替代弗氏佐剂的新选择——QuickAntibody系列免疫佐剂
β-葡萄糖苷酶抗体的制备及比较分析
β-葡萄糖苷酶抗体的制备及比较分析余厚美;张振文【摘要】β-葡萄糖苷酶是一种广泛存在于自然界的水解酶,其含量高低直接关系到水解产物的量.木薯含有大量的生氰糖苷,是β-葡萄糖苷酶的底物之一,被水解后将产生有毒的氰化物,给食品安全带来隐患.为保障食品安全,给木薯及其制品的氰化物含量提供快速检测技术.本研究以A,B,C3种来源的β-葡萄糖苷酶为抗原免疫Balb/C小鼠,并制备单克隆抗体和做出初步评价.结果表明,A抗原免疫的小鼠融合后获得5株杂交瘤细胞株,效价均达到105以上,抗体亚型均为IgG1型,但单克隆抗体与B抗原、C抗原、KLH、BSA均无交叉反应.说明不同来源的β-葡萄糖苷酶免疫小鼠得到的抗体均为特异性抗体.【期刊名称】《热带生物学报》【年(卷),期】2019(010)001【总页数】5页(P89-93)【关键词】β-葡萄糖苷酶;抗体;抗体制备【作者】余厚美;张振文【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/国家薯类加工技术研发分中心/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室,海南儋州571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/国家薯类加工技术研发分中心/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室,海南儋州571737【正文语种】中文【中图分类】Q-331β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase，EC3.2.1.21)是一种水解酶，也叫β-D-葡萄糖苷水解酶、龙胆二糖酶[1]，能够水解结合于末端非还原性的β-D-葡萄糖苷键，同时释放出β-D-葡萄糖和相应的配基[2]，相对分子质量一般在40×103～250×103之间。
1837 年， LIEBIG和 WOHLER首次在苦杏仁中发现β-葡萄糖苷酶，其广泛存在于许多古细菌、细菌、真菌、酵母、曲霉、昆虫、动物和植物中[3-5]。
不同来源的β-葡萄糖苷酶的相对分子质量差异较大，这是由其结构和组成的不同导致的。
由于参与生物体的糖代谢，β-葡萄糖苷酶对维持生物体的正常生理功能有着重要作用[2]，已经在哺乳动物的疾病防治和人类的癌症治疗方面广泛开展了应用研究[2,6]；此外，β-葡萄糖苷酶还能将果、蔬、茶中的风味前体物质水解为具有浓郁天然风味的香气物质，协助纤维素酶降解纤维素等功能[1-2,7-8]，在饲料工业、生物合成和生物燃料等领域，β-葡萄糖苷酶同样有巨大的应用价值[4,9]。
疫苗中铝佐剂的研究进展
疫苗中铝佐剂的研究进展佐剂，也称为免疫调节剂或免疫增强剂，是疫苗的一种添加剂。
佐剂属于非特异性免疫增强剂，可以增强或改变对抗原的免疫反应类型。
佐剂不仅可以帮助抗原在体内诱导长期有效的特异性免疫反应，从而实现更高的疫苗效力，延长免疫反应的保护时间，还可以减少抗原的使用量、生产成本和免疫次数。
根据其化学性质，佐剂大致可分为以下几类：无机佐剂如含铝佐剂；乳液型佐剂如MF59和AS03；水溶性佐剂如皂苷；靶向模式识别受体的佐剂如CpG；和细胞生成佐剂，如白细胞介素。
佐剂与抗原的结合可以增加抗原的表面积，其生物学效应主要包括：（1）抗原库效应；（2）细胞因子和趋化因子表达的上调，免疫细胞在注射部位的募集；（3）炎症小体的激活；以及（4）载体效应。
一方面，在佐剂作用下，抗原更有可能被抗原递呈细胞有效处理和呈递；另一方面，佐剂可以改变抗原的物理性质，从而导致抗原在体内的释放减慢，并延长抗原与免疫细胞之间的相互作用时间。
目前，已有数百种天然或合成化合物用于佐剂的研究，但批准用于疫苗的佐剂数量仍然有限。
氢氧化铝（AH）和磷酸铝（AP）仍然主导着人类疫苗制剂的佐剂领域。
然而，尽管含铝佐剂在增强疫苗免疫反应方面已经应用了近几十年，但含铝佐剂的作用分子机制仍未完全了解。
因此，有必要加深我们对这些佐剂的物理、化学和生物特性的理解，为在临床开发阶段尽早确定每种佐剂的质量属性和选择合适的佐剂类型提供理论依据。
铝佐剂的种类目前，获得许可的人类疫苗中包括的两种主要类型的铝佐剂是氢氧化铝和磷酸铝。
疫苗制剂中AH佐剂与AP佐剂的选择在很大程度上取决于抗原的性质和吸附以实现最佳免疫反应的要求。
氢氧化铝佐剂是通过在精心控制的条件下向铝离子溶液中加入氢氧化钠来制备的。
温度、浓度和混合速度是影响所生产佐剂物理化学性质的因素。
电子显微镜显示AH佐剂由形成松散微粒聚集体的纳米颗粒纤维组成。
磷酸铝佐剂是通过在磷酸盐存在下在碱性条件下沉淀铝离子来制备的。
免疫佐剂的作用和发展
免疫佐剂的作用和发展佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。
佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。
改变体液抗体的种类IgG亚类和抗体的亲和性。
佐剂可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。
佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHC Ⅱ型。
佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。
随着生物技术的发展，新一代疫苗，如合成肽疫苗、基因工程疫苗等的研究已取得了初步成果，但现代疫苗研究过程所遇到的一个关键问题是其免疫原性较弱，往往需要佐剂来克服。
对适合于推广应用的新疫苗的研制，佐剂的研究显得至关重要。
因此，近年来免疫佐剂的研究进展更为迅速。
本文就各种免疫佐剂的研究现状和应用前景进行简要的讨论。
1 矿物质矿物质佐剂是传统佐剂中的一类，包括AL(OH)3和磷酸铝等。
1926年Glenny首先应用铝盐吸附白喉类毒素，至今已有70多年了，但它还是唯一被FDA批准用于人用疫苗的佐剂。
常用佐剂中效果较好的是AL(OH)3和磷酸铝佐剂，其次磷酸钙较常用。
铝佐剂主要诱导体液免疫应答,抗体以IgG1类为主,刺激产生Th2型反应，还可刺激机体迅速产生持久的高抗体水平,也比较安全,对于胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原是良好的疫苗佐剂。
它虽是人医和兽医均获批准的佐剂，广泛应用于兽医疫苗，特别是各种细菌苗，但其仍存在缺点：如有轻度局部反应，可以形成肉芽肿，极个别发生局部无菌性脓肿；铝胶疫苗怕冻；可能对神经系统有影响；不能明显地诱导细胞介导的免疫应答。
疫苗中加入磷酸三钙[Ca3(PO4)2]作佐剂，与铝胶一样具有吸附沉淀作用，但使用更加简便。
其缺点是：含盐量高；贮存日久有结晶沉淀。
皮下注射时偶有肿胀或结块,抗原免疫原性弱时,不足以提高其免疫原性,特别是保护性免疫机制要求活性介导的免疫参加时,应使用其他佐剂。
免疫佐剂的作用和发展
免疫佐剂的作用和发展免疫佐剂（Adjuvant）是指能够增强疫苗免疫效果的物质。
传统意义上的疫苗通常是由抗原构成，而免疫佐剂则用于改善疫苗的免疫原性以及增强免疫反应。
在免疫系统中，免疫佐剂通过激活免疫细胞、增强抗原呈递以及改善免疫记忆等方式来增强免疫效果。
1.增强免疫响应：免疫佐剂可以通过激活免疫细胞，如单核细胞、树突细胞等，促使它们产生更多的细胞因子，增强免疫反应，从而提高疫苗的效果。
2.增加抗原排斥：免疫佐剂可以改善疫苗抗原的呈递能力，提高免疫系统对抗原的感知，从而增强免疫细胞对抗原的处理和反应能力。
3.改善免疫记忆：免疫佐剂可以促进免疫记忆的形成，使得免疫系统对于相同抗原的记忆反应更为迅速和强烈，从而提高抗体和细胞免疫的持久性。
第一阶段是使用无机盐类作为免疫佐剂，如氢氧化铝、氢氧化铝磷灰石等。
这些无机盐类佐剂主要通过形成沉淀、吸附或者离解，来改善抗原的呈递，增强免疫应答。
这些免疫佐剂被广泛应用于多种疫苗中，如百白破、流感等疫苗。
第二阶段是进一步研发了更加有效的佐剂，如MF59（油剂）、AS03（油剂）以及QS-21等佐剂。
这些佐剂主要通过改善抗原的呈递和激活免疫细胞，来增强免疫应答。
例如，MF59是一种油剂，能够激活树突细胞、促使炎症反应，从而增强免疫效果。
第三阶段是利用分子生物学和基因工程技术来研发更加高效、安全的免疫佐剂，如脂质体、抗原保持剂和分子佐剂。
这些佐剂主要通过模拟病原体信号，激活免疫细胞，如树突细胞和飞翼细胞，促进免疫应答。
例如，脂质体被广泛应用于疫苗中，可以通过有效抗原表达和递呈来增强免疫效果。
未来的发展方向包括：1.个性化佐剂：根据个体差异，采用定制化的免疫佐剂，以提高疫苗的接种效果和安全性。
2.紧急响应佐剂：针对突发疫情，开发出能够快速产生免疫应答的佐剂，以便迅速应对疫情并控制传播。
3.基因表达佐剂：利用基因工程技术，将免疫佐剂与特定抗原基因组合表达，从而实现一揽子疫苗的生产。
佐剂比较表
需构建表达CpG的质粒与病毒颗粒联合免疫。
非商品化
脂质体(LIP)和
Novasomes
人工合成
佐剂
既是抗原载体，也是免疫佐剂；
Novasomes为非磷脂亲水脂分子，在体内稳定性比常规LIP好，而且价廉、易制备；
无毒性、无免疫原性；在可体内的可降解性，不引起组织损伤。
需制备油包水乳剂。
Roche/Sigma
MF59
油乳佐剂
可降解鲨烯与Tween 80和Span 85混合后进行微流化进而形成均一的滴状油包水乳液；耐受性良好；
第一个可用于人体的疫苗佐剂。
Chiron公司
CpG-ODN
佐剂
水溶性分子佐剂
含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的寡脱氧核苷酸；
有很强的粘膜佐剂活性，通过膜受体TLR9直接激活DC和B细胞，是一种高效的Thl型疫苗佐剂；不同类型CpG-ODN具有不同疫苗佐剂活性,B和c型CpG-ODN在小鼠体内的体液免疫佐剂效果优于A型CpG-ODN.
稳定性较差；
脂质体在制备过程中要求一定的技术性；费用比其他免疫佐剂高
非商品化？
ImmunEasyMouse Adjuvant
水溶性
佐剂
为免疫小鼠而设计、只适用于小鼠；
含有特效免疫诱导剂CpG DNA，产生的抗体效价高于FIA；
免疫周期2周；
无毒性，无副作用；
容易操作，只需加入抗原混合，室温下5～10分钟后即可注射，无需加热、超声波处理、乳化等复杂步骤。
Qiagen公司（已停产）
QuickAntibody系列免疫佐剂
水溶性
佐剂
使用时不需复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。
免疫佐剂的类型
免疫佐剂是一种辅助免疫系统产生免疫应答的物质，它可以增强疫苗的免疫效果或加强被动免疫。
免疫佐剂的类型多种多样，下面将详细介绍几种常见的免疫佐剂。
1. 佐剂蛋白：佐剂蛋白是一种与疫苗一起使用的蛋白质，它能够激活免疫系统并增强免疫应答。
其中最常用的佐剂蛋白是沙门氏菌外膜蛋白（OMP），它能够增加疫苗的免疫原性并提高抗体水平。
此外，还有革兰氏阴性菌的脂多糖，也是一种常见的佐剂蛋白，它可以刺激免疫系统产生更多的抗体。
2. 短肽佐剂：短肽佐剂是由多个氨基酸组成的简化蛋白结构，它可以模拟疫苗中的抗原部分，从而引发免疫系统的应答。
短肽佐剂可以增强免疫细胞的活性和记忆效应，提高疫苗的免疫原性。
目前，已经有一些疫苗采用了短肽佐剂来增强免疫效果。
3. 脂质佐剂：脂质佐剂是一种由脂质构成的免疫佐剂，它能够促进疫苗在体内的传递和吸收。
脂质佐剂可以形成微粒或液晶结构，将疫苗包裹在其中，从而提高疫苗的稳定性和抗原性。
此外，脂质佐剂还可以刺激免疫系统产生更多的抗体，并加强细胞介导的免疫应答。
4. 细胞佐剂：细胞佐剂是一种通过改变免疫细胞的功能来增强免疫应答的佐剂。
细胞佐剂可以活化树突状细胞、巨噬细胞和淋巴细胞等免疫细胞，从而增强它们对抗原的处理和呈递能力。
常见的细胞佐剂有类脂体、病毒载体等，它们能够激活免疫系统并提高疫苗的免疫原性。
5. 辅助佐剂：辅助佐剂是一种通过改变免疫应答的环境来增强免疫效果的佐剂。
辅助佐剂可以改变炎症反应、调节细胞因子水平等，从而优化免疫应答的方向和强度。
常见的辅助佐剂有铝盐和水合氢氧化铝等，它们能够增强疫苗的免疫效果，并延长免疫应答的持续时间。
总结起来，免疫佐剂的类型包括佐剂蛋白、短肽佐剂、脂质佐剂、细胞佐剂和辅助佐剂等。
这些免疫佐剂可以增强疫苗的免疫效果，提高抗体水平和免疫细胞的活性，从而增强人体对病原体的防御能力。
在疫苗研发和免疫治疗中，选择适合的免疫佐剂是非常重要的，它可以帮助提高疫苗的效力，保护人类免受疾病侵袭。
兔子免疫程序
小鼠免疫程序admin一、抗原的准备1、收到抗原时，首先要了解抗原的种类、性质和浓度，以便采取不同的处理方法。
2、多肽抗原，一般分多肽—偶联KLH和多肽—偶联BSA（或GGG）或裸多肽三种。
多肽—偶联KLH一般用于免疫，而多肽—偶联BSA或裸肽一般用于检测，在免疫时注意区分使用。
3、分装（1）收到抗原后，应及时按免疫需要分装，避免反复冻融。
（2）如抗原是大肠杆菌重组蛋白，可能存在不溶性沉淀，分装前，应用超声粉碎仪粉碎，要注意，在冰浴中进行，超声强度应以溶液不产生泡沫的水平为准，超声强度过大，易产生泡沫导致蛋白变性，超声强度太低效果不佳，每次2-3秒，重复3-4次，超声完毕立即分装。
（3）分装管应用不粘附蛋白的样品管，要用二种不同颜色的标签明确区分免疫用抗原和检测用抗原，并写明分装日期，抗原名，浓度和剂量。
A 免疫用抗原：一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1个分装管，备做首次免疫用。
另分装2个100ug/1管，备做融合前加强免疫用，再分装25ug/只/×5=125ug/1个分装管，共分装4-5管，备加强免疫用。
B 检测用抗原：100ug/每管，分装共3管。
C 分装好的抗原除马上免疫用管外，其余均装入小塑料袋中，写好抗原名标签，马上存入-700C。
剩余抗原交保管员存-700C，并填好交接班表格。
二、免疫程序1、多肽类抗原（包括MAP型多肽），第一次用福氏完全佐剂，每只50-100ug ,腹腔注射，总剂量0.5ml/只，第二次起用福氏不完全佐剂，剂量为25-50ug/0.5ml/只，间隔3周，第三次注射后10天测血（ELISA法），如滴度未达到1:104, OD1.0以上，则继续免疫，如ELISA已达滴度，则可取血清送WB或ICC检测。
2、蛋白类抗原：所用抗原的剂量等与多肽类相同，但进程有差异，首次免疫21天后，第二次免疫后，每次间隔为10天。
三、抗原的乳化抗原乳化前，应检查抗原管有否颗粒状沉淀，如有沉淀，应超声粉碎后，立即溶解在0.01M PH7.2 PBS中（PBS应为无菌液），每只小鼠腹腔注射总量0.5ml，用2-5ml注射器，取1.25ml含抗原的PBS，另一支注射器取（等体积）福氏完全佐剂或不完全佐剂，用不锈钢连接接头连接，反复推拉混合约10-30分钟，平放静置30分钟，如水乳相不再分离，即可注射小鼠。
单克隆抗体制备实验过程
单克隆抗体制备实验过程一、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。
一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。
说明：FCA，弗氏完全佐剂；FIA，弗氏不完全佐剂；Quickantibody，北京康碧泉公司研制的佐剂。
上表中第四种免疫方法产生的抗体大部份都为IgM，存在亲和力弱等缺点，慎用。
PS：1、一般皮下注射每个注射点注射30-50ul左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点为宜。
2、腹腔注射时，如果抗原混有弗氏佐剂，建议注射在左侧腹腔，如果采用右侧腹腔注射，则在免疫过程中，很容易导致小鼠脾脏与腹膜粘连的情况，造成后期取出脾脏麻烦。
3、冲击免疫完成后，应在96小时内完成细胞融合，否则相应的B细胞数量会下降到未冲击前的水平。
二、细胞融合（Cell fusion）【材料和试剂】（1）骨髓瘤细胞悬液选好骨髓瘤细胞株，取体外培养对数生长期细胞或体内生长的肿瘤分离骨髓瘤细胞，制备细胞悬液。
（2）免疫小鼠脾细胞悬液取3天前加强免疫的小鼠，眼眶放血，•分离血清冻存备用。
拉颈处死小鼠，浸泡于75％酒精中3～5min。
无菌操作取出脾脏，置入盛有5ml不完全培养液的平皿中洗涤，剪去周围的结缔组织，将脾脏移入另一盛有5ml不完全培养液的平皿中的钢网上，先用剪刀剪成3～5个小块，然后用注射器内芯研磨。
将脾脏细胞悬液移至50ml离心管中，加不完全培养液50ml，1000r/min 离心5min，弃上清，再以同法洗涤离心一次。
然后将沉淀细胞重新悬浮于10ml不完全培养液中，计活细胞数，一般一只小鼠可得0.5～2×108个脾细胞。
（3）饲养细胞将小鼠致死、体表消毒和固定后，用消毒剪镊从后腹掀起腹部皮肤，暴露腹膜。
用酒精棉球擦拭腹膜消毒。
用注射器注射10ml不完全培养基至腹腔，注意避免穿入肠管。
免疫佐剂
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矿物盐
细胞因子 油水乳剂 微生物及代谢产物
人工合成
新型佐剂
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• 矿物盐类佐剂
铝盐佐剂
成分：氢氧化铝，磷酸铝，硫酸铝钾。不可溶，凝胶 状的沉淀物。 现代应用铝化合物的疫苗非为铝化合物沉淀疫苗和铝 化合物吸附疫苗。 灭活脊髓灰质炎病毒疫苗，麻疹，腮腺炎和风疹疫苗 （ MMR疫苗），水痘疫苗 ，以及流感疫苗不含有铝盐。
Thank You!
ห้องสมุดไป่ตู้
• 优点：
CpG引起的免疫反应以Th1型为主,因此可以 很好的激发粘膜免疫反应。 与常用的氢氧化铝佐剂具有协同作用。 一些不能与铝混合的减毒活疫苗或多价疫苗则 可单独使用CpG–DNA增强其免疫原性。 应用范围广。
• 缺点：
其免疫激活机制、免疫剂量(高剂量CpG– DNA及重复给药可能导致毒性效应) 和最适免疫 途径还需进一步研究。 最近,美国CpG免疫药剂公司研制的一种CpG 佐剂作为乙肝表面抗原疫苗的免疫佐剂,开始了在 48个健康人中进行I期临床试验,主要目的是研究 CpG佐剂的安全性及人体耐受剂量。
疫苗免疫佐剂
• 佐剂
自1925年法国免疫学家Ranmon发现在疫苗 中加入某些与之无关的物质可以特异性的增强机 体的免疫反应，至今免疫佐剂的发展已近90年。 特点：佐剂本身可以有抗原性也可以不具备抗 原性。
• 免疫佐剂的生物作用包括：
（1）延长了抗原的作用时间； （2）增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬； （3）能刺激吞噬细胞对抗原的处理； （4）促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用； （5）刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。 （6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度； （7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并 使其增强。
兽用疫苗常用免疫佐剂的概况和发展趋势_李茂
100Chinese Veterinary Public Health Association，CAA V兽用疫苗常用免疫佐剂的概况和发展趋势李茂1，刘天强1，肖丹1，史子学2（1.通威股份有限公司动物保健研究所，成都 610041；2.中国农科院上海兽医研究所，上海200241)摘要：免疫佐剂也称佐剂或抗原佐剂，是一类单独使用时一般无免疫原性，但与抗原物质合并使用时能增强抗原物质免疫原性，增强机体免疫应答，或改变机体免疫应答类型的物质。
佐剂种类很多，如铝盐佐剂、油乳佐剂、微生物佐剂、中草药类佐剂、细胞因子、化学合成类和其他佐剂等。
本文介绍了各种佐剂的研究应用概况，以期为开发研制高效、低毒和结构新颖的免疫佐剂提供参考。
关键词：免疫佐剂；免疫应答THE PROGRESS AND DEVELOPMENT TREND OF THE COMMONLY USED IMMUNE ADJUVANT IN VETERINARY VACCINESLI Mao1，LIU Tian-qiang1，XIAO Dan1，SHI Zi-xue2（1.Animal Health Research Institute of Tongwei Co.,LTD,Chengdu 610041，China；2.Shanghai VeterinaryResearch Institute, CAAS, Shanghai 200241, China）Abstract: Immune adjuvant，also known as adjuvant or antigen adjuvant, immunogenicity generally alone,but when combine with antigenic material can enhance the antigen substance immunogenicity ,enhance immune response, or alter the immune response type substances. Many different types of adjuvant, such as aluminum adjuvant, oil emulsion adjuvant, Chinese herbal medicine,cytokines,chemical synthesis and other adjuvants. This article describes the research and application of a variety of adjuvants,in order to provide a reference for the development of efficient, low toxicity and structure of the novel adjuvants.Key words: Immune adjuvant; Immune response1 非油乳佐剂1.1 铝盐佐剂铝盐佐剂是传统佐剂中的一类，包括氢氧化铝胶和磷酸铝等，一直广泛用于人用和兽用疫苗的制备。
新型免疫佐剂的开发及应用
新型免疫佐剂的开发及应用免疫佐剂是指在携带抗原的疫苗中增加其他成分，以增强或调节免疫反应的物质。
免疫佐剂不仅可以提高生物制品的免疫原性和安全性，而且能够降低疫苗的剂量和频率。
随着分子生物学、生物技术的不断发展，越来越多的新型免疫佐剂被开发并应用于疫苗的生产中。
一、免疫佐剂的类型和作用1. 油水复合佐剂：油是免疫佐剂的重要成分之一，可以提高疫苗对抗原的稳定性，并激发强烈的抗体反应。
油水复合佐剂是指以油为基础的佐剂，通常包括水和乳化剂。
它们可以改善疫苗悬浮液的分散性和局部免疫刺激，并改变疫苗的吞噬和呈递特性，从而提高疫苗的免疫原性。
2. 佐剂小体：佐剂小体是由蛋白质组成的颗粒，在疫苗中作为佐剂使用。
它们可以增强疫苗的免疫原性和特异性，增加免疫细胞的摄取和抗原表现，并诱导诱导特定的免疫细胞类型，如细胞毒性T淋巴细胞和记忆B细胞。
3. 多糖佐剂：多糖佐剂通常是由多糖结构，如卡波激活多糖（CAPs）和壳多糖（LPS）组成，在疫苗中使用以增强抗原的免疫原性。
多糖佐剂可以诱导多种的细胞类型产生反应，并增加特异性的抗体水平。
此外，在一些疾病，如肺炎球菌和流感等，多糖佐剂的能力很容易被当作候选佐剂。
二、新型免疫佐剂的开发随着分子生物学和生物技术的发展，越来越多的新型免疫佐剂被开发。
以下是几个比较有潜力的新型免疫佐剂：1. 病毒样颗粒：病毒样颗粒是由病毒多聚体组成的一类颗粒，通常是不包括病毒核酸。
这些颗粒具有很强的免疫原性和天然的佐剂性，且在疫苗中使用时可以激发强烈的保护性免疫反应。
目前已经有很多类型的病毒样颗粒作为疫苗的候选佐剂。
2. 蛋白质互作型佐剂：蛋白质互作型佐剂是由蛋白质构建而成，这些蛋白质是在免疫细胞中表达的关键信号分子。
这些佐剂可以模拟天然的免疫反应而不需要携带抗原，从而提高疫苗的免疫原性和安全性。
3. 基因疗法佐剂：基因疗法佐剂通常是由多肽或蛋白质编码的DNA或RNA，可以导入宿主细胞以表达抗原，从而产生特异性保护性免疫应答。
过敏原特异性免疫治疗中的新型佐剂
过敏原特异性免疫治疗中的新型佐剂过敏反应是发达国家日益严重的健康和经济问题。
I型过敏是最常见的过敏形式，是由针对我们环境中无害抗原（过敏原）的过度免疫反应引起的。
在免疫学上，这些免疫反应的特征是诱导过敏原特异性Th2细胞和IgE抗体，从而引发IgE依赖性肥大细胞脱颗粒，并伴有相关的过敏症状。
目前，过敏原特异性免疫治疗（AIT）是唯一有可能重建对相应过敏原的临床耐受性的疾病改善治疗方法。
然而，传统的AIT有一些缺点，包括治疗时间长、诱发过敏副作用的风险，以及过敏原本身具有相当低的免疫原性。
为了改善AIT，佐剂可以成为一种强大的工具，不仅可以提高共同应用的过敏原的免疫原性，还可以诱导所需的免疫激活，例如促进过敏原特异性Th1或调节反应。
目前，已批准用于人类AIT的佐剂包括氢氧化铝、磷酸钙、微晶酪氨酸和MPLA，但它们的在AIT的应用依然有许多缺点。
近年来研究的一些新型佐剂：如水包油乳液、病毒样颗粒、葡聚糖和CpG ODN等显示出不同的特性，例如延长注射部位的过敏原释放，诱导过敏原特异性IgG的产生，同时降低IgE水平，以及促进不同免疫细胞的分化和激活。
未来，更好地了解这些佐剂在临床中作用的免疫机制可能有助于我们改善AIT。
已批准用于AIT的佐剂氢氧化铝铝佐剂是目前人类疫苗预防传染病应用最广泛的佐剂，如白喉、破伤风、百日咳、乙型肝炎、炭疽和流感。
铝佐剂通过静电相互作用吸附蛋白质，从而减少过敏原扩散（降低过敏反应的机会），延长免疫细胞在注射部位接触这些抗原的时间。
因此，铝佐剂已被纳入大多数皮下过敏免疫治疗（SCIT）产品中，以增加免疫反应。
然而，铝佐剂的使用并非没有缺点。
铝佐剂经常在注射部位引起急性和慢性炎症，生物降解性低，导致其在反复使用时积聚，并可能具有毒性作用；因此，明矾作为I型过敏治疗佐剂的应用仍在不断地研究中。
磷酸钙磷酸钙是人体的天然成分，与氢氧化铝相比具有更好的生物降解性和生物相容性，可防止其在反复使用时在体内积聚。
QuickAntibody 系列免疫佐剂使用说明
QuickAntibody系列免疫佐剂使用说明规格：1ml保存温度：2~8ºC产品描述QuickAntibody系列免疫佐剂包括四种具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，分别用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体以及兔子多克隆抗体，与常规使用的弗氏佐剂相比，具有免疫针次少、抗原用量低、抗体产生快、抗体滴度高、抗体亲合力高、不破坏抗原天然构象和使用方便等多方面优点。
重要提示1、QuickAntibody只需两针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。
2、QuickAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。
推荐使用的抗原用量为（1）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5~50μg（通常为小鼠5~20μg，兔子20~50μg）；（2）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1~10μg（通常为小鼠1~5μg，兔子5~10μg）。
3、QuickAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，标准免疫程序只需要在三周内进行两针免疫，通常在第五周即可获得ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000~1:10000000的高亲合力抗体水平。
4、QuickAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
5、QuickAntibody是一类水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。
6、QuickAntibody使用肌肉免疫途径，与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫免疫或脾内免疫相比，极大地方便了使用。
7、QuickAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。
常规多克隆抗体制备多使用兔子，不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托专门单位制备。
替代弗氏佐剂的新选择——QuickAntibody系列免疫佐剂
替代弗氏佐剂的新选择——QuickAntibody系列免疫佐剂来源：北京康碧泉/experiment/430/478/482/31937.htmQuickAntibody系列免疫佐剂是由北京康碧泉公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，专业用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体。
与常规使用的弗氏佐剂的比较QuickAntibody佐剂特色详解：1、为什么无需乳化？QuickAntibody系列佐剂为水溶性佐剂，抗原与佐剂仅需用移液器吹打几下，即可混匀；弗式佐剂为油性佐剂，需要繁琐的乳化，形成油包水的稳定结构。
因此与弗式佐剂繁琐的乳化相比，QuickAntibody佐剂可节省大量时间与精力。
2、免疫周期短？QuickAntibody佐剂有二周快速小鼠多抗制备佐剂、三周快速小鼠单多抗制备佐剂以及五周标准小鼠单多抗制备佐剂三种。
若多抗即可满足客户需求，可以建议客户制备小鼠多抗，使用我们的佐剂最快仅需2周即可制备高滴度的小鼠多抗，最慢也只需5周即可制备成功，比常规弗式佐剂8周的制备时间相比，可节省3-6周的时间，从而大大提升了客户实验效率；若客户制备单抗，可以使用我们三周佐剂或五周佐剂，与常规使用弗式佐剂免疫时间8周相比，可以节省3-5周时间，也大大提升了客户实验效率，同时也节省动物饲养成本。
3、抗原用量少？QuickAntibody免疫佐剂通过减少免疫针次（常规弗式佐剂免疫需要至少4针，QuickAntibody佐剂仅需免疫2针）以及每针次抗原用量，降低抗原使用量。
每针次抗原用量真核细胞表达仅需1-10ug每针，原核细胞表达仅需10-20ug，病毒源颗粒仅需1-5ug每针。
若客户抗原为直接购买抗原、真核表达抗原（真核表达量低）、抗原表达量极低、或抗原为天然组织纯化（如从植物组织或动物组织中纯化的天然抗原），因抗原贵重或产量较低，此特色的优势更加明显。
4、不破坏抗原天然构象？弗式佐剂为油性佐剂，在与抗原乳化时，需要形成油包水的稳定结构，而蛋白一般亲水基团暴露在外侧，疏水基团在内侧未暴漏，形成油包水的稳定结构，必然伴随着疏水基团的外翻，从而导致抗原天然构象的改变。
免疫佐剂种类
免疫佐剂种类
1.具备免疫原性的佐剂：如卡介苗、枯草分枝杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、脂多糖、细胞因子等。
2.不具备免疫原性的佐剂：如氢氧化铝佐剂、磷酸铝、磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、藻酸钙、多聚核苷酸、胞壁肽等。
应用最多的是福氏佐剂、细胞Fra bibliotek子佐剂。(1)福氏佐剂：分完全福氏佐剂(石蜡油+羊毛脂+卡介苗)、不完全福氏佐剂(石蜡油+羊毛脂)两种。福氏完全佐剂可提高佐剂效能，但注射后易产生局部持久性溃疡和肉芽肿，宜注意。
不同类型免疫佐剂的作用比较
不同类型免疫佐剂的作用比较
李渊;孙红祥
【期刊名称】《浙江畜牧兽医》
【年(卷),期】2003(28)5
【摘要】@@ "免疫剂"(Immunoadjuvant)是一种能与特异性抗原结合,能比疫苗单独使用时产生更强的免疫应答的物质.免疫佐剂通常是指与抗原物质同时注射或预先注射后,能非特异地增强或改善动物机体对抗原物质免疫应答的物质.
【总页数】3页(P16-18)
【作者】李渊;孙红祥
【作者单位】浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学动物科学学院,杭州,310029
【正文语种】中文
【中图分类】S852.5
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替代弗氏佐剂的新选择——QuickAntibody系列免疫佐剂
来源：北京康碧泉
/experiment/430/478/482/31937.htm
QuickAntibody系列免疫佐剂是由北京康碧泉公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，专业用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体。
与常规使用的弗氏佐剂的比较
QuickAntibody佐剂特色详解：
1、为什么无需乳化？
QuickAntibody系列佐剂为水溶性佐剂，抗原与佐剂仅需用移液器吹打几下，即可混匀；弗式佐剂为油性佐剂，需要繁琐的乳化，形成油包水的稳定结构。
因此与弗式佐剂繁琐的乳化相比，QuickAntibody佐剂可节省大量时间与精力。
2、免疫周期短？
QuickAntibody佐剂有二周快速小鼠多抗制备佐剂、三周快速小鼠单多抗制备佐剂以及五周标准小鼠单多抗制备佐剂三种。
若多抗即可满足客户需求，可以建议客户制备小鼠多抗，使
用我们的佐剂最快仅需2周即可制备高滴度的小鼠多抗，最慢也只需5周即可制备成功，比常规弗式佐剂8周的制备时间相比，可节省3-6周的时间，从而大大提升了客户实验效率；若客户制备单抗，可以使用我们三周佐剂或五周佐剂，与常规使用弗式佐剂免疫时间8周相比，可以节省3-5周时间，也大大提升了客户实验效率，同时也节省动物饲养成本。
3、抗原用量少？
QuickAntibody免疫佐剂通过减少免疫针次（常规弗式佐剂免疫需要至少4针，QuickAntibody佐剂仅需免疫2针）以及每针次抗原用量，降低抗原使用量。
每针次抗原用量真核细胞表达仅需1-10ug每针，原核细胞表达仅需10-20ug，病毒源颗粒仅需1-5ug每针。
若客户抗原为直接购买抗原、真核表达抗原（真核表达量低）、抗原表达量极低、或抗原为天然组织纯化（如从植物组织或动物组织中纯化的天然抗原），因抗原贵重或产量较低，此特色的优势更加明显。
4、不破坏抗原天然构象？
弗式佐剂为油性佐剂，在与抗原乳化时，需要形成油包水的稳定结构，而蛋白一般亲水基团暴露在外侧，疏水基团在内侧未暴漏，形成油包水的稳定结构，必然伴随着疏水基团的外翻，从而导致抗原天然构象的改变。
QuickAntibody佐剂为水溶性佐剂，不会导致疏水基团外翻，保留抗原的天然构象，因此可以获得针对构象性表位的抗体。
若客户需要针对构象性表位的抗体，如诊断试剂公司等，此特色具有极大的吸引力。
5、不含有蛋白成分？
QuickAntibody佐剂不含有任何蛋白成分，因而佐剂本身不会产生针对自身的抗体；弗式佐剂含有卡介苗的蛋白成分，会产生很多针对佐剂的抗体。
使用QuickAntibody佐剂制备单抗，阳性克隆率远远高于使用弗式佐剂，因此更容易获得诊断试剂需要的高质量配对抗体。
6、肌肉免疫？
通常免疫小鼠为皮下多点免疫、足垫免疫和腹腔免疫等，本佐剂为小鼠后腿小腿肚肌肉免疫，
只需一手抓住小鼠，一手免疫，一人操作，一针免疫，极大方便了免疫方法。
7、无毒？
弗式佐剂等因含有卡介苗和矿物油等毒性物质，会造成动物机体发炎，伤口溃烂，严重可以导致动物的死亡，从而造成用户一定的损失；有客户在免疫的时候也会不小心免疫到自己的手部，从而导致手部发炎，严重的甚至需要手术切除；QuickAntibody佐剂为无毒佐剂，不会造成动物机体发炎和动物死亡。