核酸提取和注意事项
核酸采集保存知识点总结
核酸采集保存知识点总结一、核酸采集的操作流程核酸采集的操作流程包括样本采集、核酸提取和保存三个主要步骤。
下面将对这三个步骤分别进行介绍。
1. 样本采集在进行核酸采集时，首先需要采集样本，常见的样本包括血液、唾液、鼻拭子、咽拭子、组织等。
在采集样本时，需要注意以下几点：(1) 样本采集前，需要严格遵循无菌操作，使用无菌手套，并保持工作区域的清洁。
(2) 样本采集时，要选择合适的采集器具，不同样本可选择不同的采集器具，比如血液可以选择采血管、鼻拭子可以选择鼻拭子采集器等。
(3) 样本采集后，应尽快进行保护性包装，避免样本受到外界污染。
(4) 不同样本的采集方法有所不同，比如采集血液时要用无菌注射器采集，采集鼻拭子时要注意插入深度和旋转操作等。
2. 核酸提取核酸提取是指从采集的样本中分离出核酸的过程。
常见的核酸提取方法包括化学法、机械法和离心法等。
在进行核酸提取时，需要注意以下几点：(1) 核酸提取试剂的选择要根据样本类型和需要的核酸纯度进行选择，比如采集全血样本时可选择通用的核酸提取试剂盒，采集唾液时可选择适用于唾液样本的提取试剂等。
(2) 核酸提取过程中，需要严格按照试剂盒说明书中的操作方法进行，不同的试剂盒可能有不同的提取步骤和操作要点。
(3) 核酸提取后，需要对提取得到的核酸进行保存，以便后续的分子生物学实验或临床诊断检测。
3. 样本保存样本保存是核酸采集过程中的关键环节，它直接关系到后续实验结果的准确性和稳定性。
常见的样本保存方法有干冰保存、-80°C冷冻保存和室温保存等。
以下是几种常见的样本保存方法及其注意事项：(1) 干冰保存干冰保存是一种常见的样本保存方法，它可以在短时间内将样本冷冻到极低温度，有利于核酸的保存。
在进行样本保存时，需要注意以下几点：- 样本保存前，应将核酸溶液均匀混合，并分装到干冰盒中。
- 样本保存后，需将干冰盒放置在干冰箱中，并保持在-70°C～-80°C的温度范围内。
核酸提取步骤及注意事项
核酸提取步骤及注意事项---摘要核酸提取是生物学实验中常见的重要步骤，用于从样本中纯化和获得核酸。
本文将介绍核酸提取的基本步骤，并指出一些需要注意的事项。
---1. 核酸提取的基本步骤1. 样品准备：选择合适的样品进行核酸提取，如细胞、组织、血液等。
样品应保存在适当的条件下，以保持其完整性和稳定性。
在提取过程中，应保持样品的纯净度，避免污染和降解。
2. 细胞破碎：使用适当的方法破碎细胞膜，如机械破碎、化学溶解、超声波破碎等。
破碎时应注意温度控制、避免核酸降解，以及避免悬浮液的污染。
3. 溶解和脱脂：加入适量的溶解缓冲液和脱脂试剂，使核酸从其他杂质中分离。
溶解和脱脂过程应遵循规定的条件和比例，确保高效分离和纯化。
4. 酶解和消化：添加酶解缓冲液和酶解试剂，以去除蛋白质、RNA等杂质。
在酶解和消化过程中，应注意适当的时间和温度，以避免核酸的降解和损失。
5. 提取和纯化：通过离心、过滤、凝胶电泳等方法，将核酸从溶液中分离出来。
提取和纯化过程中，应注意操作的规范和准确性，以确保获得高质量的核酸。
6. 纯化和检测：使用柱层析、电泳、分光光度计等方法，对提取的核酸进行纯化和检测。
纯化和检测过程中，应遵循操作规程，进行准确的数据记录和结果分析。
---2. 注意事项1. 工作区域：核酸提取应在干净的实验室环境中进行，避免外界污染和其他干扰因素的干扰。
实验室应定期进行消毒和清洁，并保持适当的温度和湿度。
2. 工具和试剂：使用高质量的工具和试剂，避免因质量差的材料而导致实验出现问题。
试剂的保存条件和有效期限应按照说明书要求进行，避免使用已过期或变质的试剂。
3. 操作规范：在核酸提取过程中，应根据标准操作规程进行操作，严格遵守实验室安全和操作规范。
严禁接触裸露的皮肤、吸入有害气体，必要时应佩戴个人防护装备。
4. 试剂交叉污染：为避免试剂交叉污染，应使用干净的工具，确保每个步骤使用新的试剂和材料。
严禁在不同实验或样品中混用相同的工具，以避免导致污染和误差。
核酸提取原理及方法
核酸提取原理及方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从细胞或组织中分离出核酸并净化的过程。
核酸提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。
一、核酸提取原理。
核酸提取的原理主要包括细胞破碎、核酸溶解和净化三个步骤。
首先，细胞膜和细胞壁需要被破坏，以释放细胞内的核酸。
其次，核酸需要被有效地溶解，使其能够被提取出来。
最后，通过净化步骤去除蛋白质、多糖和其他杂质，从而得到纯净的核酸样品。
二、核酸提取方法。
1. 酚氯仿法。
酚氯仿法是最常用的核酸提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种有机溶剂与水相不相溶的特性，将细胞裂解液中的蛋白质等杂质分离出去，从而得到纯净的核酸。
这种方法操作简单，适用于提取大量样品。
2. 硅胶柱法。
硅胶柱法利用硅胶膜对核酸的亲和力进行提取和分离。
通过将样品加入硅胶柱后，核酸能够与硅胶膜结合，而其他杂质则被洗脱掉。
这种方法提取的核酸纯度高，适用于对纯度要求较高的实验。
3. 磁珠法。
磁珠法是近年来发展起来的一种核酸提取新方法。
通过在磁珠表面修饰亲核酸的功能基团，使得核酸能够与磁珠结合。
利用磁场的作用，可以将核酸与磁珠分离出来，从而实现核酸的提取和纯化。
这种方法操作简便，且适用于高通量提取。
三、注意事项。
在进行核酸提取时，需要注意以下几点：1. 样品的质量和保存对提取结果有重要影响，因此在提取前需要确保样品的完整性和纯度；2. 根据不同的实验目的和样品特点选择合适的提取方法，以确保提取效果；3. 在操作过程中要注意无菌操作，避免外源性核酸的污染；4. 核酸提取后，应根据实验需求储存或立即进行下一步实验。
总结，核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。
不同的提取方法有着各自的特点和适用范围，选择合适的提取方法能够提高实验效率和结果的准确性。
在实验操作中要严格按照操作规程进行，确保提取的核酸样品质量和纯度。
核酸采集操作流程及注意事项
核酸采集操作流程及注意事项核酸采集是一种常用的生物样本采集方法，用于检测病原体的遗传物质。
以下是核酸采集的一般操作流程和注意事项：操作流程：1.准备工作：●确保工作区域整洁、干净，并做好个人防护，包括佩戴口罩、手套和实验室外套。
●检查所需的采集工具和试剂是否完整和有效，如采集管、标签、采集液等。
2.样本采集：●向患者解释采集过程，提供必要的指导和支持。
●根据具体采集部位，选择合适的采集工具，如棉签、拭子等。
●注意遵循正确的采集方法，确保从患者体内采集到足够的样本。
●采集后将样本放入采集管中，确保管盖紧闭，并在管上标明患者信息和采集日期。
3.样本处理：●根据采集管上的要求，添加适当的保存液（如稳定剂）。
●严格按照操作规程将样本进行处理和保存，以确保遗传物质的稳定性和完整性。
●注意避免污染和交叉污染，避免与其他样本接触。
4.清洁和废弃物处理：●在采集完毕后，及时清洁工作区域和使用的工具。
将废弃物按照生物危险废弃物的处理要求进行处置。
注意事项：1.严格遵守无菌操作：采集前和采集过程中，保持工作区域和工具的无菌状态，以避免样本污染。
2.避免交叉污染：每个患者使用一次性的采集工具和采集管，避免不同患者样本之间的交叉污染。
3.注意采集部位的选择和操作：根据具体的检测需求和采集部位的不同，选择合适的采集工具和方法，并按照正确的操作步骤进行采集。
4.安全防护：佩戴口罩、手套和实验室外套等个人防护用品，避免直接接触样本和可能存在的病原体。
5.样本标识和记录：在采集管上准确标注患者信息和采集日期，确保样本的追踪和记录。
6.操作规范和培训：操作人员应熟悉和遵守相关的操作规程，并接受相关培训，以确保采集的准确性和可靠性。
7.废弃物处理：将废弃物按照规定的生物危险废弃物处理程序进行处置，避免对环境和他人造成风险。
总之，严格的操作流程和注意事项是确保核酸采集的准确性和可靠性的重要保证，同时保护操作人员和环境的安全。
在实施核酸采集时，应根据具体的要求和规定进行操作，并遵循实验室的标准操作程序。
核酸检测需要那些注意事项
核酸检测需要那些注意事项核酸检测是一种用于检测病原体核酸的方法，主要用于检测病原体感染、传染病的早期诊断和流行病学调查。
在使用核酸检测技术进行检测时，需要注意以下几个方面：1. 样本的采集：核酸检测需要采集患者的体液或组织样本，如鼻咽拭子、口咽拭子、血液、尿液等。
在采集样本时，应遵循严格的无菌操作，并确保采集到的样本能够保持完整性和纯净度。
另外，采集过程中应注意预防交叉感染，使用一次性的采样器具，并避免接触其他污染源。
2. 样本的保存与运输：采集到的样本需要及时进行存储和运输，以确保核酸的完整性。
一般来说，样本应尽快送达实验室进行处理，但在送达之前，可以暂时将样本保存在2-8摄氏度的冰箱中，避免冰冻和高温。
在运输过程中，可以使用冷藏箱、冷链运输等方式来保持样本的稳定性。
3. 实验室条件：核酸检测需要在实验室环境下进行，因此实验室应具备相应的设施和设备。
实验室应保持洁净，避免有害物质的污染。
同时，实验室应配备相应的核酸提取、扩增和检测设备，如纯化试剂、PCR仪、电泳设备等。
实验室人员应具备相关的专业知识和技能，并按照标准操作程序进行实验。
4. 样本的预处理和核酸提取：在进行核酸检测之前，需要对样本进行必要的预处理和核酸提取。
预处理包括样本的离心、离析、悬浮等步骤，以裂解细胞和释放核酸。
核酸提取是将核酸从样本中纯化出来的过程，常用的方法有有机溶剂法、硅胶膜法、磁珠法等。
在预处理和核酸提取的过程中，应注意避免交叉污染，并使用无脂的试剂和无RNase 的器具。
5. PCR扩增和检测：核酸检测常用的方法是聚合酶链式反应（PCR），通过PCR可以扩增出足够数量的目标核酸序列，然后使用凝胶电泳或荧光PCR等方法进行检测。
在PCR扩增和检测的过程中，应注意以下几点：首先，要保证反应体系的准确性和稳定性，使用新鲜的试剂和标准品；其次，要正确设置PCR反应条件，包括反应体系的组成、温度和时间等参数；最后，要进行结果解读和数据分析，根据阈值循环数（Ct值）判断样本是否阳性或阴性。
核酸提取流程及注意事项
核酸提取流程及注意事项本文档将介绍核酸提取的基本流程以及需要注意的事项。
1. 核酸提取流程1. 准备样本：使用适当的方法采集样本，并将其放入离心管或样本收集器中。
2. 细胞破碎：使用细胞破碎缓冲液将样本离心管/样本收集器中的细胞破碎。
3. 核酸溶解：将细胞破碎液转移到离心管中，并加入核酸溶解液。
充分混合并孵育一定时间。
4. 蛋白质沉淀：加入蛋白质沉淀剂，使蛋白质沉淀形成。
离心样本以去除蛋白质沉淀。
5. 取出上清液：小心地将上清液完全转移到新的离心管中，并避免带入任何沉淀。
6. 酒精沉淀：加入适量冷酒精，使核酸沉淀形成。
离心样本以沉淀核酸。
7. 洗涤：去除酒精，使用70％乙醇洗涤核酸沉淀，以去除杂质。
8. 干燥：离心样本以去除乙醇，并将核酸沉淀在室温下干燥。
9. 溶解：使用核酸溶液溶解核酸沉淀，以获得最终的核酸提取物。
2. 注意事项- 操作前确保实验室中的工作区域及设备已经彻底清洁，并且消毒所需器材。
- 严格按照实验室的安全操作规程进行操作，佩戴个人防护装备，如手套和口罩。
- 确保使用的试剂及其浓度、质量得到了验证，并按照提取试剂的指导书进行操作。
- 注意避免样本污染，避免核酸降解和污染的情况发生。
在操作过程中尽量避免直接接触皮肤，使用滤液器等器具进行操作。
- 样本处理过程中，尽量减少离心速度和时间，以避免影响核酸的质量。
- 核酸提取中的步骤应在恒温的环境下进行，避免温度变化对结果的影响。
- 在每个步骤结束后，及时标记和记录样本信息，减少错误。
- 技术操作前后，仔细清洗所有的设备和工作台，避免交叉污染。
以上是核酸提取的基本流程及注意事项，希望对您有所帮助。
如有问题，请随时咨询。
核酸提取流程及注意事项
核酸提取流程及注意事项1. 简介核酸提取是从生物样本中分离纯化核酸的过程，是进行分子生物学和基因组学研究的重要步骤之一。
本文档将介绍核酸提取的基本流程，并提供一些注意事项，以确保提取过程的准确性和可靠性。
2. 核酸提取流程核酸提取的基本流程如下：步骤一：样本处理- 将样本收集至离心管中，并确保样本来源明确和标识清楚。
- 根据实验需要，进行样本预处理步骤，如组织粉碎、细胞裂解等。
步骤二：细胞裂解- 使用适当的细胞裂解缓冲液对样本进行裂解。
- 考虑使用机械破碎、化学裂解或酶裂解等方法根据样本类型进行处理。
步骤三：蛋白质去除- 加入适当的蛋白质沉淀剂，如氯仿、酚/氯仿等，将蛋白质沉淀下来并分离。
步骤四：核酸沉淀- 加入等体积的异丙醇或其他适当的溶剂，将核酸沉淀下来。
- 使用离心等方法将核酸沉淀回收。
步骤五：核酸洗涤- 使用洗涤缓冲液对核酸沉淀进行洗涤，以去除残留污染物。
- 使用离心等方法将洗涤后的核酸沉淀回收。
步骤六：核酸溶解- 加入适量的溶解缓冲液，使核酸完全溶解。
- 定量测定溶解后的核酸浓度，并保存在-20°C或更低温度下。
3. 注意事项- 样本处理过程中要保持样本的完整性和纯净性。
- 制备细胞裂解缓冲液时，要根据样本类型和研究目的作出合理选择。
- 注意在蛋白质去除步骤中避免蛋白质和核酸的干扰。
- 在核酸沉淀过程中，处理时要避免核酸的降解和损失。
- 核酸洗涤时，要严格控制洗涤时间、温度和离心速度，以提高洗涤效果。
- 核酸溶解过程中，要充分溶解，避免出现团块和有机溶剂残留。
以上是核酸提取流程及注意事项的基本内容，希望对您的核酸提取实验有所帮助。
核酸样本采集流程及注意事项
核酸样本采集流程及注意事项一、核酸样本采集流程1.采集器械准备：准备所需采集器具，包括呼吸道采样用的试管、棉签、采集管、采集袋等。
2.个人消毒：采集人员应严格按照个人防护要求进行消毒，戴上帽子、口罩、手套等，确保操作环境的洁净。
3.采样器械消毒：将采集用的器械浸泡于含有消毒液的容器中，保证完全消毒。
4.采集前准备：告知被采集者相关信息，包括采集的目的、过程、时间等，征得其同意，并填写相关采样表格。
5.采集样本：对于呼吸道采样，可以通过鼻咽拭子或者咽拭子进行采集。
采集者戴好手套后，轻轻插入拭子到被采集者的鼻腔或咽喉处，旋转几次后慢慢取出。
将拭子立即放入带有病毒保存液的管中。
6.采集完毕：将采集好的样本放入采集袋，并严密封口，确保不发生泄露，将相关信息填写在采样袋上。
7.处理废弃物：将采集器具集中在一起，进行高温高压处置，或者进行焚烧处理。
8.存储与运输：将采集好的样本放入专用的冷藏盒中，确保样本处于适宜的温度，避免样本在运输过程中的降解或可能的感染。
二、注意事项1.个人防护：采集人员应严格按照卫生部门和相关规定的个人防护要求进行操作，包括正确佩戴口罩、帽子、手套等，避免交叉感染。
2.采集时间：对于不同采样方法，有不同的采样时间要求，一般来说，拭子应在采样后立即放入保存液中，避免样本的降解和污染。
3.采样技术：采集者应具备专业技能，避免伤害被采集者，并确保采样的准确性和完整性。
4.采样部位：针对新型冠状病毒，一般采用鼻咽拭子和咽拭子的方法进行采样，各个机构可以根据需要选择合适的采样部位。
5.采集管选择：采集管应选用无菌封闭的试管，带有病毒保存液，能够保证样本质量和安全性。
7.样本保存：采集好的样本应及时放入冷藏盒中，并严密封口，将温度控制在适宜范围内，避免样本的降解和污染。
8.废弃物处理：采集器具应进行严格消毒和高温高压处理，避免采集过程中的交叉感染。
9.运输要求：采集好的样本应保持冷链运输，避免样本在运输过程中的降解或可能的感染。
核酸提取和注意事项
核酸提取和注意事项核酸提取是生物实验室中常见而重要的实验步骤，它是从细胞或组织中提取出DNA或RNA，以便进行分子生物学研究和DNA分析。
在进行核酸提取时需要注意许多事项，以保证提取出的核酸质量和纯度。
本文将详细介绍核酸提取的步骤和注意事项。
首先，核酸提取的步骤通常包括样品的处理、细胞破碎和核酸分离纯化三个主要步骤。
在样品处理步骤中，应该选择适当的样品类型，如细胞、组织、血液、粪便等，并根据样品类型选择合适的提取方法。
在细胞破碎步骤中，可以使用机械破碎、化学溶解或酶处理等方法使细胞破碎释放核酸。
核酸的分离纯化可以通过离心沉淀、柱层析或化学沉淀等方法进行。
在进行核酸提取过程中，还需要注意一些事项来保证提取的核酸质量和纯度。
首先，实验操作人员应该佩戴手套和口罩，避免外源性的DNA或RNA污染。
同时，实验器材如离心管、移液器、离心机等要提前消毒，以避免实验过程中的污染。
其次，在细胞破碎过程中，应避免过度破碎，以免影响核酸的质量。
其次，应该使用高质量的试剂和试验用具来确保提取到纯净的核酸。
此外，实验过程中的温度、时间、pH值等操作条件也要科学合理地控制，以保证核酸提取的效果。
除了实验操作的注意事项，还有一些其他方面也需要特别注意。
首先是样品的存储和保存。
提取后的核酸应尽快进行下一步实验处理，如果需要长时间保存，则应将核酸溶液储存在适当的条件下，如冷冻或冷藏。
其次，实验操作过程中也要注意避免交叉污染。
交叉污染是指从前一个实验中带入的DNA或RNA污染到后一个实验中，严重影响实验的结果。
为了避免交叉污染，可以使用RNase和DNase来去除外源性的核酸污染，并严密控制实验操作流程。
此外，值得注意的是，在核酸提取过程中，可能会出现一些常见的问题和解决方法。
例如，样品中可能含有酶活性物质，影响核酸的纯度和完整性。
这时可以添加酶抑制剂来抑制酶活性。
此外，有些预处理步骤可能会造成样品损失，导致核酸提取产量不高。
在这种情况下，可以通过调整预处理步骤的条件来提高核酸的产量。
核酸提取方法的技术要点和注意事项
核酸提取方法的技术要点和注意事项一、核酸的基本概念核酸是脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。
一个核苷酸分子是由一分子含氮的碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成的。
根据五碳糖的不同可以将核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。
核酸都是极性化合物，都溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂。
在酸性溶液中易水解，在中性及弱碱性溶液中稳定性稍高。
二、核酸提取前样本采集、预处理和保存全血：抗凝剂EDTA或枸橼酸钠，不宜使用肝素（抑制Taq活性）；血清和血浆：主要用于检测病毒、细菌和肿瘤细胞等释放入血的游离核酸；分泌物：痰液是检测呼吸道病原体核酸的主要样本，深部咳痰，患者采集早晨起床后的第一口痰，采集前应先漱口，以避免混入大量口腔脱落的上皮细胞和唾液影响检测结果。
三、核酸提取的基本步骤及使用试剂1.核酸的释放；2.核酸的分离与纯化；3.核酸的浓缩、沉淀与洗涤。
核酸提取的常用组分成分名称原理及作用酚蛋白质的变性剂，可抑制DNase的降解作用SDS（十二烷基磺亲水基表面活性剂，可破坏细胞膜、核膜、并使组织蛋白酸钠）与DNA分离溶解脂类蛋白TritonX-100 非离子表面活性剂，有助于蛋白质与DNA分离异硫氰酸胍变性裂解细胞，强有力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破坏4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES) 一种重要的氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH异丙醇DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分氯化钠氯化钠溶液中DNA的溶解度最低，而蛋白质高，可以去除蛋白；抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定等矿物油去除非核酸有机杂质磁珠吸附核酸四、实验室常用核酸提取技术1.酚/氯仿抽提法/醇沉淀法；2.层析柱法；3.煮沸裂解法；4.一步法；5.纳米磁珠法。
1.酚/氯仿抽提法/醇沉淀法：酚是蛋白质的变性剂，同时抑制了DNase的降解作用，SDS（十二烷基磺酸钠）将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质，核蛋白变性降解，使核酸释放。
核酸样本采集流程及注意事项
核酸样本采集流程及注意事项1. 流程核酸样本采集的流程一般包括以下步骤：1. 洗手和穿戴防护装备：在采集核酸样本之前，工作人员应先洗手，并穿戴好防护装备，如手套、口罩、护目镜等，以确保采集过程中的卫生安全。
2. 准备采集器材：准备好采样用具，如采样试剂盒、采样棒等。
确保采集器材的清洁和无损。
3. 采集样本：依据标准采样操作步骤，将采样棒或其他采样器具插入病人的鼻腔、咽喉等部位，轻柔地旋转数次，确保足够的标本采集。
4. 标本处理：采集的样本需要进行相关预处理，如转移至采样试剂盒，进行离心、混匀等操作，以保持样本稳定和适宜后续检测。
5. 封存和标记：采集样本之后，将其妥善封存，并标记相关信息，如采集日期、患者信息等，以便于后续样本追踪和管理。
6. 清洁和消毒器材：采样完毕后，及时清洁和消毒采样器材、工作台等，以确保实验室环境的卫生和安全。
2. 注意事项在进行核酸样本采集过程中，需要注意以下事项：1. 穿戴防护装备：采样前必须正确穿戴防护装备，包括手套、口罩、护目镜等，确保人员的个人防护。
2. 采集操作规范：按照规范的采集操作步骤进行，避免操作不规范或不正确的情况发生。
3. 采集器材消毒：确保采样器材的消毒处理，避免交叉感染的发生。
4. 避免污染：在采集和处理样本时，要避免污染的发生，特别是来自外界的污染。
5. 标本追踪和管理：采集的样本需要标记清晰，以便于追踪和管理，避免样本丢失或混淆。
6. 实验室环境卫生：在采样结束后，要及时清洁和消毒相关设备和工作台，保持实验室环境的卫生和清洁。
以上是核酸样本采集的流程及注意事项，希望能为您提供帮助。
核酸提取和注意事项
核酸提取和注意事项核酸提取是一种常用的实验方法，用于从生物样品中提取核酸（DNA或RNA）。
核酸提取的目的是分离并纯化核酸，以便进行进一步的研究，如测序、PCR、酶切等。
然而，核酸提取是一项复杂且容易受到各种因素影响的实验步骤，因此需要特别注意一些事项，以确保提取到高质量的核酸。
其次，核酸提取需要在无菌、洁净的环境中进行。
核酸容易受到外源性DNA的污染，会影响提取到的核酸的纯度和酶活。
因此，在进行核酸提取前，必须保证实验台面和实验器皿的清洁，并特别注意避免手部和呼吸道的DNA污染。
另外，使用一次性消耗品或经过严格消毒的实验仪器也是必要的。
第三，选择合适的核酸提取方法和试剂盒。
目前，有多种核酸提取方法可供选择，如酚/氯仿法、基质柱法、磁珠法等。
不同的样品类型和研究目的，可能需要选择不同的提取方法。
同时，合适的试剂盒也会直接影响着核酸提取的效果和纯度。
因此，在选择方法和试剂盒时，要充分考虑实验需要、实验条件和提取效率等因素。
第四，正确的操作流程和实验技巧也是核酸提取的关键。
核酸提取过程中，应严格按照操作步骤进行，避免出现错误或漏操作。
特别需要注意的是，禁止使用锐利的工具或剪刀等进行样品切割，避免受到损伤导致核酸的降解。
此外，在悬浮细胞和组织细胞的裂解过程中，需要避免过度裂解或裂解时间过长，以避免释放大量的酶和细胞碎片影响核酸提取的效果。
最后，实验前后的设备检查和清洁也很重要。
在实验前，检查电动机、搅拌器和温度控制系统等设备是否正常工作，并校正相关的仪器和设备，确保实验的准确性和稳定性。
在实验结束后，及时清洁实验台面和仪器设备，避免DNA污染的交叉感染和混杂，保证下次实验的准确性。
综上所述，核酸提取是一项复杂的实验步骤，需要注意多个方面的细节。
在样品选择、无菌环境、方法和试剂盒选择、操作流程和技巧等方面都需要特别重视，以提取到高质量的核酸，并保证实验的准确性和稳定性。
这些小细节的注意，会对核酸提取的结果产生重大影响。
核酸磁珠提取注意事项
核酸磁珠提取注意事项
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲核酸磁珠提取的那些事儿，这可太重要啦！
你想想看啊，要是在这个过程中有什么疏忽，那岂不是前功尽弃了嘛！比如说，在操作的时候马马虎虎，那可不行哟！就像做饭一样，你不认真对待，做出来的菜能好吃吗？
首先呢，样本处理得特别小心。
你得把样本处理得干干净净的，不能有杂质啥的。
这就好比你要去见很重要的人，不得把自己收拾得利利索索呀！要是样本没处理好，那后面提取出来的能靠谱吗？你说是不是这个理儿。
然后呢，试剂的添加可得准确无误。
哎呀呀，可别手抖多加了或者少加了呀！这就好像你调颜料画画，颜色比例不对，画出来能好看吗？比如说，磁珠的量要是没把握好，那可就麻烦大啦！
还有呀，操作过程中得保持专注。
别一会儿看看手机，一会儿又干干别的。
这就跟你走路一样，东张西望的能走好路吗，说不定还会摔跟头呢！在提取的时候，就得一心一意的。
提取完成后，别着急着就完事大吉啦！还得好好检查检查呢。
这就像写完作业要检查一遍一样，万一有错误呢！要是没检查，出了问题可别后悔哟！
总之啊，核酸磁珠提取这件事，咱就得当成宝贝一样小心翼翼地对待。
千万不能马虎，要认真细致，每一个步骤都做到位。
不然会前功尽弃，那可就得不偿失啦！一定要记好这些注意事项，让我们的提取工作顺顺利利的！。
核酸提取的注意事项
核酸提取的注意事项
1. 嘿，做核酸提取的时候，可千万别马大哈呀！就好比你做一件很重要的事情，能随随便便吗？比如说做菜，你要是盐放多了或者火候没掌握好，那味道能好吗？所以啊，提取核酸的时候一定要认真对待，咱们得把每个步骤都做仔细咯！
2. 你知道吗，核酸提取的环境可得保持干净整洁啊！这就好像你住的房间，如果乱七八糟的，你待着能舒服吗？咱不能在一个脏兮兮的地方做这么重要的事呀！就像你不会在堆满垃圾的桌子上吃饭一样，一定要给核酸提取创造一个良好的环境！
3. 核酸提取的时候，那操作一定要规范呀！你想想，要是你做手工，不按步骤来，能做出好东西吗？这可不是能乱来的事儿呀！可别图快就不管不顾啦，要像对待宝贝一样精心操作哟！
4. 哇塞，核酸提取的试剂可不能随便乱用啊！这就跟你给汽车加油似的，加错了油车子还能跑好吗？一定要用合适的试剂，不然可就白费劲啦，你说郁闷不郁闷？
5. 朋友们，核酸提取那可是个细致活儿啊！每一个环节都不允许有差错呀。
就好比搭积木，一块没放好，整个就可能垮掉。
所以每一步都要小心翼翼，别掉以轻心哦！
6. 别忘了呀，做完核酸提取要好好处理废弃物呀！这就像你吃完东西，总不能把垃圾乱扔吧？要把该清理的都清理干净，给后面的工作创造一个良好的条件，不然多麻烦呀！
我的观点结论就是：核酸提取一定要谨慎对待，注意这些事项，才能保证结果的准确性和可靠性！。
核酸提取与纯化
核酸提取与纯化引言核酸提取与纯化是生物学研究中常用的操作步骤之一。
核酸提取是指从生物样本中分离出DNA或RNA分子，纯化则是指将提取得到的核酸分子除去杂质，获得纯净的核酸样品。
本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项。
核酸提取原理核酸提取的基本原理是利用生物样本中DNA和RNA分子与其他组分（如蛋白质、细胞壁等）之间的化学或物理性质的差异，将核酸分子从样本中分离出来。
常见的提取方法有有机溶剂法、盐析法和离心法等。
有机溶剂法有机溶剂法是一种常用的核酸提取方法。
其原理是利用有机溶剂（如酚-氯仿混合液）与生物样本中的其他组分之间的亲和性差异，将核酸分子从样本中提取出来。
这种方法操作简单，适用于提取DNA和RNA。
具体操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞培养物或组织样本。
2.加入细胞裂解缓冲液，破坏细胞膜、核膜等结构，释放核酸分子。
3.加入酚-氯仿混合液，与细胞裂解液混合，形成两相体系。
4.离心分离两相，核酸分子会在有机相中分配到有机相中，而其他杂质会在水相中。
5.取出有机相，加入异丙醇或乙醇等沉淀剂，沉淀核酸分子。
6.离心沉淀，弃去上清液。
7.用乙醇洗涤沉淀，去除残留的盐和有机溶剂。
8.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
盐析法盐析法是利用核酸分子与盐溶液中的离子交互作用的原理进行分离。
该方法适用于高含量的核酸样本（如DNA或RNA）。
其操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入适量的盐溶液，使盐浓度达到一定程度。
3.离心分离沉淀，核酸分子会与高浓度盐溶液结合形成沉淀，而其他杂质会在上清液中。
4.取出沉淀，用盐溶液洗涤核酸，去除杂质。
5.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
离心法离心法是一种快速分离核酸的方法。
其原理是利用离心力将核酸分子从样本中沉淀下来。
离心法适用于小样本量和快速提取的情况。
具体步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入高盐缓冲液，增加核酸与其他组分之间的亲和性差异。
核酸提取方法的技术要点和注意事项
核酸提取方法的技术要点和注意事项1.样品的采集和保存：样品的质量将直接影响到核酸提取的结果。
在采集样品之前，需要有一定的准备工作，例如清洁工作台，检查工具和试剂的应急备份等。
样品可以是从血液、组织、细胞培养物和体液中获得的。
样品应马上放入合适的保存液中，以防核酸降解。
2.细胞破碎：在获得样品后，必须破坏细胞膜以释放核酸。
常用的方法包括机械破碎、化学破碎和酶破碎。
机械破碎通常使用超声波或螺旋破碎器，以激烈的震荡和磨擦力来破坏细胞膜。
化学破碎一般使用溶解细胞膜的缓冲液，如洗涤液或裂解酶。
酶破碎利用特定的酶来降解细胞膜或核膜。
3.去除蛋白质和其他杂质：核酸提取过程中，需要去除细胞残渣、蛋白质和其他杂质，以纯化核酸。
这可以通过加入蛋白酶和盐溶液、醇沉淀或利用柱层析方法来实现。
蛋白质酶可以降解细胞蛋白，使其不会干扰核酸的提取。
盐溶液可以用来沉淀核酸和去除蛋白质，高盐浓度可以使核酸结合在核酸龄处沉淀下来。
醇沉淀则是利用醇和低温来提取核酸，除去杂质。
柱层析方法则是利用不同材料具有不同的亲和性和尺寸选择性来分离纯化核酸。
4.纯化核酸：纯化核酸的目的是去除杂质，提高核酸的纯度。
常用的纯化方法包括酚-氯仿提取、硅胶柱层析和离心柱层析。
酚-氯仿提取方法主要适用于大量核酸的提取，酚可以去除蛋白质，氯仿可以除去可能会干扰PCR反应的污染物。
硅胶柱层析可以在较短的时间内实现核酸的快速纯化，其原理是利用核酸在硅胶膜上的特异性结合来分离纯化核酸。
离心柱层析也是一种常用的方法，它可以根据核酸分子大小和其他特征来实现核酸的分离。
5.储存核酸：在核酸提取完成后，需要储存核酸以备后续实验使用。
常见的储存方法是在低温下（通常为-20°C或更低的温度）储存核酸，可以延长其保存时间。
此外，核酸也可以在冻干的形式下储存，在干燥条件下长期保存。
要注意的事项如下：1.严格控制样品的污染问题，使用无菌器具和试剂，并在一定范围内进行无菌操作，以防止核酸的污染和降解。
pcr实验室核酸提取流程
pcr实验室核酸提取流程PCR实验室核酸提取流程。
PCR实验室核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从生物样本中提取DNA或RNA的过程。
本文将介绍PCR实验室核酸提取的流程及注意事项，希望能为实验人员提供一些帮助。
首先，准备样本。
样本可以是血液、组织、细胞培养物等，根据实验需要选择合适的样本。
样本的质量和纯度对提取的核酸质量有重要影响，因此在实验前要确保样本的质量良好。
其次，裂解细胞膜。
裂解细胞膜是核酸提取的关键步骤，可以选择化学法、物理法或酶法进行裂解。
常用的方法包括加入裂解缓冲液、冻融法和酶消化法等，根据不同的样本选择合适的裂解方法。
接着，使用载体吸附核酸。
在裂解后，核酸会以游离态存在于溶液中，需要使用载体将核酸吸附并固定。
常用的载体包括硅胶膜、硅胶柱或磁珠等，选择合适的载体可以提高核酸的纯度和回收率。
然后，洗脱核酸。
经过载体吸附后，核酸需要进行洗脱步骤，去除杂质和提高核酸的纯度。
洗脱液的选择和洗脱条件的控制对核酸提取的效果有重要影响，需要严格按照实验步骤进行操作。
最后，进行核酸定量和保存。
提取得到的核酸需要进行定量检测，可以使用紫外分光光度计或荧光定量仪进行测量，确保核酸的浓度和纯度符合实验要求。
另外，在保存核酸时，要避免冻融循环和长时间暴露在光线下，以保证核酸的稳定性和完整性。
在进行PCR实验室核酸提取时，需要注意以下几点，首先，严格控制实验条件，避免外源DNA或RNA的污染；其次，避免核酸降解，尽快进行提取和保存；最后，遵循实验步骤，避免操作失误导致实验失败。
总之，PCR实验室核酸提取是一项关键的实验步骤，正确的操作可以保证提取得到高质量的核酸样品，为后续实验提供可靠的基础。
希望本文的介绍能够帮助实验人员更好地进行核酸提取实验，提高实验效率和结果的可靠性。
核酸检测操作指南
核酸检测操作指南
1. 简介
核酸检测是一种用于检测特定病原体的方法，常用于疾病诊断
和大规模筛查。
本操作指南旨在提供核酸检测的基本步骤和注意事项。
2. 操作步骤
步骤一：样本采集
1. 确保采集器具和试剂齐全，并严格按照操作要求进行消毒。
2. 使用无菌棉签或采样管收集样本。
常见的样本来源包括喉拭子、鼻拭子、唾液等。
3. 确保样本采集完整，避免交叉污染。
步骤二：核酸提取
1. 根据实验室提供的核酸提取试剂盒使用说明，进行核酸提取。
2. 注意严格按照操作要求进行样本处理，避免污染和损坏。
步骤三：核酸扩增
1. 根据实验室提供的核酸扩增试剂盒使用说明，进行核酸扩增。
2. 注册样本信息，确保数据的准确性和可追溯性。
步骤四：结果判读
1. 根据实验室提供的结果判读标准，对扩增反应结果进行判读。
2. 注意识别阳性和阴性结果，避免误读和漏读。
3. 注意事项
- 操作前必须戴好防护手套和口罩，做好个人防护。
- 严格按照操作要求和实验室规范进行操作，防止交叉污染。
- 对于复杂样本或结果不确定的情况，及时与实验室负责人沟
通并寻求帮助。
- 操作结束后，记得将实验器材进行消毒处理。
以上为核酸检测操作指南的简要介绍和操作步骤，希望能对您
的工作有所帮助。
> 注意：本文档内容仅供参考，请在实际操作中严格遵守相关
法规和实验室规范。
> 注意：由于核酸检测标准和操作要求可能因地区和实验室而异，请在操作前核实并了解相关指导。
核酸提取和检测安全要求
核酸提取和检测安全要求随着医学和生物科技的进步，核酸提取和检测已经成为许多疾病的诊断和治疗的关键工具。
然而，这些过程涉及到许多潜在的安全风险，必须采取一系列的预防措施来保障操作者和患者的健康和安全。
核酸提取和检测的安全风险在核酸提取和检测过程中，可能涉及到以下安全风险：化学物品的危险性核酸提取和检测涉及到使用一些化学试剂，这些试剂具有毒性、腐蚀性和易燃性等危险特性。
生物安全的风险在核酸提取和检测过程中，操作者可能面临来自样品本身的生物危害，包括病原体、细菌和真菌等微生物。
实验室场地和设备的危险性核酸提取和检测需要在实验室条件下进行，实验室场地和设备的安全是确保操作者和患者安全的关键因素。
不合适的设备和场地可能导致化学品泄漏、电击等严重安全事故。
核酸提取和检测的安全管理措施为了确保核酸提取和检测的安全，需要采取以下管理措施：操作者安全意识培训应该定期对操作者进行化学品、微生物和实验室设备的安全培训，确保操作者具备基本的安全意识、防范措施和紧急处理措施应对预计和突发情况。
实验室设备和场地评估核酸提取和检测实验室的设备和场地应该符合国家规定和标准，确保其能够承受化学试剂和微生物带来的风险。
化学品和生物物品使用管理使用化学试剂和生物物品进行操作时，需要按照国家标准和规定进行使用和储存，并对化学试剂和生物物品进行标识、分类和记录等管理。
个人防护措施操作者需要配戴合适的个人防护用品，包括手套、防护眼镜、口罩等，以保护自身安全。
废物处理废弃化学试剂和生物物品应按照国家标准和规定进行妥善处理，防止对环境造成污染。
结论核酸提取和检测是一项复杂的操作，提高安全意识、合理使用化学试剂和生物物品、开展实验室场地和设备安全评估以及保护个人安全，都是确保核酸提取和检测过程中的安全的关键措施。
只有充分重视核酸提取和检测的安全，才能有效避免事故的发生，保障操作者和患者的健康和安全。
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B：新型低毒染料： • 如Gold View、SYBR GreenⅠ、 SYBR Gold等。 • 毒性较低，但价格较昂贵。 • 灵敏度较好，但不如EB。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
4.琼脂糖胶液制备（1%，50 ml）
4.1 称取0.5 g琼脂糖，置于250 ml锥形瓶中，加入
——重新沉淀
DNA中残留有金属离子
——重新70%乙醇漂洗
基因组DNA提取常见问题分析
DNA降解
– 材料不新鲜或反复冻融 – 未很好抑制内源核酸酶的活性 – 提取过程操作过于剧烈，DNA被机 械打断 – 外源核酸酶污染
基因组DNA提取常见问题分析
DNA提取量少
实验材料不佳或量少 —— 选取新鲜（幼嫩）材料
60 ml 1×TAE电泳缓冲液，微波炉中加热，使琼脂糖溶 解。一般需反复煮沸3次，琼脂糖才能充分溶解。加热过 程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。 加热时应盖上封口膜，以减少水分蒸发；
4.2
待胶液冷却至60℃左右时，加入5%的Gold View
染料，混匀，既成琼脂糖胶液。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
学 习 汇 报
核酸提取的原理及方法
汇报人:富贵 青海大学2010级研究生
前言
• 核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物 信息分子，是分子生物学研究的主要对象， 因此，核酸的提取是分子生物学实验技术 中 最 重 要 、 最 基 本 的 操 作 。
一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取
1.实验器材
台式高速离心机、旋涡混合仪、移液器、定时器、 marker笔、 电子天平、电泳设备、凝胶成像系统、微波炉、量筒、试剂瓶、锥形瓶等。
2.实验耗材
无菌2 mL/1.5 mL EP管、各规格Tip、一次性手套等。
3.实验试剂
质粒小提试剂盒（离心柱型，YRBIO) 、LB培养基、抗生素、 琼脂糖、DNA Loading Buffer、 GoldView核酸染料、 TAE电泳缓冲液等。
• 严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下进行 的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，往往在一个细胞 中只有一份或几份拷贝；
• 松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下进
行的，每个细胞中含有10-200份拷贝，如果用一定的药物
处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至几千份。
如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素 处理才能达到更高拷贝数。
离心柱型质粒DNA提取试剂盒工作原理
离心柱型质粒DNA提取试剂盒采用改进的 SDS-碱裂 解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液
将杂质和其它细菌成分去除，最后用低盐、高pH值的洗
脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
质粒DNA提取及检测——实验准备
——减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。
解决办法:重新抽提一次，再沉淀、溶解。
RNA提取常见问题分析
电泳带型异常
上样量超过 3μg 电压超过 8V/cm 电泳缓冲液陈旧
均可能导致 28S 和 18S 条带分不开
一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取
四．真核细胞总RNA提取
五．琼脂糖凝胶电泳
DNA的琼脂糖凝胶电泳
1 原理： DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带 负电荷，在电场中向正极移动。而琼脂糖 凝胶具有分子筛作用，不同分子量或分子 形状的核酸，其移动速度有差异。因此， 利用这种“电荷”和“分子筛”的双重效 应，达到分离核酸的目的。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
2. 琼脂糖凝胶分离DNA的范围
Tris-HCl （pH 8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变， 使酚容易去除。
该复合物在高盐溶液中（>0.7 mol/L NaCl）是可 溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚 类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB提取缓冲液的经典配方
组份 终浓度 Tris-HCl （pH 8.0） 100 mM EDTA （pH 8.0） 20 mM NaCl 0.4 M CTAB 2% (W/V) β-巯基乙醇 0.1%（V/V） 使用前加入
基因组DNA提取——CTAB法
• CTAB提取缓冲液的改进配方
组份 终浓度
Tris-HCl EDTA NaCl （pH 8.0） （pH 8.0）
100 mM 20 mM
CTAB
PVP40
β-巯基乙醇 2%（V/V） 使用前加入
0.4 M 3% (W/V) 5% (W/V)
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种 不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同 时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
TRIzol试剂
TRIzol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫 氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白 质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽
提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后
可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋 白质和DNA便分离开。水相层主要为RNA，有机层主要为 DNA和蛋白质。
7.电泳
加完样后立即接通电源。控制电压小于8
V/cm，电流在100 mA以上。当溴酚蓝条带移动
到凝胶2/3时，停止电泳。
8.成像
在紫外透射仪或凝胶成像系统上观察电泳结果。 保存图像。
倒胶温度不要太低； 先赶气泡、再插梳子。
胶液60℃ 加染料
凝固20~30min
混匀样品不能有气泡； 更换Tip。
反复煮沸3次、锥形瓶封口
10 μg/ml RNase A 10 mM Tris-HCl （pH 8.0） 1 mM EDTA （pH 8.0 ）
洗脱液 EB
质粒DNA提取——实验流程
对数期菌体 上清液
溶液I充分重悬
过柱
质粒DNA溶液
溶液II裂解
离心洗涤
溶液III中和
干燥溶解
质粒DNA提取——电泳检测
琼脂糖凝胶电泳检测
总RNA提取——样本准备
植物/动物组织样本：
新鲜取材或组织离体后液氮速冻，存于液氮或-80℃。 为避免反复冻融，需小份分装（50~100 mg/份）。
细胞样本：
新鲜收集待用或加入TRIzol后 -80℃冻存细胞沉淀。
血液样本：
新鲜血液分离出淋巴细胞，待用或加入TRIzol后 -80℃ 冻存细胞沉淀。
一．核酸简介
二．基因组DNA提取
三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取
五．琼脂糖凝胶电泳
总RNA提取——通用方法
异硫氰酸胍/苯酚法（TRIzol法）
原理： 核酸在中性条件下，因磷酸基解离而带负电荷，这一
部分由于水化而溶于水。而在酸性条件下，磷酸基的负电
荷消失，水溶性下降。因此，在酸性酚的处理下，DNA向 疏水性的酚层移动，而RNA由于有-OH的存在有亲水性， 因此向水层移动。
4.实验材料
对数期菌株（pEGFP-N1 in DH5α）
质粒DNA提取——碱裂解法
碱裂解法试剂配方
组分1 Ⅰ液 Ⅱ液 25 mM Tris-HCl （pH 8.0） 0.2 M NaOH 组分2 10 mM EDTA（pH 8.0 ） 1% SDS
Ⅲ液
RNase A
3 M KAc （pH 4.2）
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB法实验流程
植物材料
抽提
离心洗涤
液氮研磨
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
核酸沉淀
DNA溶液
基因组DNA提取——SDS法
SDS法原理
SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能 裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸； 提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白 质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；
质粒DNA的三种带型： 1.共价闭合环状DNA分子： 质粒双链没有断裂；超螺 旋结构；泳动速度最快； 2.半开环质粒DNA分子： 质粒的一条链断裂；松弛 的环状分子；泳动速度最 慢； 3.线性DNA分子：质粒的 两条链均断裂；泳动速度 居中。
质粒DNA提取常见问题
RNA残留
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ质粒断裂 量少
质粒DNA提取常见问题分析
RNA残留
忘记加RNase A？ I液中RNase A失效？ 酶量不够？
质粒断裂
II 液裂解时间过长？ 裂解时动作过于剧烈
质粒DNA提取常见问题分析
量少
凝胶是否有问题？ 菌体量少 菌体重悬不彻底 裂解不完全 菌株老化 严谨型质粒
质粒类型
真核细胞总RNA提取——实验步骤
293细胞样品为例
收集细胞 上层溶液
干燥溶解
裂解变性
异丙醇沉淀
RNA溶液
抽 提
离心洗涤
RNA提取常见问题
RNA降解 DNA残留 OD260 /OD280 比值偏低 电泳带型异常
RNA降解
外源RNase的污染 裂解液质量 裂解液用量不足 样品本身富含RNase 环境温度过高
小鼠gDNA电泳图
基因组DNA提取常见问题
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR 反应
DNA降解 DNA量少