小鼠皮下移植性肝癌模型的热消融研究

第21卷 第8期 2012年8月中国普通外科杂志

Chinese Journal of General Surgery

Vol.21　No.8Aug. 2012

小鼠皮下移植性肝癌模型的热消融研究

吴浩1，沈顺利２，匡铭２，彭宝岗２

（1. 广东省广州市第十二人民医院 普通外科，广东 广州 510620；2. 中山大学第一附属医院 肝胆外科，广东 广州 510080）

摘 要

目的：探讨建立适合微波消融研究的肝癌小鼠模型。

方法：将C57BL/6J 小鼠随机分为4组（n =10），分别皮下注射不同数量（5×105，1×106，2×106，5×106）的Hepa1-6细胞，比较各组成瘤率；选择成瘤率理想的细胞数再次造模，待瘤体长径达8~10 mm 时将模型小鼠随机分为4组（n =10），对瘤体行微波热消融处理，瘤体边缘温度分别控制在60 ℃，55 ℃，50 ℃和45 ℃，消融时间为3 min，比较各组完全消融率及消融前后的瘤体病理变化。

结果：2×106 的Hepa1-6细胞皮下注射组成瘤率高且适合消融操作；60 ℃消融组出现组织碳化，其余各组比较，55 ℃消融组完全消融率最高，复发率最低（P <0.01）。

结论：对小鼠Hepa1-6细胞皮下移植性肝癌模型行55 ℃×3 min 的微波热消融有效、可行。

关键词

肝肿瘤，实验性；热消融；疾病模型，动物；小鼠中图分类号：R735.7 文献标识码：A

[中国普通外科杂志，2012，21(8):973-977]

Thermal ablation for subcutaneously implanted hepatocellular

carcinoma in mice

WU Hao 1, SHEN Shunli 2, KUANG Ming 2, PENG Baogang 2

(1. Department of General Surgery, the Twelfth Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510620, China; 2. Department of Hepatobiliary Surgery, the First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China)ABSTRACT

Objective: To establish a mice model of liver cancer suitable for microwave ablation.

Methods: C57BL/6J mice were randomly divided into 4 groups (n =10 in each group) and subcutaneously injected with Hepa1-6 cells of diff erent numbers (5×105, 1×106, 2×106 and 5×106) respectively, and then the tumor formation rates in the 4 groups were compared. Next, the ideal cell number for tumor formation was selected to establish the mouse models once again. When mean tumor diameter reached 8–10 mm, the tumor-bearing mice were randomly divided into 4 groups (n =10 in each group) to undergo microwave thermal tumor ablation. The temperature at the edge of the tumor was maintained at 60, 55, 50, and 45℃ respectively, and the ablation time was 3 min. Th e complete ablation rate and pathological changes of tumor among the 4 groups were compared.

・基础研究・

文章编号：1005-6947(2012)08-0973-05

基金项目：国家自然科学基金资助项目（81071892）；广州市医药卫生科技项目（20121A010012）；高等高校博士

学科点专科专项科研基金（新教师类，201000171120072）；高校基本科研业务费中山大学青年教师培育项目（09ykpy30）。

收稿日期：2012-02-16； 修订日期：2012-07-05。

作者简介：吴浩，广东省广州市第十二人民医院主治医师，主要从事普外科肿瘤治疗方面的研究。通讯作者：彭宝岗， Email: pengbaogang@

中国普通外科杂志第21卷974

近年来，消融治疗因微创、简便和经济成为一种广泛应用的肝癌治疗新手段；经皮热消融治疗早期肝癌可获得与手术切除同等的局部疗效和总生存率[1-4]。但肿瘤的复发一直是消融治疗未能解决的重大问题。现发现免疫治疗可以明显减少肿瘤手术后的复发。研究联合两者预防肿瘤复发显得十分必要。肝癌热消融动物模型是开展研究的基础。本实验建立小鼠皮下肝癌热消融模型，分为两步实施：先在小鼠皮下建立移植性肝癌，待瘤体长大后再对其行热消融处理，探索适宜的实验操作条件。

1　材料与方法

1.1 材料

1.1.1动物和细胞株　雄性C57BL/6J小鼠（4~6周，体质量16~20 g）购自中山大学北校区动物实验中心。肝癌细胞株（Hepa1-6）为来源于C57BL/6J 小鼠的化学诱导肝肿瘤，由日本理化学研究所细胞库（RIKEN）提供。

1.1.2试剂和主要仪器　细胞培养常用试剂由中山大学分子医学试剂部和第一附属医院外科实验室提供。FORSEA MTC-3型微波消融治疗仪由南京庆海微波电子研究所生产，微波功率5~100 W 可调，频率2 450 Hz。微波消融电极针16 G，定制自南京庆海微波电子研究所。

1.2 实验方法

1.2.1模型的建立及筛选适合消融操作的移植细胞数量　选择同一批次C57BL/6J小鼠，分别将不同数量的Hepa1-6细胞（5×105，1×106，2×106，5×106）注射到4组（每组10只）C57BL/6J小鼠单侧胁腰部皮下[5]。观察每组有肿瘤生成的小鼠数目，计算每组的皮下肿瘤形成率及成功消融率，筛选出适合消融操作的细胞数量。1.2.2筛选适合的消融温度　选择同一批次C57BL/6J小鼠，根据成瘤率的结果选用单侧胁腰部各注射2×106个Hepa1-6细胞，待瘤体长径达8~10 mm时消融。将荷瘤小鼠随机分为4组（每组10只），以测温针检测距瘤体边缘1 mm瘤内温度（简称瘤缘温度），控制4组不同的瘤缘温度（60 ℃，55 ℃， 50 ℃， 45 ℃）微波消融皮下瘤体3 min，观察各组微波消融后30 d的肿瘤残余率，筛选合适的消融温度。

1.2.3建立小鼠微波消融模型　待小鼠皮下移植型肝癌瘤体长径达到8~10 mm时进入消融实验。按功率5 W×3 min预设进行消融。按照瘤缘温度不超过60 ℃控制微波能量输出。若消融后3 d 未死亡，皮肤切口生长良好瘤体未脱落的小鼠视为热消融模型建立。

1.2.4观察热消融模型　⑴ 消融时瘤体的大体、瘤体中心温度、瘤缘温度，绘温度变化曲线；

⑵ 消融后3 d切出瘤体作病理切片观察；⑶ 绘制消融的瘤体体积变化曲线；⑷ 观察模型的30 d 存活率。尔后杀死解剖全部动物，查看有无局部复发和全身转移。

1.3 统计学处理

计数资料多组率两两比较采用χ2检验。检验水准α=0.05。

2　结　果

2.1 成功建立小鼠移植型皮下肝癌模型

实验证实将（2×106个）Hepa1-6细胞接种小鼠后第10 天，小鼠皮下肝癌长径达到6~8 mm。小鼠平均生存时间（47±4）d。小鼠皮下移植型肝癌模型瘤体体积生长曲线见图1。切除皮下移植瘤体做病理检查见图2。

Results: The group with 2×106 Hepa1-6 subcutaneous injection had a high tumor formation rate and was

suitable for ablation. Except for 60℃ ablation group, in other 3 groups, the 55℃ ablation group had the

highest complete ablation rate and the lowest recurrence compared with the other two groups (P<0.05).

Conclusion: 55℃× 3 min microwave ablation is feasible and eff ective for Hepa1-6 cells subcutaneously implanted

model of liver cancer in mice.

KEY WORDS Liver Neoplasms, Experimental; Th ermal Ablation; Disease Models, Animal; Mice

CLC number: R735.7Document code: A

[Chinese Journal of General Surgery,2012,21(8):973-977]