流式细胞仪基本工作原理
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
·
的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗 粒折射等有关，主要分为前向散射光 和侧向散射光。
光学系统
前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射细胞时，光 以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细胞 等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。
前向散射光示意图
流式细胞仪基本工作原理
流式细胞仪的组成
流式细胞仪 工作原理
采用激光作为激发光源，保证其具有 更好的单色性与激发效率；
利用荧光染料与单克隆抗体技术结合 的 标 记 技 术 0， 保 证 检 测 的 灵 敏 度 和 特 异性；
用计算机系统对流动的单细胞悬液中 单个细胞的多个参数信号进行数据处 理分析，保证了检测速度与统计分析 精确性。
Laser
FALS Sensor
侧向散射光（side scatter, SS）：激光束照射细胞 时，光以90°角散射的讯号，用于检测细胞内部结 构属性。
侧向散射光示意图
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
测得的FS与SS信 号通过计算机处理， 可得到FS-SS图，由 此可仅用散射光信号 对未染色的活细胞进 行分析或分选。
此为血细胞分类ห้องสมุดไป่ตู้ 基本原理，但不能分 析表面分子。
单核细胞
中性粒细胞
淋巴细胞
光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群
荧光测量
荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发 射的荧光波长与激发光波长不同。 每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波长选择通透 性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的 光电倍增管。 选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。 线性放大器和对数放大器
2、FCM分析中前向散射· 光反映颗粒的大小；侧向 散射光反映颗粒内部结构复杂程度、表面的光滑程 度；荧光反映颗粒被染上荧光部分数量的多少，根 据其标记的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子 的表达情况。
思考题
1. 流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光 和荧光的检测意义是什么？
2. 何谓荧光补偿？ · 3. 流式细胞术有哪些临床应用价值？在科研中
有哪些应用？
THANK YOU
荧光染料的特性
•激发波长(EXCITING) •发射波长(EMISSION)
荧光补偿
荧光补偿
指在流式细胞仪分析过程纠正荧光素发射 光谱重叠（spectral overlap）的过程,即 从被检测的荧光信号中除去其他干扰荧光 信号。
小结
1、流式细胞术（FCM）是在保持细胞及细胞器或 微粒的结构及功能不被破坏的状态下，从分子水平 上获取多种信号实现对单个细胞进行定量分析或纯 化分选。
基本工作原理
已标记的单细 硅化管 胞悬液和鞘液
基本过程
流动室 形成稳态 喷嘴 水平激光与之 荧光染料被
单细胞液柱
垂直相交 激发发光
荧光检测系统和
收集光信号 光电倍增管
放大 脉冲信号
散射光感受系统
计算机系统 分析结果
散射光的测定
细胞在液柱中与激光束相交时向周围 360°立体角方向散射的光线信号，它
的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗 粒折射等有关，主要分为前向散射光 和侧向散射光。
光学系统
前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射细胞时，光 以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细胞 等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。
前向散射光示意图
流式细胞仪基本工作原理
流式细胞仪的组成
流式细胞仪 工作原理
采用激光作为激发光源，保证其具有 更好的单色性与激发效率；
利用荧光染料与单克隆抗体技术结合 的 标 记 技 术 0， 保 证 检 测 的 灵 敏 度 和 特 异性；
用计算机系统对流动的单细胞悬液中 单个细胞的多个参数信号进行数据处 理分析，保证了检测速度与统计分析 精确性。
Laser
FALS Sensor
侧向散射光（side scatter, SS）：激光束照射细胞 时，光以90°角散射的讯号，用于检测细胞内部结 构属性。
侧向散射光示意图
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
测得的FS与SS信 号通过计算机处理， 可得到FS-SS图，由 此可仅用散射光信号 对未染色的活细胞进 行分析或分选。
此为血细胞分类ห้องสมุดไป่ตู้ 基本原理，但不能分 析表面分子。
单核细胞
中性粒细胞
淋巴细胞
光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群
荧光测量
荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发 射的荧光波长与激发光波长不同。 每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波长选择通透 性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的 光电倍增管。 选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。 线性放大器和对数放大器
2、FCM分析中前向散射· 光反映颗粒的大小；侧向 散射光反映颗粒内部结构复杂程度、表面的光滑程 度；荧光反映颗粒被染上荧光部分数量的多少，根 据其标记的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子 的表达情况。
思考题
1. 流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光 和荧光的检测意义是什么？
2. 何谓荧光补偿？ · 3. 流式细胞术有哪些临床应用价值？在科研中
有哪些应用？
THANK YOU
荧光染料的特性
•激发波长(EXCITING) •发射波长(EMISSION)
荧光补偿
荧光补偿
指在流式细胞仪分析过程纠正荧光素发射 光谱重叠（spectral overlap）的过程,即 从被检测的荧光信号中除去其他干扰荧光 信号。
小结
1、流式细胞术（FCM）是在保持细胞及细胞器或 微粒的结构及功能不被破坏的状态下，从分子水平 上获取多种信号实现对单个细胞进行定量分析或纯 化分选。
基本工作原理
已标记的单细 硅化管 胞悬液和鞘液
基本过程
流动室 形成稳态 喷嘴 水平激光与之 荧光染料被
单细胞液柱
垂直相交 激发发光
荧光检测系统和
收集光信号 光电倍增管
放大 脉冲信号
散射光感受系统
计算机系统 分析结果
散射光的测定
细胞在液柱中与激光束相交时向周围 360°立体角方向散射的光线信号，它