生化实验一 总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖的测定
三、实验器材
1、材料：山芋粉 2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100 可见分光光度计、移液器 3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、 吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、 漏斗、离心管、六凹反应盘、pH试纸（1 ～14）
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml） 2、DNS试剂 3、6mol/L HCl 4、6mol/L NaOH 5、I2-KI溶液
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
2、样品中总糖的水解、提取
准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中
加3ml蒸馏水，调成糊状
取1～2滴于六凹 反应盘中，加1滴 I2-KI溶液，如果 完全不显蓝色， 即可进行下面的 操作。
再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl
沸水浴，30min (不时搅拌) 冷却至室温 用6mol/L NaOH调pH7.0（ pH试纸） 蒸馏水定容至100ml,混匀
合上盖，0键校零MODE键切换到A，参比 Nhomakorabea放入到光路中
合上盖，100键调零
将待测液依次放入到光路中，即可得出 待测液的吸光度。
比色皿的使用
管号
试剂
标准葡萄糖溶液 /ml
0
1
2
3
4
5
6
7
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。
而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。
测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。
本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。
2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。
2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。
2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。
5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。
2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。
5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。
3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。
糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。
这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。
4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。
通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。
5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。
总糖和还原糖的测定
第三章 基础实验（一）糖化学实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2 + Na 2SO 4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜）（淡黄色）滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。
碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
生 化 实 验
(3) 0.10mo1/L醋酸溶液100mL
(4) 0.01mo1/L醋酸溶液50mL
（5）0.5%酪蛋白溶液（以0.01M NaOH作溶剂）100ml
（6）0.01%溴甲酚绿指示剂
（7）0.02mo1/L氢氧化钠溶液100ml
（8）0.02mo1/L盐酸溶液100ml
1.00N醋酸溶液（ml）2.4————
0.1N醋酸溶液（ml）—4.01.0——
0.01N醋酸溶液（ml）———2.50.62
酪蛋白醋酸钠溶液（ml）1.01.01.01.01.0
溶液的最终pH3.24.14.75.35.9
沉淀出现的情况
（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以“—、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个是酪蛋白的等电点。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2。
NH2和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所
形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成
有色物质。此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸
在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
(13) 2％氯化钡溶液150mL
四、实验操作
1、蛋白质的盐析
中性无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
4、有机溶剂沉淀蛋白质
取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL 95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告还原糖和总糖的测定实验报告导言：糖是我们日常生活中常见的食品成分之一，它不仅为我们提供能量，还赋予食物甜味。
然而，不同类型的糖对人体的影响是不同的。
为了更好地了解糖的含量和类型，我们进行了还原糖和总糖的测定实验。
实验目的：1. 学习使用化学方法测定食品中的还原糖和总糖含量；2. 了解不同类型糖的含量及其对人体的影响。
实验原理：还原糖是指能够还原氧化剂的糖类物质，如葡萄糖、果糖等。
总糖则包括还原糖和非还原糖，如蔗糖、乳糖等。
在实验中，我们将使用菲林试剂对还原糖进行定量分析，使用硫酸对总糖进行水解，然后再用菲林试剂进行测定。
实验步骤：1. 准备食品样品：我们选择了三种常见的食品作为样品，分别是苹果、饼干和牛奶；2. 进行还原糖测定：将样品研磨成粉末状，称取适量样品，加入适量的菲林试剂，加热反应，待溶液冷却后，用水稀释至一定体积，通过分光光度计测定溶液的吸光度，计算还原糖的含量；3. 进行总糖测定：将样品称取适量，加入适量的硫酸，用水稀释至一定体积，加热水浴进行水解，待溶液冷却后，用菲林试剂进行测定，计算总糖的含量。
实验结果：经过实验测定，我们得到了三种食品样品中还原糖和总糖的含量数据。
苹果中还原糖含量为X%，总糖含量为X%；饼干中还原糖含量为X%，总糖含量为X%；牛奶中还原糖含量为X%，总糖含量为X%。
讨论与分析：通过对实验结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 不同食品中的糖含量差异较大，苹果中的糖含量较高，而饼干和牛奶中的糖含量较低；2. 还原糖和总糖的含量也存在差异，苹果中的还原糖含量较高，而饼干和牛奶中的还原糖含量较低；3. 总糖的含量比还原糖的含量高，这是因为总糖包括了还原糖和非还原糖的含量。
结论：通过本次实验，我们成功测定了苹果、饼干和牛奶中的还原糖和总糖的含量。
实验结果表明，不同食品中的糖含量存在差异，而总糖的含量比还原糖的含量更高。
这些数据对我们了解食品的营养成分和糖的类型具有重要意义。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。
二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。
还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。
测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。
2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。
3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。
4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。
5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。
6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。
7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。
同时进行空白试验并记录滴定体积V0。
8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。
四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。
五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。
其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。
这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。
六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。
还原糖和总糖的测定
生物化学综合实验报告题目：3，5—二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖姓名：学号：同组成员：分院(系）：专业班级：指导教师:完成日期：年月日1。
实验目的用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量2。
实验原理先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。
3。
实验仪器和试剂试剂：1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L HCl，6mol/L NaOH仪器:25，100ml容量瓶、1，5ml吸量管、50ml移液管、100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱4。
实验步骤一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0。
2、0。
4、0.6、0。
8、1.0毫升在加入蒸馏水2。
0、1.8、1。
6、1。
4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1。
5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min，冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线，用1号样调零，测其分光度，制得标准曲线。
二、还原糖提取：取3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50摄水中保温20min，离心，取滤液,用100ml容量瓶定容得还原糖待测液.总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸馏水搅匀,100摄下恒温水浴30min，冷却,NaOH调节PH至中性,离心,滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液.测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1。
0、1。
0、0、0毫升，总糖0、0、0、0.5、0。
5毫升,蒸馏水2。
0、1。
0、1。
0、1。
5、1。
5毫升,DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度.5数据处理葡萄糖标准曲线表管号0 1 2 3 4 5 含糖总量（mg）0 0.2 0。
4 0。
6 0。
8 1 葡萄糖标液(ml）0 0.2 0.4 0。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量测定的基本原理和方法。
2、熟练使用分光光度计进行比色分析。
3、培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理1、总糖的测定总糖是指样品中所有能够还原斐林试剂的糖类物质的总和，包括还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原糖（如蔗糖）。
在本实验中，首先将非还原糖通过酸水解转化为还原糖，然后利用还原糖与斐林试剂反应生成氧化亚铜沉淀的特性，通过比色法测定总糖的含量。
2、还原糖的测定还原糖能够直接与斐林试剂反应，生成氧化亚铜沉淀。
在碱性条件下，氧化亚铜沉淀与酒石酸钾钠反应，形成蓝色的络合物。
通过分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对比，即可计算出还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、实验材料（1）葡萄糖标准溶液（1mg/mL）：准确称取 100mg 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 100mL。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取 63g DNS 和 262mL2mol/L NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）6mol/L HCl 溶液。
（4）10% NaOH 溶液。
（5）待测样品：如水果汁、蔬菜汁等。
2、实验仪器（1）分光光度计。
（2）恒温水浴锅。
（3）电子天平。
（4）移液器。
（5）容量瓶（100mL、500mL）。
（6）具塞刻度试管（25mL）。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）分别吸取 00、02、04、06、08、10、12mL 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）于 25mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 20mL。
（2）向各试管中加入 20mL DNS 试剂，摇匀后在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温。
（3）用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。
（4）以空白管（00mL 葡萄糖标准溶液）为参比，在 540nm 波长下测定各管溶液的吸光度。
还原糖和总糖的含量测定
还原糖和总糖的含量测定材料：小麦面粉；精密pH 试纸四、操作步骤1. 制作葡萄糖标准曲线取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作2. 样品中还原糖和总糖的测定（1）还原糖的提取准确称取3.00g 食用面粉，放入100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。
将浸出液（含沉淀）转移到50mL 离心管中，于4000r/min下离心5min,沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）总糖的水解和提取准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL 蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。
待三角瓶中的水解液冷却后，加入1 滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH 中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。
将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。
（3）显色和比色取4支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。
加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
五、结果与计算：计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
实验一 还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定一、实验目的1、了解还原糖和总糖含量的测定原理，熟悉实验步骤。
2、掌握还原糖和总糖含量的测定方法。
二、实验项目及所用仪器1、还原糖：Benedict试剂，烧杯，伏安电极，示波器，旋涡振荡仪；2、总糖：滤纸、热板、氧化棉芯，旋涡振荡仪。
三、实验原理1、还原糖：Benedict试剂由碳酸锰盐溶液、碳酸铵溶液、氯化钠溶液和抗上皮染料橙Ⅲ组成。
当还原糖作用于Benedict试剂时，会与其中的锰离子发生反应，生成蓝色配体，从而使抗上皮染料橙Ⅲ发生变色；2、总糖：将样品与氧化棉芯一起置于热板中，加热到900℃时，碳水化合物在此温度条件下完全分解为糖和水，糖与热板表面发生热反应而分解，引起氧化棉芯之上有显著黑色浓缩形成，即糖皿现象，根据糖皿质量来推算样品中碳水化合物的质量。
四、实验步骤1、还原糖测定：（1）将1ml Benedict溶液放至烧杯中；（2）向烧杯中加入1ml样品液体，根据不同液体不同加入2-3滴 (液体较稠时) 或1-2滴 (液体较洁时) 酸碱度调节液；（3）将伏安电极组件放入烧杯中，并选取示波器连接；（4）加热26℃下水浴加热，取示波器时加热过程中的电势；（5）检测峰面上的电势，来比较是否有变色；（6）如果有变色，就用旋涡振荡仪对发生变色的液体测定样品含有的还原糖含量。
（1）将样品5ml液体流入滤纸中，滤取液体；（2）将滤取的液体均匀的淋洒在氧化棉芯之上，并将其置于热板之上；（3）将热板加热，观察过程中糖皿现象的变化，双环现象表示反应完成；五、结果计算还原糖：检测变色后用旋涡振荡仪测定吸光度值，用标准曲线求出浓度；总糖：使用朱诺重量比法称取峰面上的焦灰，根据标准曲线求出浓度，以重量比计算样品中碳水合物的含量。
六、安全措施1、食品分析实验中，需要遵守实验室安全规章制度，具体包括：实验前应安全检查仪器，按要求穿防护服、佩戴护目镜，使用专用工具等；2、使用热源时，需要注意：电源线耐热、工作在室内，不能离开，保持室内通风；3、使用化学试剂时，应具备良好的操作习惯，佩戴护手镯、护目镜，禁止吞咽及外用，实验结束后将试剂放回原位，实验结束后要做好清洗工作。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中还原糖和总糖的含量，了解不同食品中糖的含量差异。
实验原理，还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，如葡萄糖、果糖等；总糖是指食品中所有的糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。
在本实验中，我们将利用费林试剂将还原糖氧化成酸，然后用氢氧化钠将酸中和，再用硫酸将非还原糖氧化，最后用费林试剂滴定还原糖。
实验步骤：1. 样品制备，取不同食品样品，如蜂蜜、果酱等，分别称取适量样品。
2. 提取糖液，将样品加水稀释，加热至沸腾，过滤得到糖液。
3. 还原糖的测定，取一定量糖液，加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V1。
4. 总糖的测定，取一定量糖液，加入硫酸，再加入氢氧化钠，加热至沸腾，冷却后加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V2。
实验数据：样品 | V1（mL） | V2（mL） | 。
蜂蜜 | 12.3 | 15.6 | 。
果酱 | 8.7 | 10.5 | 。
实验结果：1. 蜂蜜中还原糖的含量为12.3mL，总糖的含量为15.6mL。
2. 果酱中还原糖的含量为8.7mL，总糖的含量为10.5mL。
实验分析：通过实验数据可以看出，蜂蜜的总糖含量明显高于果酱，说明蜂蜜中含有更多的糖类物质。
而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜，这可能是因为果酱中的果糖含量较高。
通过本实验，我们可以初步了解不同食品中糖的含量差异，为食品质量的评价提供了一定的依据。
实验结论：本实验通过测定不同食品中的还原糖和总糖含量，初步了解了食品中糖的含量差异。
蜂蜜中总糖含量明显高于果酱，而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜。
这为我们对食品质量的评价提供了一定的依据。
实验注意事项：1. 实验中需要注意操作的精确性，尤其是在滴定过程中需要小心操作，避免误差的产生。
2. 实验中的废液需要妥善处理，不可直接倒入下水道，以免对环境造成污染。
结语：通过本次实验，我们初步了解了食品中还原糖和总糖的测定方法，以及不同食品中糖的含量差异。
实验一还原糖和总糖的测定——3,5二硝基水杨酸比色法
《生物化学》实验指导书适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学孝感学院生命科学与技术学院生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3. 进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。
4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8. 实验后，要及时完成实验报告。
目录实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１实验二油脂酸价的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５实验三蛋白质的提取及浓度测定¬(紫外吸收法)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７实验四淀粉酶活力的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９实验五酶的激活和抑制作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１３实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１４实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６实验八琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
还原糖和总糖的实验报告
还原糖和总糖的实验报告实验目的本实验旨在使用化学方法测定还原糖和总糖的含量，并通过实验结果对食品样品进行分析。
实验材料•还原糖标准溶液•总糖标准溶液•食品样品•蒸馏水•试剂瓶•烧杯•称量器•离心机•恒温水浴•分光光度计•显色剂实验步骤1.准备工作–将实验室器材清洗干净。
–准备还原糖和总糖的标准溶液。
–根据实验需要，调整分光光度计的波长和基线。
2.样品制备–将食品样品加入烧杯中，使用称量器测量准确的样品质量。
–加入适量的蒸馏水，使样品溶解均匀。
3.酶解还原糖–取一定量的样品溶液，放入恒温水浴中加热。
–加入适量的酶解液，保持一定的温度和时间，使还原糖完全酶解。
4.离心分离–将酶解液离心一段时间，使得悬浮的物质沉淀在底部。
–将上清的液体转移到试剂瓶中。
5.光度计测定–在分光光度计中设置合适的波长。
–取一定量的样品溶液和标准溶液，放入分光光度计中分别测定吸光度值。
6.统计数据–根据测得的吸光度值，使用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。
–记录每个样品的测量值和计算结果。
7.数据分析–对比不同食品样品中的还原糖和总糖含量。
–推断食品样品的甜度和糖分含量。
实验注意事项1.实验过程中要注意实验器材的洁净，避免污染样品。
2.在酶解过程中，要控制好温度和时间，确保还原糖能够完全酶解。
3.分光光度计的使用要按照正确的方法进行操作，确保测量结果准确可靠。
4.实验数据的记录要详细，以便后续的数据分析和结果推断。
实验结果通过实验测定和计算，我们得到了不同食品样品中的还原糖和总糖的含量。
根据这些数据，我们可以比较不同样品之间的甜度和糖分含量，进一步分析食品的品质和营养成分。
实验结果将有助于我们了解食品的糖分成分，为食品安全和营养评估提供数据支持。
总结通过本次实验，我们掌握了使用化学方法测定还原糖和总糖含量的实验步骤和技巧。
实验结果为我们分析食品样品的甜度和糖分含量提供了数据支持。
在今后的食品分析和研究中，我们可以运用这些方法来评估食品的品质和营养成分，并为食品安全和营养评估提供科学依据。
南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体的分布，不仅反映植物体碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。
分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。
3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水酸法在波长540nm下，一定浓度围，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。
mbert-Beer定律A=lg(I 0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（茜配置）（4）6mol/L NaOH（茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。
实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。
，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。
产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。
通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。
2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。
先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。
水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。
2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。
（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。
（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。
（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。
（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。
（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中的还原糖和总糖含量，了解食品中糖类成分的含量和比例。
实验原理，还原糖是指具有还原性的单糖和部分醛酮糖，如葡萄糖、果糖等。
总糖是指所有糖类的总和，包括还原糖和非还原糖。
测定还原糖的方法主要是费林试剂法，利用还原糖与费林试剂发生还原反应生成蓝色络合物，通过比色测定还原糖的含量；而测定总糖的方法主要是硫酸-酚试剂法，利用总糖与硫酸-酚试剂在酸性条件下发生酚酞反应生成红色络合物，通过比色测定总糖的含量。
实验步骤：1. 样品制备，取适量食品样品，经过粉碎、过筛等处理，制备成均匀的样品。
2. 还原糖测定，取一定量的样品溶液，加入费林试剂，经过恒温水浴反应，测定吸光度，并通过标准曲线计算出还原糖的含量。
3. 总糖测定，取一定量的样品溶液，加入硫酸-酚试剂，经过恒温水浴反应，测定吸光度，并通过标准曲线计算出总糖的含量。
实验结果：经过实验测定，样品A的还原糖含量为10g/100g，总糖含量为15g/100g；样品B的还原糖含量为8g/100g，总糖含量为12g/100g。
实验结论：通过本次实验，我们成功测定了食品样品中的还原糖和总糖含量，了解了食品中糖类成分的含量和比例。
实验结果显示，样品A的还原糖和总糖含量均高于样品B，说明样品A中糖类成分更为丰富。
这对于食品质量的评价和改进具有一定的指导意义。
实验总结：本次实验通过费林试剂法和硫酸-酚试剂法测定了食品样品中的还原糖和总糖含量，实验结果准确可靠。
实验过程中，我们严格按照实验步骤操作，保证了实验数据的可靠性。
通过本次实验，我们不仅掌握了测定还原糖和总糖含量的方法，也增加了对食品中糖类成分的认识，为日常生活中的食品选择和饮食健康提供了参考依据。
在今后的实验中，我们将继续加强实验操作的规范性和数据的准确性，不断提高实验技能和科研能力，为食品质量和食品安全做出更大的贡献。
实验一还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法。
二．原理在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。
过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。
放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。
待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。
以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。
还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定原理3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可用比色测定。
操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验方法一葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准曲线的制定：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，摇匀。
浓度为1mg/Ml。
取9支25mm×250mm的试管，分别按下表加入试剂：（ml）项目0 1 2 3 4 5 6 7 8G标液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝基水杨酸加入21.5mL蒸馏水,摇匀。
于520nm波长处测A值。
以葡萄糖mg数为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
二样品中总糖和还原糖含量的测定以测定山芋中总糖和还原糖含量为例。
1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放在100mL烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加工50-60mL蒸馏水，于50o C恒温水浴中保温20分钟，过滤，将滤液收集在100mL 容量瓶中，再定容至100mL。
2．样品中总糖的水解及提取：准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸，15mL水，在沸水浴中加热半小时，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈蓝色。
冷却后加1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100mL。
再精确吸取上述溶液10mL于100mL 容量瓶中，定容到刻度，混匀备用。
3．样品中糖含量的测定：取7支队5mm×250mm试管分别按下表加入试剂：加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。
实验一 还原糖和总糖的测定
四、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL葡萄糖标准液（mL）蒸馏水（mL）DNS（mL）葡萄糖含量（mg）光密度值（OD540nm）002 1.50 10.2 1.8 1.50.2 20.4 1.6 1.50.4 30.6 1.4 1.50.6 40.8 1.2 1.50.85 1.0 1.0 1.5 1.06 1.20.8 1.5 1.2将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。
调波长540nm，用0号管调零点，测出1~6号管的光密度值。
以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
2．样品中还原糖和总糖的测定（1）还原糖的提取准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。
将浸出液（含沉淀）转移到50mL离心管中，于4 000r/min下离心5min，沉淀可用20mL蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）总糖的水解和提取准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。
待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。
将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。
（3）显色和比色取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。
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实验一总糖和还原糖含量的测定
（3,5－二硝基水杨酸法）
一、目的要求：
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:
在NaOH存在的条件下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色
三、试剂和器材
1、试剂
3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即葡萄糖浓度为1.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
2、材料
山芋淀粉
四、器材
723型分光光度计，分析天平，水浴锅，研钵，烧瓶，试管若干等。
五、操作
1、葡萄糖标准曲线制作
取干净试管6支，按表1进行操作。
以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。
管号
0 1 2 3 4 5
试剂
标准葡萄糖溶液∕ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水∕ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
DNS试剂∕ml 2 2 2 2 2 2
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水∕ml 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 葡萄糖含量∕mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
A540nm0 0.051 0.110 0.150 0.205 0.253
2、样品中还原糖的提取与测定
准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。
于50℃恒温水浴中保温0.5h，不时搅拌，使还原糖浸出。
将浸出液（含沉淀）转移到100ml离心管中，于4000r∕min下离心5min，沉淀用20ml蒸馏水洗一次，再离心，将两次离心的上清液合并，用蒸馏水定容至100ml，混匀，作为还原糖待测液。
取1ml进行还原糖含量测定。
3、样品总糖的水解及提取
准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。
再向烧瓶中加入6mol/L HCl 10ml，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I2-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
水解完毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml 于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液。
取1ml 总糖水解液，测定其还原糖含量。
六、结果处理
1、各浓度标准葡萄糖溶液按表1进行反应后，溶液吸光值见表1。
以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。
如图1所示。
图1 葡萄糖标准曲线
经分析得标准曲线回归方程为：y=0.2524x+0.0020，相关系数R2=0.9984。
2、还原糖溶液按照表1进行反应后，测定得到溶液于540nm处的吸光值为：A1=
将A1代入回归方程得c1=
还原糖（mg∕g）= （c1×100）∕m
=
3、总糖溶液按照表1进行反应后，测定得到溶液于540nm处的吸光值为：A2=
将A2代入回归方程得c2=
总糖（mg∕g）= （c2×1000×0.9）∕m
=
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml；
V──还原糖或总糖提取液的总体积，ml；
m──样品重量，g；
0.9──乘以0.9是为了从测定的总糖水解成单糖量中扣除水解时所消耗的水量。
注意事项
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
七、思考题
1. 简述3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的原理？
2. 本实验中盐酸、氢氧化钠和碘-碘化钾溶液的作用是什么？。