中药复方总化学成分_浸膏_提取工艺研究

610 04 1;
摘要: 本研究旨在提高白花蛇舌草、金银花、黄芪、甘 草组成 的中药复 方的临 床疗效 和抗病 毒作用 机理研 究, 为 复方剂 型
改革和工业化生产提供科学依据。采用正交设计结合单因素考察, 对复方水提和醇 沉工艺进行 优化: 以水提后 的浸膏重量 为
考察指标, 选用 L 9 ( 34 ) 正交表设计试验, 对浸泡时间、用水量、煎煮时间、煎煮次 数 4 个因 素进行优化; 采用 H PL C 法测定复 方
4
175. 3a
3
166. 3a
2
131b
注: 同列数据肩标相同字母表示差异不显 著( P > 0. 05) , 肩标 不
同字母表示差异显著( P< 0. 05) 。下同。
2. 2 醇沉 L 9( 34) 正交试验结果 试验数据用 D PS 统计软件系统进行分析。试验数据见表 6, 方差分 析结果见表 7, 多重比较结果见表 8。由表 6 可知, 最佳提取工艺组合应为 A 2 B3 C3 , 即用 80% 乙醇浓 度, 加 4 倍剂量, 醇沉 16 h。方差分析( 表 7) 表明,
量、醇沉 16 h。结合实际生产和成本因素, 确定中药复方水提 和醇沉工艺为: 浸泡 0. 5 h、12 倍加水量、煎煮 3 次、煎煮时间1 h,
65% 乙醇浓度、3 倍乙醇量、醇沉 16 h, 水提浸膏收率为 57. 2% , 醇沉浸膏甘草酸含量为 0. 42%, 均接近正交方案中的最高值。
关键词: 中药复方; 正交设计; 水提工艺; 醇沉工艺
13
15
8
44
注: K 表示总和, k 表示平均数, R 表示极差。下同。
表 4 水提 L9 ( 34) 正交试验结果方差分析
方差来源
A B C D E (误差)
方差平方和
288. 2 328. 2 138. 9 3294. 9 4050. 22
自由度 2 2 2 2
均方 144. 1 164. 1 69. 4 1647. 4
中图分类号: T X461
文献标识码: A
文章编号: 1671 7236( 2011) 07 0242 04
根据 祛邪可以扶正 和 扶正可以祛邪 的治疗 原则, 以白花蛇舌草、金银花等清热解毒药为主药, 辅以黄芪、甘草等扶正药, 组成具有抗病毒功效的中 药复方散剂, 临床上用于鸡新城疫( N D) 、鸡传染性 法氏囊病( IBD) 、鸭病毒性肝炎( DH ) 、禽流感( AI) 等疾病的治疗, 并 取得了 良好 的效 果( 段 亮亮等, 2010; 刘群等, 2010; Liu 等, 2010) 。中药及复 方有 效成分的含量一般较低, 临床散剂应用用量大、浪费 大、药材资源浪费。中药化学成分复杂, 中药复方的 化学成分更为复杂, 同一复方的化学成分与临床实 际运用的各种制剂所含有的化学成分, 存在有一定 的差异。制剂选择不当, 制备不得法, 化学成分提取 工艺不优等不仅直接影响到临床疗效, 而且对中药 资源的保护、开发利用及规模化工业生产都造成不 利影响。
表 6 醇沉 L9 ( 34 ) 正 交试验结果数据
A 乙醇浓度 B 乙醇用量 C 醇沉时间 甘草酸含量
( % ) ( 乙醇 浸膏)
( h)
(%)
1
65
2
65
3
65
4
80
5
80
6
80
7
95
8
95
9
95
K1
1. 183
K2
1. 206
K3 0. 8390
K1 0. 3944
K2 0. 4019
K3 0. 2797
表 1 水提 L9 ( 34) 正交试验因素水平表
水平
1 2 3
因素
A 浸泡时间 B 加水量 C 加热时间
( h)
( 药材倍数)
( h)
0. 5
8
1
1
10
1. 5
1. 5
12
2
D 煎煮次数 ( 次) 2 3 4
1. 2. 2 醇沉 L 9( 34) 正交试验 以比重值在 1. 18~ 1. 20 的中药复方水提浸膏进行醇沉试验, 确定乙醇 浓度、乙醇用量、醇沉时间 3 个因素, 每个因素选取 3 个水平, 以 L 9( 34) 正交表设计试验, 以醇沉浸膏甘 草酸含量为考察指标。影响因素及水平见表 2。称 取经最佳水 提工艺 组合提 取的水 提浸膏 ( 比重 值 1 18~ 1. 20) 20 g, 加入一定浓度和一定量的乙醇, 4 冰箱放置, 醇沉一定时间, 按中华人民共和国兽 药典( 2005) 以高效液相色谱法测定醇沉浸膏中甘草 酸的含量。液相条件: 十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂, 甲醇- 0. 2 mol/ L 醋酸铵溶液- 冰醋酸( 67 33 1) 为流动相, 检测波长 250 nm, 柱温 30 , 流 动相速度 0. 8 m L/ min, 进样量 10 L。
R
0. 1222
2 3 4 2 3 4 2 3 4 1. 024 1. 093 1. 111 0. 3413 0. 3643 0. 3704 0. 0291
8 12 16 12 16 8 16 8 12 1. 056 1. 019 1. 152 0. 3522 0. 3398 0. 3553 0. 0441
7
1. 5
8
2
3
1 53
8
1. 5
10
1
4
1 64
9
1. 5
12
1. 5
2
1 32
K1
48 1
44 8
45 6
3 93
K2
48 8
47 9
48 1
4 99
K3
44 9
49 1
48 1
5 26
k1
16 0
14 9
15 2
1 31
k2
16 3
16 0
16 0
1 66
k3
15 0
16 4
16 0
1 75
R
表 3 水提 L9 ( 34) 正交试验结果数据
A 浸泡时间 B 加水量 C 加热时间 D 煎煮次数
( h)
( 药材倍数)
( h)
( 次)
浸膏重量 ( g)
1
0. 5
8
1
2
1 20
2
0. 5
10
1. 5
3
1 74
3
0. 5
12
2
4
1 87
4
1
8
1. 5
4
1 75
5
1
10
2
2
1 41
6
1
12
1
3
1 72
收稿日期: 2010 11 25 作者简介: 江平康( 1986- ) , 男, 四川人, 硕士生, 研究方向: 现代
中兽药。 通信作者: 刘群, 博士, 副教授, 硕士 生导师, 研 究方向: 中 药( 复
方) 药理。
观点, 本研究采用传统的正交设计法, 结合单因素考 察, 选用 L9 ( 34 ) 正交设计试验, 以水提浸膏重量为考 察指标, 对用水量、煎煮时间、煎煮次数、浸泡时间 4 个因素进行优化; 以 HPL C 法测定复方醇沉浸膏中甘 草酸含量为考察指标, 对乙醇浓度、乙醇用量、醇沉时 间 3 个因素进行优化, 现将研究结果报告如下。 1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 中药复方 白花蛇舌草、金银花、黄芪、甘草 等饮片购于海王星辰健康药房, 由四川省兽药监察 所鉴定, 低温干燥避光保存。 1. 1. 2 仪器及试剂 电子天平( 00000249, 北京赛 多 利 斯 仪 器 有 限 公 司 ) , JP A 型 盘 架 天 平 ( 00000052, 上海 力能电子仪器 公司) , 超声 清洗器 ( KQ3200E, 昆山市超声有限公 司) , 高效液相色谱 仪( L C 10A T V) , 万用电炉( DL 1, 北京中兴伟业仪 器有限公司) , 纯水机( MIL L QA) 等; 乙醇、甲醇、乙 酸、醋酸铵( AR 级, 分析纯) 均购自成都金山化学试 剂有 限 公 司, 甘 草 酸 铵 标 准 品 ( 批 号: 110731 200615) 由中国药品生物制品鉴定所提供。 1. 2 方法 1. 2. 1 水提 L 9( 34) 正交试验 选取正交试验设计 优化的方法, 结合生产实际中的操作和成本问题及 该中药复方药的特性, 采用水提工艺, 确定用水量、 浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数 4 个因素, 每个因素 选取 3 个水平, 以 L 9( 34 ) 正交表设 计试验, 以复方 水提浸膏重量为考察指标。影响因素 及水平见表
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经验交流
中国畜牧兽医 2011 年第 38 卷第 7 期
中药复方总化学成分( 浸膏) 提取工艺研究
江平康1 , 刘群1, 杨松沛2 , 卢亚艺2 , 唐帝2 , 朱子凤3 , 周李1
( 1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 四川成都 610041; 2. 四川省兽药监察所, 四川成都 3. 西南民族大学校医院, 四川成都 610041)
浸膏中的甘草酸含量作为醇沉优化指标, 选用 L9 ( 34 ) 正交表 设计试验, 对乙 醇浓度、乙醇 用量、醇沉时 间 3 个 因素进 行优化。 结果得到复方水提最佳工艺: 浸泡 1 h、12 倍 加水量、煎煮 4 次、煎煮 时间 1. 5 h; 浸膏 醇沉最 佳工艺: 80% 乙 醇浓度、4 倍乙 醇
中国畜牧兽医 2011 年第 38 卷第 7 期
1。按比例称取该中药复方各单味药饮片共 320 g, 按照所设计的试验处理组合方法煎煮, 3 层纱布过 滤, 合并滤液并水浴浓缩。当浸膏温度在 80 时, 用密度计测量, 当比重值在 1. 18~ 1. 20 时停止加热 浓缩, 冷却至室温称重并计算出浸膏重量和收率。