第6章 细菌对抗菌药物敏感性与耐药性

者感染部位通常所能达到的药物浓度不能抑制菌株的生长；和/
或证明MIC或抑菌圈直径可能处于特殊的微生物耐药机制范围
（如β-内酰胺酶），抗菌药物对菌株的疗效尚未得到临床治疗
研究的可靠证实。
19
一、药敏试验的抗菌药物选择
临床微生物实验室应选择先进、方便的方法 甘
肃
进行常规的抗菌药物敏感试验，常用的药敏方法 医
少应用于临床。
医 学
第二代喹诺酮类对革兰阴性和阳性细菌均有作用, 比较这类 院
药的抗菌活性强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、罗美沙星、
氟罗沙星、培氟沙星及诺氟沙星。
第三代喹诺酮类主要包括司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、 加替沙星、格帕沙星及莫西沙星，对革兰阳性菌作用高于第 二代的4~8倍，对厌氧菌亦有作用，。
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九、氯霉素类
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甘
氯霉素类抗生素包括氯霉素、甲砜霉素。其
肃 医
学
作用机制为作用细菌70S核糖体的50S亚基，使肽 院
链延长受阻而抑制蛋白合成。氯霉素对许多革兰
阳性菌和革兰阴性菌、支原体、衣原体和立克次
体有抗菌活性。
15
甘 肃 医 学 院
第二节 抗菌药物敏感试验 16
分为PBP1,PBP2,PBP3等，PBP1分子量最大。
青霉素结合蛋白-转糖基酶、转肽酶、D-羧肽酶、
内肽酶。
5
一、β-内酰胺类
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（一）青霉素类
甘
肃
青霉素类抗生素主要包括天然青霉素、耐青霉素 医
学
酶青霉素、广谱青霉素、青霉素+β-内酰胺酶抑制 院
剂 （二）头孢菌素类
测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低
抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。 21
二、纸片扩散法
（二）步骤
甘
1.水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂
肃 医
厚度4mm，直径90mm的平板
学
院
2.挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管
中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准
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糖苷类抗生素对需氧革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，
对阳性球菌有一定的活性。
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三、大环内酯类
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目前国内常用的有红霉素、柱晶白霉素、麦迪霉 甘
素、乙酰螺旋霉素。新一代大环内酯类有克拉霉素、
肃 医
罗红霉素、地红霉素、氟红霉素、阿奇霉素、罗地霉
学 院
素和美欧卡霉素。
其作用特点和机制是：①可逆结合细菌核糖体50S
1.影响纸片扩散法的因素
学习目标：
甘
1．掌握 抗菌药物敏感试验常用方法，纸片扩散法（K-B法）肃
医
的操作方法、结果判断及实验质量影响因素。
学
院
2．了解 耐药表型检测；β-内酰胺酶检测方法；超广谱β-
内酰胺酶（ESBLs）检测方法。
3．了解 临床常用抗菌药物种类；药敏试验中药物选择原则。
本章重点：★纸片扩散法（K-B法）的操作方法及结果判断
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二、பைடு நூலகம்片扩散法
6.平板置35±2℃孵育箱，16～18小时后判读结果。苛
甘
养菌应在含5%CO2环境中培养20～24小时
肃
医
7.用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。按照CLSI标准 学
院
判读，报告敏感、中介、耐药（P100）
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甘
释法的原理和特点，对抗菌药物直接测量MIC。E试条 肃
医
为宽5mm、长50mm的无孔试剂载体，一面固定有浓度呈 学 连续指数增长的抗菌药物，另一面有所含药物浓度的 院
刻度。
细菌生长区
E test 塑料条
256 128
椭圆形 细菌生长 抑制区
8
判读抑菌浓3度3
016
（MIC ug/ml)
四、E-test法
甘
肃
医
第六章
学
院
细菌对抗菌药物敏感性与耐药性
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《病原生物学教研室》
1
本章内容
1 第一节 临床常用抗菌药物
甘
肃
医
2 第二节 抗菌药物敏感试验
学 院
3 第三节 细菌的耐药性检查
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2
学习目标
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24
甘 肃 医 学 院
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甘 肃 医 学 院
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甘 肃 医 学 院
27
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二、纸片扩散法
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甘
（二）质量控制
肃 医
对于肠杆菌科细菌，M-H琼脂，生长法或直接菌
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八、林可霉素类
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甘
林可霉素类包括林可霉素和克林霉素。主要作
肃 医
用于革兰阳性球菌和白喉棒状杆菌、破伤风梭菌等
学 院
革兰阳性杆菌。
其作用机制是与细菌50S核蛋白体亚基结合， 抑制蛋白合成，并可干扰肽酰基的转移，阻止肽链 的延长。
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七、四环素类
甘
四环素分为短效、中效和长效，短效四环素有 肃 医
：土霉素、四环素；中效四环素有：地美环素、美 学 院
他环素；长效四环素有：多西环素、米诺环素。其 作用机制主要与细菌的30S核糖体亚单位结合，阻止 肽链延伸，抑制蛋白质合成。临床上四环素类常作 为衣原体、立克次体感染的首选药物。
大亚基的23S单位，抑制细菌蛋白质合成和肽链延伸；
②肺部浓度较血清浓度高；③新一代大环内酯类具有
免疫调节功能，能增强单核-巨噬细胞9 吞噬功能。
四、喹诺酮类
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第一代喹诺酮类为窄谱抗生素, 主要有奈啶酸，对革兰阳性 甘
球菌无作用, 主要用于大肠埃希菌，且迅速出现耐药，已较 肃
学 院
落悬液法，相当于0．5麦氏标准的细菌浓度，35
℃±2 ℃，空气，16～18小时观察结果，质控菌株推
荐为大肠埃希菌ATCC 25922，大肠埃希菌ATCC 35218
（为监控β内酰胺酶/β内酰胺抑制剂纸片用）。
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纸片扩散法图解
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敏感
抑菌圈 细菌菌落
细菌生长
喹诺酮类作用机制是：①通过外膜孔蛋白和磷脂渗透进入细
菌细胞；②作用DNA旋转酶，干扰细菌DNA复10 制、修复和重组。
五、糖肽类和环脂肽类
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糖肽类目前有万古霉素、替考拉宁。万古霉素 甘
肃
和替考拉宁对革兰阳性球菌具有强大的活性,对MRS 医
学
非常敏感
院
达托霉素（daptomycin）为环脂肽类抗生素，
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一、药敏试验的抗菌药物选择
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甘
临床微生物实验室在分离出病原体时，必须选择 肃 医
合适的抗菌药物和合适的方法进行药物敏感试验，抗
学 院
菌药物的选择应遵循有关指南，并与医院感染科、药
事委员会和感染控制委员会的专家共同讨论决定。在
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（一）方法
甘
肃
1.菌液制备及接种均同纸片扩散法。
医
学
2.于90mm平板上可放E试验试条1 ～ 2
院
条，140mm平板最多可放6条。
3. 孵育、温度及时间同纸片扩散法。
4.读取椭圆形抑菌环与E试条的交界点
值即为MIC。
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五、质量控制
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二、纸片扩散法
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(一)实验原理
甘
含有定量抗菌药物纸片贴在已接种测试菌的
肃 医
琼脂平板上，纸片中所含药物吸收琼脂中水分溶
学 院
解后向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓
度。纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑
制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对
我国主要参照美国临床和实验室标准协会（Clinical
and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定
的抗菌药物选择原则。
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一、药敏试验的抗菌药物选择
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甘
我国主要遵循美国临床实验室标准化委员会（CLSI） 肃
医
制定的抗菌药物选择原则。
学
院
A组：包括对特定菌群的常规试验并常规报告的药物；
B组：只在A组药物耐药、过敏、无效时选择性报告; C组：在A、B组药物过敏或耐药时选用；
U组：仅用于治疗泌尿道感染的药物。
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一、药敏试验的抗菌药物选择
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药敏试验的折点遵照每年最新公布的CLSI标准进行。敏感
（susceptible, S）指当使用常规推荐剂量的抗菌药物进行治 甘
肃
疗时，该抗菌药在患者感染部位通常所能达到的浓度可抑制分 医
离菌株的生长。中介意味着该药常规剂量治疗该部位的感染可
学 院
能有效；若某药在高剂量使用时是安全的（如β-内酰胺类药
物），则中介意味着高于常规剂量给药可能有效。耐药
（resistant, R）指使用常规推荐剂量的抗菌药物治疗时，患
★药敏试验的临床意义 3
甘 肃 医 学 院
第一节 临床常用抗菌药物 4
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一、β-内酰胺类
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作用机制
甘
肃
通过抑制细菌细胞壁的合成抑制和杀死细。细菌 医
学
细胞壁的合成是通过青霉素结合蛋白（PBP）催化完 院
成的。各种细菌都有青霉素结合蛋白，按分子量可
它通过扰乱细胞膜对氨基酸的转运，从而阻碍细菌
细胞壁肽聚糖的生物合成，改变细胞质膜的性质；
另外，它还能通过破坏细菌的细胞膜，使其内容物
11
外泄而达到杀菌的目的。
六、磺胺类和三甲氧苄氨嘧啶
甘
磺胺类与对氨基苯甲酸化学结构相似，对氨基 肃 医
苯甲酸是细菌叶酸合成所需的重要因子，磺胺类完 学 院
全抑制细菌对氨基苯甲酸转变成二氢叶酸。三甲氧 苄氨嘧啶（TMP）是抑制二氢叶酸还原酶的一种嘧 啶类似物，干扰叶酸代谢及其后的嘧啶合成和细菌 的一碳单位代谢。
学
包括纸片扩散法（disc diffusion test）、稀释 院 法 (dilution test)、E-test法和自动化仪器法 ，稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微量肉汤稀释法(microdilution test)、 琼脂稀释法(agar dilution test)。
头孢菌素类根据发现的先后和抗菌作用将其命 名为第一代、第二代、第三代、第四代头孢菌素
6
一、β-内酰胺类
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（三）其他β内酰胺类
甘 肃
医
1．单环类 单环内酰胺类抗生素主要有氨曲南和卡 学
院
芦莫南。对革兰阴性菌作用强。
2．头霉素类
头霉素类(cephamycins) 有头孢西丁、头孢替坦、 头孢美唑。
耐药
甘
肃
医
学
院
药敏纸片
抗生素浓度
29
三、稀释法
以一定浓度的抗菌药物与培养基进行一系列 甘 肃
不同倍数稀释，经培养后观察被试菌株的最低抑
医 学
菌浓度，根据CLSI提供的MIC解释标准判断细菌 院
对抗菌药物的敏感程度。稀释法中使用肉汤培养
基为肉汤稀释法，使用琼脂培养基为琼脂稀释法。
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三、稀释法-肉汤稀释法
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浓度 4
8
混
甘 肃 医 学 院
16
32
64
128 256 μg/ml
清
抗菌药物素倍比稀释，接种菌105CFU/ml ， 孵育温度35℃，16～20h，判读结果。
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三、稀释法-琼脂稀释法
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二、氨基糖苷类
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甘
按其来源分为：①由链霉菌属发酵滤液提取获 肃
医
得,有链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴 学 院
龙霉素、新霉素；②由小单胞菌属发酵滤液中提取,
有庆大霉素、阿司米星；③半合成氨基糖苷类，有阿
米卡星、奈替米星、地贝卡星(dibecacin)等。氨基
浓度 16
32
甘 肃 医 学 院
64
128 256 μg/ml
制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液 ，点种菌，104/每点，孵育35℃，16～20h ，判读 结果
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四、E-test法
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E-test法（epsilometer test）结合了扩散法和稀
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二、纸片扩散法
3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液。
甘
4.在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度， 肃
医
最后沿平板内缘涂抹1周
学
院
5.平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或纸片分配器
将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，
纸片距平板内缘大于15mm