亲水基团，与水相接触。
所以不要剧烈震荡。
异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。
氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA 提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。
因为细胞中存在DNA酶，在提取之前细胞破碎的时候没有加DNA酶抑制剂，DNA已经被分解了。
上层水相，PH 5.1左右，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，只有RNA分子留在水相。
而当pH接近中性时，DNA就会溶解在水相，（导致PH中性的大概原因是trizol与样品比例不对，应该尽量保证提取量的前提下使trizol过量）TRIzol Reagent 提取total RNA步骤：1. 查下表根据样品量选择适当的TRIzol Reagent体积装入50ml RNase-free离心管中，注意样品体积不能超过TRIzol Reagent 体积的10%。
dna-rna相互作用的5种研究方法及原理
dna-rna相互作用的5种研究方法及原理全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：DNA和RNA是生物体内极其重要的核酸分子，它们在遗传信息的传递和调控过程中起着至关重要的作用。
DNA与RNA之间的相互作用是细胞内的一个关键过程，研究这种相互作用不仅有助于深入了解基因调控的机制，还可以为药物研发和疾病治疗提供新的思路。
在这篇文章中，将介绍关于DNA-RNA相互作用研究的五种常见方法及其原理。
1. RNA兴趣序列捕获（RIP-Seq）RIP-Seq是一种通过免疫沉淀法识别RNA与蛋白质相互作用的方法。
其基本原理是利用特异性抗体对目标RNA进行免疫沉淀，然后通过高通量测序技术对RNA进行分析。
这种方法可以鉴定DNA与RNA 相互作用的结合蛋白，从而揭示DNA-RNA相互作用的机制。
5. 双荧光蛋白互补法（BiFC）BiFC是一种通过蛋白互补的方式研究蛋白质与RNA相互作用的方法。
其基本原理是将两片断裂的荧光蛋白与RNA结合蛋白的两个互补片段连接，当这两个互补片段相互结合时，便会恢复荧光蛋白的活性，从而可以通过荧光显微镜观察RNA结合蛋白的互作情况。
BiFC方法可以直观地展示DNA-RNA相互作用的过程。
第二篇示例：DNA和RNA是生物体内重要的核酸分子，它们之间的相互作用可以在细胞中发挥重要的生物学功能。
研究DNA-RNA相互作用不仅有助于理解细胞内的基因表达调控机制，还可以为相关疾病的治疗提供新的思路。
本文将介绍关于DNA-RNA相互作用的5种研究方法及原理。
1. RNA免疫共沉淀法（RIP）RNA免疫共沉淀法是一种广泛用于研究RNA结合蛋白的方法。
其基本原理是利用抗体特异性识别和结合待研究的RNA结合蛋白，然后通过免疫共沉淀将这些蛋白与RNA一起沉淀下来。
通过对免疫共沉淀物的分析，可以确定RNA与蛋白之间的相互作用，并进一步揭示DNA-RNA相互作用的机制。
2. RNA结合蛋白CLIP-Seq技术CLIP-Seq技术是以cross-linking的方式封存RNA与蛋白质的相互作用，然后通过特定酶切割RNA，并通过测序鉴定蛋白质结合的RNA序列。
动物组织和细胞中核酸的提取和测定_
实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。
提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。
本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。
核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。
这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。
为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。
高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。
细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。
【实验材料】1.实验器材研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。
2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。
RNase在用前适量加入。
(2)溶液D(变性液)：4mol/L硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠.2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V)月桂基肌酸钠溶于293ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。
DNA与RNA提取方法
实验三Trizol法提取细菌总RNA一、实验原理Trizol主要物质是异硫氰酸胍,它可以破坏细胞使RNA释放出来的同时,保护RNA的完整性。
加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。
RNA存在于水样层中。
收集上面的的水样层后RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。
无论是人、动物、植物还是细菌组织Trizol法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≧1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。
Trizol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。
所有的操作可以在一小时内完成。
Trizol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。
主要试剂和器材Trizol 溶液氯仿异丙醇75%乙醇0.1% DEPC水超净工作台 2.0 mL离心管无Rnase移液枪紫外分光光度计石英比色皿泳槽和模具电泳仪凝胶成像系统大肠杆菌实验步骤一. 采用Trizol 溶液提取细菌的总RNA挑取大肠杆菌菌单菌落培养至稳定期取菌液2.0 mL 于2.0 mL离心管离心得菌体2、每管加入1 mL Trizol 溶液盖紧管盖激烈振荡15 s室温静置5 min 4℃12000 g离心10 min取上清转入(约 1 mL)新的2.0 m L离心管中每管加入0.2 mL 的氯仿(0.2 体积Trizol)盖紧盖剧烈振荡15 s室温静置3 min4℃, 12000 g, 离心10 min，小心吸取上层水相转入另一新的2.0mL 离心管，测量其体积,加氯仿时应充分震荡使其充分乳化。
加入1倍体积的氯仿，盖紧盖，剧烈振荡15 s，室温静置3 min，4℃12000 g离心10 min 小心吸取上层水相，转入另一已编号新的2.0mL 离心管。
加入0.5 mL 的异丙醇(0.5 体积Trizol)轻轻颠倒混匀，室温静置10 min，4℃12000 g离心10 min，RNA 沉于管底，小心吸去上清6、加1 mL75%的乙醇(预冷),并轻柔颠倒，洗涤沉淀4℃7500 g离心5 min,小心弃上清，微离吸去剩余乙醇，室温干躁10 min。
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DNA提取的几种方法
染色体DNA的提取
➢ CTAB法 ➢ SDS法 ➢ 其它
DNA提取的几种方法
非染色体DNA的提取 ➢ 质粒DNA的提取 • 碱裂解法 • 煮沸法
➢ 线粒体、叶绿体DNA的提取 • 差速离心结合SDS裂解法
基因组DNA－ CTAB法
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
细胞器DNA－差速离心法
线粒体和叶绿体是生物体内半自主性细胞器，自身可编码蛋 白，它们的比重和大小一定，因而在同一离心场内的沉降速度 也一定，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各 种组分分级分离出来。
差速离心法原理
➢ 是利用物质比重的不同分离混合物的一种方法。
➢ 将待分离物质置于均匀介质（蔗糖）中，以一定的转速进 行离心，比重大的物质优先沉降，比重小的却处于上层， 从而得以分离。
注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的 植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
基因组DNA－ CTAB法
CTAB提取缓冲液的经典配方
➢ Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； ➢ EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； ➢ NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； ➢ CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； ➢ β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除
➢ 有机溶剂抽提法：
有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用
➢ 密度梯度离心法： 利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物
质粒DNA－碱裂解法
碱裂解法原理
➢ 染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分 子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；
➢ 当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共 价闭环的质粒DNA在回到中性pH时即恢复其天然构象；
内容
第一部分：DNA提取方法简介 第二部分：DNA提取及常见问题分析
DNA提取的基本步骤
I.材料准备 II.破碎细胞或包膜－内容物释放 III.核酸分离、纯化 IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质 V.核酸溶解在适量缓冲液或水中
材料准备
基因组DNA的提取
➢ 最好使用新鲜材料，低温保 存的样品材料不要反复冻融
CTAB提取缓冲液的改进配方
➢ PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合
物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合， 有效去除多糖。
基因组DNA－ CTAB法
CTAB法流程图
植物材料
裂解液
酒精沉淀
液氮研磨
抽提
离心洗涤
DNA溶液
细胞裂解
上层溶液
干燥溶解
➢ 变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉 淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相 中，从而可通过离心将两者分开。
质粒DNA－碱裂解法
碱裂解法流程图
对数期菌体
上清液
沉淀
溶液I充分重悬
抽提
干燥溶解
溶液II裂解 溶液III中和
酒精沉淀 离心洗涤
质粒DNA溶液
质粒DNA－煮沸法
煮沸法原理
➢ 染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分 子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；
➢ 当加热处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共 价闭环的质粒DNA在冷却时即恢复其天然构象；
➢ 变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉 淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相 中，从而可通过离心将两者分开。
基因组DNA－SDS法
SDS法流程图 （以动物组织为例）
动物组织
抽提
离心洗涤
组织匀浆
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
酒精沉淀
DNA溶液
基因组DNA－其它方法
根据细胞裂解方式的不ຫໍສະໝຸດ 有：➢ 物理方式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法 ➢ 化学方式：异硫氰酸胍法、碱裂解法 ➢ 生物方式：酶法
基因组DNA－其它方法
根据核酸分离纯化方式的不同有：
➢ 吸附材料结合法：
• 硅质材料
高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。 快捷高效。
• 阴离子交换树脂
低盐高pH值结合核酸，高盐低pH值洗脱。 适用于纯度要求高的实验。
磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的 物，从而达到分离目的。
基因组DNA－其它方法
➢ 浓盐法：
利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离
➢ 提取血液基因组DNA时，要 选择有核细胞（白细胞）
➢ 组培细胞培养时间不能过长， 否则会造成DNA降解
➢ 含病毒的液体材料DNA含量较 少，提取前先富集
质粒DNA的提取
➢ 使用处于对数期的新鲜菌体 （老化菌体导致开环质粒增加）
➢ 培养时应加入筛选压力，否则 菌体易污染，质粒易丢失
➢ 尽量选择高拷贝的质粒，如为 低拷贝或大质粒，则应加大菌 体用量
基因组DNA－SDS法
SDS法原理
➢ SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细 胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
➢ 提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖 杂质沉淀，离心后除去沉淀；
➢ 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的 DNA。
➢ CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴 化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
➢ 该复合物在高盐溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂 抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离 出来。
➢ 菌株不要频繁转接（质粒丢失）
细胞裂解
基因组DNA的提取
DNA和RNA提取方法及原理
DNA提取专题
第一部分：DNA提取方法简介 第二部分：DNA提取常见问题分析及对策
前言
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学 研究的主要对象。为了进行测序、杂交和基因的表达，获得高分子量和高 纯度的DNA是非常重要的前提。
DNA提取原则
保证DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、脂类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染