生物毒性检测作业指导书
设计一个环境水样中生物毒性的测 定”实验方案
设计一个环境水样中生物毒性的测定”实验方案1.一种生物毒性的检测方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行：步骤一，样品处理：按照标准取样方法采取污水样，并对样品进行如下处理：(1)依次将7mL的二氯甲烷、7 mL的甲醇、7mL的纯水通过C18固相萃取小柱对柱子进行润湿活化，(2)取500 mL经0.45μm滤膜过滤后的污水样上柱，使污水样连续通过C18固相萃取小柱，并调节真空泵使流出液流速为3mL/min，(3)待污水样全部流出柱后用5 mL纯水过洗柱子，接着继续真空抽气干燥15 min，而后将C18固相萃取小柱放入离心机中离心，(4)用二氯甲烷洗脱柱子，收集洗脱液，并将所得洗脱液用高纯氮气吹干，然后用5mL体积分数为0.5%的二甲基亚砜溶解所得吹干物，得到浓缩样品溶液，(5)将浓缩样品溶液用0.9%的生理盐水配制成系列浓度梯度的待检测样品溶液，步骤二，青海弧菌Q67菌悬液的制备：(1)将青海弧菌Q67菌种转接到50 mL液体培养基中，22℃条件下，培养10～12 h，(2)将得到的菌体培养液在12000 rmp条件下离心10 min后弃去上清液，接着对沉淀的菌体细胞进行3次洗涤：即用10 mL 0.9%的生理盐水重悬、12000 rmp离心10 min，然后将经洗涤的菌体细胞用10 mL 0.9%的生理盐水重悬，得到青海弧菌Q67菌悬液，步骤三，污水样急性生物毒性的检测：对步骤一中所得到的每个待检测样品溶液进行如下检测：(1)在1.5 mL样品检测管中加入100μL待检测样品溶液，并取100μL 0.9%的生理盐水加入1.5 mL对照检测管中作为空白对照样，其中样品及空白对照样均有3~5个平行样，(2)上述各检测管中分别加入100μL青海弧菌Q67菌悬液，且各检测管之间加菌悬液的时间间隔为15 s，(3)菌悬液加入完900 s后，采用发光细菌检测仪，按照加青海弧菌Q67菌悬液的检测管的顺序，依次对各样品及对照样进行发光强度检测，读取其相对发光值，步骤四，结果计算：(1)计算出对照样的相对发光值平均值I0和不同浓度待检测样品的相对发光值平均值I，按(式A)计算出不同浓度待检测样品对发光细菌的相对抑制率E，(式A)(2)以待检测样品的浓度为纵坐标，以不同浓度待检测样品的相对抑制率E为横坐标作定量标准曲线，并从该曲线上读取出相对抑制率为50%时所对应的浓度，即半数发光抑制率浓度EC50，EC50值越大，毒性越小，(3)用(式B)计算总影响指数TII50，并以此来反映污水样品的生物毒性，TII50值越大，毒性越大，(式B)。
便携式生物毒性检测仪安全操作及保养规程
便携式生物毒性检测仪安全操作及保养规程1. 引言便携式生物毒性检测仪是一种用于检测生物毒性的便携式仪器，广泛应用于医药、食品安全、环境监测等领域。
为确保仪器的安全使用和长期运行，特制定本安全操作及保养规程。
本规程适用于所有操作人员，包括设备管理人员和使用人员。
2. 安全操作规程2.1 仪器检查在使用便携式生物毒性检测仪之前，必须进行仪器检查，以确保其正常工作。
检查时需要注意以下事项：•检查仪器外部是否有明显的损坏或异物；•检查电源线及接头是否完好；•检查仪器是否有异常的噪音或异味。
若发现以上异常情况，应立即停止使用并通知设备管理人员。
2.2 仪器连接在连接便携式生物毒性检测仪之前，必须确保连接正确且牢固。
具体操作步骤如下：1.先将电源线插入适配器，然后将适配器插入电源插座；2.将仪器的连接线插入适配器的输出接口；3.将另一端的连接线插入被测物体或样品。
连接完成后，检查连接是否紧固，杜绝松动现象。
2.3 仪器操作为确保仪器的安全操作，使用人员应遵守以下规定：•使用前必须仔细阅读用户手册，了解仪器的正确操作方法；•操作人员必须穿戴个人防护装备，包括实验手套、口罩、护目镜等；•在操作过程中需要保持仪器周围环境整洁，避免杂物干扰；•严禁在仪器工作时进行其他无关操作；•操作人员必须经过相关培训，并得到合格后方可独立操作。
2.4 仪器存储存储便携式生物毒性检测仪时，需要注意以下事项：•存放仪器的环境应干燥、通风，避免阳光直射；•仪器应放置在平稳的台面或架子上，避免受到碰撞和摔落；•仪器和配件应放置在干净、整洁的仪器箱内，避免与其他物品接触。
3. 保养规程3.1 日常保养便携式生物毒性检测仪的日常保养主要包括以下内容：•定期清洁仪器表面和连接线，使用柔软干净的布擦拭；•检查电源线是否破损，如有破损应立即更换；•定期检查仪器配件的完好情况，如有损坏或遗失应及时修复或补充。
3.2 液体保养对于便携式生物毒性检测仪使用液体样品的情况，需要注意以下保养事项：•使用后，应及时将液体样品从仪器内部排空，避免样品残留对仪器造成损害；•使用干净的纱布或棉花蘸取适量去离子水清洗液体样品残留的部分；•注意避免液体样品进入仪器的连接接口，以免造成电路短路。
生物学实验作业指导书
生物学实验作业指导书实验名称：生物学实验作业指导书引言：生物学实验是学生掌握实践能力和理论知识的重要环节。
本实验作业指导书旨在帮助学生正确、有效地完成生物学实验作业，并有效地整理和呈现实验数据。
实验目的：本实验作业的目的是：1. 培养学生科学实验的态度和方法；2. 提高学生的实验操作技能；3. 加深学生对生物学实验内容的理解。
实验设备和材料：1. 显微镜及玻璃切片；2. 显微镜载玻片和盖玻片；3. 标本、显微镜封片剂；4. 酒精灯、试管及试管架；5. 实验手册和实验记录表。
实验步骤：1. 实验准备：- 仔细阅读实验手册，了解实验目的和步骤。
- 检查实验设备和材料，确保完整和干净。
- 为实验记录做好准备，准备笔记本和实验记录表。
2. 样本获取与制备：- 根据实验要求选择合适的样本，可利用新鲜的植物或动物组织。
- 将样本切割成薄片，并用显微镜载玻片将其固定。
- 使用显微镜封片剂将载玻片封入，防止液体溢出。
3. 实验操作：- 将载玻片放入显微镜中，调节镜头使样本清晰可见。
- 观察样本细胞的形态、大小、结构等特征，并记录在实验记录表中。
- 使用显微镜的放大倍数逐渐增加，观察更加细微的结构和细胞内的活动。
- 尽量观察多个样本，以获得更全面的实验数据。
4. 数据整理与分析：- 将观察到的样本特征和实验数据整理成表格或图表。
- 分析数据，得出相应的结论，并撰写实验报告。
- 如有需要，进行图表的绘制和数据的统计。
安全注意事项：1. 在实验操作中要佩戴实验手套和眼部保护设备，以确保实验过程的安全。
2. 使用酒精灯时需注意火源和防火措施。
3. 实验结束后，将实验设备和材料归位，并保持实验区域的整洁和安全。
总结：通过本次实验作业指导书的操作实践，学生能够充分理解生物学实验的目的和步骤，并能够熟练运用实验设备和材料进行实验操作。
同时，学生还能通过观察和记录实验数据，加深对生物学实验内容的理解和掌握。
实验作业的完成将有助于学生培养科学实验的态度和方法，提高实验技能水平，并进一步促进对生物学知识的学习和理解。
生物作业指导书
生物作业指导书一、作业概述本次生物作业主要涉及生态学相关知识的综合运用，通过对实际生态系统的观察与分析，培养学生的实践操作能力、数据处理与解释能力，同时提高学生对生态学原理的理解与应用。
二、实验目的通过本次实验，学生将能够：1. 理解生态系统的概念及其组成要素；2. 掌握生态学常用的研究方法与技巧；3. 学会设计并完成一个简单的生态系统观测实验；4. 针对实验结果进行数据处理与解释，得出相应结论。
三、实验材料与方法1. 材料：（列出实验所需的各类材料，如测量工具、实验器材等）2. 实验方法：（详细说明实验的步骤与操作过程，包括实验前的准备工作、实验中的操作注意事项和实验后的数据处理与整理）四、实验步骤与观测要点本次实验主要分为以下几个步骤：1. 实验前准备：（说明实验前需要进行的准备工作，如场地选择、生态系统的搭建等）2. 实验过程：（具体描述实验的操作步骤，注明观测时间、观察要点等）3. 数据处理与分析：（详细说明如何对实验所得数据进行处理，如统计数据、绘制图表等，同时解释数据结果的含义与实验原理的关联）五、实验结论与讨论根据实验所得数据及其分析结果，学生应结合实际情况，做出相应的结论，并进行讨论。
重点涵盖以下几方面内容：1. 生态系统的组成要素及其相互关系；2. 生态系统的稳定性与脆弱性；3. 实验设计是否合理，有无其他可以改进的地方。
六、作业要求1. 学生需要完成实验报告的撰写，包括标题、引言、实验材料与方法、实验结果与讨论、结论等部分；2. 实验报告应遵循学术规范，注意格式、语言准确、通顺、文字流畅；3. 注意实验结果的可视化展示，可适当使用表格、图表等方式展示数据，提高报告的可读性和易理解性；4. 鼓励学生进行思考和讨论，对实验结果进行解释并提出合理的建议。
七、参考文献（列出参考文献，供学生进行相关知识的深入学习和拓展阅读）以上为本次生物作业的指导书内容，请学生根据指导书的要求进行实验与报告撰写，并及时提交完成的实验报告。
生物毒性测试仪说明书
生物毒性测试仪说明书DXY-3型智能化生物毒性(污染)测试仪使用说明书一、仪器特点DXY-3型智能化生物毒性(污染)测试仪是在DXY-2型生物毒性(污染)测试仪基础上改进，并加人智能化功能的新型号机，与国际上同类产品相当，但是，价格低廉，发光菌能保证供应。
该仪器是基于毒性物质对特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设计的，它通过测定发光细菌发光度的变化，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成的急性生物毒性。
与传统的鱼、蚤和其它水生生物作为生物检测方法相比，发光细菌法简便、快速、灵敏、适应性强、重复性好、精度高、费用低、用途广，凡有毒化合物、废水、废弃物的生物毒性均可测定。
因此，它是对受污染环境的生物毒性检测进行初筛、监测较为理想的工具，也是其他领域开拓新的实验测试方法的新工具。
该仪器可测量和显示待测液的毒性含量，测量所得数据可存储，可一次存储10组数据，每组数据包含3个标准液测量值和3个待检溶液的测量值，以便查看；同时，可以上传到计算机，以便分析和长期保存。
仪器显示界面由液晶显示屏提供，仪器的控制输入由按键实现。
该仪器2型机为中国环境监测总站监制产品。
该仪器测定方法为国家标准，标准号：“GB/T15441-1995水质急性毒性的测定发光细菌法”由中国标准出版社出标准文版。
仪器标准号：Ｑ/KTS 01-93。
经宁过近三十年的不断开发，已经在环境科学、微生物学、免疫学、细菌学、生物化学和临床检验等领域得到广泛应用。
二、仪器用途测定纯化合物(包括有机分子、无机金属离子)的急性毒性。
测定受污染水体(包括工业排放污水、矿山采矿和冶炼废水、河水等水系)的急性毒性。
测定受污染土壤、河流和沿海带底泥的急性毒性。
用于研究有毒元素以及化合物相互之间的相互作用－协同或拮抗效应。
用于慢性反应的化学发光分析等。
三、测试原理测试原理：总体急性生物毒性。
明亮发光杆菌之所以发光，是由于菌的发光系统发生了如下反应：基质↓ ATP ATP ATP还原型辅酶A → 黄素(H2) → 细胞色素→ 02↓载氢黄素单核苷酸荧光酶(电子)↓02 RCH0 RCO0H电子→ FMNH2→ 电子→ FMNH → 光＋FMN＋电子十H2O↓OOH黑暗↓电子十黄素单核苷酸十H2O2当细胞活性高，处于积极分裂状态时，细胞ATP含量高，发光强；休眠细胞ATP含量明显下降，发光弱；当细胞死亡，ATP立即消失，发光停止。
水生生物急性毒性试验一般程序
水生生物急性毒性试验一般程序1、试验准备1）实验容器准备、清洁和消毒处理——容器：大小合适、材料无毒、不易吸附、对生物不造成损伤2）受试生物的采集与驯化3）稀释水（试验关键）——来源：无污染自然水、去氯自来水、配置标准水（OECD ASTM推荐配方）——质量控制：pH、温度、溶解氧、盐度、硬度、无其它污染物，有参比4）环境条件：控制系统2、实验设计1）测试方式选择——可选用静止、更新式和直流式。
——挥发性高、降解速率大化合物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式——BOD高的废水不能用静止式，选用更新式，最好用直流式——生长速率快、代谢快的生物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式2）试验生物选择3）被测毒物的配置——配成高浓度储备液——不溶或溶解度小用助溶试剂，如丙酮等，并设置溶剂对照，助溶试剂的毒性要小、溶解度高、实验系统用量要少，关键是要了解被测毒物的溶解度4）生物指标确定及试验重点5）试验浓度的设置（获得毒性数据的关键）——文献资料——预备试验——浓度确定方式：等对数浓度3、正式试验1）实验浓度的配置2）试验动物的数量——数量分配：5~10——生物量：＜0.8g/L；个体小的热带种＜0.1g/L3）实验组数——5个浓度+对照（稀释水）——5个浓度+对照（稀释水）+溶剂对照——对照组死亡率＜10%——3~5个平行（不少于30个受试生物）4）实验周期（暴露时间）——根据试验目的和生物不同而不同——标准方法：藻类生长抑制试验，72h枝角类急性毒性试验，48h鱼类急性毒性试验，96h5）试验终点观察：不同生物不同，同一实验相同6）理化指标测定：温度、溶解氧、pH、硬度等7）受试毒物浓度确定（计算得的数值VS实测）8）实验记录P.S.急性毒性试验期间不喂食物4、LC50的求法1）直线内插法——图解计算LC50、EC50的一种简便方法。
在半对数纸上作图，即可求解。
2）概率单位法依据：浓度对数与概率单位呈直线关系方法一：查死亡率——概率单位换算表，然后作图（浓度对数——概率单位图）方法二：直接用对数——概率纸作图——求直线回归方程——求LC50的置信区间（范围）推荐软件：Trimmed Spearman-Karber Software/Excel/SPSS。
生物毒性应急检测操作说明书
1．目的本指导书规定了用ToxScreen-∏Test生物毒性的方法2 . 适用范围本方法适用于水和废水中生物毒性的测定，方法为定性检测3. 人员资格和职责3.1 检测人员需经过相关培训，并考核合格3.2 检测人员参照本方法，负责生物毒性的分析测定4. 方法原理发光细菌是一类可以自身发出蓝绿色荧光的细菌，且发光强度持续、稳定，一旦遭遇到外界不利因素，就会很“敏感”的反应，几乎立即影响到它的发光，通常是发光受到抑制。
发光受抑制程度可以很方便地用适当的光电传电器检测出来，从而推算生物毒性的大小。
发光细菌有多种，如：费氏弧菌、青海弧菌Q67等。
本法采用青海弧菌冻干粉检验生物毒性。
5. 仪器与试剂5.1 仪器生物毒性发光分析仪：ToxScreen-∏Test5.2 试剂与材料Q67青海弧菌冻干粉复苏稀释液与渗透压调节液6. 样品的采集和储存使用清洁容器采集水样，采集后容器中不要有空气。
水样应尽快分析，如果不能立即分析请在4℃阴暗环境下保存。
7. 分析步骤7.1 样品的预处理样品浑浊、色度较深时，需对样品进行过滤。
7.2 样品分析1、取一支青海弧菌Q67冻干粉置于室温（20℃左右）平衡15min。
2、取0.5ml复苏稀释液加入平衡后的青海弧菌Q67冻干粉试剂瓶中。
3、溶解后的冻干粉溶液置于室温下10min后用于测定样品。
标准品（空白对照）制备：取2ml复苏稀释液加入到干净的测试管中。
4、待测样品溶液制备：将淡水样品与渗透压调节液以19:1的比例混合，配制成待测样品溶液，取待测样品溶液2ml加入到干净的测试管中。
（实际操作中，直接取淡水样品1.9ml与0.1ml渗透压调节液混匀即可）5、向各测试管中依次加入0.05ml冻干粉溶液中，轻轻振荡，使之充分混匀，放置15 min后测定发光值。
8. 数据处理与结果8.1 数据处理IC=(A-A0)/A*100%IC:光损失A：空白对照样品的光强度A0：样品的光强度8.2 本方法为定性检测水样的生物毒性，一般光损失达到30%，则认为该水样具生物毒性。
生物毒性检测工作方案
生物毒性检测工作方案一、背景。
生物毒性检测是指对生物体内外环境中的毒性物质进行检测和评价的一种技术手段。
生物毒性检测工作方案是指在生物毒性检测过程中所采取的一系列操作流程和方法，旨在确保检测结果的准确性和可靠性。
生物毒性检测工作方案的制定对于保障生物体健康和环境安全具有重要意义。
二、目的。
生物毒性检测工作方案的目的是为了对生物体内外环境中的毒性物质进行全面、准确的检测和评价，以保障生物体健康和环境安全。
三、工作流程。
1. 样品采集，根据检测对象的不同，采用适当的样品采集方法，保证样品的代表性和完整性。
2. 样品处理，对采集到的样品进行适当的处理，如过滤、浓缩、提取等，以便于后续的检测分析。
3. 毒性物质检测，采用合适的检测方法对样品中的毒性物质进行检测，包括化学分析、生物学检测等。
4. 数据分析，对检测结果进行分析和评价，确定样品中毒性物质的种类、含量及对生物体的潜在危害。
5. 结果报告，编制检测报告，将检测结果及评价意见及时准确地传达给有关部门和相关单位。
四、关键技术。
1. 样品处理技术，包括样品的提取、浓缩、预处理等技术，确保检测结果的准确性和可靠性。
2. 检测方法，包括化学分析方法、生物学检测方法等，选择合适的检测方法对毒性物质进行检测。
3. 数据分析技术，包括统计分析、数据处理等技术，对检测结果进行科学分析和评价。
五、质量控制。
1. 仪器设备，确保检测仪器设备的准确性和可靠性，定期进行校准和维护。
2. 样品质量控制，采用合适的质量控制方法，对样品进行质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性。
3. 检测过程控制，严格按照检测工作方案进行操作，确保检测过程的规范和可控。
4. 结果验证，对检测结果进行验证，确保检测结果的准确性和可靠性。
六、安全保障。
1. 操作规程，制定严格的操作规程，确保操作人员的安全和样品的完整性。
2. 废物处理，对实验废物进行妥善处理，确保实验过程中不会对环境造成污染。
3. 防护措施，采取必要的个人防护措施，确保操作人员的安全。
生物实验操作作业指导书
生物实验操作作业指导书一、实验目的本实验旨在让学生通过实际操作掌握生物实验的基本操作方法，并提高对生物实验安全性和实验数据处理的认识。
二、实验材料和设备1. 实验材料:- 试剂：X溶液、Y溶液、Z溶液等（根据具体实验需求）- 培养基：A培养基、B培养基等（根据具体实验需求）- 实验动物/植物样本等（根据具体实验需求）- 实验器材：试管、培养皿、移液管、显微镜等2. 实验设备：- 离心机- 恒温培养箱- pH计- 显微镜三、实验前准备1. 仔细阅读实验原理和实验步骤，了解实验目的和要求。
2. 检查实验设备是否齐全，确保实验器材的完好和洁净。
3. 准备所需的试剂和培养基，确保其质量和浓度符合实验要求。
4. 检查实验动物/植物样本，确保其健康并符合实验要求。
四、实验步骤1. 实验准备：a) 将所需试剂和培养基按照实验要求配制好。
b) 调节pH值：使用pH计将培养基的pH值调节至所需范围内。
c) 温度控制：将培养基置于恒温培养箱中，使其温度达到实验要求。
d) 样本处理：根据实验要求，对实验样本进行必要的处理，如清洗、消毒等。
2. 实验操作：a) 实验操作步骤一：详细描述实验操作步骤，确保操作的准确性和安全性。
b) 实验操作步骤二：详细描述实验操作步骤，确保操作的准确性和安全性。
c) 实验操作步骤三：详细描述实验操作步骤，确保操作的准确性和安全性。
d) 实验操作步骤四：详细描述实验操作步骤，确保操作的准确性和安全性。
3. 实验记录：a) 记录实验操作过程中的关键数据，包括观察结果、实验条件、实验时间等。
b) 结果分析：根据实验数据，进行结果分析和解释。
五、实验安全注意事项1. 实验操作过程中，需佩戴实验手套、实验眼镜和口罩，确保个人安全。
2. 使用有毒、腐蚀性或易燃的化学试剂时，注意采取相应的防护措施，避免危险事故发生。
3. 遵守实验室规章制度，保持实验环境整洁有序。
六、实验结果和结论根据实验记录和结果分析，得出实验结果和结论，可以对实验中出现的问题进行讨论和解释。
生物作业指导书
生物作业指导书【生物作业指导书】一、概述本作业指导书旨在帮助同学们有效完成生物作业，并提供相关的学习指导和参考。
通过合理的组织、清晰的表述和准确的知识传递，帮助同学们加深对生物学知识的理解和掌握。
二、作业类型及要求1. 阅读理解题阅读理解题一般要求根据所给的生物学文章或实验数据，进行问题解答。
同学们需要注意以下几点：- 仔细阅读题目和文本，理解文章中所陈述的生物学概念和实验原理；- 提取关键信息，区分主要和次要观点；- 能够用自己的话准确表述出问题的答案；- 注意审题，确定问题的要求以及所需要的答案形式。
2. 实验设计与数据分析题实验设计与数据分析题要求同学们基于指定的实验条件和数据，进行实验设计和数据分析。
在进行实验设计时，同学们需要注意以下几点：- 确定实验目的、假设和实验步骤；- 提前了解并运用适当的实验操作技能；- 合理安排实验控制组与实验组以及重复次数；- 结果数据的收集与处理应准确无误；- 数据分析要结合生物学原理进行解释。
3. 名词解释题名词解释题要求同学们根据所给的生物学术语，给出准确的解释和定义。
同学们需要注意以下几点：- 准确理解术语的含义和用法；- 运用自己的语言，用简洁明了的方式进行解释；- 可以进行举例或者与其他相关概念进行对比，帮助读者更好地理解。
三、作业完成技巧和方法1. 选择合适的学习环境合适的学习环境对于作业的高效完成起到关键作用。
选择一个安静、干净、明亮的地方，保持良好的学习氛围和集中注意力的状态。
2. 提前预习教材在开始作业之前，可以提前预习教材内容，了解相关知识点和概念。
这样可以帮助你更好地理解作业题目，并提前思考和准备答案。
3. 注意整理笔记在完成作业的过程中，可以根据题目要求和自己的理解，整理相关的笔记。
这不仅有助于记忆和复习，还可以为今后的学习提供方便。
4. 积极寻求帮助如果在完成作业的过程中遇到困难或者不理解的地方，可以积极向老师、同学或者互联网资源寻求帮助。
异常毒性试验SOP
异常毒性试验SOP1.目的检测生物制品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。
2.范围本标准规程适用于生物制品异常毒性的通用试验。
3.定义无4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量总监负责批准本规程。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6.材料6.1.试验用具：一次性无菌无热原注射器（2ml、5ml、10ml），75％酒精棉球，试管架、中试管、吸管（1ml 、2ml、5ml、10ml）；解剖用具：手术剪刀、手术小镊子、解剖刀。
6.2.试验设备：电子天平，台式灭菌器，电热鼓风干燥箱，百级超净工作台。
6.3.试剂与配制：乙醇，分析纯，购入；氯化钠，分析纯，购入；2．4．6-三硝基酚（苦味酸）分析纯，购入；75%酒精：量取95%乙醇78.9ml，加水至100ml，摇匀即得；75%酒精棉球：把高压灭菌好的脱脂棉弄成球状至广口瓶中，倒入75%酒精，使棉球湿润，即得；苦味酸染液：量取苦味酸5ml，加95%酒精20ml，摇匀即得；0.9%NaCl溶液：称取氯化钠0.9g，经（180℃ 120min）干烤除热原后，在超净工作台加注射用水100ml，摇匀，再经121℃ 30min高压灭菌，即得。
6.4.试验动物：6.4.1.健康小鼠，雌者无孕，体重18～22g, 级别：SPF级, 品系：KM。
6.4.2.健康豚鼠，雌者无孕，体重250～350g, 级别：SPF级。
7.流程图无8.程序8.1.试验准备8.1.1.试验前1~2天将试验小鼠、豚鼠从繁殖场购买至实验动物饲养室饲养并检查是否健康，一般要求体型正常，运动灵活，皮毛浓密而有光泽，眼睛有神，呼吸正常，无溃烂等现象。
8.1.2.临注射前给每只小鼠、豚鼠称体重，作好色标并记录。
8.1.3.供试品处理除另有规定外，每批供试品用5只小鼠，小鼠体重为18~22g，每只小鼠应注射供试品0.5 ml 。
生物毒性测试仪说明书
生物毒性测试仪说明书DXY-3型智能化生物毒性(污染)测试仪使用说明书一、仪器特点DXY-3型智能化生物毒性(污染)测试仪是在DXY-2型生物毒性(污染)测试仪基础上改进，并加人智能化功能的新型号机，与国际上同类产品相当，但是，价格低廉，发光菌能保证供应。
该仪器是基于毒性物质对特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设计的，它通过测定发光细菌发光度的变化，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成的急性生物毒性。
与传统的鱼、蚤和其它水生生物作为生物检测方法相比，发光细菌法简便、快速、灵敏、适应性强、重复性好、精度高、费用低、用途广，凡有毒化合物、废水、废弃物的生物毒性均可测定。
因此，它是对受污染环境的生物毒性检测进行初筛、监测较为理想的工具，也是其他领域开拓新的实验测试方法的新工具。
该仪器可测量和显示待测液的毒性含量，测量所得数据可存储，可一次存储10组数据，每组数据包含3个标准液测量值和3个待检溶液的测量值，以便查看；同时，可以上传到计算机，以便分析和长期保存。
仪器显示界面由液晶显示屏提供，仪器的控制输入由按键实现。
该仪器2型机为中国环境监测总站监制产品。
该仪器测定方法为国家标准，标准号：“GB/T15441-1995水质急性毒性的测定发光细菌法”由中国标准出版社出标准文版。
仪器标准号：Ｑ/KTS 01-93。
经宁过近三十年的不断开发，已经在环境科学、微生物学、免疫学、细菌学、生物化学和临床检验等领域得到广泛应用。
二、仪器用途测定纯化合物(包括有机分子、无机金属离子)的急性毒性。
测定受污染水体(包括工业排放污水、矿山采矿和冶炼废水、河水等水系)的急性毒性。
测定受污染土壤、河流和沿海带底泥的急性毒性。
用于研究有毒元素以及化合物相互之间的相互作用－协同或拮抗效应。
用于慢性反应的化学发光分析等。
三、测试原理测试原理：总体急性生物毒性。
明亮发光杆菌之所以发光，是由于菌的发光系统发生了如下反应：基质↓ ATP ATP ATP还原型辅酶A → 黄素(H2) → 细胞色素→ 02↓载氢黄素单核苷酸荧光酶(电子)↓02 RCH0 RCO0H电子→ FMN H2→ 电子→ FMNH → 光＋FMN＋电子十H2O↓OOH黑暗↓电子十黄素单核苷酸十H2O2当细胞活性高，处于积极分裂状态时，细胞ATP含量高，发光强；休眠细胞ATP含量明显下降，发光弱；当细胞死亡，ATP立即消失，发光停止。
细胞增殖-毒性检测实验操作步骤
细胞增殖-毒性检测实验操作步骤
CCK8试剂盒，是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。
CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
1. 在96孔板中配制100μl的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在37℃，5% CO2 的条件下)。
2. 向培养板加入10μl 不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48 小时)。
4. 向每孔加入10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
7. 如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
生物医学实验作业指导书
生物医学实验作业指导书一、实验目的本实验旨在帮助学生熟悉生物医学实验的基本操作技能，了解常用实验仪器的使用方法，并培养观察、记录实验数据及结果的能力。
二、实验器材与试剂1. 实验器材：- 显微镜- 电子天平- 显微镜载玻片- 针筒、注射器- 实验用动物（小白鼠）2. 实验试剂：- 生理盐水- 碘酒- 乙醇- 碘化钾溶液三、实验步骤1. 细胞计数实验：步骤1：准备工作- 使用生理盐水清洗玻璃仪器，保证卫生无菌； - 将显微镜装置好，调整放大倍数；- 准备好显微镜载玻片。
步骤2：制备待测试细胞悬液- 取一定量的细胞液，加入适量的生理盐水；- 彻底摇匀，以保证细胞分布均匀。
步骤3：进行细胞计数- 取适量悬液加入显微镜载玻片上；- 在显微镜下观察和调整焦距，找到合适的视野； - 使用计数网格统计细胞数量；- 重复计数，求取平均值。
2. 血液型实验：步骤1：准备工作- 将玻璃仪器用乙醇消毒，保证卫生无菌；- 准备好实验所需的试剂和实验用动物。
步骤2：血样采集- 使用针筒和注射器采集小白鼠的血液样本；- 将血液滴入玻璃片上。
步骤3：加入试剂- 在滴有血液样本的玻璃片上滴加碘化钾溶液；- 混合均匀，等待反应发生。
步骤4：观察结果- 使用显微镜观察血液中的凝集现象；- 根据凝集的形状及规模判断血型。
四、实验注意事项1. 安全注意：- 在实验操作过程中，需佩戴实验手套，避免直接接触实验物品； - 针筒和注射器只可单次使用并妥善处理。
2. 实验仪器使用注意：- 显微镜使用前需进行调节，以保证观察效果；- 电子天平应平稳放置，避免碰撞和摔落。
3. 试剂使用注意：- 使用前检查试剂标签，确保使用正确的试剂；- 碘酒和碘化钾溶液均为有毒物质，慎用。
五、实验结果记录与分析1. 细胞计数实验结果：- 记录在显微镜视野中数到的细胞数量；- 计算平均数，并根据该数值进行数据分析和结果陈述。
2. 血液型实验结果：- 观察血液样本中的凝集情况；- 根据凝集的形状和规模进行血型判断。
3.Deltatox综合毒性检测仪作业指导书
Deltatox急性毒性检测仪操作规程一、工作条件：1. 工作环境条件：10到28℃2. 菌种存储条件：-18到-25℃3. 供电：可使用220V交流电源或电池。
二、操作步骤2.1 按“ON”键打开电源。
分析仪将进行1分钟的自检。
2.2 分钟自检通过，屏幕显示正常。
分析仪的工作温度：10-28℃，温度太高时，将仪器放入空调房使用，或用冰袋降温。
2.3 按“MODE”键，直到屏幕左上角显示“B-Tox”。
2.4 菌种培养15分钟在每只装有菌种的试管中，用量程为1000μL的移液器加入310μL稀释液（大瓶试剂，名称Diluent），混匀后，开始计时，培养15分钟。
备注：一只菌种只可做三个样，如样品较多，增加菌种只数，在分别加入310uL稀释液后，全部转入其中1只菌种的玻璃试管集中培养，使整批菌种保持一致。
A1位置。
2.6水样的配置A2之后的试管用于配制水样。
首先在每只试管中加入100μL渗透压调节液（小瓶试剂，名称OAS），再加入1000μL待测样品（不同样品需更换移液器枪头），混匀待测。
2.7检测菌种原始发光值a. 15分钟培养时间结束时，将培养好的菌种再次混匀，再用量程为100μL 移液器按每管100μL，分装到第二排试管中，见上图。
b. 关上仪插销，按仪器Start键，自检完成后，屏幕闪动“Insert control cuvette”时（如下图），将B1放入仪器分析井中，盖好盖子，关上插销，按“READ”键，检测读取B1中菌种的原始发光值。
c. “Insert cuvette 001”闪动时（如下图）取出B1，将B2放入仪器分析井中，盖好盖子，关上插销，按“READ”键，检测读取B2中菌种的原始发光值。
d. “Insert cuvette 002”闪动时取出B2品，放入B3……2.8样品与菌种混合反应5分钟测定完菌种原始发光值后，测完后按Stop键，仪器自动开始5分钟倒计时，迅速将A1、A2……小试管中的混合样移取900uL加入B1、B2……小试管中（注意：一定要一一对应，不同样品间应更换移液器枪头），加完后，轻轻平摇B1、B2……小试管，让样品与菌种充分混匀后放回对应位置。
急性全身毒性试验作业指导书
急性全身毒性试验作业指导书1.定义本法系将一定剂量的供试液由静脉注入小白鼠体内，在规定时间内观察小白鼠有无毒性反应和死亡情况，以决定供试品是否符合规定的一种方法。
2.主要设备及试剂压力蒸汽灭菌器、动物天平、0.9%氯化钠注射液。
3.试验前准备3.1器具灭菌与供试液接触的所有器具置压力蒸汽灭菌器内115℃ 30min。
3.2试验动物准备试验用小白鼠应健康无伤，毛色光滑，眼睛红亮活泼。
须在同一饲养条件下饲养，同一来源，同品种，雌者无孕，体重17-23g。
做过本试验的小白鼠不得重复使用。
4.试验方法4.1供试品数量每批供试品至少2个单位供试品。
4.2浸提介质0.9%无菌无热原氯化钠注射液。
4.3空白对照液0.9%无菌无热原氯化钠注射液。
4.4供试液制备供试液制备应按无菌操作法进行。
4.4.1管类器具：管内腔注入浸提介质至最大容液量，两端封闭，置60℃ 8h。
4.4.2容器类器具：容器内注入浸提介质至公称容量，置60℃ 8h。
4.4.3小型配件或实体类器具：供试品放入一无菌具塞器皿内，按供试品表面积每3cm2加入浸提介质1ml，振摇数分钟，使其浸没为止，置60℃ 8h。
4.4.4未灭菌供试品浸提液使用前应置压力蒸汽灭菌器内115℃灭菌30min。
4.4.5供试液应在制备后24h内使用。
5．试验步骤及观察即时反应5.1将小白鼠随机分为试验和对照两组，每组5只，复试时每组取18-19g的小白鼠10只。
5.2将小白鼠放入固定器内，自尾静脉分别注入供试液和空白对照液，注射速度为0.1ml/s，注射剂量为50ml/kg。
5.3注射完毕后，观察小白鼠即时反应，并于4、24、48和72h观察和记录试验组和对照组动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数。
5.4注射动物反应观察指标按表1规定。
表15.5注意事项5.5.1注射完毕如发现有血或供试液外溢现象，此小白鼠应弃去，另取小白鼠依法操作。
5.5.2试验后待观察小白鼠喂养方法同试验前。
生物毒性仪
一．使用前准备1.仪器配备•ToxScreen毒性仪•移动实验室和测试瓶• 1-100微升移液枪和枪头• 10-1000微升移液枪和枪头2．单个样品试剂的配备2.1配置细菌悬浮液取一瓶冻干发光细菌，加入1 mL 存储缓冲液，混匀，在2 ℃下培养3小时。
为了保持悬浮液温度，将悬浮液试剂瓶放入到盛满水的烧杯中，这样更有利于温度平衡。
还可以在冰箱中放几个盛水的烧杯，可防止停电造成的影响。
该悬浮液可以使用长达5天。
单个样品需要60 uL细菌悬浮液。
2.2配置阳性质控标准液2.2.1氯化铜质控标准液按1:100倍稀释，如配置1 mL稀释液：取10 uL氯化铜原液加入990 uL清水（本地矿泉水即可），混匀，配置成1 mL稀释液。
2.2.2氯乙酸钠质控标准液按1:100倍稀释，如配置1 mL稀释液：取10 uL氯乙酸钠原液加入990 uL清水，混匀，配置成1 mL稀释液。
二．采样测试毒性1.在移动实验室中放入6个测试瓶，分别标记A1 阴性对照M（）A2 阴性对照OB3 阳性对照M B4 阳性对照OC5 样品M C6 样品O2．测试前准备：A) 阴性对照第1个测试管：0.8 ml清水加入0.2 ml重金属缓冲液，抽吸几次混匀第2个测试管：0.8 ml清水加入0.2 ml有机物缓冲液，抽吸几次混匀B) 阳性对照第3个测试管：0.8 ml氯化铜阳性质控标准液加入0.2 ml重金属缓冲液，混匀第4个测试管：0.8 ml氯乙酸钠阳性质控标准液加入0.2 ml有机物缓冲液，混匀C) 样品测试第5个测试管：0.8 ml水样加入0.2 ml重金属缓冲液，反复抽吸几次混匀第6个测试管：0.8 ml水样加入0.2 ml有机物缓冲液，反复抽吸几次混匀3）测试向每个测试管各加入10微升细菌悬浮液在30℃培养.记录15或30分钟RLU，计算每个样品的毒性（通过与相应阴性对照得出）。
生物实验——毒性实验
（⼀）概述某⼀种新药或⼀个新的制剂，于临床使⽤前，必须经过这个步骤。
虽然药物对⼈的作⽤，不完全能在动物⾝上表现出来，但对⼀个新药物来说仍是⼀个很有⽤的参考数据。
因此，为保证病⼈的⽤药安全，新药在临床应⽤前⼀定要进⾏毒性试验。
毒性试验的类型，可根据药物的性质及使⽤途径、⽅法和时间等加以选择。
如有的药物后则产⽣中毒症状；有的药物需长期服⽤才能秦效等。
因此，药物的毒性试验，应根据该药物的特点来决定。
（⼆）急性毒性试验（⼀般安全试验）取体重18－22g的健康不⽩⿏5只，由尾静脉（或腹腔）注射⼀定剂量的药液（容量以0.5ml为宜，可⽤注射⽣理⽔稀释成不同浓度），注射时间为4－5秒，观察有⽆不良反应（如惊厥、四肢瘫痪、步伐不稳、竖⽑、呼吸抑制等）或死亡。
主要以死亡为指标，注射后48⼩时内不得有死亡。
如有死亡应加取⼩⽩⿏10只重新试验，全部⼩⽩⿏在48⼩时内不得有死亡（做过本试验的⼩⽩⿏不得重复使⽤）。
【注】①供试品静脉有困难时，可由腹腔注射，注射量仍为0.5ml，注射时间不限，注射后72⼩时内不得有死亡。
②若某⼀药物⽆安全试验剂量时，可将临床⼈⽤剂量乘以⼀定的安全系数然后再折算成⼩⽩⿏体重的剂量。
安全系数⼤⼩，应根据该药物的纯度及临床试验情况⽽定，⼀般治疗性药物可定为50－100，需长期服⽤的药物可为100以上。
例：某注射液，成⼈（按体重50kg计），每次注射量为4ml，安全系数为50，则⼩⽩⿏（按20g计）的给药剂量为： ⼩⿏剂量＝4×50／50000×20＝0.08ml 取该药0.08ml加0.9％氯化注射液稀释成0.5ml，作为供试品的注射⽤量。
③也可⽤同样⽅法试验（即某⼀剂量注⼊⼩⽩⿏内，若5只中只有1只死亡，则减剂量再试直⾄试出5只⼩⽩⿏均不死亡的剂量）。
求出某药物的安全系数。
计算公式： 安全系数＝⼩⽩⿏耐受量×成⼈体重（g）／成⼈⽤量×⼩⽩⿏体重（g）。
水生生物急性毒性试验一般程序【范本模板】
水生生物急性毒性试验一般程序1、试验准备1）实验容器准备、清洁和消毒处理——容器：大小合适、材料无毒、不易吸附、对生物不造成损伤2）受试生物的采集与驯化3）稀释水（试验关键）——来源：无污染自然水、去氯自来水、配置标准水(OECD ASTM推荐配方)——质量控制：pH、温度、溶解氧、盐度、硬度、无其它污染物，有参比4）环境条件：控制系统2、实验设计1）测试方式选择—-可选用静止、更新式和直流式.——挥发性高、降解速率大化合物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式——BOD高的废水不能用静止式，选用更新式，最好用直流式——生长速率快、代谢快的生物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式2)试验生物选择3）被测毒物的配置-—配成高浓度储备液——不溶或溶解度小用助溶试剂，如丙酮等，并设置溶剂对照,助溶试剂的毒性要小、溶解度高、实验系统用量要少，关键是要了解被测毒物的溶解度4）生物指标确定及试验重点5）试验浓度的设置（获得毒性数据的关键)—-文献资料—-预备试验——浓度确定方式:等对数浓度3、正式试验1)实验浓度的配置2)试验动物的数量——数量分配:5~10——生物量：＜0。
8g/L；个体小的热带种＜0.1g/L3）实验组数-—5个浓度+对照(稀释水)--5个浓度+对照(稀释水）+溶剂对照——对照组死亡率＜10％——3～5个平行（不少于30个受试生物)4）实验周期（暴露时间）-—根据试验目的和生物不同而不同——标准方法：藻类生长抑制试验，72h枝角类急性毒性试验，48h鱼类急性毒性试验,96h5)试验终点观察：不同生物不同，同一实验相同6)理化指标测定：温度、溶解氧、pH、硬度等7）受试毒物浓度确定(计算得的数值VS实测)8)实验记录P.S。
急性毒性试验期间不喂食物4、LC50的求法1）直线内插法——图解计算LC50、EC50的一种简便方法.在半对数纸上作图，即可求解。
2）概率单位法依据：浓度对数与概率单位呈直线关系方法一:查死亡率-—概率单位换算表,然后作图（浓度对数—-概率单位图)方法二：直接用对数——概率纸作图——求直线回归方程——求LC50的置信区间(范围）推荐软件：Trimmed Spearman—Karber Software/Excel/SPSS。
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生物毒性检测作业指导书
1.受试生物
受试生物的选择应遵循以下原则：
——栖息于非污染区、生长良好、健康无病的个体；
——对污染反应较敏感的种类；
——地理分布较广、数量较大，全年在某一实际海区容易采到的，并对其生活习性清楚，易在实验室条件下培养的种类；
——受试生物来源于同一地点、同一种群，力求个体大小基本一致；
——选用受试生物的早期发育阶段（受精卵、幼体）。
2.污染水样采集和致毒实验液的配制
2.1污染水样采集及处理
2.1.1采样应用无毒容器，水样应装满，以免运输过程剧烈摇荡而改变某些水质特性。
采集的水样量，应按实验设计和次数备足。
同一系列试验，应用同时同地采的污水。
2.1.2采水时应记录采样时间、地点，现场测量水温，并观察记录污染的表观现象。
2.1.3采回的水样最好立即用于实验，若需放置，应低温保存。
水样应进行化学分析，测定其盐度、PH、水温、溶解氧、化学耗氧量、营养盐及主要污染物含量，为配制致毒试液提供参考。
2.2致毒试液的配制
2.2.1毒性试验的浓度范围的确定一般应做预实验。
预实验可用较大浓度间隔按比级数配制污水稀释液，如：按污水体积比配制出如下浓度组：
0.01%、0.1%、1.0%、10%、100%。
2.2.2正式试验可根据预实验所提供的浓度范围，按相等的浓度对数间隔安排5个以上的试验浓度组。
2.2.3配制不同浓度的致毒试液时，应先将污水轻轻摇匀，再按需要量取一定体积用清洁海水稀释，注意yoga海盐或除氯自来水调节其盐度，使与受试生物的适盐范围基本一致。
2.2.4若要试验某特定污染物的毒性效应，可人工配制该种污染物的储备液，然后，参照化学分析测得的污水中该污染物的含量，酌情按上述方法，用洁净海水配制试液。
石油类污染物，可单独试验水溶性组分或用少量低毒性的分散剂制备乳浊液后再行配制。
3.试验步骤
a)备好若干洗净的试验容器，并按对照组和各不
同浓度组分别编号；
b）将上述配好的致毒试液，按浓度顺序分别倒入各相应的试验容器中，对照组可依试验目的，加入洁净的海水或受纳水体的海水；
c）按从低浓度至高浓度顺序，移入受试生物。
若受试生物是成体，每组放入10个以上；若受试生物属受精卵，密度约20000~30000个/L；若为贝类幼虫，密度10000~15000个/L；甲宙类无节幼体200~500只/L左右。
受试生物移入试液前，需经必要检查，受精卵、幼小个体应在解剖镜下观察，除去死亡和异常个体；
d）记录试验起始时间，检查时间是2h、4h、8h、10h、12h、16h、20h、24h、32h、40h、48h、60h、72h、96h，发现死亡个体，应及时检出，统计记录
24h、48h、72h、96h各时间内的死亡或异常的总个体数。
受精卵和微小个体可用显微镜或解剖镜观察；
e）试验期间，每隔24h更换一次试液，注意勿改变各组试液浓度。
换新试液时，微小个体和受精卵可用孔径小于受试个体的筛子滤出，再放回相应的新试液中；
f）试验结束，为统计各组个体差异，应及时测量各组个体大小。
微小个体可进行显微测量若干数量，以比较各组生长发育受抑制情况。
必要时，还可取水样和受试生物样分析，比较试验前后污染物质在水体和生物体内的变化；
g）每一试验应有两个平行试验，并按上述步骤和条件，重复试验两次以上。
4.记录与计算
4.1按各致毒事件，把观察到的受试生物死亡或
异常的个体数记入表中，依据表中数据，计算死亡百分率。
由死亡百分率，查出对应的概率单位记入表中。
4.2半致死浓度的求法
概率单位法
求算某一试验事件的半致死浓度，可以死亡率的概率单位为纵坐标，试液浓度的对数为横坐标，在对数坐标纸上标出各数据点，拟合各数据数绘出一直线，在直线上查出概率单位为5的点所对应的浓度对数值，其反对数即为LC50.
由此法得出的lgLC50的95%可置信限，其计算如式（14）：
可置信限= lgLC50±1.96×2S/N2 (14)
式中：
S——表示标准差。
亦即相当于直线斜率的倒数。
数值等于概率单位6和4之差除其相应的浓度对数值之差；
N——死亡率在16%~84%范围内的各组受试生物总数。