石蜡制片方法
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作试验药品和仪器试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。
试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。
试验方法1 叶片组织结构的观察对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。
具体操作步骤如下：1. 取材。
选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2mm x 5mm 的小段。
2. 固定。
将切取的植物材料立即放入FAA 固定液中（材料与固定液比例1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰），固定时间48h以上。
FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按18:1:1的比例配置。
3. 冲洗。
材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h,并在70%酒精中过夜。
4. 脱水。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行：70%酒精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精，每级酒精中放2h，无水酒精分2次，一次2h。
5. 透明。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。
材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1〜2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红染色，以便透明后找到材料）一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒精一二甲苯一二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放1h。
材料进入无水的透明剂中后，若透明剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到前面一级无水的脱水剂中再次脱水。
6. 浸蜡。
夏季采用熔点较高的石蜡（56-58）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52-54）。
新蜡应溶一次，增加密度，反复溶的旧蜡包埋效果更好。
在溶蜡箱中进行55-60C，恒温。
石蜡切片流程范文
石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。
下面是石蜡切片制备的详细流程。
1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。
最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。
将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。
2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。
通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。
3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。
可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。
4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。
选择适当的石蜡类型和温度很重要。
通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。
5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。
首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。
6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。
将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。
然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。
7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。
通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。
将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。
8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。
轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。
然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
生物显微技术 第一章 石蜡切片制作技术
三、包埋
是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起 倒入一定形状的容器内，并立即投入冷水中， 使它凝固成含材料的蜡块，以备切片。
从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋 用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，用温镊 子夹取材料平放于纸盒底部，使之排列整齐。 将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆 的水面，待石蜡的表面凝固，将 纸盒慢慢 浸入水中，待石蜡完全凝固（约30分钟） 后即可取出备用。
包埋前应先把必需的用具（恒温箱、温台、纸盒） 准备好。 包埋用的镊子要先放在温箱中预热。
第五节 切片、展片和贴片
一、切 片 是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。 实验程序 1. 切片前的准备工作 （1）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。 （2 ）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长
四、注意事项
1 透明的注意事项
使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中水 分进入； 更换透明剂，动作要迅速； 材料周围 出现白色雾状，应退回纯酒精中重新脱水。
2 透蜡的注意事项
动物材料常用的石蜡熔点为52-56ºC；植物材料 为54-60ºC。 透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；
3 包埋的注意事项
第一节 动物的选择、杀死和取材
一、动物的选择 根据实验目的选择合适的动物和组织 如：健康状况的选择 观察不同组织、器官选择不同的动物（如：
肥大细胞、肝小叶、环层小体等）
二、动物致死法 根据动物的大小、种类和观察目的不同，进
行适当的选择。 1、麻醉法 2、空气栓塞法 3、断头法 4、击头法 5、股动脉放血法 要求动作迅速、及时取材、迅速固定
第三章 石蜡制片实例
南瓜茎导管、筛管纵切
南瓜茎导管、筛管横切 南瓜茎导管、筛管横切局部放大
制片效果：厚壁组织、导管、细胞核红色，其余部分绿色。
制片步骤
1.取样：锋利刀片将南瓜茎切成小段，横切:0.8cm，纵切:lcm，选髓腔较小样品，便于切片。 2.固定：FAA固定24 h，抽气，并保存于固定液中。 3.软化：经70%乙醇、50%乙醇2〜4 h降至蒸馏水，15%氢氟酸中软化10〜15 d。 4.水洗：自来水流水冲洗24 h，蒸馏水浸洗6 h。 5.整染：苯胺番红中染色48 h。 6.脱水：经30%-50%-70%-85%-95%乙醇，每级3〜4 h， 无水乙醇2次，每次1.5〜3 h。 7.透明、加蜡：5级氯仿透明(每级3〜4h)，纯氯仿2次(每次2h)，加碎蜡2次，置36℃温箱2〜4 d。 8.透蜡、包埋：50%/75%蜡各3 h，纯蜡A/B/C(每杯lh)。包埋时:横切样品竖放，纵切样品卧放。 9.修蜡块、切片：横切片厚度15 μm，纵切片厚度20μm，切前浸水软化。 10.展片、粘片、烘干：每张载玻片粘1个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘，36℃温箱中烘干。 11.脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。 12.复染、脱水及透明：滴注无水乙醇、95%乙醇各4〜5 s，苯胺固绿约0.5〜1 min,再经95%乙 醇、1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯（2次）各约4〜5s，最后置于二甲苯缸中。 13.封片、烘片：加拿大树胶封片后平放在摊片盘上，36℃温箱烤数天（自然干燥）。 14.镜检。
实验日程表(固定-包埋)
日期（日/月）
时间
步骤
第一天 / 上午8:00-11:30
50%乙醇 爱氏苏木精稀释液（原液1份加50%乙醇及乙酸等量混合液1份）
第四天 / 上午8:00 下午2:00
石蜡制片法
石蜡制片法（用于免疫组织化学，HE染色）发布日期:2008-10-27 热门指数:6172 收藏石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。
此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。
除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。
该法多采用旋转式切片机进行切片。
石蜡制片操作程序如下：（一）材料的采集与分割采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。
采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室进行分割固定（如有条件也可在试验地采集后进行分割固定）。
为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。
分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。
分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。
（二）杀死与固定利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。
常用的固定有F.A.A固定液、卡诺固定液等。
将固定液放在具塞小瓶中，投入材料，盖好瓶盖。
用F.A.A 固定液固定，时间至少24小时。
F.A.A固定液既是良好的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。
卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般1~6小时即可，最多不超过24小时。
因卡诺固定液不能做保存剂，所以固定后要用95%、85%酒精浸洗，每级约20min.，然后保存在70%的酒精中备用。
（三）脱水脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。
常用的脱水剂为酒精。
脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。
植物石蜡切片法显微制片技术
取材
用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜的材料，立即固定。 取材的注意事项如下： （1）取材料要新鲜。动作要迅速，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置
对照材料。 （2）所取材料大小要适当：根和茎一般直径≤5mm，切取成5-10mm小段；叶
片一般取过中脉处，切成2-5mm宽、5-8mm长。在切材料时，必须注意 刀片与中轴成直角，两切面平行，否则制成的切片细胞是斜的。 雌、雄 蕊一般不需分割。 （3）取材时间可根据切片要求有所区别。如：在进行植物发育的研究过程时， 需要找到细胞分裂相，一般在晴天的早晨9：00-10：00时取材，此时植 物细胞分裂活动较明显。 （4）取材不易过老，否则制片有难度（过老的材料须在滑走切片机上进行）； 对纵切的材料适当多取材，如根尖、茎尖等，因为切到材料正中的概率 较低。
（五）脱水
• 材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分 解。而且透明剂与水是不相混合的，不利 于材料的透明和包埋等后期处理。因此需 用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让 石蜡渗透进细胞。所以，脱水是制片的关 键环节。脱水剂要求能与水混合，而且能 与其他有机溶剂互相替代。
• 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止 吸收空气中的水分；在更换高一级的脱水 剂时，最好不要移动材料，以免损坏材料。
• 浸蜡是一个渐进的过程，常用的正丁醇。
• 每次浸蜡的时间，视材料大小而调节。
（八）包埋
• 材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡 块，以备切片。
• 操作方法：根据切片材料大小，确定所 需纸盒的尺寸，用表面光滑的磅纸预先 叠好纸盒。
（九）切片
• 即（二）固定
• 将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固 定液中。借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止， 并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变 化。从而达到使组织变硬从而便于切片、增强内含物的折 光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。以新 鲜配制固定液效果较好。固定的时间依材料的种类、性质、 大小等而定。材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上 标签。
(精选)石蜡切片的制片方式
石蜡切片制作大体技术实验器材：转动切片机、镊子、解剖刀、解剖针、玻璃缸或小塑料盆、小烧杯（50ml）、酒精灯、打火机、染色缸、吸管、温台、温箱、毛笔、纱布、双面刀片。
试剂：95%的乙醇、无水乙醇、二甲苯、甲醛、石碳酸、甘油、新鲜鸡蛋清、加拿大树胶、番红、铬绿、熔点48~50℃和56~58℃的石蜡。
、铁帆、苏木精、重铬酸钾、浓硫酸其它：无水CaCl2石蜡切片制作大体技术：石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
应依照要求选取材料来源及部位。
采下的标本要注意保湿，冲洗干净后截取大小适合的样品迅速投入固定液中。
（注意材料切割形状以便于包埋，尤其植物叶片横纵切面）卡诺氏固定液（无水乙醇：冰醋酸=3：1）固定24h，70%酒精保留。
固定液的用量一样为材料块的20倍左右，固按时刻那么依照材料块的大小及松密程度和固定液的穿透速度而定，能够从1小时至数天，一样为数小时至24小时。
从50％开始→70％→85％→95％→无水乙醇（30min）（此步骤需两遍），每次时刻为1～2h；如不能及时进行各级脱水，材料能够放在70％酒精中保留。
脱水乙醇的用量为材料体积的3~5倍。
；用95%的乙醇配制各级脱水乙醇（原无水乙醇中要加入不含结晶水的CaCl2浓度95%,要配浓度y%,那么取yml95%乙醇加上95-y=？ml蒸馏水即可）。
经1/2无水乙醇+1/2二甲苯（氯仿）至纯二甲苯（氯仿）两级透明，每级停留2h。
在1/2无水乙醇+1/2二甲苯时加入少量番红干粉。
在浸入有植物材料的透明剂中投入切成小块的低熔点石蜡，加入石蜡的量溶入透明剂的用石蜡溶液=透明剂体积为原那么。
用浮石蜡（石蜡放入容器中，水浴熔融，掏出石蜡，冷却时不断用玻璃棒搅拌，空气进入，冷却后即为浮石蜡）。
加蜡后放有材料的有盖容器放入35℃的温箱中6h或更长时刻。
以后调高温度至56℃，打开盖子让透明剂蒸发，2h后将石蜡溶液倾去。
实验十二、石蜡切片法(一)取材、固定、洗涤、脱水
五、思考题
1. 为什么切取病理材料时应加对照？ 2. 为什么固定液要以新配为好？
二、试剂与器材 1. 试 剂：10%中性福尔马林固定液、各级乙醇（50% 70%、 50%、70% 50% 70% 85%、95%、100%） 2.器 材：解剖刀、解剖针、剪刀、镊子、解剖盘、 单面刀片、培养皿、吸管、指形管、 橡皮圈、软木塞、胶布、塑料脸盆。
三、实验程序 1．取材：用锋利的刀片切取材料。 2．固定：将已切好的材料放入10%的福尔马林溶液中 固定12-24小时。固定剂一般为组织块体积的10-15倍。 3．洗涤：材料自固定液中取出，放入指形管，加入 半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水 冲洗。流水冲洗时间一般需要12-24小时。 4．脱水：材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。 一般经50%、70%、85%、95%直至纯酒精。每级停留 约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中。
实验十二
石蜡切片法（一）取材、固定、洗涤、脱水
一、实验原理 • 取 材： 用于制片的动植物材料应选择新鲜的，用陈 腐材料制片，往往不能反映材料的真正情况。 • 固 定： 固定是借助化学药品的作用,使细胞组织的形 态保存下来,不使其改变形态和变质。
• 洗 涤:是洗去渗入细胞内部的固定液。因材料中的固 定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶，影响观 察；有的会继续作用，使材料变坏等。 • 脱 水：材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水 剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存。 因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的， 只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入。
石蜡切片的制作过程
石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。
4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。
6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。
7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。
8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。
9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。
10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。
11．封片、烘片：加拿大树胶封片。
封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。
最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。
制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。
4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。
石蜡切片制片流程(番红固绿滴染)
石蜡切片制片流程（番红固绿滴染）1.鲜样FAA（18：1：1）抽气固定24h以上。
2.易碎的材料可用甘油酒精软化剂（1：1）软化1周以上（乙二胺软化剂容易导致颜色变深）。
3.70%酒精浸泡1h。
4.80%酒精浸泡1h。
5.95%酒精浸泡1h。
6.吸水纸迅速吸干，100%酒精浸泡1h。
7.100%酒精浸泡1h。
8.含1/2酒精+二甲苯的溶液浸泡1h。
（若有浑浊，即脱水不完全，需要重新从95%酒精再脱水一次）。
9.纯二甲苯浸泡1h。
10.纯二甲苯浸泡1h。
11.加入约1/4二甲苯体积的碎蜡，放置约半小时，再加入1/4体积碎蜡（也可一步到位）。
12.视混合物熔点而定，40-50℃液体状态渗蜡1-2d。
13.视石蜡熔点而定，50-65℃（高于熔点3-5℃），含1/2二甲苯+石蜡的蜡锅浸蜡2h。
14.含1/3二甲苯+2/3石蜡的蜡锅浸蜡2h。
15.纯石蜡锅浸蜡2d以上。
16.包埋（若材料大、中间有空气可调高温度再抽气）（新蜡不易凝固，可在新蜡锅抽气再用老蜡包埋）。
17.空气中冷却（急剧冷却容易收缩不均而变形），削块成棱台形蜡块。
18.切片（8-20µm，若太薄易碎则调高厚度）。
19.40℃水中展片，用涂有粘片剂的载玻片捞片（展片时间不宜太短，易产生褶皱）（捞片的展片效果优于滴水展片，气泡少），40℃烘干。
20.40-50℃烤片2-3d（比石蜡熔点低5℃左右），让蜡带充分贴在玻片表面。
21.铅笔做好标记，二甲苯浸泡脱蜡20-30min。
22.二甲苯透明10-20min。
23.取出，滴加含1/2酒精+二甲苯的溶液，放置数秒，倾去。
（需要过渡酒精至与染色剂的酒精含量相同的浓度，染色）（以50%番红酒精溶液和95%固绿为例）。
24.滴加100%酒精，放置数秒，倾去。
25.滴加95%酒精，放置数秒，倾去。
26.滴加80%酒精，放置数秒，倾去。
27.滴加70%酒精，放置数秒，倾去。
28.滴加50%酒精，放置数秒，倾去。
水稻组织石蜡制片技术
水稻组织石蜡制片流程材料准备：10ml离心管（或5ml离心管）、胶头滴管、真空泵、切片机、染色缸、烘箱、烘片机，镊子。
酒精、自来水、二甲苯、冰醋酸、甲醛、粘片剂（可用鸡蛋清/甘油=1/1，加防腐剂配成）、染色剂试剂配制：FAA固定液：70%乙醇：乙酸：甲醛=80:5:575%、85%、95%，无水乙醇染色缸内染液：视情况而定，可参考染色步骤。
粘片剂：鸡蛋清/甘油=1：1，再根据量加入少许防腐剂（如苯甲酸钠、山梨酸钾或潮霉素等）处理顺序：离心管中加固定液，材料取好后放入固定液中。
水稻叶片取下后如果不立即放入固定液中，叶片会卷起来。
不要先取材料后加固定液。
一、固定FAA固定液，真空泵抽气（至0.8-0.9间红线后再过十五分钟），过夜注意：固定液体积至少为材料体积的5至6倍。
材料体积较小时，取2ml左右。
石蜡制片不像其他分子实验那样力求精确。
我的做法是将胶头滴管1ml位置沾上标签，每次吸溶液到标签附近即可，比用移液器省力许多。
二、脱水75%酒精―► 85%酒精一95%酒•一无水酒精一＞无水酒一►每步处理各1h。
三、透明（A：酒精B：二甲苯）A/B=3/1——A A/B=U1——► A/B=1/3—— B —— B每步处理各1h。
透明完成后，一般情况下，材料变成半透明玻璃色。
四、浸蜡（B：二甲苯C：石蜡）此步在70度烘箱中B/C=U1——► C1—— C2—— C3注意：B/C=1/1这一步尤其需要注意，因为比较幼嫩的组织遇到石蜡易皱缩，皱缩后的材料石蜡就很难透入了。
解决的方法是让是让石蜡浓度缓慢升高。
二甲苯中石蜡的浓度应该慢慢升高！通常的方法是向有材料的二甲苯溶液中慢慢加浮蜡。
（材料与石蜡块均沉于二甲苯底部，当石蜡溶解时造成材料四周的短时局部石蜡浓度过高会造成材料皱缩变形。
）浮蜡制法：将融化的石蜡在凝固过程中不停地快速搅动，使气泡进入蜡体内，最终凝成蜡块中容有大量小气泡，成为浮蜡。
（搅到蜡快完全凝结时停下，不然就成一摊蜡屑了。
石蜡制片程序-修改后
第一天：脱水：材料（已在70%酒精中）→85%酒精1小时→95%酒精1小时→100%酒精1 小时→100%酒精1小时→1/2二甲苯+1/2纯酒精（加几粒泛红颗粒）（过夜）。
第二天：透明：纯二甲苯2小时→二甲苯+1/3碎蜡（45度温箱2小时）→二甲苯+1/3碎蜡（45度温箱2小时）→二甲苯+1/3碎蜡（45度温箱过夜）第三天：透蜡：混合物（60度温箱2小时）【可以将瓷碗放到包埋机里，设成60度。
之后的60度温箱都这样处理。
提前将包埋机打开，待蜡熔化后再将材料从45度温箱移过来。
】→纯蜡1（60度温箱2小时）→纯蜡2（60度温箱2小时）。
包埋：包埋要整齐，将材料摆好，勿触及到柱头。
第四天：切块：将包埋好的蜡块切成单个材料的小块。
粘块：粘好后，放入小袋子里密封，放于-20度冰箱过夜第五天：修块：块要好好修理，整齐，有利于后续的切片，材料不要暴露出来，留一部分蜡在表面。
切片：厚度8微米。
连续切片切好后用毛笔转移到A4大小的滤纸上，用解剖刀分割成与盖片同样长度的片段【要比盖片稍小些，还有展片的过程，要预留出空间。
】。
【切片前用毛笔将切片机上的刀片内外两侧都清扫干净。
可以提前用抽屉中现有的别的材料的蜡块用6微米切切，看看效果，如果可以就用6微米切。
切片越薄着色和观察的效果越好。
但是如果切的蜡带很碎，或者很难成带，就还用8微米的。
】粘片：载玻片上涂薄薄一层粘贴剂，涂匀后再在上面滴2、3滴蒸馏水，涂抹均匀，把切片用解剖刀转移到载玻片上，靠载玻片右侧粘材料，左侧留出空白写材料信息。
尽量多贴切片，没有柱头的部分不要。
展片：43度温台上放置15秒至切片展开。
烘片：从温台上取下载片，放入载片盒中，45度温箱干燥2天。
第七天：脱蜡：二甲苯1→二甲苯2→二甲苯3→1/2二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→100% 酒精→95%酒精→85%酒精→70%酒精（以上每级10分钟）→50%酒精（加上1%番红）（4天过染）。
第九天：染色：蒸馏水过一下→50%酒精（加入半滴1当量盐酸）（1分半钟）→70%酒精→85% 酒精→95%酒精（这三级每级过一下，用滤纸吸干）→固绿（0.5%，95%酒精）（约5-30秒）→95%酒精→100%酒精→100%酒精（这三级每级过一下）→1/2二甲苯+1/2纯酒精（2分钟）→二甲苯1（5分钟）→二甲苯2（10分钟）→加拿大树胶封片。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
医院快速石蜡切片操作规程
快速石蜡切片操作规程
快速石蜡切片操作步骤：
1、接到标本后快速取材固定；
2、快速脱水、透明、浸蜡、包埋；
3、迅速切片、染色；
4、封片时不得有气泡，不得有树胶外溢；
5、标签必须贴于玻片左侧，编号字迹必须清楚；
6、制片后剩余组织应做常规石蜡包埋切片染色，进一步诊断。
快速石蜡切片相关要求：
1、制片工作一般应在10—20分钟内完成，诊断报告应在30分钟内出具。
2、为了尽量缩短制片时间，必须预先做好有关准备工作。
3、用于组织固定、脱水、透明的试剂和浸蜡用的石蜡应及时过滤、更换。
*注：丙酮、乙醇、二甲苯等为易燃物，进行上述各项流程时，2米距离内不得存在明火；加温脱水和浸蜡过程必须应用隔水温箱，不得使用干烤箱操作。
常规石蜡切片制片方法
常规石蜡切片制片方法组织经系列酒精的脱水，经透明剂的作用，经熔化的石蜡的浸渍，包埋后所切成的切片称为石蜡切片。
组织脱水把含于组织内或细胞内的水份用脱水剂把其置换出来的过程称组织脱水。
不管是正常的组织，还是有病变的组织，都含有不同程度量的水分。
据测定，人体的物质组成约含水55~67%，蛋白质15~18%，脂类10~15%，无机盐3~4%及糖类1~2%[14]。
如果不把这些水分脱去，石蜡切片将无法进行，因为石蜡和水不能混合在一起，所以除去组织中的水分成为制片中的关键，用什么物质才能担当起这个重任呢，至今为止，国内所用的都是酒精。
因它不管在什么样比例的情况下都能和水混合，所以它可以慢慢地将水从组织中置换出来。
酒精脱水力强，对组织又有硬化和易脆的不良影响。
在使用时，通常是从低浓度至高浓度，浓度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，组织经过这一系列处理后，基本可达到脱水的目的。
临床上如使用含酒精的固定液固定组织时，(Carnoy氏、AAF液)组织不需要经过低浓度的酒精，可直接进入95%酒精脱水。
组织脱水，目前常用的有两种方法1.人工组织脱水法该法经济实惠，灵活度高，可根据不同的组织及其大小来确定脱水时间，也可根据不同组织及大小分批进行脱水，其优点是：①可根据不同的组织及大小，任意增减脱水时间，达到脱水目的。
②可随时观察组织的变化，随时中断组织的脱水，不使组织过度硬脆。
③可以多层次地进行脱水。
缺点：①需耗费人力，每个步骤的递增都需要人工完成。
②不能大批量的进行脱水。
③必须在上班完成脱水或者定点于某一浓度的酒精中过夜，晚上无法进行梯度递增。
2.自动组织脱水机脱水法自动组织脱水机的机型品种繁多，大小不一，国内生产的轨道式和圆盘式两种，国外生产的有圆盘式和柜式两种，上述国内外四种型号的机子，我们都使用过，根据使用的效果做一简单介绍。
①轨道式自动组织脱水机。
这种机子容量小，脱水用的试剂不足一千毫升，组织块脱水用的提篮小，每次只能容纳40块组织左右，它适合于较小的单位，但不适合于大单位。
石蜡制片方法
202修与固着 1.选取所要切片的材料，用单面刀片从包埋的 石蜡块上切割下来，注意不可损伤所包埋的组 织。 2.确定切面的方位，用刀片将石蜡的四面作初 步的整修。 3.取一块台木，用镊子夹取少量的碎蜡放于台 木上，后点燃酒精灯，烧热镊子将台木上的石 蜡熔化，迅速将蜡块粘在台木上。 4.再用镊子夹取少许碎蜡放在蜡块四周，后在 酒精灯上将镊子烧热，迅速将蜡块四周的碎蜡 熔化烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。
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▪包埋中出现的问题及其解决办法 ➢问题 包埋后的石蜡块应为均匀的半透明状态， 但有时出现白色混浊的结晶部分，这样在切片时 就有妨碍。 ➢原因 1.脱水不干净。2.组织内部或石蜡中混 有透明剂。3.石蜡本身品质不良。4.纸盒中周围 的石蜡先成凝固状态，中部的石蜡凝固较晚。5. 石蜡冷凝得太慢。 ➢解决办法
3.二甲苯极易挥发，故在切片透明之后，从染 色缸中取出封藏，手续要敏捷，不宜久置，否 则待二甲苯挥发干净后，组织就变硬发白。
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4.二甲苯极易吸收空气中的水分，故在湿 度大的天气，贮有二甲苯的染色缸的盖子周 缘可涂少许凡士林，以防止水分的渗入。在 封片时也不宜将口鼻过分靠近切片，以免水 气侵入，出现白色云雾状。
长度达到20—30cm时，可用毛笔挑起放于白 纸上备用。
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切片
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➢切片过程中常见现象分析 1、蜡片卷曲，主要由于：
a．切片刀不锋利 b．切片刀的角度不正确 c．切片太薄或太厚 d．石蜡太软或太硬(与温度有关) e．蜡块中的材料不在中央 2、材料与蜡片分离 石蜡温度与材料温度不一致。 3、蜡片上有条纹，是因为切片刀上有缺刻。 4、蜡带不成直线，是因为蜡块上下不平整。 5、蜡片破碎不成蜡带而吸附于切片刀上，由于材 料过脆与切口摩擦产生静电的原因。
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纸合的折叠方法
3.在脸盆内放入冷水备用。 4.点燃酒精灯，准备好1把镊子，1支拨针。 包埋的操作过程 1 、右手持镊子，左手从恒温箱中取出盛满熔 化石蜡的小瓶，并随手将恒温箱的门关闭，立即 将小瓶中的石蜡和材料一起倒入包埋用的纸盒中， 如果纸盒中蜡的量少，可再加入适量的蜡。 2 、材料倒入纸盒后，将镊子在酒精灯上烧热， 将材料分开，使材料之间保持一定的距离，并注 意材料的方向。
3 、将拨针烧热，沿着纸盒的边缘以及材料 的周围轻轻移动，目的是将蜡中的气泡赶走 和使蜡凝固时较均匀。 4 、将标签插入纸盒的边缘，并将有字的一 端露在外面。 5 、轻轻将纸盒平放在脸盆的水面上，待纸 盒内石蜡的表面已凝固，即可将纸盒沉入水 中，使包埋块迅速冷却。 6、纸盒在水中经 30分钟到1小时后即可取出， 将纸盒打开取出包埋的蜡块备用。
2.如果需要切很薄的片子(4微米以下)， 可用熔点58—60℃的石蜡，较厚的则用
熔点52—54℃的。
3.根据当地当时的气候条件，夏天气
温高时，通常用56—58℃的蜡，冬天气
温低时用54—56℃的蜡。
石蜡
性质好的石蜡，必须具备的条件 (1)熔点已知。 (2)结构细致，光滑而均匀。 (3)无灰尘、水分及挥发性物质等。 鉴定石蜡品质优劣的方法 可先将石蜡熔化，倒入纸匣中凝成蜡块，如品 质优良，则具备下列特点： (1)无气泡，无不透明的点子和裂痕。 (2)蜡块断裂后，其断裂面不呈颗粒状。 (3)如果将它切成薄片，不会碎成细粒。
(2) 由 FAA 固定的草本茎，每级停留 2 小时， 木本茎停 4 小时，较大的木材每级应延长为 8— 12小时。 (3) 脱水至纯酒精时，需更换二次，每次 30 分钟到1小时；材料大者，可多换一次。由95％ 换100％酒精时，瓶子上的塞子也应更换干燥的， 以免有水分渗入。 (4) 已制成的切片，在染色缸中脱水时，每 级停留时间约为3—10分钟。 (5) 脱水时应按顺序进行，级度不宜相差太 大，一般应按第1项所配各级浓度进行。
（4）纳瓦兴氏液(Navaschin’s Fluid) 适用范围：植物组织及细胞学的研究 配方： 甲液： 10％铬酸 15毫升 冰醋酸 10毫升 蒸馏水 75毫升 乙液： 福尔马林 40毫升 蒸馏水 60毫升 在使用之前，才将甲、乙两液等量混合。材料 经固定之后可在此液中长期保存。 处理：固定时间为24-48小时，固定后可直接在 蒸馏水中洗几次，再继续脱水。
透明 透明的目的 主要目的： 1 、替代组织中的酒精或丙酮， 使石蜡能很顺利的进入组织中。 2 、增强组织 的折光系数。3、能和封藏剂混合进行封藏。 透明剂的特性 必须具有既能与脱水剂相溶又能与包埋剂相 溶的特性。 透明剂的种类 常用的明透剂有二甲苯、甲苯、苯、氯仿、 香柏油和苯胺油等，二甲苯为最常用的透明剂。
蜡块切修
将蜡块粘在台木上
整修蜡块时，应注意的问题 1. 应将蜡块的前后、左右四个面，两两 修成平行的面，这样切成的蜡带就成直线， 如果两面不平行，切成的蜡带将弯曲。 2. 将蜡块四周多余的蜡修掉，但注意不 要太靠近组织，特别是不要将组织露在外 面。
切片 1. 将粘有蜡块的台木装在切片机的装物部位 上。 2.检查刀口是否锋利，是否有缺口。 3.调整刀片的角度，一般以5—8℃为宜。 4. 蜡块切取面和刀口必须平行，并使刀口恰 好邻近蜡面，切忌蜡块超过刀口。 5. 调节切片厚度，一般石蜡切片厚度为 8— 10微米。 6. 切片时用力要均匀，速度要适宜。到蜡带 长度达到 20—30cm 时，可用毛笔挑起放于白 纸上备用。
常用固定液的配方
（ 1 ） 福 尔 马 林 [Formalin ， 37—40 ％ 的 甲 醛 (HCHO)] 适 合 固 定 的 浓 度 ： 10 ％ 福 尔 马 林 (3.7—4％甲醛) （2）卡诺氏液(Carnoy's Fluid) 适用范围：适用于胚胎学、细胞学研究。 配方： (1) 纯酒精 3份 冰醋酸 1份 (2) 纯酒精 6份 冰醋酸 1份 氯 仿 3份
（3）福尔马林——醋酸——酒精混合液(FAA) 适用范围：适用于植物各器官解剖结构的观察， 但不适于染色体观察研究。 配方： 50％或70％酒精 90毫升 冰醋酸 5毫升 福尔马林 5毫升 处理：1、一般柔软材料，可用50％酒精。 2、固定时间最短需18小时，也可无限期延长。 3、冲洗时材料可直接换入 50％或70％酒精中洗一、 二次，木质材料在流水中冲洗 48 小时，并在酒精 (50％)和甘油溶液(1：1)中浸2、3天，使它软化。
4.二甲苯极易吸收空气中的水分，故在湿 度大的天气，贮有二甲苯的染色缸的盖子周 缘可涂少许凡士林，以防止水分的渗入。在 封片时也不宜将口鼻过分靠近切片，以免水 气侵入，出现白色云雾状。 5.二甲苯必须保持无水、无酸。若用一、 二滴石蜡油滴入其中，立即出现云雾状，即 表示其中已含有水分，不能再用。
浸蜡 将石蜡浸入整个组织的过程称为 浸蜡。 包埋剂 包埋所用的各种石蜡，其熔点约在 50— 60℃之间。 石蜡的选择方法 1. 依所包埋的材料不同而异，软的材料 用软石蜡，硬的材料用硬石蜡。一般动物 材料最常用的石蜡熔点为 52—56℃，植物 材料用的石蜡熔点为54—58℃。
固定液的种类和常用固定液的配方 固定液的种类 分为两大类：简单固定液和混合固定液。 1.简单固定液又称单纯固定液 就是用一种化 学试剂作为固定液。种类有：乙醇、福尔马林、 醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞和锇酸等 八种。 2.混合固定液 就是用几种化学药品，按一定 的比例混合配制而成的，由于各种药品的优缺点 互相弥补，因此可产生较好的效果。
脱水方法 1.配制下列各级浓度的酒精： 15 ％， 35 ％， 50 ％， 70 ％， 85 ％， 95 ％， 100 ％。 2. 一般经水洗的材料，脱水可自 35 ％开始， 柔弱的材料自 15 ％开始，若用酒精洗涤，则可直 接移入50％或70％酒精中继续脱水。 3. 在每级中停留的时间，依材料的大小、性 质以及留在固定液中的时间长短和固定液的溶解 性而定。一股的标准是： (1) 如洋葱、蚕豆等根尖和小片叶子一样大 小的材料，每级停留约30分钟到1小时。
卡诺氏液的处理方法和特点 处理：固定时间为12—24小时，也可缩短。 根尖可固定 15 分钟。花药固定 1 小时，子房可 固定 12—24 小时。固定完毕可用 95 ％或纯酒精 洗涤，换二次，经二甲苯与纯酒精等量混合液 过渡，二甲苯透明两次，就可进入石蜡中浸蜡。 如果不立即制片时，可转入70%酒精中保存。 特点：固定液穿透力既强又快，纯酒精固 定细胞质，冰醋酸固定染色质，并能防止组织 由酒精引起的高度收缩与硬化。
透明的方法 为了避免组织收缩，在纯酒精或丙酮脱水以 后，必须经过几个级度，逐渐置换，最后移入 二甲苯中。酒精与二甲苯混合的比例列表如下：
级别
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
纯酒精
二甲苯
2/3
1/3
1/2
1/2
1/3
2/3
0
1
在透明时应注意的问题
1.如材料内仍留有微量水分，二甲苯就进不去， 因此石蜡也不能透入，切片后将在蜡片上出现 空洞。 2.切片内留有微量水分，在封藏以后，就会发 生乳白色的云雾状，在显微镜下观察时，可见 许多密集水珠把组织掩盖，影响观察。 3.二甲苯极易挥发，故在切片透明之后，从染 色缸中取出封藏，手续要敏捷，不宜久置，否 则待二甲苯挥发干净后，组织就变硬发白。
冲洗 目的 材料自固定液中取出后，须立即冲洗，使其 中含有的固定液全部除去，—直到洗净为止，否 则防碍染色和保存。 冲洗液的选择 冲洗液应依固定液的性质而定，一般水溶性 的固定剂用水来冲精洗涤法
脱水 脱水的目的 目的：除去组织中的水分，使组织变硬。 原因：水和石蜡是不溶的，经过脱水剂将 水分脱净，透明剂透明后，才能进入包埋阶段。 脱水不干净，影响制片效果，甚至完全失败。 脱水剂及其脱水方法 脱水剂 最常用的脱水剂为酒精。此外还有丙酮、 正丁醇和叔丁醇等。
石蜡的清净方法 1. 将石蜡放入锅中加热到开始冒白烟后
为止，使其中的水分及挥发性杂质逐渐被
蒸发掉。 2. 热过的石蜡放在温暖处慢慢冷却，这 样就可使其中的灰尘等杂质颗粒沉下去。 3. 待石蜡的表面已凝为固体时，即可慢
慢地将上面的石蜡倒在纸匣或其它容器中，
把下面沉淀的杂质留下来。
浸蜡方法 (1)将组织留在透明剂中，在透明剂上轻轻倒上 一层已熔化的石蜡，其分量比例约为3：2。 (2) 倒入的石蜡即凝成固体，然后将材料放在 35—37℃之间的熔蜡炉内，经一、二天到石蜡不 再继续熔化时为止。 (3) 将材料移入 56—60 ℃的恒温箱中停留 2—5 小时，待石蜡融化后换纯蜡。 (4)换二、三次新鲜纯石蜡，使留在组织内的透 明剂全部排除后即可包埋。
浸蜡过程应注意的问题 1. 尽量保持在较低温度中，以石蜡不 凝固为度。 2. 力求在最短时间内完成石蜡的浸透 过程。因为温度过高或时间过长都会引 起组织变硬、变脆、收缩等，影响制片 效果。
包埋
被石蜡浸透的组织连同熔化的石蜡，一起 倒入纸盒内，并投入冷水中，使它立刻凝固 成蜡块的过程。 包埋前的准备工作 1.摺包埋用的纸盒并写好标签。 2.检查恒温箱中所熔的新鲜石蜡是否够 用。
切片
蜡块的分割、整修与固着 1.选取所要切片的材料，用单面刀片从包埋的 石蜡块上切割下来，注意不可损伤所包埋的组 织。 2.确定切面的方位，用刀片将石蜡的四面作初 步的整修。 3.取一块台木，用镊子夹取少量的碎蜡放于台 木上，后点燃酒精灯，烧热镊子将台木上的石 蜡熔化，迅速将蜡块粘在台木上。 4.再用镊子夹取少许碎蜡放在蜡块四周，后在 酒精灯上将镊子烧热，迅速将蜡块四周的碎蜡 熔化烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。
切片
切片过程中常见现象分析 1、蜡片卷曲，主要由于： a．切片刀不锋利 b．切片刀的角度不正确 c．切片太薄或太厚 d．石蜡太软或太硬(与温度有关) e．蜡块中的材料不在中央 2、材料与蜡片分离 石蜡温度与材料温度不一致。 3、蜡片上有条纹，是因为切片刀上有缺刻。 4、蜡带不成直线，是因为蜡块上下不平整。 5、蜡片破碎不成蜡带而吸附于切片刀上，由于材 料过脆与切口摩擦产生静电的原因。