vero细胞无血清培养基培养技术与应用
vero是什么意思
Vero美[ˈvɛroʊ]【医】细胞毒素【一种志贺样毒素】;【地名】【法国】韦罗短语VERO MODA 维莎曼; 维沙曼; 专柜正品。
Vero Beach 弗隆滩; 维罗海滩; 维洛海滩; 维罗比奇。
Vero Cuoio 牛津皮鞋; 休闲鞋; 休闲球鞋; 真皮材质。
双语例句1、Study on Culture of Vero Cells with Low Concentration Calf Serum低浓度牛血清培养Vero细胞的研究2、Harvest effect on rabies virus under different vero cell culture conditions改变Vero细胞培养条件对狂犬病毒收率的影响3、Research and Application of Serum-Free Vero Cells Culture TechnologyVero细胞无血清培养技术的研究与应用4、Study on the Injury Mechanism of Chloroform to Vero Cells 氯仿对非洲绿猴肾细胞损伤机理的研究5、Vero cells are highly recommended by WHO for vaccine production.Vero细胞是WHO积极推荐用于疫苗生产的细胞基质。
扩展资料Vero细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。
这个细胞系由日本千叶大学的Yasumura 和Kawakita 于1962年3月27日扩增出来。
该细胞系取“Verda Reno”(世界语意为‘绿色的肾脏’)的简写而命名为"Vero",而"Vero"本身在世界语中也有“真相”的意思。
Vero细胞用途广泛:1.用于检查大肠杆菌毒素。
大肠杆菌毒素最初就因此细胞系而被命名为Vero毒素,后来被称为志贺菌素样毒素,因为它与在痢疾志贺菌中分离出来的志贺菌素很相似。
VERO细胞培养
对数生长期 细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳,最适合进行实验研究
平台期
细胞长满瓶壁后,细胞虽有活力但不再分裂 机制:接触抑制、密度依赖性 相互接触后,如培养的是正常细胞,由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动,这种现
象称接触抑制(Contact Inhibition)。 当细胞密度进一步增大,培养液中营养成分减少,代谢产物增多时,细胞因营养的枯
VERO细胞培养
细胞培养技术
从生物体内取出组织或细胞,在体外(in vitro)模拟体内生理环境,在无菌、适当温度 和一定营养条件下,对这些组织或细胞进行孵育培养,使之保持一定的结构和功能,以 便于我们观察研究,这种方法就是细胞培养(cell culture)。有时细胞培养也称为组 织培养(tissue culture)。
意大利I.A.Z. 欧洲细胞实验室列表(大全)
上海午立生物技术有限公司细胞株
意大利IZSLER细胞库
中国医学科学院基础医学研究所细胞中心保藏细 胞目录 上海华大天源生物科技有限公司提供高
细胞库
ATCC:American Type Culture Collection (美国标准培养物收集所) ECACC:European Collection of Cell Cultures(欧洲动物细胞库 ) JCRB:Japanese Collection of Research Bioresources(日本细胞库) CCTCC:China Center for Type Culture Collection (中国典型培养物保藏中心)
塑料制品特点:质软、易出现划痕;耐腐蚀能力强、但不耐热。
1、针式滤器帽不能泡酸液,用2%氢氧化钠泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两 张,安装滤膜时注意光面朝上(凹向上),然后将螺旋稍微拧松一些,放入铝盒中在高压锅内 15磅30分钟消毒,再烘干备用。
生物工程中的无血清细胞培养
生物工程中的无血清细胞培养无血清培育基的消失是培育基进展历程上的一个里程碑,其一般是在合成培育基的基础上,引入成分完全明确的或部分明确的血清替代成分,使培育基能满意动物细胞培育的要求,又可有效的克服因使用血清所引发的问题。
进入20世纪80年月后,新的无血清培育基不断问世,人们经过讨论发觉,只要在培育基中增加某些适于细胞生长的成分,如纤连蛋白(fibronectin)、转铁蛋白(Transferrin,TRF)、胰岛素(Insulin)和表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)等,不少细胞即能在无血清供应的状况下生长,尤其是CHO、杂交瘤、骨髓瘤细胞以及BHK21细胞等。
某些细胞在无血清的条件下,其生长和抗体的产量甚至较有血清培育时高出数倍。
目前,无血清培育基的讨论有两个方向:一是培育基中不含有任何动物来源的添加组分;二是培育基中不含有不明确的添加组分。
依此可以将当前应用较多的无血清培育基归纳为以下四种:(1)无血清培育基,为一般意义上无血清培育基,用各类可替代血清功能的生物材料配制细胞培育基,如牛血清白蛋白(BSA) 、转铁蛋白、胰岛素等生物大分子物质,以及从血清中提取的去除蛋白质的混合脂类以及水解蛋白等。
其特点是培育基中的蛋白含量较高,添加物质的化学成分不明确,其中含有大量的动物来源蛋白。
(2)无动物来源培育基,很多商业公司开发的无动物来源培育基是基于生产重组药物的安全考虑,培育基中的添加组分无动物来源,需要的蛋白来源于重组蛋白或者蛋白水解物,这些组分可以保障细胞生长及增殖的需要。
(3)无动物蛋白培育基,培育基完全不用动物来源的蛋白,但仍有部分添加物是来源于植物蛋白的水解片段或合成多肽片段等其他衍生物。
此类培育基组分相对稳定,但必需添加类固醇激素和脂类前体,并且对培育的细胞是高度特异性的。
(4)化学组分限定培育基,此类培育基是目前最安全、最为抱负的培育基,首先可以保证培育基批次间的全都性,其中所添加的少量动物来源的蛋白水解物、蛋白都是成分明确的组份。
vero细胞无血清培养基培养技术与应用
V ero细胞是日本学者Yasumura等于1962年从正常成年非洲绿猴肾分离获得的贴附依赖性细胞系, Vero一词由世界语中的verde(意为绿色的)和reno意为肾脏的)两个词合并而成。
Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。
与用作疫苗生产的原代细胞、二倍体细胞和其他一些传代细胞基质相比,Vero细胞具有以下特点:①来源方便,可连续传代,生长速度快;②对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高;③遗传性状稳定,恶性转化程度低,生物安全性较高;④培养条件要求不苛刻,易于在生物反应器实施大规模培养。
疫苗的接种对象主要是大范围的健康人群,其质量和安全性一直是备受关注的首要问题。
疫苗的质量和安全性在很大程度上取决于疫苗的生产方式和过程。
血清是一种组分复杂而尚不完全明确的混合物,至少含有1 000种不同的蛋白质,总蛋白量高达60~150g/L,它能为细胞的体外培养提供必要的生长因子、激素、细胞贴附因子和营养成分。
受Vero细胞自身的贴附依赖生长特性和动物细胞培养技术发展进程的影响,本世纪之前的V ero细胞培养及病毒疫苗生产均存在着对血清的依赖。
血清组分的复杂性和不确定性,以及其中存在病毒等病原微生物污染的潜在风险,影响着病毒疫苗的生产工艺和疫苗质量。
从病毒疫苗生产工艺角度考虑,血清组分的复杂性和批次间的质量差异增加了病毒疫苗生产的不稳定性和产品质量控制的难度;从病毒疫苗的安全性角度考虑,血清中潜在的病原微生物,如引起牛海绵状脑炎的阮病毒,给疫苗的使用带来了不容忽视的安全隐患阎。
由血清使用所造成的细胞培养过程和细胞表达产物安全性的不确定因素增加的现实问题,成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动因。
随着动物细胞无血清培养技术的不断进步,为包括V ero细胞在内的动物细胞大规模无血清培养技术的应用提供了必要的技术支撑,无血清培养已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势问。
2010年,美国、欧盟和日本等发达国家将全面停止在生物制药中应用血清,FDA将停止含血清细胞培养工艺生产的生物技术新药的申报受理。
Vero细胞无血清培养基的发展-医学工程论文-基础医学论文-医学论文
Vero细胞无血清培养基的发展-医学工程论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——商业化的无血清培养基由最初血清替代物的研究发展到了化学界定培养基的研究。
目前,无血清培养基的发展趋势有两个方向,一是完全化学界定培养基;二是不含任何动物来源组分的培养基。
无血清培养技术常用的培养基分类如下。
第一代,不含血清,添加替代血清的生物材料。
特点是培养基的蛋白含量高,增加了纯化工作的难度和成本。
第二代,无动物来源培养基,添加基因工程和重组蛋白或植物蛋白水解物。
不含动物源性蛋白衍生物,既可保证产品的安全,又能保障细胞生长。
第三代,无蛋白培养基,培养基完全不含蛋白。
利于纯化分离,培养基相对稳定,但应用局限.,化学鉴定培养基。
培养基所含成分都是明确的,有利于细胞体外培养的代谢研究。
无血清、无蛋白、无动物来源、成分明确的新型培养基是最理想、最安全的通用培养基,在细胞工程领域大规模生产病毒性疫苗、重组蛋白等制品方面应用广泛[3-4].1 Vero 细胞在病毒性疫苗中的广泛应用和优势1. 1 Vero 细胞的来源近年来随着生物技术的发展,动物细胞培养技术已从简单的试验研究拓展到了生物学研究和商业应用领域。
生物制品如生物基因工程疫苗、病毒性疫苗、医学治疗性抗体的研究与生产都用到了细胞培养技术。
应用最广泛最安全的动物细胞基质是Vero 细胞。
Vero 细胞是世界卫生组织(WHO)和《中国药典》认可的疫苗生产细胞系。
Vero 细胞(非洲绿猴肾细胞)是日本学者Ya-sumura 和Kawakita 两人在1962 年正式从非洲绿猴肾脏分离的,首个用于生产人用生物制品的异倍体贴附依赖性细胞,并建立了细胞系和不同代次的细胞库[5].在此之前,对生物制品的研究和生产只允许用原代细胞或二倍体细胞。
早在20 世纪60 年代,美国宾夕法尼亚大学威斯达研究所(Wistar In-stitute )选择人二倍体细胞WI-38 培养狂犬病毒,并用MRC-5 等二倍体细胞生产多种疫苗,如甲肝疫苗、脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)和风疹病毒疫苗。
无血清培养基及应用
无血清培养基及应用
无血清培养基及应用
无血清培养基专门用来在无血清条件下培养特殊类型的细胞或进
行特殊应用。
无血清培养基的使用展现了一种重要的培养方法:允许细胞培养
在一套限定条件下进行,尽可能避免受到干扰参数的影响。
使用无血清培养的优点:
? 增加确定性。
? 性能更加一致。
? 容易进行纯化和后期处理。
? 对细胞功能进行精确评估。
? 增强生长和/或产量。
? 生理反应性的更好对照。
? 加强细胞内介质的检测。
某些应用可能需要添加生长因子和/或细胞因子。
术语表:
无血清培养基—无血清培养基无需添加血清,但可能含有离散
的蛋白或大块蛋白片段。
无蛋白培养基—无蛋白培养基不含有蛋白质,但可能含有植物或酵母的水解产物。
很多无蛋白培养基都不含动物来源成分。
符合化学定义的培养基—符合化学定义的培养基不含蛋白质、
水解产物或其它未知成分。
这些培养基不含动物来源成分,并
且所有成分都有已知的化学结构。
不含动物来源物的产品—不含动物来源物的产品不含有直接取
自高等真核生物(如哺乳动物(包括人)、鱼、鸟、昆虫等)的动物
组织、细胞或体液的材料。
“动物来源”一词不适用于低等真
核生物,如高等植物、真菌、原生动物和藻类,也不适于原核
生物,如细菌或蓝绿藻。
无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立
无血清培养基培养 Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立摘要:文章主要是分析了Vero 细胞无血清培养基的组成,在此基础上讲解了Vero细胞无血清细胞培养基的发展,望可以为有关人员提供到一定的参考和帮助。
关键字:Vero细胞;无血清培养基;研究进展1、前言当前现代细胞工程的不断发展,无血清培养基培养Vero细胞作为其中的基质生产疫苗已被广泛的应用,市场上的商品化Vero细胞无血清培养基主要是使用到无血清培养基以及无血清无动物源成分的培养基,其可以有效维持到细胞在体外的生长以及增值,但其中还是存在了一定的污染可能,这会在一定程度上使得疫苗存在一定风险。
2、组成2.1、基础培养基葡萄糖是血液生长、增殖和产物表达过程中的重要能量来源。
通过对血清培养Vero细胞中枢代谢的研究,发现葡萄糖主要参与葡萄糖代谢,而谷氨酰胺是三羧酸循环中最重要的碳源。
用天门冬酰胺和丙酮酸钠代替谷氨酰胺作为碳源,才可以有效的减少到了次级代谢的产物(如乳酸和氨)对细胞的伤害,且谷氨酰胺易被降解,在新形成的培养基中加入等量的谷氨酰胺。
2.2、主要添加因子在Vero无细胞培养的早期研究中,主要是加入到了一些牛(人)血清白蛋白和转铁蛋白,然后有效的促进到了细胞的生长。
然而,血清白蛋白不仅能调节渗透压,能够有效的保护到了细胞免受受到机械的损伤,而且能与维生素、脂类激素、金属离子和生长因子结合,使这些物质在血清培养中的活性转移到血清培养中,具有结合毒素和还原蛋白酶的作用。
通过新的研究发现Vero细胞无血清培养物现在用于用植物蛋白质水解酸盐可以替换成了血清白蛋白。
该蛋白质是复杂的,其中主要是包括了氨基酸,寡肽,橄榄果多酚和纤维。
目前,最常用的植物水解产物是大豆植物水解产物,小麦植物水解产物和水稻水解产物。
这些植物蛋白质使疫苗更加安全。
转铁素是无细胞培养物中最重要的额外组分,这可能导致细胞生长抑制。
在没有动物来源成分的Vero细胞培养基研究中,认为铁柠檬酸铁和维生素C的混合物可以取代转铁蛋白。
Vero细胞无血清培养基研究进展
Pr gr s n V e e i r e cne o e s i t rna y M dii
Veo细 胞 无 血 清 培 养基 研 究 进 展 r
苏晓蕊 , 岳 华 , 汤 承
( 西南 民 族 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 , 物 医学 四 川 省 高 等 学 校 重 点 实 验 室 , 动 四川 成 都 60 4 ) 1 0 1
无血 清 培养基 由基 础 培养 基 和添 加 因子 两 大部 分组 成 。不 同 的基 础 培 养 基 中 , 加 因 子 的种 类 和 添 浓 度是不 同的 , 体试 验过 程 中要根 据需 要优 化 。 具
1 1 基 础 培 养 基 .
病毒 和 支原 体 污染 l 。此 外 , 清 中大 量 成 分 复 杂 2 ] 血 的 蛋 白质会 给 疫 苗 、 胞 因 子 和 单 克 隆 抗 体 等 生 物 细
定 性考 虑 , 统 的培 养 基 还 是 有 一 些 缺 陷 。 由于 血 传 清所 含 的化 学 成分 不 确 定 , 个 批 次 之 间 也 存 在 着 每
差异, 同时血 清 的价格 昂贵 , 还容 易 引起 细 菌 、 菌 、 真
1 Veo细 胞 无 血 清 培 养 基 的组 成 r
养 基培 养 Veo细胞 已成 为病毒 疫 苗生产 的 一个 重要 发展 趋 势 。Veo细胞无 血 清培 养基 的组成 包括 基 础培 r r
养 基和 添加 因子 两大部 分 , 常见 的添 加 因子 有 转铁 蛋 白 、 岛素 、 量 元 素 、 长 因子 和 维 生素 等 。论 文 对 胰 微 生 Veo细胞 无 血 清培 养基 的研 究 进展 做 一 综 述 , r 以期 为 Veo细 胞 的 无 血 清 培 养 基 研 制 及 疫 苗 的 生产 提 供 r 参考。 关 键词 : r Veo细胞 ; 无血 清培 养 ; 展 进
一种适于Vero细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法[发明专利]
专利名称:一种适于Vero细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法
专利类型:发明专利
发明人:陈文均,徐念沁,陈巧云
申请号:CN201510664916.1
申请日:20151015
公开号:CN105176916A
公开日:
20151223
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明属于细胞培养领域,具体涉及一种适于Vero细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法,所述培养基包括氨基酸、维生素、无机盐、微量元素及其他组分。
本发明制备的适于Vero细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法,具有无蛋白、无动物源成份、化学成份明确几大优点,在工业上减少了血清对细胞培养过程的干扰,降低了生产成本,为细胞的产业化生产带来极大方便。
申请人:南京三生生物技术有限公司
地址:210032 江苏省南京市浦口高新区星火路10号A座601室
国籍:CN
代理机构:常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙)
代理人:陈书华
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V ero细胞是日本学者Yasumura等于1962年从正常成年非洲绿猴肾分离获得的贴附依赖性细胞系, Vero一词由世界语中的verde(意为绿色的)和reno意为肾脏的)两个词合并而成。
Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。
与用作疫苗生产的原代细胞、二倍体细胞和其他一些传代细胞基质相比,Vero细胞具有以下特点:①来源方便,可连续传代,生长速度快;②对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高;③遗传性状稳定,恶性转化程度低,生物安全性较高;④培养条件要求不苛刻,易于在生物反应器实施大规模培养。
疫苗的接种对象主要是大范围的健康人群,其质量和安全性一直是备受关注的首要问题。
疫苗的质量和安全性在很大程度上取决于疫苗的生产方式和过程。
血清是一种组分复杂而尚不完全明确的混合物,至少含有1 000种不同的蛋白质,总蛋白量高达60~150g/L,它能为细胞的体外培养提供必要的生长因子、激素、细胞贴附因子和营养成分。
受Vero细胞自身的贴附依赖生长特性和动物细胞培养技术发展进程的影响,本世纪之前的V ero细胞培养及病毒疫苗生产均存在着对血清的依赖。
血清组分的复杂性和不确定性,以及其中存在病毒等病原微生物污染的潜在风险,影响着病毒疫苗的生产工艺和疫苗质量。
从病毒疫苗生产工艺角度考虑,血清组分的复杂性和批次间的质量差异增加了病毒疫苗生产的不稳定性和产品质量控制的难度;从病毒疫苗的安全性角度考虑,血清中潜在的病原微生物,如引起牛海绵状脑炎的阮病毒,给疫苗的使用带来了不容忽视的安全隐患阎。
由血清使用所造成的细胞培养过程和细胞表达产物安全性的不确定因素增加的现实问题,成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动因。
随着动物细胞无血清培养技术的不断进步,为包括V ero细胞在内的动物细胞大规模无血清培养技术的应用提供了必要的技术支撑,无血清培养已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势问。
2010年,美国、欧盟和日本等发达国家将全面停止在生物制药中应用血清,FDA将停止含血清细胞培养工艺生产的生物技术新药的申报受理。
Vero细胞无血清培养基的研究和商业开发1.1 Vero细胞无血清培养基的研究培养基是影响体外培养细胞生长代谢、增殖乃至生存的最直接和最重要的环境因素。
Vero细胞无血清培养的技术关键在于无血清培养基的设计和优化。
设计Vero细胞无血清培养基组成配方的技术核心是筛选和确定具有促进细胞贴附生长、维持细胞存活、提高病毒扩殖效果的培养基组成成分。
基于细胞生长和代谢的高通量分析及Plackett-Burman实验设计和Box-Behnken响应面设计是Vero细胞无血清培养基设计和优化的主要技术。
V ero细胞的培养需要在适宜的介质表面贴附、铺展才开始有丝分裂、增殖,病毒的有效感染和增殖也有赖于细胞的贴附生长状态。
此外,在某些病毒疫苗(如流感病毒疫苗)的生产过程中,需要在培养基中加人一定浓度的胰蛋白酶以提高病毒的感染和增殖效率。
另一方面,病毒的感染和增殖不仅是细胞代谢负荷不断加大的过程,也是细胞病变、以致凋亡和坏死、甚至裂解的渐进性过程。
V ero细胞无血清培养基的设计和优化相对于应用于动物细胞悬浮培养工艺生产重组蛋白、特别是治疗性抗体生产的无血清培养基更具挑战性。
设计Vero细胞无血清培养基的较为便捷和有效的策略是以DMEM,F-12,M199和RPMI1640等商品化的合成培养基的单独使用或联合使用为基础培养基,以反映细胞生长和代谢的主要参数为评价指标,结合统计学方法确定向其中添加生长因子、激素、结合蛋白及豁附因子、微量元素、脂类和脂类前体物等的种类和浓度。
无血清培养基中常用的黏附因子主要是存在于细胞间质和血清中的胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白,如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白和胶原等。
其中,纤粘连蛋白和层粘连蛋白不仅具有提高细胞的砧附力及活力的作用,同时在促进有丝分裂中也起着重要的作用。
某些含有精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(RGD)序列的短肤也能够有效地促进Vero细胞贴附到以聚苯乙烯和醋酸纤维素为材料的介质表面。
Vero细胞无血清培养基的优化主要涉及以下两方面。
其一,从提高病毒疫苗安全性的需要出发,以非动物来源成分替代动物来源成分、化学组分明确成分替代化学组分不确定成分,其二,从提高病毒疫苗生产效率的目的考虑,根据细胞生长和代谢动力学特征优化培养基的组成。
基因组学技术和蛋白质组学技术是近年来用于细胞培养研究的新工具,在分子水平对细胞培养过程认识的深人,可以更准确地预测和判断体外培养细胞的生长和代谢状态。
另外,通过抗体芯片遴选参与细胞培养调控过程的细胞表面受体、黏附分子及信号通路相关生物分子,可以相应地确定在培养基中添加配体或其他生物分子来调控细胞增殖、凋亡、分化、黏附和外源基因表达。
分子生物学技术在动物细胞培养基优化设计中的应用,不仅为有针对性和预见性的无血清培养基组分筛选提供了理论指导,也为无血清培养基组分筛选提供了高通量和精确灵敏的高效技术手段。
目前,基因组学技术和蛋白质组学技术已成为国外大型培养基商业开发机构和生产商进行无血清培养基优化设计的主要技术手段。
1.2 Vero细胞无血清培养基的商业化开发与添加血清的合成培养基相比,无血清培养基的细胞适用谱系窄,往往一种培养基只适用于一种细胞类型甚至某一特定的细胞系,适用于其他细胞系的商业化无血清培养基用于Vem细胞培养往往不能获得满意的效果。
受Vero细胞无血清培养基市场需求的驱动,商品化的Vero细胞无血清培养基从数量到质量都在不断提高,MDSS2,VP-SFM,OptiPm SFM和EX-CELLVERO是较具代表性的产品。
MDSS2是由AXCELL Biotechnologies公司推出的最早商品化的Vero细胞无血清培养基之一,该培养基也可用于BHK和MDCK细胞培养,其支持细胞生长和病毒增殖的效果与含血清培养基相当。
由于MDSS2的蛋白含量高达40 mg/L,且其中含有动物来源成分,其市场份额已基本丧失。
VP-SFM(virus pro-duction-serum free media )是由世界上最大的细胞培养产品生产商GIBCO/Invitrogen公司推出的产品。
该培养基的优点是不含动物来源成分、蛋白含量低、细胞生长速度快且不需要VP-SFM适应、病毒增殖效果,OptiPro SFM是GIBCO/Invitmgen公司推出的无动物来源成分、化学成分明确的无血清培养基,该培养基除用于V ero细胞的贴壁培养和微载体培养外,也适用于多种由肾组织衍生的病毒生产细胞,如MDBK,BHK-21,PK-15等细胞的培养,EX-CELL VERO是由JRH公司推出的用于Vero 细胞高密度培养的无血清培养基。
该培养基含有重组蛋白和植物来源的水解物,蛋白含量低,不含动物来源成份、酚红和PlumnicF68o ,vero细胞在EX-CELL VERO中培养的细胞密度和病毒滴度与其在含血清培养基中达到的水平相当,但由含血清培养基转人EX-CELL VERO培养存在短暂的适应过程。
目前,商品化Vem细胞无血清培养基存在诸如培养基大多以液体的形式提供、价格昂贵、培养基的成分配方秘而不宣的问题。
这在很大程度上限制了Vero细胞无血清培养基在病毒疫苗生产中的实际应用。
针对这一现状,国外的疫苗生产企业往往选择由企业的研发部门结合特定细胞系和生产工艺设计出无血清培养基的组成配方,再委托培养基生产商生产的方式来降低无血清培养基的使用成本。
2 Vero细胞的无血清培养2.1培养模式Vero细胞在无血清培养基中的生长和代谢可能与其在含血清培养基中有所不同,但不存在培养模式的差异。
Vero细胞的贴附依赖生长特性,决定了其需要在适宜的介质表面贴附、铺展为前提的贴壁培养(anchorage-dependent culture)模式。
Vero细胞贴壁培养的最经典和简便的方法是以方瓶和转瓶的内表面为介质贴附生长。
这些培养体系所能提供的细胞生长面积有限,细胞培养规模的放大只能依赖培养单元的增加,由此给疫苗生产带来诸如污染风险大、生产效率低、产品质量可控性差及人力资源需求大等弊端fuel。
微载体培养(micmcarrier culture)是融合悬浮培养优点的一种特化的细胞贴壁培养模式,也是最有应用价值的Vero细胞无血清培养模式降卜别。
其基本特征是细胞贴附于微载体表面并随其共同悬浮于培养基中生长。
微载体的应用不仅大大增加了单位培养体积中细胞赖以生长的表面积,同时也加大了细胞培养过程监测和控制及细胞培养规模放大的可实施程度。
与悬浮培养相比,微载体的使用不仅加大了细胞培养的成本,也给培养规模的放大带来了不便。
受BHK细胞(baby ham-ster kidney cells)和CHO细胞(Chinese hamster ovary cells )规模悬浮培养在口蹄疫疫苗和重组蛋白药物生产中成功应用影响,Vero细胞无血清悬浮培养成为新近兴起的研究的热点Daelli等四通过驯化,建立了能够在无血清培养基中以单个悬沼细胞形式生长的Vero细胞系;刘冬连等从细胞生产和病毒榨殖效果对采用Vero细胞无血清悬浮培养模式生产病毒疫苗的瓦行性进行了初步验证。
Vero细胞无血清悬浮培养不是单纯的操养模式间题,更涉及到Vero细胞悬浮生长是否增加细胞的恶性转化倾向,以及由此生产的疫苗的安全性和免疫原性评价的科学问题。
2.2微载体Vero细胞无血清培养中使用最多的微载体是以交联葡聚糖为基质材料的实体微载体Cytodex-1和Cytodex-3,to Cytodex-1微载体由阳性二乙氨基乙基基团均匀分布于交联葡聚糖构成,整个基质都带正电荷,其电荷密度为1.52.0 meq/g, 1 g Cy-todex-1所提供的表面积为4 400 cm2,约能支持6x108个细胞生长。
Cytodex-3由变性胶原包被交联葡聚糖基质构成,对细胞具有良好的亲和性。
1 g Cytodex-3所提供的表面积为2 700 cm2,约能支持4.6x108个细胞生长。
在所用无血清培养基能有效支持Vero细胞贴附于微载体表面生长的前提下,选用Cytodex-1可获得较高的细胞密度或减少微载体的用量。
如所用无血清培养基不能有效支持Vero细胞贴附于微载体表面,则可选用Cytodex-3或其他有孔隙结构的载体,如以纤维素为基质的CytoporeYokomizo等证实,0.5 g/L Cytopore可支持Vero细胞达到2.1×106/mL 的培养密度,与2 g/L Cytodex-1的细胞密度相当。
Toriniwa等在VP-SFM培养基中用以聚对苯二甲二乙酷( polyethyleneterephthalate)制成的条状载体BioNOCII固定化培养Vero细胞的密度达到5.6x106/mL,而作为实验对照的3 g/LCytodex-1所达到的细胞密度仅为1.8x106/mLo BioNOCII需要以填充床的形式与特定的生物反应器配套使用,细胞培养过程监测不便和规模放大困难的问题可能成为其推广应用的限制因素。