菊花提取物的抗氧化活性研究

ＡＯＡ（％）＝（Ａ０一Ａ）／Ａ。×１００％ １．２．３ Ｆｅ“次黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶一ＴＢＡｓ生成体系ｎ ４
加样顺序为：Ｆｅｓｏ．（２ｍｍ。１，Ｌ）ｏ．０４ｍｌ、黄嘌呤氧化酶 （简写：ｘｏ）（５ｕ／ｍ１）３．５ ｕ ｌ、脱氧核糖（３０ｍｍ０１，Ｌ）ｏ ２ｍｌ、 ＥＤＴＡ（５吼ｏｌ，Ｌ）Ｏ．０４ｍ１、Ｈ２０２（１７．６黝ｏｌ，Ｌ）ｏ ０１ｍｌ、加入 ｏ．１ｍｌ样品、ｐＨ７．４ ＰＢｓ（Ｏ．１ ５ｍｏｌ／Ｌ）１．４８ｍｌ、次黄嘌呤（简 写：ｘ）（２ｍｏｌ／Ｌ）ｏ．２ｍｌ总体积为２ｍｌ（除ＰＢｓ、Ｆｅ∞．用重蒸水 配制外．其它试剂均用ｐＨ７．４ ＰＢｓ ｏ．１５ｍｏｌ／Ｌ配制）。然后，３５ ℃温浴１５ｍｉｍ．取ｌｍｌ反应液加１％ｗ／ｖ ＴＢＡ（ＮａｏＨ ｏ ０５ｍｏｌ／Ｌ 配制）及冰醋酸ｌｍｌ，混匀后放人沸水浴３０ｍｉｎ，冷却。在５３２ｎｍ 处测其吸光度Ａ，以不加样品管的吸光度为ｋ：清除活性以抑 制ＴＢＡｓ生成量Ａｓ３２ｎ。值的抑制百分率表示即（Ａ。一Ａ）／Ａ。×ｌｏｏ％。 １．２．４超氧阴离子的邻苯三酚“ｕＩｎｉｎ。ｌ发光体系
７５ｉ—Ｇｗ型分光光度计（上海分析仪器厂）、ＧＨＧ—ｃ型生物 化学发光测量仪（上海市检测技术所检测仪器厂）、ＤＧＪｏ．５一Ｉ｜ 冷冻干燥机（军事医学科学院实验仪器厂）、旋转蒸发器
（Ｒｏ＝ｊ ｒｙ Ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ ＲＥ一４ ７，ＹＡＭＡＴ０ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ
ｃ。，二二ｄ Ｔｏｋｙ。，Ｊａｐａｎ）、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｊ２—２１Ｍ高速冷冻离心机 ３ｅ：息ａｎ，ＵＳＡ）。 ：：方法 二．：二提取工艺。１。’
参考文献(8条) 1.苏祝成 杭白菊浸提液的不同萃取分离物对o-·2自由基清除作用研究 1995(02)
2.胡春 菊花总黄酮的提取工艺优化[期刊论文]-广州食品工业科技 1996(02)
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Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａ ｓｔＩｌｄ”ｖａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｎ ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｖｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆＦｌｏｓ ｃｈｒｙｓａｎｔｌｌｅｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔ Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ允】Ｉ
ｏｔ、ｎａＶｏｎｅｓ Ｓ０ｍｅ ｐｒｅｃｃｓｓｃｓ ｔｏ ｅｘｔｒａｃＩ ａａｖＯｎｅｓ打Ｏｍ ｃｈｌ）％ａｎｔｈｅｍｕｍ ｆｏｒ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｃ ｏｘｙｇｅｎ ｒａｄｉｃａｌ ｗｅｒｅ ｒｅｐｏｒｃｅｄ １兀
照物为标准ＳＯＤ。
ｉ．：．５芦丁含量测定”１
Leabharlann Baidu
芦丁标准曲线的绘制：取１．２，４，６ｍｌ芦丁标准溶液 Ｌ ０．２８４ｍｇ／ｍ１）加入３０％乙醇补充至１２．５ｍｌ：加人０．７ｍｌ ＮａＮＯ， （１：２ ０）摇匀，放置５ｍｉｒｌ＝再加人０．７ｍｌ Ａ１（ＮＯ，），（１：１０）６ｍｉｎ 后加人５ｍｌ ｉｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ混匀用３０％乙醇定容至２５ｍｉ：ｌＯｍｉｎ
【ｈｌｓ ｐ印ｃｒ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｎａｖｏｎｅｓ ｃｏｕｌｄ ｓｃａｖｅｎｇｅ·ＯＨ、Ｏ＝２ ａｎｄ ａｆ诧ｃｔ ｔｈｃ ａｎｔｉ．ｏｘｊｄａｔｉｖｅ
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０．９９ｎｇ／ｇ菊花、氯仿萃取物为０．２６ｎｇ／ｇ菊花。其含量按大小 顺序排列为：７０％乙醇授提＞水浸提＞正丁醇萃取＞乙酸乙酯萃 取＞氯仿萃取。 ２．２菊花提取物的抗氧化活性 ２．２．１菊花提取物对卵黄脂蛋白ＬＰＯ抑制话性
２结果与讨论
由表１可以发现，样品Ｉ对卵黄脂蛋白ＬＰＯ有抑制作用． 随着芦丁含量的增加样品Ｉ对卵黄脂蛋白ＬＰｏ的抑制率也加大，
方法：(1)选用微波萃取法提取菊花黄酮,分别考察乙醇浓度、微波提取时间和料液比对菊花黄酮提取率的影响,在单因素试验结果的基础上设计L9(34)正交优 化试验,探讨各影响因素综合作用条件下对提取率的影响,找出主、次影响因素和最佳组合条件参数,得到提取率最高的条件来提取制备菊花黄酮。(2)通过预试验 及吸附特性,选取AB-8大孔吸附树脂对菊花黄酮提取物进行分离纯化,分析此树脂对菊花黄酮的静态及动态吸附、解吸特性,通过改变洗脱剂浓度、上样量和静置吸 附时间探索较好的分离纯化条件,得到纯度较高的菊花黄酮。(3)利用高效液相色谱(HPLC)、高效液相色谱-质谱联用(HPLC/MS)、二级质谱(MS/MS)等技术对得到的 菊花黄酮进行分析,通过与标准物质比对、质谱进行分子量及结构分析,确定其中主要含有的黄酮类成分。(4)试验大鼠分为阴性对照组、高脂模型对照组、菊花黄 酮低剂量组、菊花黄酮中剂量组和菊花黄酮高剂量组5个组,阴性对照组饲料配方参照美国营养学会推荐的AIN-93M试验动物合成饲料配方配制而成,该配方中的蛋 白质、脂肪、维生素、矿物质的含量是保证动物生长发育所必需的,在此基础上适当调整蛋白质和蔗糖的比例,增加饱和脂肪含量,制成高脂饲料,除阴性对照组外 其余各组均饲以高脂饲料,受试物各组分别给予受试物菊花黄酮提取物25、50、100mg/bw·kg·d灌胃。连续喂养8周,测定各组大鼠体重,血清总胆固醇(TC)、甘油 三酯(TG)、高密度脂蛋白胆围醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、脂蛋白脂酶(LPL)、载脂蛋白B(ApoB),取肝脏和主动脉弓作病理切片 。取肾周脂肪组织,利用逆转录PCR的方法观察各组大鼠脂肪组织中过氧化物增殖激活受体PPARγ的表达。
Ｏ
其峰值（ＣＰ６ｓ）计算，重复测定三次，取平均值。空白对照用
１０ ｐ １０．０５ｒａｏｌ／Ｌ ｐＨ７．８ ＰＢＳ代替样品液。 按下式求出各样品浓度点的发光抑制率（％）：即以发光
抑制率为纵坐标．样品对数浓度为横坐标，绘出发光抑制曲线，
ｏｏ＂《 ０
求出抑制发光强度５０％的样品浓度（ｎｇ／ｍｌ，即ＩＣ５０）。阳性对
鋈薹型堑塞
！垒色型兰！
：：：：：＝：：：：竺：：：
向测量管加入ｌｏ“ｌ样品液，然后再加Ａ２０ ｐ ｌ １ｍｏｌｌ
Ｌ邻苯三酚（简写为ＰＡ），最后加入９７０ ｕ １鲁米诺一碳酸缓冲
０
液混合液（ＣＢ—Ｌ混合液，Ｌｕｍｉｎｏｌ终浓度为０．１ｒｍｏｌ／Ｌ），加后
１５ｓ开始连续测量，测定６ｓ的发光强度（ＣＰ６ｓ）连续２０次，取
二．二材料、试剂与仪器 千杭自菊：购于市场．绞碎备用。 卵黄悬液：新鲜鸡蛋去卵清，卵黄用等体积的ｐＨ７．４５，
ｏ二＿。一，Ｌ磷酸钠缓冲液（ＰＢｓ）配成１：ｉ的悬液，磁力搅拌１０ｍ址 再用ｐＢｓ稀释成１：２５的悬液（置于冰箱中备用）。
次黄嘌呤【Ｆｌｕｋａ公司）、黄嘌呤氧化酶（酶活力５ｕ，ｍｌ， 广卅１军事医学研究所）、２一脱氧一Ｄ核糖（ｆｅｉｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ 二ｅ二。÷一。ｅｒｇ，ｎｅｗ ｙｏｒｋ）、硫代巴比妥酸（生化试剂，上海试剂 二厂。
干菊花绞碎，加入１５倍体积７ ｏ％乙醇热浸提１２ｈ．抽滤， 滤渣用热水冲洗，滤液减压浓缩．蒸去乙醇，３ ｏｏｏｒ／ｍｉｎ离心 ：ｏ－二ｊ上清液保存待用（样品Ｉ）。取一定量样品Ｉ，用２倍
万方数据
品Ｖ（作为对照）。 １．２．２ Ｆｅｎ诱发卵黄脂蛋白ＰＵＦＡ过氧化体系…。
选用１：２５的卵黄悬液吸取ｏ．２ｍｌ，加入一定量的样品．加 入ｏ，２ｍｌＦｅｓｏ．２５衄ｏｌ／Ｌ，用ｐＨ７．４，ｏ １ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢｓ补充至２ｍ！， ３７℃振荡１５ｍｉｎ，取出后加人ｏ．５ｍｌ三氧乙酸（简写ＴｃＡ），３５００ｒ／ ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，吸取２ｍｌ上清液加入ｌｍｌ硫代巴比妥酸（简写 ＴＢＡ）．加塞，放人沸水浴中１５ｍｉｎ，冷却后，于５３２ｎｍ处比色测 出吸光度（Ａ）值：以不加样品管的吸光度为（Ａ．）。样品抗氧 化活性（ＡｏＡ）用对卵黄脂蛋白ＬＰｏ的抑制率表示：
系曲线的回归方程式ｙ：３．５ ６９９Ａ＋０，０２０６相关系数ｒ＝０．９９９５。
敲芦丁含量与ＡⅢ值成线性关系：用此方程式得知Ａ５。。值后可 以算出对应的芦丁含量。
明了黄酮类化合物与抑制作用有关。 由表３可见，样品Ｖ对卵黄脂蛋白ＬＰＯ有抑制作用．随着
芦丁含量的增加样品Ｖ对卵黄脂蛋白ＬＰＯ的抑制率基本上随之
菊花是菊科植物菊（ｃｈｒｙ８ａｎｃｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆ０１ｉｕｍ Ｒａｍａｔ） 体积１００％的正丁醇萃取２次，萃取液蒸干溶剂，再用水定容，
的头状花序．为多年生草本，在我国大部分地区有栽培。传统 得样品ＩＩ。取一定量样品Ｉ，用２倍体积１００％的乙酸乙酯。萃
医学认为菊花的功效包括清热、明目、解毒，治疗头疼、眩晕、 心胸烦热、疗疮等作用，民间更以饮用菊花水来解暑热。菊花
２．：黄酮含量测定 ２：．１芦丁标准曲线
说明黄酮类化合物与抑制效果有关。这是与文献结果相符合的，”。 由表２可见，样品Ｉ再经过正丁醇萃取后所得的样品ｌＩ对
根据标准芦丁样品的含量与ＡⅢ值可绘制标准曲线（图１） 用最小二乘法作线性回归，得芦丁含量（ｙ“）与吸光度Ａ自女关
卵黄脂蛋白ＬＰＯ仍有抑制作用，且话性有所提高。随着芦丁含 量的增加样品ＪＩ对卵黄脂蛋白ＬＰＯ的抑制率也加大，进一步证
！：：：：：：＝＝：＝：２：：
！垒曼型兰！
蚤茎熊匹塞
菊花提取物的抗氧化活性研究
张尔贤方黎张捷俞丽君 肖湘 汕头大学理学院生物学系 汕头５１５０６３
摘要通过菊花提取物对Ｆｅ２＋诱发卵黄脂蛋白ＰｕＦＡ过氧化体系、ＴＢＡｓ生成体系和邻苯三酚一Ｌ吼ｉｎ。ｌ发光体
系的抑制作用，研究了菊花的不同提取物的抗氧化活性。结果表明．菊花黄酮类化合物有清除·ｏＨ、０·：的能力， 且有着较强的抗氧化活性，并且发现菊花抗氧化活性与黄酮类化合物含量相关。 关键词菊花 黄酮类化合物抗氧化活性脂质过氧化硫代巴比妥酸反应物
取２次．萃取液蒸干溶剂，再用水定容，得样品ＩＩＩ。取一定量 样品Ｉ，用２倍体积１００≈的氯仿，萃取２次．萃取液薰干溶剂，
含黄酮类化合物，本研究通过对菊花的抗氧化作用的初步研 究．为进一步开发菊花的保健效用提供理论依据。
再用水定容，得样品Ⅳ。 干菊花绞碎，１５倍体积水直接浸提１２ｈ，低温浓缩获得样
１材料与方法
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！！！：ｉ！ １１．！±！．！！
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万方数据
万方数据
菊花提取物的抗氧化活性研究
作者： 作者单位： 刊名：
英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数：
张尔贤， 方黎， 张捷， 俞丽君， 肖湘 汕头大学理学院生物学系,汕头,515063
食品科学 FOOD SCIENCE 2000，21(7) 46次
相似文献(10条)
1.学位论文 付为琳 菊花黄酮的提取纯化及其对脂代谢紊乱大鼠作用的研究 2008
目的：(1)研究提取菊花中黄酮类化合物的最佳工艺条件,得到菊花黄酮提取物。(2)探索适合对菊花黄酮进行分离纯化的方法条件,制备出纯度较高的菊花黄 酮。(3)分析鉴定该菊花黄酮的主要成分。(4)了解菊花黄酮是否能改善试验大鼠的脂代谢紊乱状态及可能的作用机制。
２．１ ２菊花提取物的黄酮类化合物含量 分别测定经不同溶剂萃取的菊花提取物，其黄酮含量分
加大。 上述结果可见，三种样品中正丁醇萃取物活性较高，水
苎工鱼量！！！！ ！ 抑制率（％）０
表１菊花乙醇提豹取物（Ｉ）对卵黄脂蛋白ＬＰｏ抑制作用
！！：！！
１４．ｏ±２．９９
型：！！
４３．７±１．４９
塑：！！
５２．２士１．３５
图１芦丁标准曲线
ｇⅡ为：水浸提物含２８．４ｎｇ／ｇ菊花、７０％乙醇浸提物为３７．３０ｎｇｌ ｇ菊花、正丁醇葶取物为３．１９ｎｇ／ｇ菊花、乙酸乙酯萃取物为
后于５００ｒｍ处（以不加芦丁为空白）比色测定。然后．绘出标 准曲线并求出回归方程。
取一定浓度的样品液用以上相同方法可测出样品的Ａ… 值，然后利用芦丁含量与吸光度的关系曲线的回归方程求出芦 丁含量。