鲎试剂的贮存
欧洲药典EP6.0细菌内毒素 (中文)
2.6.14 细菌内毒素本法利用鲎试剂(从鲎——Limuluspolyhemus或 Tachypleus tridentatus——血细胞提取物(amoebocyte lysate)制备而来)检测由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素或对内毒素进行定量。
该检查包括三种方法:一为凝胶法,系利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理;第二种为浊度法(基于内源性底物断裂后,产生的浊度变化);最后一种为显色法(得到的肽-呈色基团复合物断裂后,检测反应混合物的色度)。
这一章阐述了下面6种方法:方法A:凝胶法:限度试验方法B:凝胶法:半定量试验方法C:动态浊度试验方法D:动态显色法方法E:终点显色法方法F:终点浊度法检测时,可用6种方法的任一种进行试验。
当测定结果可疑或有争议时,除非另有规定,以专论中的方法A的测定结果为准。
试验操作过程应防止内毒素的污染。
仪器所有的玻璃器皿及由其他耐热材料制成的器皿需用已验证的工艺在热烘箱内进行去热原处理。
去热原时,常用的最小时间和温度设置分别为30分钟和250℃。
若使用塑料器械,如微孔板和微量进样器配套的吸头等,它们必须标明无内毒素并确对试验无干扰。
注:这一章中,“管”的意思包括其他任何反应容器,如微孔板中的孔。
内毒素储备标准溶液的制备用内毒素标准品制备内毒素储备标准溶液;所用的内毒素标准品必须先用国际标准品校准,如内毒素标准BRP。
内毒素以国际单位(IU)表示。
IU的换算见国际卫生组织公布的国际标准。
注:一国际单位(IU)内毒素相当于一个内毒素单位(E.U.)。
根据包装说明书上的标准和内毒素储备标准溶液的标签上关于制备和贮存的说明。
内毒素标准溶液的制备充分混合内毒素储备标准溶液后,用细菌内毒素试验检查用水(BET检查用水)稀释,制成适当的系列稀释液,即得BET检查用内毒素标准溶液。
得到的稀释液应尽快使用,以免因吸附而导致活性损失。
供试品溶液的制备除非另有说明,以BET检查用水溶解或稀释活性成分或药品来制备供试品溶液。
显色基质鲎试剂盒说明书
CE LAL 405, 2008显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法,不含偶氮化试剂)3.2阴性对照为细菌内毒素检查用水。
3.3 微板鲎试仪ELx808IU的设定预热仪器15到30分钟,设置温育温度为37ºC。
设置模板及程序。
设定读板波长为405nm。
3.4鲎试剂与显色基质的溶解按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解, 注意不要用旋涡混匀仪激烈振摇。
溶解的鲎试剂应在10分钟内用完。
按标示量加显色基质溶解液于显色基质中,轻轻振摇使显色基质完全溶解。
显色基质溶液可在无污染的条件下于4ºC贮存8小时以内。
若采用多道移液器,将溶解的鲎试剂与显色基质分别转移到无热原加样槽,并轻轻摇匀。
3.5 实验操作将无热原微板放置于鲎试仪中,37ºC温育5分钟。
加入50µl细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液,或供试品。
用移液器或多道移液器加入50µl鲎试剂(避免产生气泡!),中速振摇10秒混匀。
若内毒素浓度在0.1EU/ml-1EU/ml 区间,37ºC温育12分钟。
(若内毒素浓度在0.01EU/ml-0.1EU/ml 区间,37ºC温育50分钟。
)温育结束,用移液器或多道移液器加入100µl显色基质溶液,中速振摇10秒混匀,37ºC温育6分钟。
温育结束,用移液器或多道移液器加入50µl反应终止剂,中速振摇10秒混匀,在405nm波长处读取吸光度值。
4.数据处理建立标准曲线:Y = b X + a ,其中Y为405nm处吸光度值,X为内毒素的浓度,b为直线斜率,a为Y轴截距。
当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效:1. 标准曲线的相关系数r ≥0.980,2. 标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值,3. 供试品平行管的平均值在标准曲线的区间内。
5.供试品的干扰试验(详见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰试验”)当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,须进行干扰试验, 步骤如下:5.1 选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm),作为供试品干扰试验中添加的内毒素浓度,配制含λm内毒素的供试品阳性对照,测量出该溶液的内毒素浓度, 称为C s;5.2 测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度, 称为C t;5.3 计算该试验条件下的回收率R =(C s–C t)/λm×100%5.4 当R在50%~200%之间,则认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。
鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题
鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题发布时间02年09月05日 09时18分方法:通过对干扰鲎试验准确性干扰因素的分析(包括鲎试剂本身、操作条件、配制原料等),提出了鲎试验中应注意的问题。
结果:只要克服了检查中的干扰因素,鲎法具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。
鲎试验是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象,作为判断供试品中细菌内毒素限量是否符合规定的一种方法[1]。
它具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。
中国药典1995年版已收载细菌内毒素检查法(简称鲎试验),但只用于几种输液的检查。
根据现有的实验证明,凡不干扰细菌内毒素检查或虽有干扰,但可以克服的药品注射剂,将能够全部以鲎法代替家兔热原检查法。
但是该法受到许多因素的影响,故在做鲎试验检查时,应注意下列问题。
1鲎试剂本身1.1鲎试剂灵敏度 为了保证检查细菌内毒素结果的准确性,用于试验的鲎试剂应首先核对灵敏度。
因为在我们的实际工作中,发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下,由于生产厂家不同,部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时,用相同标示值的鲎试剂,出现不同结果。
因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。
建议法定部门和生产单位应注意鲎试剂的质量检查。
1.2供试品稀释 在取样品时,一定要熟悉中国药典的内容,不能直接取大输液原液0.1ml进行检查,这是排除干扰因素的简单有效的方法。
因药典已明确规定试验中鲎试剂的灵敏度不超过0.5EU/ml,根据供试品的稀释公式: 供试品稀释倍数= L/λυL :供试品的内毒素限量(1EU/ml)λυ:鲎试剂灵敏度的标示值(EU/ml)故检测大输液均应稀释后才能进行试验,如选用更高灵敏度的鲎试剂,则应增加样品的稀释倍数。
稀释用的细菌内毒素检查用水药典作了规定。
在4h内不得与鲎试剂产生凝集反应。
如果直接用供试品原液试验,就会使供试品的内毒素提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml以下,这样,根据目前大输液的生产和贮藏条件,有些就会达不到,鲎法检出的阳性率会提高,兔法复核的机遇也将增多,势必会浪费人力物力。
鲎试剂凝胶法
遮光,在冷处保存。
【包装】
(1)1ml 安瓿;(2)2ml 安瓿;(3)5ml 安瓿;(4)7ml 抗生素瓶;(5)10ml 抗生素瓶 【有效期】
稀释内毒素标准品时应按其使用说明用漩涡混合器混合适当的时间。 2.2 检品稀释 当检品需要控制的内毒素限值大于鲎试剂的灵敏度值时,需要用检查用水对检品进行稀释,计算公式如下:
MVD:检品的最大有效稀释倍数 L:检品需控制的内毒素限值(Eu/ml) λ:鲎试剂灵敏度值(Eu/ml) [举例]:某检品需要控制的内毒素限值为 5Eu/ml,使用灵敏度 λ=0.25Eu/ml 的鲎试剂作细菌内毒素检查。
二年
【批准文号】
(94)卫药准字 SJ-01 【生产企业】
企业名称:湛江安度斯生物有限公司
地 址:广东省湛江市人民大道中 38 号 邮政编码:524022 电 话:(0759)3380672 传 真:(0759)3391072
E-mail:zacb@ 网 址:
若阳性对照管为阴性表明鲎试剂或标准内毒素已失效或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确或标准内毒素的稀释有误
鲎试剂说明书
【名称】 通用名:鲎试剂 英文名:Tachypleus Amebocyte Lysate (TAL) 汉语拼音:Hou Shi Ji 【性状】 本品为白色或类白色冻干块或粉末,在水中易溶。 【原理】 本品为鲎科动物东方鲎(Tachypleus Tridentatus, Leach)的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品,内含能被 微量细菌内毒素激活的凝固酶原(Proclotting enzyme)和凝固蛋白原(Coagulogen)。在适宜的条件下(温 度,pH 值及无干扰物质),细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。凝胶法鲎试 剂是根据反应所形成凝胶的程度来限量检测细菌内毒素。 【用途】 用于细菌内毒素检查。 【使用方法】 1. 实验准备 1.1 选择所需规格及灵敏度的鲎试剂,细菌内毒素标准品以及细菌内毒素检查用水。 1.2 10×75mm 反应试管(若使用 0.1ml 规格的鲎试剂无需准备此试管)和大口径稀释试管若干支,以及移液器具。 实验所用器皿须经 250℃干烤至少 1 小时或其它适宜的方法除去可能存在的外源性热原。 1.3 水浴恒温器或干热恒温器,漩涡混合器,试管架,计时器。实验开始前应把恒温器温度调到 37±1℃。 2. 实验操作 2.1 内毒素标准品稀释 取内毒素标准品(冻干品)1 支,开启,按使用说明加入检查用水溶解后分步稀释至所需浓度备用。 如下稀释方法供参考:
光度法鲎试剂
光度法鲎试剂一、介绍光度法鲎试剂1.1 光度法鲎试剂的定义光度法鲎试剂是一种用于测量光密度的试剂物品。
它能够将光通过溶液进行吸收,并通过测量吸光度来定量分析样品的浓度。
1.2 光度法鲎试剂的种类光度法鲎试剂有多种种类,包括酶标板鲎试剂、光度计鲎试剂和分光光度计鲎试剂等。
不同种类的试剂适用于不同的实验需求。
二、光度法鲎试剂的应用2.1 光度法鲎试剂在生物学研究中的应用光度法鲎试剂在生物学研究中起着重要作用。
例如,在酶动力学研究中,可以通过测量底物和产物的浓度差来确定酶的活性。
光度法鲎试剂可以对这些底物和产物进行分析,从而获得准确的数据。
2.2 光度法鲎试剂在医学诊断中的应用光度法鲎试剂也被广泛应用于医学诊断中。
例如,在血液分析中,通过测量特定指标物在血液中的浓度来判断疾病的程度。
光度法鲎试剂能够提供准确的浓度测量结果,帮助医生做出正确的诊断。
3.1 光的吸收和透射光度法鲎试剂的工作原理基于光的吸收和透射。
当光通过溶液时,溶液中的物质会吸收部分光的能量,使得光强度减弱。
通过测量光的强度变化,可以推断出溶液中物质的浓度。
3.2 Lambert-Beer定律光度法鲎试剂在测量时通常遵循Lambert-Beer定律。
该定律表示溶液中吸光度与溶液浓度和光的路径长度成正比。
通过校准曲线可以将吸光度转换为溶液中物质的浓度。
四、使用光度法鲎试剂的步骤4.1 样品的制备首先,需要制备符合实验要求的样品。
例如,在血液分析实验中,需要从患者身上采集血样,并对血液进行处理,以去除可能干扰测量的物质。
4.2 光度计的校准在进行测量之前,需要对光度计进行校准。
校准过程包括设置空白值和参考值,以确保测量结果的准确性。
4.3 加入光度法鲎试剂将样品与适量的光度法鲎试剂混合,充分搅拌以保证试剂与样品均匀混合。
4.4 测量和记录测量值将混合液倒入光度计的比色皿中,并选择合适的波长进行测量。
记录测量值并进行数据分析。
5.1 优点1.精确度高:光度法鲎试剂能够提供准确的浓度测量结果。
标准品、鲎试剂操作规程
标准品、鲎试剂操作规程目的:建立标准品、鲎试剂操作规程,指导检验员正确执行标准品、鲎试剂操作。
1.适用范围:适用于标准品、鲎试剂操作。
2.定义2.1标准品系以细菌内毒素国家标准品为基础标定其效价,用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.责任:QC人员。
4.规程4.1申购4.1.1标准品采购:按《对照品操作规程》中对照品申购程序,进行采购。
到药品检验所或中国生物制品检定所统一订购。
4.1.2鲎试剂采购:由管理员根据检验需要,填写申购单,注明:品名、规格、灵敏度、数量、购回日期。
交化验室主任核准后,交物料部采购。
4.2接收4.2.1物料部将鲎试剂与标准品购回后,管理员接通知,开具领料单。
4.2.2经化验室主任签字后,凭领料单到仓库领用。
4.2.3接收前,管理员仔细核对所领细菌内毒素工作标准品或鲎试剂的规格、数量、有效期和灵敏度,检查外包装、标签有无损坏或泄漏。
无误后,方可接收。
4.3贮存4.3.1接收的标准品与鲎试剂根据其特性存放在适宜的条件下,且根据批号、灵敏度分类摆放。
4.3.2管理员及时登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》。
4.4发放、使用4.4.1检验员根据检品需要,向管理员申请试验用量的标准品、鲎试剂。
4.4.2管理员在核实申请情况后,方可发放。
4.4.3领用后,检验员登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》,管理员签名确认。
4.4.4每批入库的鲎试剂必须按药典规定,进行灵敏度复核试验,符合规定后方可发放、使用。
4.4.5鲎试剂灵敏度复核4.4.5.1根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ),将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解,在漩涡混合器上混匀15分钟,然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液,每步混匀30秒。
4.4.5.2取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支,其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液,每一个浓度平行做4管;另两管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
【高中化学】高考化学第一轮备考特殊试剂的存放和取用
【高中化学】高考化学第一轮备考特殊试剂的存放和取用
试剂的存放有时存在特殊条件,下面是特殊试剂的存放和取用,请考生认真学习。
1.Na,K:与空气隔离;抗氧化,储存在煤油(或液体烷烃)中,(用石蜡密封)。
用镊子钳取下,切碎载玻片,用滤纸吸煤油,然后将剩余的放入煤油中。
2.白磷:保存在水中,防氧化,放冷暗处。
镊子取,并立即放入水中用长柄小刀切取,滤纸吸干水分。
3.液体Br2:有毒且易挥发,放入研磨过的瓶子中,用水密封。
瓶盖很紧。
4.i2:易升华,且具有强烈刺激性气味,应保存在用蜡封好的瓶中,放置低温处。
5.浓硝酸、硝酸银:在光照下容易分解,应贮存在棕色瓶中,低温避光。
6.固体烧碱:易潮解,应用易于密封的干燥大口瓶保存。
瓶口用橡胶塞塞严或用塑料
盖盖紧。
7.Nh3oh2o:挥发性,应低温密封。
8.c6h6、、c6h5-ch3、ch3ch2oh、ch3ch2och2ch3:易挥发、易燃,应密封存放低温处,并远离火源。
9.Fe2+盐溶液、H2SO3及其盐溶液、氢硫酸及其盐溶液:由于易被空气氧化,不适合
长期储存,因此应立即使用和制备。
10.卤水、石灰水、银氨溶液、cu(oh)2悬浊液等,都要随配随用,不能长时间放置。
这些都是特殊试剂储存和存取的内容。
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标准品、鲎试剂操作规程
标准品、鲎试剂操作规程目的:建立标准品、鲎试剂操作规程,指导检验员正确执行标准品、鲎试剂操作。
1.适用范围:适用于标准品、鲎试剂操作。
2.定义2.1标准品系以细菌内毒素国家标准品为基础标定其效价,用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.责任:QC人员。
4.规程4.1申购4.1.1标准品采购:按《对照品操作规程》中对照品申购程序,进行采购。
到药品检验所或中国生物制品检定所统一订购。
4.1.2鲎试剂采购:由管理员根据检验需要,填写申购单,注明:品名、规格、灵敏度、数量、购回日期。
交化验室主任核准后,交物料部采购。
4.2接收4.2.1物料部将鲎试剂与标准品购回后,管理员接通知,开具领料单。
4.2.2经化验室主任签字后,凭领料单到仓库领用。
4.2.3接收前,管理员仔细核对所领细菌内毒素工作标准品或鲎试剂的规格、数量、有效期和灵敏度,检查外包装、标签有无损坏或泄漏。
无误后,方可接收。
4.3贮存4.3.1接收的标准品与鲎试剂根据其特性存放在适宜的条件下,且根据批号、灵敏度分类摆放。
4.3.2管理员及时登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》。
4.4发放、使用4.4.1检验员根据检品需要,向管理员申请试验用量的标准品、鲎试剂。
4.4.2管理员在核实申请情况后,方可发放。
4.4.3领用后,检验员登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》,管理员签名确认。
4.4.4每批入库的鲎试剂必须按药典规定,进行灵敏度复核试验,符合规定后方可发放、使用。
4.4.5鲎试剂灵敏度复核4.4.5.1根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ),将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解,在漩涡混合器上混匀15分钟,然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液,每步混匀30秒。
4.4.5.2取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支,其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液,每一个浓度平行做4管;另两管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
SMP-QC-0030-00细菌内毒素标准品与检测试剂标准管理规程
1.0 目的1.1建立细菌内毒素标准品与检验试剂的管理标准操作规程。
2.0 范围2.1适用于公司细菌内毒素标准品与检测试剂的采购、接收、保存、使用、销毁、去热原物品的存放、鲎试剂灵敏度复核及工作标准品效价的标定。
3.0 职责3.1质量控制(QC)部对本操作规程实施负责。
4.0 定义4.1细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成,用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准物质标定其效价,用于试验中灵敏度的复核、干扰试验及各种阳性对照。
4.3 细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。
5.0 规程5.1细菌内毒素标准品与检测试剂的采购5.1.1细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品按一年的使用量做计划。
5.1.2鲎试剂、缓冲液、细菌内毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等按半年的使用量做计划,从可靠的供应商处购买,如湛江安度斯生物有限公司、湛江博康海洋生物有限公司。
5.2细菌内毒素标准品与检测试剂的接收5.2.1细菌内毒素标准品与检测试剂购回后,由生测组组长协同采购管理人员验收。
5.2.2 验收项目包括:运输条件、内包装、名称、数量、规格、有效期、生产厂家及外观检查等是否复核请购要求或相应规定,如购买的是细菌内毒素工作标准品,则必须有厂家提供的内毒素工作标准品效价分析证明书,验收不合格的试剂或标准品直接由采购退货处理或按相关标准操作规程销毁处理。
5.2.3试剂登记项目包括:试剂名称、批号、数量、规格、有效期、生产厂家、接收时间等。
5.3细菌内毒素标准品与检测试剂的保存5.3.1登记过的试剂才能进行保存。
5.3.2标准品、缓冲液于冰箱中冷藏保存,不得冷冻。
鲎试剂的保存见厂家的说明书。
5.3.3细菌内毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等应存放在去热原物品专柜中,此柜仅存放已去热原的物品。
光度法鲎试剂
光度法鲎试剂
光度法鲎试剂是一种用于测定蛋白质浓度的试剂,其原理是利用鲎蛋白与试剂中的染料结合产生吸收峰的变化来测定蛋白质的浓度。
该试剂具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点,因此被广泛应用于生物化学、分子生物学等领域。
光度法鲎试剂的原理是基于鲎蛋白与试剂中的染料结合产生吸收峰的变化来测定蛋白质的浓度。
鲎蛋白是一种具有高度稳定性和可重复性的蛋白质,其与试剂中的染料结合后会产生吸收峰的变化,这种变化与蛋白质的浓度成正比。
因此,通过测定吸收峰的变化,可以计算出样品中蛋白质的浓度。
光度法鲎试剂的操作非常简单,只需要将试剂与待测样品混合后,通过分光光度计测定吸收峰的变化即可。
该试剂具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点,因此被广泛应用于生物化学、分子生物学等领域。
在实际应用中,光度法鲎试剂可以用于测定多种类型的蛋白质,包括纯化的蛋白质、细胞裂解液中的蛋白质、血清中的蛋白质等。
同时,该试剂还可以用于测定蛋白质的相对分子质量、酶的活性等指标。
总之,光度法鲎试剂是一种非常实用的蛋白质浓度测定试剂,具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点,在生物化学、分子生物学等领域得到了广泛应用。
鲎试剂
鲎试剂百科名片鲎试剂鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品,含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原,凝固蛋白原,能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和(1,3)-β-葡聚糖激。
目前,鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域,用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。
目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。
目录简介试剂分类实验方法正确使用编辑本段简介鲎的血液中含有铜离子,它的血液是蓝色的。
这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”,可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病;在制药和食品工业中,可用它对毒素污染进行监测。
此外,鲎的肉、卵均可食用。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素检测和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法,它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确,因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法,并已被世界各国所采用。
目前能生产鲎试剂的主要有美国、日本、中国等国家。
中国国内现在生产鲎试剂的厂家有福州新北生化工业有限公司,厦门市鲎试剂实验厂有限公司,湛江安度斯生物有限公司及湛江博康海洋生物公司等。
编辑本段试剂分类按原料来源分一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate),缩写为LAL,由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate),缩写为TAL。
TAL 与LAL有相同的功效。
按实验方法分细菌内毒素检查法包括两种方法,即凝胶法和光度测定法,后者又包括浊度法和显色基质法。
则鲎试剂可分为:凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂。
凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂标准
鲎试剂标准本品为鲎科动物东方鲎(Tachyplecus tridentatus)的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品。
本品含能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原(Proclotting enzyme),凝固蛋白原(Coagulagen)其灵敏度以细菌内毒标准品或工作标准品测定,应为标示量的50%-200%。
(一)性状本品为白色或类白色冻干块或粉末,在水生生理盐水中易溶。
(二)鉴别1.取本品按装量加水溶解后,加茚三酮试液《中国药典1990年版》(二部附录162页)0.25ml,加热煮沸1-2分钟,显蓝色紫色。
2.取本品按装量加水溶解后,再加水适当稀释,照分光光度法《中国药典1990年版》(二部附录24页)测定,在270±1nm的波长处有单一吸收峰。
3.取本品按装量加入内毒检查用水溶解后,吸取0.1ml加入0.1ml细菌内毒素工作标准品或标准品50EU,混匀后,于37℃水浴中放置1小时,有凝胶形成。
(三)检查干燥失重:取本品约0.1在g ,在66℃减压干燥至恒得,减失重量不得过5%(中国药典1990年版二部附录55页)。
自身凝集:取本品4支,按装量加入配带的鲎试剂溶剂,溶解后,分别从每支取0.1ml,再分别加入配带的鲎试剂溶剂0.1ml,混匀后,于37±1℃水浴中放置4小时,不得形成凝胶,若有2管以上形成凝胶,判为不合格;若仅有1管形成凝胶,照同样方法,另取8支重复检查,8支均不得形成凝胶。
缓冲能力:任意取5%、10%葡萄糖注射液,氯化钠注射液无菌注射用水或注射用水适量,加稀盐酸调节pH使供试品溶液pH值为2.90-3.00,取此溶液适量与等量鲎试剂溶解液混匀,重复测定,pH值应为6.00-8.00。
(四)灵敏度测定预测:1.取细菌内毒素工作标准品1支,按说明溶解燕稀稀释成1→8等比系列稀释液。
2.取同一批鲎试剂若干支,分别按标示量加入配带的试剂溶剂制成鲎试剂溶液。
取10×75mm试管若干支,分别加入0.1ml鲎试剂溶液,加入内毒素稀释液0.1 ml ,每一稀释液最少作2管,同时作2管阴性对照。
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法,含偶氮化试剂)
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法,含偶氮化试剂)货号:T7571保存:阴凉处,最佳2-8℃,避光贮存。
产品内容:细菌内毒素工作品,5支鲎试剂, 1.7ml/支,5支显色基质,1.7ml/支,5支偶氮化试剂1,10ml/支,5支偶氮化试剂2,10ml/支,5支偶氮化试剂3,10ml/支,5支HCl(反应终止剂),50ml/瓶,1瓶细菌内毒素检查用水,50ml/瓶,3瓶用途:显色基质鲎试剂(Chromogenic End-point TachypleusAmebocyte Lysate,CE TAL)用于体外细菌内毒素的定量检测,禁止以任何途径进入机体。
原理:鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素激活C因子,引起一系列酶促反应,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的显色基质,使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺(pNA,λmax=405nm)。
在一定时间内,pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关,据此,可以定量供试品的内毒素浓度。
同时,对硝基苯胺(pNA)也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色(λmax=545nm),避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
检测限:按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml两个区间(反应时间T1和T2见出厂检验报告)。
用法:1.材料和设备1.1试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1、偶氮化试剂2、偶氮化试剂3、HC l(反应终止剂)、细菌内毒素检查用水。
1.2器材无热原试管、无热原吸头、旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架、恒温水浴箱(37±1℃)、分光光度计。
注意:接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。
玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。
鲎试剂使用说明书
鲎试剂使用说明书凝胶法鲎试剂使用说明书一、检测步骤1、标准品稀释:开启后加入检查用水(W)1.2ml,置漩涡混合器上混合5min,得到浓度为10EU/ml的内毒素溶液,标记为(E10),其余各梯度稀释方法如下:0.3ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5mlE10 ---→E1---→E0.5---→E0.25---→E0.125---→E0.06---→E0.032.7mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW此步骤为新开启标准品者操作,各梯度做好标记,其余操作人员可直接使用。
2、取鲎试剂8支,折断安瓿瓶颈,其中2支作供试品检查管,2支作阴性对照管,2支作阳性对照管,2支作供试品阳性对照管,做好标记。
3、阴性对照管加入0.2ml检查用水,其余各管加入0.1ml检查用水,每支供试品检查管另加入0.1ml供试品;阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ(即0.1ml 的E0.125)内毒素溶液,供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ(即0.1ul 的E1)内毒素的供试品。
4、封闭管口,轻轻摇匀,垂直放入37℃的恒温金属浴中60min,然后取出观察结果。
在孵育期间避免任何震动!二、结果判断1、将试管从恒温器中轻轻取出,缓慢倒转180°,若管内形成凝胶,不变形,不滑落者为阳性,记录为(+);反之为阴性,记录为(—)。
取出试管应尽量避免受到震动造成假阴性结果!2、阴性对照管必须为阴性,阳性对照管、供试品阳性对照管必须为阳性,否则实验结果无效。
3、若阴性对照管为阳性,表明鲎试剂或检查用水货实验器具受到污染;若阳性对照管为阴性,表明鲎试剂或标准内毒素已失效,或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准,或实验条件不满足;若供试品阳性对照管为阴性,表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。
学会正确进行试剂的保存和储存
学会正确进行试剂的保存和储存试剂作为科学实验中必备的物质,其正确的保存和储存对于实验结果的准确性起着至关重要的作用。
然而,很多人在进行试剂保存和储存时存在一些错误的做法,这不仅会影响实验结果,还有可能带来安全隐患。
因此,学会正确进行试剂的保存和储存是每位科学研究者必须掌握的基本技能。
首先,对于试剂的储存温度,我们应该根据其性质的不同进行分类。
一般来说,常温下保存的试剂应该放置在避光、干燥、通风良好的环境中,以防止受潮和变质。
同时,在储存试剂时要避免与空气中的氧气、湿气接触,可使用密封瓶或密封袋进行储存。
而对于需要冷藏的试剂,我们应该将其放置在冰箱的特定区域内,避免与其他食物或试剂混合,以免交叉污染。
在冷藏试剂的储存过程中,我们还应该定期检查冰箱的温度,确保试剂的冷藏温度符合要求。
其次,试剂的储存位置也是需要注意的。
在实验室中,通常有专门的试剂柜作为储存试剂的地方。
试剂柜的规划应遵循分离原则,将水溶性试剂、有机试剂和腐蚀性试剂分开存放,以防止试剂之间的反应或泄漏。
此外,试剂柜中应有明确的标识和分区,以便于快速找到所需的试剂并确保安全。
对于一些对环境敏感的试剂,如易燃、易爆或有毒物质,应当单独存放,并采取相应的防护措施,如防火柜或专用储存容器。
另外,试剂在储存过程中应定期检查和更新。
首先,我们应该注重试剂相关信息的记录和更新。
对于每一瓶试剂,我们应该标明试剂的名称、规格、购买日期、有效期等重要信息,并定期检查并更新这些信息,以确保试剂的质量和有效性。
其次,对于一些易受环境影响的试剂,如光敏试剂、易挥发试剂等,我们应定期检查其外观和性质,确认试剂的品质是否变化。
如果试剂发生变质或其有效期已过,应及时予以淘汰和更换,以免影响实验结果。
此外,良好的实验室卫生也是试剂储存和保存的关键。
试剂在使用过程中容易污染或受到颗粒、灰尘等物质的污染,因此,实验室内应保持清洁整洁,并做好试剂容器的清洁和消毒工作。
在使用试剂前,应仔细阅读试剂说明书,并根据要求进行适当的处理和准备工作,确保试剂的纯净度和稳定性。
海洋药物的天然药物贮藏与稳定性研究
海洋药物的天然药物贮藏与稳定性研究海洋药物是指从海洋生物体中提取的具有药用价值的化合物或物质。
由于海洋生物栖息的特殊环境,其产生的天然药物具有独特的结构和生物活性,对医药领域的研究具有重要意义。
然而,海洋药物的贮藏与稳定性面临着一系列的挑战,包括氧化、光照、微生物污染等问题。
本文将探讨海洋药物的贮藏与稳定性研究,以期为海洋药物的开发与利用提供理论依据和技术支持。
一、海洋药物的贮藏条件海洋药物贮藏的条件对于保持其药效至关重要。
一般来说,海洋药物应存放于低温、干燥、阴暗的环境中,以避免氧化反应的发生。
此外,药物的包装材料也需要选择合适的材质,如玻璃瓶、铝箔袋等,以确保药物的稳定性。
二、海洋药物的氧化稳定性研究氧化反应是海洋药物稳定性的主要挑战之一。
氧化反应不仅会使药物失去药效,还会产生有害的副产物。
因此,研究海洋药物的氧化稳定性对于保持其有效性至关重要。
* 海洋药物的抗氧化性研究:通过测定药物的抗氧化能力,可以评估其在氧化条件下的稳定性。
常用的方法包括DPPH自由基清除法、还原力测定法等。
通过了解药物的抗氧化性,可以选择合适的贮藏条件和药物包装材料,以提高海洋药物的稳定性。
* 海洋药物中活性成分的氧化反应研究:海洋药物中的活性成分往往是药物具有生物活性的关键所在。
研究活性成分在氧化条件下的稳定性,可以为海洋药物的合理贮藏和利用提供指导。
常用的方法包括高效液相色谱法(HPLC)、核磁共振波谱法(NMR)等。
三、海洋药物的光照稳定性研究光照也是海洋药物稳定性的一大挑战。
光照不仅会影响药物的颜色和外观,还会导致药物的化学成分发生变化。
因此,研究海洋药物的光照稳定性对于保持其药效非常重要。
* 海洋药物的光解反应研究:海洋药物中的一些成分在光照条件下会发生光解反应,从而导致药物的结构和性质发生变化。
通过研究海洋药物的光解机理和条件,可以选择合适的贮藏条件和包装材料,以提高海洋药物的光照稳定性。
* 海洋药物中色素的变化研究:由于海洋药物中存在丰富的色素,其在光照条件下易发生褪色现象。
2024年危险试剂及易变质试剂的保存方法(三篇)
2024年危险试剂及易变质试剂的保存方法危险性试剂或化学危险品,具有能燃烧、爆炸、毒害、腐蚀或放射性等危险性质。
在受到摩擦、震动、撞击、接触火源、遇水或受潮、强光照射、高温、跟其他物质接触等外界因素影响时,能引起强烈的燃烧、爆炸、中毒、灼伤、致命等灾害性事故。
在采购、保管和使用各种化学危险品的过程中,必须严格遵照国家的有关规定和产品说明书的条文办理。
中学化学实验中可能用到的化学危险品有以下几类。
特性:易挥发,遇明火易燃烧;蒸气与空气的混合物达到爆炸极限范围,遇明火、星火、电火花均能发生猛烈的爆炸。
1.易燃液体特性:易挥发,遇明火易燃烧;蒸气与空气的混合物达到爆炸极限范围,遇明火、星火、电火花均能发生猛烈的爆炸。
实例:汽油、苯、甲苯、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醛、氯乙烷、二硫化碳等。
保管与使用时的注意事项:要密封(如盖紧瓶塞)防止倾倒和外溢,存放在阴凉通风的专用橱中,要远离火种(包括易产生火花的器物)和氧化剂。
2.易燃固体特性:着火点低,易点燃,其蒸气或粉尘与空气混合达一定程度,遇明火或火星、电火花能激烈燃烧或爆炸;跟氧化剂接触易燃烧或爆炸。
实例:硝化棉、萘、樟脑、硫黄、红磷、镁粉、锌粉、铝粉等。
保存及使用时的注意事项:跟氧化剂分开存放于阴凉处,远离火种。
3.自燃品特性:跟空气接触易因缓慢氧化而引起自燃。
实例:白磷(白磷同时又是剧毒品)保管及使用时的注意事项:放在盛水的瓶中,白磷全部浸没在水下,加塞,保存于阴凉处。
使用时注意不要与皮肤接触,防止体温引起其自燃而造成难以愈合的烧伤。
4.遇水燃烧物特性:与水激烈反应,产生可燃性气体并放出大量热。
实例:钾、钠、碳化钙、磷化钙、硅化镁、氢化钠等。
保管与使用时的注意事项:放在坚固的密闭容器中,存放于阴凉干燥处。
少量钾、钠应放在盛煤油的瓶中,使钾、钠全部浸没在煤油里,加塞存放。
5.爆炸品特性:摩擦、震动、撞击、碰到火源、高温能引起激烈的爆炸。
实例:三硝基甲苯、硝化甘油、硝化纤维、苦味酸、雷汞等。