RP—HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量

RP—HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量目的建立夏桑菊颗粒中主要成分迷迭香酸的含量测定方法。方法采用高

效液相色谱法对迷迭香酸进行含量测定，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速：0.8 ml/min，检测波长329 nm，柱温27℃，进样体积10 μl，流动相为甲醇-0.5%乙酸水系统梯度洗脱。结果含量测定中迷迭香酸进样在0.22～8.80 μg范围内，线性关系良好（r=0.9999），平均回收率和RSD均符合要求。结论所建立方法操作简单、专属性和重现性良好，可作为该制剂的质量控制方法之一。

标签：夏桑菊颗粒；迷迭香酸；高效液相色谱法

夏桑菊颗粒是由夏枯草、桑叶、野菊花3味药材组成，具有清热解毒、清肝明目之功效，临床常用于风热感冒、目赤头痛、高血药等症，并可作为清凉饮料使用，商品规格20袋/包，10g/袋。夏桑菊颗粒收载于原卫生部标准（部颁标准）第15册，缺乏含量测定项[1]。夏桑菊颗粒的君药是夏枯草，2010年版《中国药典》修订了夏枯草的含量测定项，其含量测定指标修订为迷迭香酸[2]。迷迭香酸具有抗菌[3-5]、抗病毒[4]、抗氧化[6-7]、抗血栓[4，8]、保肝护肝[9]、抗炎活性[4，10-11]和免疫抑制活性[4]等作用。因此，本研究采用HPLC方法对夏桑菊颗粒中主要活性成分迷迭香酸的进行含量测定研究，为提高夏桑菊颗粒的质量控制标准提供依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

BPZ11D型电子分析天平（Sartorius公司）；KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；Waters 2695-2996高效液相色谱系统，Empower工作站，含自动进样器、四元梯度泵（美国，Waters公司）。

1.2 溶剂与试药

甲醇（色谱纯，TEDIA公司），水为哇哈哈纯净水；乙酸（分析纯，北京化工厂）。对照品迷迭香酸[12-13]（外标一点法测定纯度>98%）和样品夏桑菊颗粒及阴性制剂颗粒[14]，由湖南中医药大学药学院林丽美教授赠送，具体样品见含量测定项。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选择Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱；检测波长：329 nm；流速：0.8 ml/min；样品室温度：20℃；柱温：27℃；进样体积：

10 μl；流动相：甲醇（A）-0.5%乙酸水（B）梯度洗脱，0→60 min，30%A→40%。按照上述色谱条件，迷迭香酸分离很好，无干扰，得色谱图1。

2.2 供试品溶液制备

称取夏桑菊颗粒、缺夏枯草的阴性制剂颗粒样品约5 g，精密称定，加甲醇10 ml，称重，超声（功率250 W，频率40 kHz）30 min，取出，静置放凉，甲醇补重，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液进行HPLC分析。

2.3 标准曲线的绘制

精密称取对照品迷迭香酸适量，用甲醇溶解，定容得浓度为0.22 μg/μl的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液1、2、3、5、10、15、20、25、30、40 μl 进样分析，记录色谱条件下测得的峰面积。以峰面积作为纵坐标（Y），进样量（μg）作为横坐标（X），得回归方程：Y=4 541 216X-411 008（r=0.9999）；线性范围：0.22～8.80 μg。

2.4 精密度试验

取夏桑菊颗粒同一供试品（批号：FA10176），按照“2.2”项制备供试品溶液，分别精密吸取溶液10 μl，连续进样6次，按上述色谱条件测得迷迭香酸峰面积，其RSD=0.58%。

2.5 稳定性试验

取夏桑菊颗粒同一供试品（批号：FA10176），按照“2.2”项制备供试品溶液，精密吸取溶液10 μl，分别在2、4、6、8、10、12、24 h进样，按上述色谱条件测定迷迭香酸的峰面积，其RSD=0.58%。

2.6 重复性试验

取夏桑菊颗粒同一供试品（批号：FA10176）6份，精密称定，按照“2.2”项下制备供试品溶液，精密吸取每份溶液10 μl，按上述色谱条件测得迷迭香酸峰面积，其RSD=0.60%。

2.7 加样回收率试验

取同一批已知准确含量的夏桑菊颗粒样品（批号：FA10176）约2.5 g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品迷迭香酸溶液，按“2.2”项制成加样的供试品溶液，按上述色谱条件测定迷迭香酸总量，计算加样回收率（表1）。

2.8 含量测定

按上述色谱条件，将不同厂家的样品进行平行处理和进样分析，每个样品称

2份，每份样品平行进两针，测定迷迭香酸峰面积，计算夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量，得出平均值（表2）。

3 讨论

采用HPLC方法，建立夏桑菊颗粒中主要活性成分迷迭香酸的含量测定方法，该方法样品处理简单、容易、可控，所建立的色谱条件相对简单，单一梯度洗脱，适宜于大量夏桑菊颗粒样本中迷迭香酸的含量测定，具有很好的实用性。含量测定结果表明，夏桑菊颗粒样品中迷迭香酸的含量差别很大（0.20～7.04 mg），说明现在市面上流通的夏桑菊颗粒中质量参差不齐，建议夏桑菊颗粒增加含量测定项以进一步保证质量。

[参考文献]

[1] WS3-B-3019-98.中华人民共和国卫生部药品标准——中药成方制剂（15册）[S].

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：263.

[3] 孙峋，汪靖超，李洪涛，等.迷迭香酸的抗菌机理研究[J].青岛大学学报：自然科学版，2005，18（4）：41-45.

[4] 吴建章，郁建平，赵东亮.迷迭香酸的研究进展[J].天然产物研究与开发，2005，17（3）：383-388.

[5] 郭道森，杜桂彩，李丽，等.迷迭香酸对几种植物病原真菌的抗菌活性[J].微生物学通报，2004，31（4）：71-76.

[6] 吕晓玲，姚慧.迷迭香酸对猪油的抗氧化效果[J].中国油脂，2010，（9）：33-35.

[7] 丁巍，黄松明，张爱华，等.迷迭香酸对单侧输尿管梗阻小鼠肾脏的抗氧化保护作用[J].南京医科大学学报：自然科学版，2009，29（3）：350-355.

[8] 邹正午，徐理纳.迷迭香酸抗血栓和抗血小板聚集作用[J].药学学报，1993，28（4）：241-245.

[9] 王虹，刘红梅，王磊.迷迭香酸对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中成药，2009，31（3）：354-358.

[10] 李丽，梁绪国，田京伟，等.迷迭香酸抗炎作用研究[J].中药药理与临床，2008，24（4）：21-22.